Лямблии слабо положительный что это

Иммуноферментный анализ (ИФА) — метод лабораторной диагностики, позволяющий обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях.

ИФА — один из самых распространенных и точных методов для выявления инфекций, передающихся половым путем, в частности ВИЧ, ВПЧ, гепатита В.

Для того чтобы результаты анализов были максимально достоверными, необходимо правильно подготовиться к их сдаче.

Спецпредложения, скидки и акции помогут существенно сэкономить на медицинском обследовании.

Контроль качества лабораторных исследований, осуществляемый по международным стандартам, — дополнительная гарантия точности результатов анализов.

Современная диагностика в медицине немыслима без высокочувствительных лабораторных анализов. Прежде для установления причин тех или иных симптомов врачи были вынуждены ориентироваться на косвенные признаки болезни, а также проводить многоступенчатые микроскопические исследования в попытке обнаружить возбудителя инфекции. Сегодня достаточно одного-единственного теста — такого как иммуноферментный анализ — чтобы подтвердить или опровергнуть первоначальный диагноз.

Основные понятия и принцип метода иммуноферментного анализа

Существует несколько разновидностей антител, каждая из которых вступает в действие на определенном этапе иммунного ответа. Так, первыми в ответ на проникновение антигена в организм синтезируются иммуноглобулины класса М (IgM). Содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса.

Следом за ними иммунная система выбрасывает в кровь иммуноглобулины класса G (IgG), которые помогают уничтожать антигены до полной победы над инфекцией, а также продолжают циркулировать по сосудам в дальнейшем, обеспечивая иммунитет к повторному заражению. На этом явлении основана вакцинация: благодаря прививкам, содержащим ослабленные антигены микробов и вирусов, в нашей крови появляется большое количество IgG, которые при контакте с реальной угрозой быстро подавляют инфекцию — до того, как она нанесет вред здоровью.

Как узнать, какие именно антигены или антитела присутствуют в организме человека? Когда врач предполагает, что причиной заболевания является определенная инфекция, или желает измерить концентрацию определенного гормона, он назначает пациенту иммуноферментный анализ.

ИФА бывает качественным и количественным. В первом случае подразумевается однозначный ответ: искомое вещество или найдено, или не найдено в образце. В случае с количественным анализом более сложная цепь реакций дает возможность оценить концентрацию антител в крови человека, что в сравнении с результатами предыдущих тестов даст ответ на вопрос о том, как развивается инфекционный процесс.

Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.

Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.

В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека.

ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.

Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА. Вот наиболее распространенные цели анализа:

Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний:
- IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С;
- IgG к ВИЧ;
- Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции;
- Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр;
- Ig M и IgG к герпетическим инфекциям;
- Ig M и IgG к токсоплазмозу;
- Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям;
- IgG к паразитарным заболеваниям;
- Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем;
- IgG к хеликобактерной инфекции.
Общая оценка показателей иммунитета человека и маркёров некоторых аутоиммунных заболеваний.
Выявление онкологических маркёров (фактора некроза опухоли, простатспецифического антигена, раково-эмбрионального антигена и других).
Определение содержания гормонов в сыворотке крови (прогестерона, пролактина, тестостерона, тиреотропного гормона и других).

Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.

При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.

IgM — наличие этого класса иммуноглобулинов говорит об остром инфекционном процессе в организме. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии конкретного возбудителя в организме, так и о переходе инфекции в хроническую стадию.
IgA при отрицательном результате теста на IgM чаще всего свидетельствует о хронической или скрыто протекающей инфекции.
IgM и IgA (совместное присутствие) — два положительных результата говорят о разгаре острой фазы заболевания.
IgG говорит либо о хронизации заболевания либо о выздоровлении и выработке иммунитета к инфекционному агенту.

В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный). Последний вариант определяет, сколько антител содержится в анализируемом образце.

Еще один количественный показатель — индекс авидности антител, выраженный в процентах. Он указывает, сколько времени прошло от начала инфекционного процесса (чем выше индекс — тем больше).

Сегодня выпускаются тысячи видов тест-систем ИФА, позволяющих обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях. Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, — это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.

Информативность ИФА делает этот анализ важным инструментом в работе многих медицинских центров. Но можно ли доверять такую диагностику государственным лабораториям или лучше самим выбрать, где провести такое исследование?

Описание

Антитела к лямблиям lgG, Giardia lamblia IgG количественный — количественное определение антител lgM, lgG к лямблиям, показатель инфицирования лямблиями.

Лямблиоз (гиардиаз) — широко распространённое заболевание, вызываемое одноклеточным паразитом — кишечной лямблией Giardia lamblia, поражающее тонкий кишечник и печень.

Источник инвазии — человек, инфицированный лямблиями.

Путь передачи — алиментарный, то есть посредством зараженных пищевых продуктов, и воды, а также контактный.

На пищевых продуктах длительность жизненного цикла цист лямблий от 6 часов до 2 дней. Зачастую инфицирование происходит при употреблении плохо очищенной водопроводной воды или воды из открытых водоёмов.

Лямблии способны вызывать серьёзные кишечные заболевания людей, как в форме эпидемий, так и в виде спорадических случаев. Заболевание, зачастую, поражает детей.

Поражение слизистой оболочки тонкого кишечника может иметь различные клинические проявления: без каких-либо проявлений до аллергических симптомов и диарейного синдрома, особенно тяжело протекающего при выраженном иммунодефиците. Инфекция лямблиями может спонтанно исчезнуть через 6 недель, а может персистировать годами. Колонизируя слизистую тонкой кишки, трофозоиды лямблий проникают внутрь эпителия, и вызывают системный иммунный ответ.

По данным ВОЗ, ежегодно лямблиями заражаются около 200 млн. человек.

Проникая в кишечник, лямблии превращаются в трофозоиды, прикрепляясь к поверхностным клеткам слизистой оболочки и отсасывая из нее питательные вещества. Длительность жизненного цикла трофозоидов составляет 3–40 дней. За этот короткий период, заболевание может протекать очень длительно, так как всё время происходит повторное самозаражение. В результате длительного существования лямблий в организме, формируется синдром хронической эндогенной интоксикации. При сниженной иммунной защите это может привести к повреждению практически всех органов и систем организма.

Длительность инкубационного периода от 7 дней до 3 недель. Зачастую, лямблиоз протекает бессимптомно. При большом количестве паразитов внутри человеческого организма, заболевание протекает с выраженной клинической симптоматикой и имеет острое или хроническое течение.

Клиническая картина при лямблиозе
Основные клинические проявления на острой стадии заболевания: жидкий водянистый стул без примесей слизи и крови, боли в подложечной области, образование газа, раздувающего кишечник, отрыжка, тошнота, рвота, потеря аппетита, незначительное повышение температуры.

У большинства заболевших проявления болезни исчезают самопроизвольно в течение 1–4 недель. Затем болезнь переходит в хроническую форму, которая периодически проявляется вздутием живота, болями в подложечной области, разжиженным стулом.

У всех больных лямблиозом отмечаются признаки недостаточности витаминов: бледность кожи, синева под глазами, ангулярный стоматит (заеды), аллергические высыпания.

Лямблиоз значительно чаще поражает детей дошкольного возраста (заражено около 30% детей) и протекает тяжелее, чем у взрослых. Симптоматика у детей не специфична, схожа с другими заболеваниями, что затрудняет диагностику заболевания.

Мигрируя в кишечник ребёнка, лямблии начинают активно размножаться, используя питательные вещества, необходимые ребенку для роста. В конечном итоге это приводит к нехватке витаминов в организме, что тормозит нормальное развитие ребёнка.

Лямблии выделяют токсические вещества, что приводит к сильной аллергизации организма и подавляет иммунитет ребенка. Основные симптомы лямблиоза у детей: атопический дерматит, бронхиальная астма, хронический сухой кашель и частые простуды.

Осложнения лямблиоза
Лямблиоз может отягощать течение любых других, сочетающихся с ним заболеваний желудочно-кишечного тракта. Он маскирует их и способствует возникновению аллергических реакций.

Достаточно распространены ситуации, когда за диагнозом лямблиоз скрываются такие хронические заболевания желудочно-кишечного тракта, как воспаление поджелудочной железы, дискенезия (нарушение двигательной активности) желчного пузыря, воспаление кишечника различного характера и т.д.

Часто страдает нервная система. Больные жалуются на общую слабость, утомляемость, раздражительность, неглубокий сон, тревожные сновидения, головные боли, головокружения. Возможно развитие гипотонических кризов с обморочными состояниями. Достаточно распространены вегето-сосудистая дистония и аритмия.

В связи с обнаружением у ребёнка лямблий в кале и появлении у него характерных жалоб, требуется дополнительное обследование с целью выявления скрыто протекающих хронических воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта.

Антитела при лямблиозе
В ответ на инфицирование Giardia lamblia иммунной системой вырабатываются обеспечивающие иммунный ответ специфические иммуноглобулины классов IgM и IgG.

Серологические исследования иммуноглобулинов классов IgM, IgG к антигенам лямблий, являются косвенным методом лабораторной диагностики лямблиоза. Могут использоваться как дополнительный диагностический метод, позволяющий определить иммунный ответ организма на внедрение возбудителя.

Исследование антител к лямблиям IgM, lgG целесообразно дополнять методами, которые направлены на выявление лямблий в кале. Тест рационально проводить через 1–2 недели после проявления симптомов заболевания, если исследования кала в более ранний период не дали результата.

Как показывает практика, антитела к антигенам лямблий обнаруживаются у 39–42% больных с патологией желудочно-кишечного тракта. У 89–92% из них, лямблиоз подтверждается положительным результатом тестирования образцов фекалий или дуоденального содержимого на наличие цист лямблий. Существует проблема перекрёстных реакций антигенов лямблий с другими паразитарными и соматическими антигенами, которые дают ложноположительные результаты, поэтому для повышения надёжности и достоверности диагностики лямблиоза необходимо комплексное обследование.

Показания
В комплексе с другими методами исследования при диагностике лямблиоза. Серологическое тестирование целесообразно проводить через 1–2 недели от появления клинической симптоматики, если повторные исследования кала в более ранний период не дали результата.

Подготовка
Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 11 часов. Взятие крови производится натощак, спустя 4–6 часов голодания. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.

Интерпретация результатов
Единицы измерения: УЕ*

Положительный результат будет сопровождаться дополнительным комментарием с указанием коэффициента позитивности пробы (КП*):

КП >= 11,0 — положительно;
КП *Коэффициент позитивности (КП) — это отношение оптической плотности пробы пациента к пороговому значению. КП — коэффициент позитивности, является универсальным показателем, применяемым в иммуноферментных тестах. КП характеризует степень позитивности исследуемой пробы и может быть полезен врачу для правильной интерпретации полученного результата. Поскольку коэффициент позитивности не коррелирует линейно с концентрацией антител в пробе, не рекомендуется использовать КП для динамического наблюдения за пациентами, в том числе контроля эффективности лечения.

Лямблиоз - одно из наиболее распространенных паразитарных заболеваний человека.

По данным ВОЗ, ежегодно лямблиями заражаются около 200 млн. человек. Клинические проявления лямблиоза регистрируются почти у 500 млн. больных в год. Заболевание распространено повсеместно.

Что такое лямблии?

Возбудитель лямблиоза у человека - широко известный протозойный организм Lamblia intestinalis, поселяющийся в тонком кишечнике и вызывающий расстройства пищеварения.

Попав в кишечник, лямблии превращаются в трофозоиды, прикрепляясь к поверхностным клеткам слизистой оболочки и отсасывая из нее питательные вещества. Их жизненный цикл от трёх до сорока дней. Несмотря на то, что это достаточно короткий период, заболевание может протекать очень длительно, так как всё время происходит повторное самозаражение. В результате длительного существования лямблий в организме формируется синдром хронической эндогенной интоксикации. При сниженной иммунной защите это может привести к повреждению практически всех органов и систем организма.

Как происходит заражение?

Различают три основных пути передачи лямблиоза:

Чаще всего заражение происходит при употреблении плохо очищенной водопроводной воды или воды из открытых водоёмов. При контактно-бытовом пути попадание в организм осуществляется через загрязнённые цистами предметы обихода: бельё, игрушки, посуду. Возможно также заражение при употреблении инфицированных цистами пищевых продуктов, особенно без их термической обработки (овощи, ягоды, фрукты).

Как проявляется лямблиоз у взрослых?

Инкубационный период заболевания продолжается 1-3 недели. Как правило, лямблиоз протекает без каких-либо проявлений. При большом количестве паразитов внутри человеческого организма заболевание протекает с выраженной клинической симптоматикой и имеет острое или хроническое течение.

При острой форме заболевание начинается с появления жидкого водянистого стула без примесей слизи и крови. Появляются боли в подложечной области. Образуется большое количество газа, раздувающего кишечник, наблюдается отрыжка. У больных отмечается снижение аппетита, тошнота, рвота, незначительное повышение температуры тела.

У большинства заболевших проявления болезни исчезают самопроизвольно в течение 1-4 недель. Затем болезнь переходит в хроническую форму, которая периодически проявляется вздутием живота, болями в подложечной области, разжиженным стулом.

У всех больных лямблиозом отмечаются признаки недостаточности витаминов: бледность кожи, синева под глазами, заеды в углах рта, аллергические высыпания.

Чем опасен лямблиоз для ребёнка?

У детей лямблиоз развивается значительно чаще и протекает тяжелее, чем у взрослых.

Современные эпидемиологические исследования показали, что лямблиями заражено около 30% детей дошкольного возраста. При этом, в большинстве случаев, лямблиоз у ребёнка проявляется симптомами, которые имитируют другие заболевания и затрудняют выявление истинной причины болезни.

Попадая в кишечник ребёнка, лямблии начинают активно размножаться, используя питательные вещества, необходимые ребенку для роста. В результате возникает нехватка витаминов в организме, что тормозит нормальное развитие ребенка.

В процессе жизнедеятельности лямблии выделяют также ряд токсических веществ. Это приводит к сильной аллергизации организма ребенка и подавляет его иммунитет. По этой причине одним из частых проявлений лямблиоза у детей являются: атопический дерматит, бронхиальная астма, хронический сухой кашель и частые простуды.

Каковы последствия лямблиоза?

Лямблиоз может отягощать течение любых других, сочетающихся с ним заболеваний желудочно-кишечного тракта. Он маскирует их и способствует возникновению аллергических реакций.

Как проводится диагностика лямблиоза?

Многообразие клинических проявлений лямблиоза и отсутствие симптомов, характерных только для этого заболевания, требуют обязательного лабораторного подтверждения диагноза. Материалом для исследований служат фекалии и дуоденальное содержимое. В дуоденальном содержимом обнаруживаются только трофозоиды, в оформленных фекалиях - только цисты, в жидких и полуоформленных испражнениях - трофозоиды и цисты.

В настоящее время с целью диагностики лямблиоза применяется ряд методик, которые различаются между собой чувствительностью, специфичностью и общедоступностью. Независимая лаборатория ИНВИТРО предлагает широкий спектр исследований, позволяющих выявить наличие лямблий в организме человека.

Самым доступным методом лабораторной диагностики лямблиоза является копрологическое исследование. При проведении исследований необходимо помнить, что цисты в кале можно обнаружить не всегда. Непостоянное выделение цист с калом требует неоднократного исследования фекалий, а также использование других методов лабораторного исследования.

Больным с клиническими проявлениями лямблиоза, но при отрицательном результате исследования фекалий, целесообразно исследовать аспирант двенадцатиперстной или верхнего отдела тощей кишки. Как правило, в нём содержится большое количество лямблий, в том числе и трофозоидов (они видны в свежих мазках).

Анализ неудач в выявлении лямблий при исследовании фекалий позволил систематизировать основные причины ложноотрицательных результатов. К ним отнесены:

Выявление лямблий возможно уже у 76% больных при устранении данных причин при первом обследовании кала. После второго исследования вероятность увеличивается до 90 %.

Самым надёжным методом диагностики лямблиоза является дуоденальная биопсия. Показаниями для проведения дуоденальной биопсии являются:

Иммунологические методы (метод ИФА выявления антигена Giardia lamblia) в последнее время широко используются во всем мире для диагностики лямблиоза. Подобные тест-системы обладают очень высокой чувствительностью и специфичностью, и позволяют одновременно выявлять как цисты, так и трофозоиды в образцах стула. Обычно G lamblia выявляется у 50-70% больных после единичного анализа стула. После трехкратного анализа – у 90% .

Выявление антител суммарных классов IgA, IgM, IgG к антигенам лямблий (серологические методы) является косвенным методом лабораторной диагностики лямблиоза. Может использоваться как дополнительный диагностический метод, позволяющий определить иммунный ответ организма на внедрение возбудителя.

Литература

Паразитарные болезни человека (протозоозы и гельминтозы). Руководство для врачей. (Ред. Сергеева В.П., Лобзина Ю.В., Козлов С.С.) Спб., 2006. 586 стр.
Wallach J. Interpretation of diagnostic test Lippincott - 2000 pp. 864 - 885.

В комплексе с другими методами исследования при диагностике лямблиоза. Серологическое тестирование целесообразно проводить через 1-2 недели от появления клинической симптоматики, если повторные исследования кала в более ранний период не дали результата.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Антитела к Giardia lamblia, возбудителю лямблиоза, – это специфические белки-иммуноглобулины, вырабатываемые иммунной системой в ответ на инфицирование лямблиями и обеспечивающие иммунную защиту.

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Giardia lamblia – это простейшие, паразитирующие в тонкой кишке и иногда в желчном пузыре и вызывающие лямблиоз. Они могут существовать в вегетативной форме (трофозоиты) и в форме цист. Когда цисты проникают внутрь организма, из них высвобождаются трофозоиты, способные к размножению и заселению тонкого кишечника. При определенных условиях часть трофозоитов вновь образует цисты, которые выделяются с фекалиями во внешнюю среду.

Путь передачи инфекции – фекально-оральный, через зараженную цистами лямблий воду или пищу, а также через загрязненные руки и бытовые предметы.

Источник инфекции – больной лямблиозом или бессимптомный носитель. Инкубационный период составляет 3-42 дня.

При данной инфекции преобладают симптомы диареи: боли, вздутие и урчание в животе, повышенное газообразование, частый желтоватый водянистый стул с неприятным запахом, увеличение количества непереваренных жиров в кале из-за нарушения всасывания жиров, иногда потеря аппетита и рвота. К "внекишечным" проявлениям лямблиоза относятся различные аллергодерматозы, артрит и ринит. Может лямблиоз протекать и бессимптомно с ликвидацией возбудителя через 1-3 месяца.

Наиболее подвержены заболеванию дети (особенно в возрасте от 1 года до 4 лет). У них инфекция протекает особенно тяжело, иногда с дефицитом массы тела. К группе высокого риска по заражению лямблиозом также относятся путешественники, люди с низким уровнем гигиены и социальным статусом, те, кто находится в учреждениях закрытого типа (больницах, домах престарелых, тюрьмах), сексуально активные гомосексуалисты, пациенты с иммунодефицитами и мальабсорбцией, а также представители некоторых профессий (работники зоопарков, звериных питомников и т. д.).

В ответ на лямблии иммунной системой вырабатываются специфические иммуноглобулины (A, M, G). Самыми первыми появляются IgM (на 10-14-й день после заражения), затем – IgG, которые присутствуют в крови практически на всех стадиях лямблиоза, их уровень снижается через 1-2 месяца после гибели паразита.

Для чего используется исследование?

Для выявления острых и хронических форм лямблиоза.
Для выявления паразитоносителей.
Для дифференциальной диагностики (наряду с другими тестами) при заболеваниях, протекающих со сходными симптомами, таких как бактериальная или вирусная диарея, воспалительные заболевания кишечника, нарушения всасывания, некоторые эндокринные расстройства, стресс.

Когда назначается исследование?

При диарее неустановленного происхождения.
При хронических заболеваниях желудочно-кишечного тракта.
При дисбактериозе кишечника.
При гипотрофии, отставании в физическом развитии.
При кожных заболеваниях: дерматите, крапивнице, экземе, нейродерматите.
При иммунодефицитных состояниях.
При обструктивных бронхитах и бронхиальной астме.
При аллергии неустановленной этиологии.
При обследовании лиц, контактировавших с больным лямблиозом или с паразитоносителем.

Что означают результаты?

КП (коэффициент позитивности): 0 - 0,84.

Текущий острый или хронический лямблиоз.
Недавно перенесенный лямблиоз.
Носительство G. lamblia.
Перекрестные реакции с соматическими антигенами или антигенами других возбудителей (редко).

Отсутствие инфицирования лямблиями.
Серонегативный период заражения (первые 1-2 недели после инфицирования).
Отсутствие иммунного ответа или слабый иммунный ответ к возбудителям лямблиоза из-за нарушений в иммунной системе.

Тест на антитела к лямблиям является косвенным методом диагностики лямблиоза. Кроме того, антигены лямблий могут перекрестно реагировать с антигенами других паразитов или антигенами человека, что нередко приводит к ложноположительным результатам. Поэтому данный анализ целесообразно использовать как дополнительное исследование, в комплексе с другими. Большей диагностической значимостью обладает выявление антигенов лямблий в фекалиях.

Владельцы патента RU 2246115:

Изобретение относится к области медицины, а именно к паразитологии, и предназначено для диагностики лямблиоза и его течения. Проводят иммуноферментный анализ. Определяют диагностическую оптическую плотность и оптическую плотность меченого иммунного комплекса в лунке планшета с исследуемой сывороткой, измеряемых в условных единицах при длине волны 492 нанометра. Рассчитывают коэффициент концентрации антител, измеряемый в условных единицах, по формуле: ККА = (ОПиссл - ОПд) х 100, где ККА - коэффициент концентрации антител, ОПиссл - оптическая плотность лунки с исследуемой сывороткой, ОПд - диагностическое значение оптической плотности, 100 – коэффициент разведения сыворотки. По значению ККА определяют титр антител к антигенам Lamblia intestinalis и интерпретируют результаты исследования. Способ позволяет повысить точность диагностики лямблиоза и проследить динамику течения заболевания. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, в частности к паразитологии.

Лямблиоз является повсеместно распространенной инвазией. В Российской Федерации ежегодно регистрируется около 110000 случаев лямблиоза, из которых 80% составляют дети до 14 лет. В этиологической структуре диарей на долю лямблиоза приходится от 3% до 8% случаев. Доказана роль Lamblia intestinalis в аллергизации организма, развитии дуоденоеюнитов, кроме этого лямблиоз является инвазией, сопутствующей широкому спектру заболеваний желудочно-кишечного тракта: хроническому гастродуодениту в 76,5%, панкреатиту - 15,7%, энтероколиту - 4,0%, рефлюкс-эзофагиту - 3,8% случаев.

В качестве аналога авторы предлагают микроскопический способ диагностики лямблиоза (Клиническая лабораторная аналитика. Том II. Частные аналитические технологии в клинической лаборатории / Под ред. В.В.Меньшикова. - М.: Лабинформ-РАМЛД, 1999. - 352 с.). Из исследуемого материала (фекалии) готовят два нативных препарата под покровными стеклами. Один из препаратов окрашивают раствором Люголя. Микроскопию препаратов проводят с сухой системой большого увеличения. В неокрашенном препарате выявляют подвижные вегетативные стадии лямблий, в окрашенном препарате - цисты простейших.

К недостаткам микроскопического способа диагностики лямблиоза можно отнести недооценку периодичности выделения лямблий с фекалиями, зависимость наличия различных форм возбудителя от консистенции стула. В связи с этим эффективность микроскопического способа является недостаточно высокой, а сроки диагностики - продолжительными, так как для подтверждения отрицательных результатов необходимо микроскопическое исследование фекалий с интервалом в 1 неделю в течение 4-5 недель.

Прототипом заявляемого способа, по мнению авторов, является способ определения антител к антигенам лямблий методом ИФА с использованием тест-системы “Лямблия-АТ-стрип” (ЗАО “Вектор-Бест”, Новосибирская обл., п.Кольцово). Способ заключается в обнаружении в сыворотке крови антител к антигенам Lamblia intestinalis. В ходе исследования при взаимодействии исследуемых образцов сывороток крови (разведение 1:100) в лунках планшеты с иммобилизованными антигенами лямблий происходит связывание специфических антител и образование комплекса “антиген-антитело” на поверхности лунок. После удаления не связавшихся компонентов сыворотки и добавления в лунки планшета конъюгата антител против иммуноглобулинов человека с пероксидазой хрена происходит включение ферментной метки в иммунный комплекс. В результате ферментативной реакции, проведенной в лунках, отмытых от избытка конъюгата, с субстратным раствором для пероксидазы, содержащим перекись водорода и ортофенилендиамин, образуется окрашенный продукт, оптическая плотность которого пропорциональна концентрации антител в анализируемом образце сыворотки к антигенам лямблий. Оптическую плотность (ОП) меченого иммунного комплекса в лунках планшеты регистрируют с помощью анализатора колориметрического иммуноферментного при длине волны 492 нм. В планшете кроме рабочих лунок, в которые вносят исследуемые сыворотки, ставят контроли: в 2 лунки вносят положительный контрольный образец, в 2 лунки - отрицательный контрольный образец, в 2 лунки (контроль конъюгата) - раствор для разведения сывороток. Последующее проведение реакции в контрольных лунках не отличается от такового в рабочих лунках. Оценку результатов проводят только в том случае, если средние показатели ОП контроля конъюгата не превышает значения 0,2; ОП в лунках с контрольным отрицательным образцом (ОП К - ) не более значения 0,3; а ОП в лунках с контрольным положительным образцом имеет значение не ниже 0,8. Диагностическая ОП (ОП_д) вычисляется по формуле: ОП_д=1,48×ОП К - +0,04. Результат ИФА расценивается как положительный, если ОП меченого иммунного комплекса в лунке, в которой использовалась исследуемая сыворотка (ОП_иссл.) в разведении 1:100, равна или больше диагностической ОП (ОП_д). Поскольку ошибка метода ИФА составляет 10-15% при значении ОП_иссл. меньше на 15%, чем ОП_д, результат считают сомнительным и проводят повторное исследование.

К недостаткам прототипного способа диагностики лямблиоза относится определение только факта наличия антител к антигенам лямблий (в одном разведении 1:100) - то есть лишь качественный способ учета результатов ИФА, но не исследуется количество специфических антител (их титр). Очевидный в данной ситуации подход - исследование исследуемой сыворотки не в одном, а в нескольких разведениях, например от 1:100 до 1:3200 с двукратными разведениями, увеличивает стоимость анализа кратно количеству разведений. В связи с отсутствием количественных данных при прототипном способе отсутствует возможность оценки выраженности иммунного ответа на возбудитель, динамики течения заболевания. Кроме этого невозможно оценить эффективность выбранного химиопрепарата и терапии заболевания в целом.

Авторы предлагают следующий способ диагностики и течения лямблиоза. Постановка ИФА на наличие антител в сыворотке крови к антигенам лямблий с применением тест-системы “Лямблия-АТ-стрип” проводится аналогично прототипу. ОП измеряется при той же длине волны. Расчет ОП_д проводится по вышеуказанной формуле. Однако для учета результата исследования вычисляется разница между ОП_иссл. и ОП_д, которая умножается на 100, с целью получения значения показателя концентрации антител к антигенам лямблий, который авторы предлагают назвать коэффициентом концентрации антител (ККА). Значение ККА является пропорциональным концентрации специфических антител в сыворотке крови. ККА рассчитывается по формуле ККА=(ОП_иссл.-ОП_д)×100, где 100 - коэффициент разведения сыворотки.

Наряду с определением коэффициента концентрации антител (качественная реакция в одном разведении - 1:100) при исследовании сывороток крови на наличие антител к антигенам лямблий с применением тест-системы “Лямблия-АТ-стрип” авторы проводили и определение титра данных антител (количественное исследование). Указанные параллельные исследования проведены на 150 образцах сывороток крови больных с жалобами со стороны желудочно-кишечного тракта, аллергическими заболеваниями и косвенными признаками лямблиоза. Контрольную группу составили образцы крови 30 практически здоровых людей. Образцы крови у обследуемых лиц в количестве не менее 0,5 мл забирали из пальца натощак. Сыворотку крови тщательно отделяли от сгустка и примеси эритроцитов. Сыворотки хранили при температуре 6±2°С не более 48 часов до исследования. Обработка результатов исследования проводилась с использованием компьютерной программы статистического анализа Biostat 3.03 (S.A.Glantz, 1997), применялся критерий линейная регрессия и корреляция.

В 94 образцах опытных сывороток крови значение ККА - от 101 до 205 условных единиц и титры антител 1:800-1:3200, результат исследования расценен как положительный; в 24 образцах опытных сывороток крови - значение ККА от 11 до 100 условных единиц и титр антител 1:200-1:400, результат исследования расценен как положительный, так как у пациентов имелись симптомы со стороны желудочно-кишечного тракта, эозинофилия; у 14 человек при ККА от 11 до 100 условных единиц и титре антител 1:200-1:400 результаты исследования расценены как носительство, так как отсутствовали симптомы со стороны желудочно-кишечного тракта и эозинофилия; в 18 образцах опытных сывороток крови получено значение ККА от 6 до 10 условных единиц и титр 1:100, что интерпретировали как сомнительный результат. В контрольной группе во всех образцах сывороток крови значение ККА составляло от 0 до 5 условных единиц, титр антител менее 1:100.

Полученная статистически достоверная зависимость между ККА и титром антител имеет значение для интерпретации результата исследования: отрицательный результат - сомнительный - носительство - положительный результат, что необходимо для лечащего врача.

Предлагаемый способ диагностики и течения лямблиоза экономически выгоден, поскольку при тех же затратах на проведение ИФА в одном разведении сыворотки крови дает количественный результат (титр специфических антител), а не только факт наличия данных антител, что позволяет контролировать эффективность лечения, использовать для диагностики феномен нарастания титра антител в парных сыворотках.

К-ов Павел, 1995 года рождения (история болезни №2512) поступил в терапевтическое отделение областной детской клинической больницы с жалобами на боли в животе, в околопупочной области, вздутие живота, запах изо рта. В анамнезе частые ОРВИ (до двух раз в месяц) с затяжным течением, длительный субфебрилитетом (до 37°С в вечерние часы в течение трех месяцев). При обследовании обнаружено - дефицит массы тела, кожные покровы бледные, с желтушно-цианотичным оттенком, ярко выраженные периорбитальные тени, цианоз носогубного треугольника. Задние шейные лимфоузлы увеличены до 1 см в диаметре, безболезненные, неспаянные с окружающими тканями. Язык густо обложен белым налетом. Живот болезненный в околопупочной области, в правом подреберье и в точке проекции желчного пузыря. Печень выступает из под края реберной дуги на 1 см. Селезенка не пальпируется. При исследовании крови на наличие антител к антигенам лямблий с помощью ИФА с использованием предлагаемого способа получен коэффициент концентрации антител 202 условные единицы, что соответствует титру антител 1:3200 и расценивается как положительный результат. Поставлен диагноз лямблиоз, назначен курс лечения тибералом, желчегонными, ферментными препаратами, фитотерапия. При контрольном исследовании через месяц определен коэффициент концентрации антител 48 условных единиц, что соответствует титру антител 1:200 и было расценено как положительный результат, так как признаки заболевания все еще присутствовали, хотя выражены были слабее - цианоз носогубного треугольника отсутствовал, периорбитальные тени были выражены слабо, задние шейные лимфатические узлы увеличены до 0,3 см в диаметре, температура нормальная, по органам без особенностей, появился аппетит, прибавка в весе 1 килограмм, дефицит массы тела сохраняется. Продолжена терапия желчегонными, ферментными препаратами, фитотерапия. Через два месяца при контрольном исследовании определен коэффициент концентрации антител 5 условных единиц, что соответствует титру антител менее 1:100 и было расценено как отрицательный результат. Ребенок жалоб не предъявлял, кожные покровы нормальной окраски, лимфатические узлы не пальпировались, по органам без особенностей, прибавка в весе 3 килограмма. Таким образом, при предлагаемом способе диагностики и течения лямблиоза несмотря на положительный лабораторный результат исследования на наличие антител к антигенам лямблий после курса лечения тибералом была продолжена патогенетическая терапия без применения антипаразитарных химиопрепаратов, так как титр антител уменьшился в 16 раз, что говорит об эффективности антимикробной терапии. Контрольное исследование, проведенное через два месяца, подтвердило правильность выбранной врачебной тактики - продолжения патогенетической терапии без дополнительного назначения химиопрепаратов, обладающих известными побочными эффектами.

Способ диагностики лямблиоза и его течения, включающий проведение иммуноферментного анализа и определение диагностической оптической плотности и оптической плотности меченного иммунного комплекса в лунке планшета с исследуемой сывороткой, измеряемых в условных единицах при длине волны 492 нм, отличающийся тем, что рассчитывают коэффициент концентрации антител, измеряемый в условных единицах, по формуле: ККА = (ОПиссл - ОПд)×100, где ККА - коэффициент концентрации антител, ОПиссл - оптическая плотность лунки с исследуемой сывороткой, ОПд - диагностическое значение оптической плотности, 100 – коэффициент разведения сыворотки; и по значению ККА определяют титр антител к антигенам Lamblia intestinalis и интерпретируют результаты исследования: значению ККА от 0 до 5 условных единиц соответствует титр антител менее 1:100 и результат исследования расценивают как отрицательный, значению ККА от 6 до 10 условных единиц соответствует титр антител 1:100 и результат исследования считают сомнительным, значениям ККА от 11 до 50 условных единиц и от 51 до 100 условных единиц соответствуют титры антител 1:200 и 1:400 соответственно, и результат исследования расценивают как положительный с диагнозом лямблиоз при наличии симптомов со стороны желудочно-кишечного тракта и эозинофилии или как носительство лямблий при их отсутствии, значениям ККА от 101 до 135 условных единиц, от 136 до 170 условных единиц и от 171 до 205 условных единиц соответствуют титры антител 1:800, 1:1600 и 1:3200 соответственно, и результат исследования считают положительным.

Читайте также: