Микозы морфология культуральные свойства

Для выделения, хранения и идентификации грибов используют разные среды. Стандартной в микологии является глюкозопептонная среда Сабуро, пригодная для многих целей. Для точного определения видов используют картофельно-морковный агар, рисовый или кукурузный агар, среду Чапека-Докса и др. в зависимости от вида гриба. В последнее время получили распространение специальные среды для выделения культур, содержащие антибиотики и циклогексимид, подавляющий рост грибов-контаминантов.

Грибы культивируют в аэробных условиях при температуре 25–30(С. При определении рода и вида грибов учитывают скорость роста и созревания колонии, ее цвет, форму и тип поверхности, а также ряд дополнительных признаков. Колонии дрожжевых и некоторых плесневых грибов вырастают уже на вторые-третьи сутки, однако культуру возбудителей наиболее распространенных микозов обычно получают не ранее недели. Гладкие колонии характерны для дрожжевых грибов, образование спор сопровождается изменением поверхности (мучнистая, порошковатая, бархатистая, и др.). Цвет колоний широко различается у разных видов болезнетворных грибов. Особая группа грибов Dematiaceae, образующих меланин, дает темные колонии с черной обратной стороной.

27.3. Морфологические свойства

Жизненный цикл грибов состоит из двух фаз, или стадий – половой (репродуктивной) и бесполой (вегетативной). Половая стадия жизненного цикла грибов называется телеоморфой, бесполая – анаморфой. В вегетативной фазе тело гриба (таллом) состоит из похожих клеток, питающихся и размножающихся независимо друг от друга. Существует 2 типа таллома и, соответственно, роста грибов. Таллом может состоять из ветвящихся нитей, составленных из клеток с общей клеточной стенкой. Такие нити называются гифами, а их совокупность – мицелием, или грибницей.

Грибы с талломом, представленным гифами, называются плесневыми, или мицелиальными. Подавляющее большинство грибов являются плесневыми. Другим вариантом роста является почкование. При почковании, как правило, происходит отделение дочерней клетки от материнской, так что дрожжевой вариант таллома является одноклеточным. Грибы, существующие преимущественно в виде почкующихся клеток, называются дрожжевыми, или дрожжами, их тип роста также называется дрожжевым. Те грибы, которые могут менять тип таллома, переходя из дрожжевой формы в плесневую или обратно, называются диморфными.

Гифа имеет параллельные общие стенки и может иметь поперечные перегородки - септы. В септах есть поры, позволяющие перемещение цитоплазмы и органелл. Несептированными (не имеющими перегородок) считаются гифы многих низших грибов (отдел Zygomycota), хотя септы могут образовываться и у них при неблагоприятных условиях. Для низших грибов характерно также неравномерное расположение септ, а все представители отделов Ascomycota и Basidiomycota имеют равномерно септированные гифы.

27.4. Размножение грибов

В репродуктивной фазе тело гриба имеет более сложное строение и состоит из дифференцированных клеток, имеет специальные репродуктивные органы. Среди них выделяют структуры переживания, позволяющие переносить неблагоприятные условия, и структуры распространения (споры и несущие их органы). На различиях в этих признаках основана идентификация родов и видов большинства грибов.

Грибы размножаются с помощью спор. Споры образуются в результате простого митоза или мейоза. В первом случае тип спорообразования и стадия развития гриба называются бесполыми, а сами бесполые споры – конидиями. Во втором случае тип размножения называется половым, а само имя споры чаще применяется именно к половым спорам. Большинство возбудителей грибковых инфекций в культуре представлено только вегетативной стадией. В связи с этим в идентификации болезнетворных грибов первоочередное значение имеют особенности морфологии органов бесполого размножения (конидиогенеза).

Различают и другие типы бесполого спорообразования. У Zygomycota имеются бесполые споры, не являющиеся конидиями – так называемые спорангиоспоры. Они образуются свободно внутри особой структуры – спорангия. К бесполым органам выживания у многих патогенных грибов относятся хламидоспоры, представленные толстостенными клетками или многоклеточными образованиями. Хламидоспоры позволяют пережить отмирание и разложение вегетативного тела гриба, и при более благоприятных условиях высвобождаются в окружающую среду.

Строение репродуктивных органов при половом размножении определяет принадлежность гриба к одному из отделов царства Fungi. В микробиологической диагностике микозов эти признаки, как правило, не используются.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить свойства микроскопических грибов и методы микологического исследования.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходимы плакаты, таблицы, биопрепараты, культуры микроскопических грибов, выделенных от животных, больных микозами; препаровальные иглы или микологические крючки, предметные и покровные стекла.

При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:

1. Возбудители микозов и вызываемые ими болезни.

2. Морфологические и культуральные особенности патогенных грибов, вызывающих микозы.

3. Методы лабораторной диагностики микозов.

1. Классификация возбудителей:

I. Поверхностные микозы кожи и ее производных (волосы, когти):

- Возбудители стригущего лишая

Роды: Trichophyton (трихофития)

Род: Achorion (парша).

II. Глубокие микозы:

Род: Criptococcuc farciminosus(эпизоотический лимфан­гит)

III. Висцеральные (внутренние) – микозы с локализацией процессов в органах дыхания или других органах:

Роды: Mucor (мукоромикоз)

2. Общая характеристика болезни:

- Стригущий лишай – хроническая инфекционная болезнь, характеризующаяся зудом и появлением на коже участков с обломанными волосами, покрытых корками и чешуйками.

- Парша (фавус) – хроническая инфекционная болезнь птиц, реже млекопитающих, характеризующаяся поражением кожи, перьев, внутренних органов.

- Эпизоотический лимфангит (африканский сап) – хроническая инфекционная болезнь однокопытных животных, характеризующаяся гнойным воспалением кожи, подкожной клетчатки с поражением лимфатических сосудов и узлов.

- Кандидомикоз (молочница) – хроническая инфекционная болезнь птиц, реже млекопитающих и человека, характеризующаяся поражением слизистых оболочек пищеварительного тракта, других внутренних органов, иногда кожи.

- Висцеральные микозы – инфекционные болезни многих видов животных, включая птиц и человека, характеризующиеся в основном поражением органов дыхания с вовлечением лимфатических узлов.

3. Восприимчивые животные:

- все виды, включая птиц. Восприимчив и человек.

4. Патогенез и факторы вирулентности (стригущий лишай)

- возбудители размножаются в тканях, содержащих роговое вещество кератин, находящийся в коже, в роге. Он проникает в волосяные фолликулы и в шейку волоса, корковое вещество, что ведет к нарушению питания волос и его выпадению, развивается воспалительная реакция,

- возбудители выделяют токсины и кератолитические ферменты.

Методы диагностики стригущего лишая (I), кандидомикоза (II).

А. Микологическая диагностика (рис. 149, 150):

1. Материал для исследования:

- соскобы с мест поражения кожи (волос, эпидермис и др.) (I);

- трупы мелких животных, соскобы со слизистой оболочки ротовой полости; молоко из пораженной доли вымени (II).

а) микроскопируют объективами х8 и х40 в затемненном поле зрения (с прикрытой диафрагмой); на кандидомикоз готовят мазки-препараты, фиксируют и окрашивают метиленовой синью или раствором Люголя.

Рис. 149. Схема лабораторной диагностики дерматомикозов

Рис. 150. Схема лабораторной диагностики кандидомикоза

- при трихофитии – гифы не разветвлены, споры лежат правильными рядами вдоль волоса (рис.151);

Рис. 151. Волос, пораженный грибом рода Trichophyton. Увеличение х400

- при микроспории – гифы и споры по отношению волоса располагаются беспорядочно (рис. 152);

Рис. 152. Волос, пораженный грибом рода Microsporum. Увеличение х400

- при кандидомикозе – дрожжеподобные грибы имеют шаровидную овальную форму до 10 мкм (рис. 153.)

а) посев на питательные среды:

- сусло агар (неохмеленное пивное сусло и 2% агар-агара);

- среда Сабуро (глюкоза, пептон, агар-агар);

- среда Чапека (глюкоза, набор ми­неральных солей, агар-агар);

Рис. 153. Возбудитель кандидомикоза из соскоба со слизистой оболочки ротовой полости собаки. Увеличение х400

б) особенности выделения культуры:

- оптимальная температура 28-30ºС,

- срок культивирования 7-10 дней,

в) культуральные свойства:

- возбудители стригущего лишая на средах образуют гладкие или складчатые со слизистым налетом колонии;

- в препаратах из культуры возбудителей мицелий разветвлен, септирован. У трихофитонов на концах гифов разветвления в виде рогов оленя, у микроспорона – спиралевидные или ракетообразные. Образуют споры и макроконидии;

- возбудитель микроспории под ультрафиолетовыми лучами светится зеленым светом;

- возбудитель кандидомикоза на средах образует гладкие или шероховатые колонии различной окраски.

- при стригущем лишае заражать белых мышей, морских свинок, втирая материал в скарифицированную кожу;

- при кандидомикозах внутривенно заражают белых мышей, морских свинок, кроликов.

Б. Серологическая диагностика:

- в ветеринарной практике не используют.

В. Аллергическая диагностика:

- в ветеринарии не используют.

5. Биопрепараты для специфической профилактики:

- при трихофитии – живые вакцины ТФ-130 или ЛТФ-130,

6. Биопрепараты для специфической терапии:

- при трихофитии – живые вакцины ТФ-130 или ЛТФ-130.

Задания для самостоятельной работы

1. Ознакомиться с культуральными свойствами возбудителей микозов.

2. Приготовить препараты из культур патогенных грибов, выделенных от животных, больных микозами, и изучение их морфологических свойств.

3. Изучить методы лабораторной диагностики микозов.

Слайды и текст этой презентации

Западно-Казахстанский Государственный Медицинский Университет имени Марата Оспанова

Специальность: Общая медицина
Дисциплина: Микробиология
Кафедра: Микробиологии, иммунологии, вирусологии
Тема: Систематика грибов, культуральные свойства и морфологические. Возбудители микозов

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТА

План:
I. Введение
II. Систематика грибов
Классификация грибов
Виды грибов
Микозы
Заключение
Список литературы

Основы систематики грибов
1. Отделы царства грибов
2. Классы грибов
3. Дальнейшее подразделение грибов
1. Царство грибов Mycota разделено на 2 отдела:
- Myxomycota;
- Eumycota.
К последнему относятся грибы-микроорганизмы,изучаемые медицинской микологией.

Многоклеточные грибы подразделяются на классыпо способу размножения, морфологии гифов и характеру мииелия.
Грибы, у которых нет мицелия и полового размножения (архимицеты), отнесены к 2 классам: Chytridiomycetesи Hypho-chridiomycetes.
Грибы, для которых характерен несептированный мицелий и образование спорангиоспор при бесполом размножении (фикомицеты),в зависимости от типа спор, образуемых при половом размножении, делятся на 2 класса: OomycetesиZygomycetes(соответственно для них характерны ооспоры или зигоспоры). Высшие многоклеточные грибы с септицированным мицелием, для которых наряду с бесполым характерно половое размножение, отнесены к классам Ascomycetes(характерны половые аскоспоры) и Basidiomycetes(характерно образование базидио-спор при половом размножении).
Отдельную группу составляет класс Deuteromycetes, или несовершенных грибов, сюда отнесены дрожжевые, плесневые и некоторые другие грибы, не имеющие полового размножения. Большинство возбудителей микозов человека относится к классу дейтеромицетов, хотя некоторые зигомицеты, аскомицеты и базидиомицеты также могут вызвать заболевания у человека.

Классы грибов делятся на семейства, семейства на роды, род на виды. При этом учитывается:
• расположение и характер спор;
• морфология грибов;
• метаболическая активность;
• продукция пигментов;
• ареал распространения;
• характер вызываемых заболеваний.

Различают микозы кожи и ногтей — дерматомикозы (другие заимствованные из иностранного языка названия: дерматофитоз, дерматофития) и микозы внутренних органов. У животных могут также возникать отравления токсинами грибов, поражающих растительные корма, — микотоксикозы. Одними микозами болеют только люди или животные, другими человек заражается от животных (например, микроспорией).

Виды грибковых заболеваний

Дерматофития — кожные заболевания, вызываемые грибами Trichophyton и Microsporum.
Кандидоз — вызывается Candida albicans.
Онихомикоз — грибковое заболевание ногтей, вызывается дерматофитами.
Пёстрый (отрубевидный, разноцветный) лишай — характеризуется образованием чешуек, вызывается Malassezia furfur.
Чёрный лишай — на ладонях и подошвах образует коричневые или чёрные пятна, вызывается Exophiala werneckii.
Чёрная пьедра — колонизирует волос, вызывается Piedraia hortae.
Белая пьедра — микоз волос головы, усов, бороды, вызывается Trichosporon beigelii.
Споротрихоз
Черный язык — на языке образуется черный налет, вызывается грибком (Black hairy tongue)

Причины заражения микозом
Заражение микозом происходит в результате попадания грибковых спор в эпидермис или более глубокие слои кожи вследствие микротравм, а также оседания их на слизистых оболочках рта, глаз, дыхательных путей, в том числе бронхов и легких. Инфицирование микозом может произойти в результате непосредственного контакта с больным человеком, а также через общие предметы – одежду, обувь, банные и маникюрные принадлежности. Нередко появление болезни связано с посещением бассейна или сауны. Росту грибка способствует несоблюдение правил личной гигиены и повышенная влажность среды, например, при излишней потливости ног.

Признаки и проявления микоза
Внешние проявления и тяжесть микоза зависят от состояния иммунной системы и вида паразитического грибка. Некоторые из них постоянно обитают на кожных покровах и являются условно патогенными микроорганизмами. Снижение защитных сил организма провоцирует усиление негативных симптомов, а отсутствие своевременного лечения переводит болезнь в хроническую форму. Как правило, очаги микоза локализуются на кистях рук или стопах ног, поражая волосы и ногтевые пластинки. Иногда они отмечаются в области наружных половых органов, слизистых оболочках рта, пищевода и верхних дыхательных путей.

Классификация микозов
Классификация микоза основывается на виде возбудителя, месте локализации, степени негативного воздействия. Весьма распространенным микозом является кандидоз, возбудителями которого являются условно патогенные грибы рода Candida. Они поселяются на слизистых оболочках рта и половых органов. Кератомикозы поражают преимущественно верхний роговой слой эпидермиса и не сопровождаются воспалительным процессом, к ним относится отрубевидный или разноцветный лишай. Дерматофитии развиваются на поверхности кожи, волос и ногтей; они устойчивы к внешним факторам и трудно поддаются лечению.
В указанную группу микозов входят эпидерматофития паха и стоп, грибковые заболевания волос, микроспория. Однако наиболее опасными являются глубокие микозы, распространенные в странах с теплым и влажным климатом. Они способны поражать не только глубокие слои кожи, но и мышечные волокна, кости, внутренние органы. Течение глубоких микозов очень тяжелое, нередко заканчивается летальным исходом. Так называемые псевдомикозы вызываются особыми микроорганизмами, занимающими в биологической классификации промежуточное положение между бактериями и грибами.

Фото: Эксфолиативная эритродермия: грибовидный микоз. Налицо все признаки эксфолиативной эритродермии: эритема, утолщение кожи и шелушение. Поражена вся кожа, но не равномерно. Некоторые участки имеют более темный, коричневатый оттенок. Отмечаются алопеция, генерализованная лимфаденопатия и кератодермия.

Что может сделать врач
При необходимости врач может назначить сильнодействующее и специфическое лекарство, а также выписать рецепт порошковой смеси для приготовления дезинфицирующего раствора для ног.
В тяжелых случаях могут посоветовать использовать комбинированную терапию, включающую также физиотерапевтические процедуры, а также прием препаратов внутрь. В случае появления вторичной бактериальной инфекции (она проникает в кожу через трещины и ранки) врач назначит вам антибиотики для местного или системного применения.
Профилактические меры
Соблюдайте гигиену: никогда не ходите босиком, особенно в общественных душах и раздевалках, ежедневно надевайте свежие носки, предварительно вымыв и тщательно высушив стопы и межпальцевые промежутки, хорошо проветривайте обувь в перерывах между использованием.
Обязательно принимайте душ до и после плавания в бассейне, одевайте резиновые тапочки, как только вы вышли из воды. Кроме того, вы можете проконсультироваться с врачом о применении различных профилактических средств.

Царство грибов (Mycota или Fungi) входит в состав надцарства Eucaryotae и содержит многочисленные виды грибов, среди которых 150-500 видов относится к отделу настоящих грибов (Eumycotae), вызывая у человека, вызывая разнообразные по клиническим проявлениям заболевания (микозы) - от легких, имеющих косметическое значение, до тяжелых системных инфекций с поражением различных органов, тканей и систем. Большинство патогенных для человека грибов являются представителями преимущественно класса Deuteromycetes (Fungi imperfecti или несовершенные грибы, не способные размножаться половым путем), а также классов Ascomycetes и Basidiomycetes. Выделяют 4 группы микозов (табл. 23).

Некоторые микозы встречаются спорадически, другие имеют эпидеми­ческое распространение, третьи характеризуются природной очаговостью. Патогенные для человека грибы могут быть одноклеточными и многоклеточными, одна часть из которых способна расти на искусственных сре­дах, а другая не способная развиваться вне организма больного человека.

Таблица 23. Классификация микозов.

Группы микозов	Заболевания	Возбудители
Глубокие (системные микозы)	Кокцидиоидный микоз Гистоплазмоз Криптококкоз Бластомикоз	Coccidioides immitis Histoplasma capsulatum Criptococcus neoformans Blastomyces dermatitidis
Подкожные (субкутанные) микозы	Споротрихоз Хромобластомикоз (хромомикоз) Мицетома (мадуромикоз)	Sportrichum schenckii Fonsecaca pedrosai Грибы родов Acremonium, Aspergillus и т.д.
Эпидермомикозы	Эпидермофития Рубромикоз Трихофития Микроспория Парша (фавус)	Epidermophyton floccosum Trichophyton rubrum Trichophyton violaceum, Trichophyton mentagrophytes, Microsporum canis, Microsporum ferrugineum Achorion schoenleini
Кератомикозы (поверхностные микозы)	Разноцветный лишай Черный микоз (кладоспоридиоз) Трихоспороз (белая пьедра) Черная пьедра	Malassezia furfur Cladosporium werneskii Trichosporon beigelii Piedraia hortae
Оппортунистические микозы	Кандидозы Мукороз Аспергиллез Пенициллиоз Пневмоцистоз	Candida albicans, Candida tropicalis Candida pseudotropicalis и др. Mucor spp Aspergillus spp Penicillium spp Pneumocystis carinii

Размеры клеток гриба варьируют от нескольких (дрожжи, дерматофиты) до десятков и сотен микрометров (мукоровые). Грибы относятся к примитивным эукариотам, их клетки содержат гомогенную или зернистую цитоплазму, одно или несколько шарооб­разных ядер нуклеолями, вакуоли, митохондрии, аппарат Гольджи и ряд включений. По­стоянными включениями в клетке грибов являются липиды, волютин, гли­коген, реже - кристаллы солей, ор­ганических кислот и пигменты.

Морфология грибов весьма разнообразна (рис. 32). Наиболее часто у молодых клеток грибов встречается яйцевидная форма или удлиненная в виде трубочки или нитей ветвящаяся структура - мицелий. Поли­морфные, грушевидные, булавовид­ные, веретенообразные, амебовидные клетки встречаются в более зрелых культурах.

Мицелий представляет собой круг­лую ветвящуюся трубку диаметром от 1 до 10 мк, разделенную поперечными перего­родками на клетки длиной 5 до 70 мкм. Ветви мицелия возникают в виде боковых выростов, которые могут располагаться у некоторых грибов через пра­вильные промежутки с той или дру­гой стороны. Переплетаясь и анастомозируя друг с другом, нити мицелия создают рыхлую или густую грибницу, плотно спаянную с пита­тельным субстратом или же легко от него отделяющуюся. На конце нитей у ряда грибов можно наблюдать своеобразные ветвления в виде рогов северного оленя, канделябров, гребешковых органов, завитков, тонких спиралей или же вздутий, напоми­нающих дубинку, посошок, булаву.

В культурах дрожжеподобных гри­бов рода Candida вместо истинного мицелия встречается псевдомицелий, состоящий из удли­ненных клеток с боковыми ответвле­ниями, напоминающими нити истин­ного мицелия. В отличие от истинного мицелия, псевдомицелий представлен отдельными, не связанными друг с другом клетками, каждая из которых имеет собственную оболочку и вместо истинного ветвле­ния в псевдомицелии имеется древовидное расположение клеток.

Важнейшим элементом грибов являются споры или конидии, с помощью которых грибы размно­жаются и распространяются во внеш­ней среде. Обычно споры образуются в большом количестве и возникают либо внутри мицелия (эндоспоры - тканевые фор­мы возбудителей кокцидиоидного микоза, риноспоридиоза, развивающие­ся в крупных круглых образовани­ях - сферулах), или непосредственно на мицелии, на его ветвях, либо на своеобразных спороносных гифах (экзоспоры).

Выделяют следующие виды спор:

· артроспоры прямоугольной и округлой формы, размером 2-4х4-8 мкм, образую­щиеся путем расчленения мицелия;

· бластоспоры - круглые или яйце­видные споры, размером 1,5-8 мкм, образующиеся почкованием материн­ской клетки;

· хламидоспоры - ок­руглые, крупные споры, диаметром 15-20 мк с выраженной шероховатой оболочкой, располагающиеся по ходу (интеркаларные, промежуточные) или на концах (терминальные, концевые)мицелия;

· микроконидии (алейроспоры) округлой или грушевидной формы размером 2-5х3-7 мкм, располагающиеся кучками или поодиночке;

Рис. 32. Морфология грибов. 1 - мицелий; 2 - разветвление мицелия в виде рогов северного оленя; 3 - гребешковые органы - окончания мицелия дерматофитов; 4 - канделябры - концевые ветвления мицелия; 5 - булавовидные окончания мицелия; 6 - окончания мицелия в виде дуби­нок; 7 - узловатые органы - сплетения мицелия дерматофитов; 8 - веретенообразные споры на концах мицелия; 9 - аскоспоры; 10-спорангиоспоры; 11 - артроспоры; 12 - бластоспоры; 13 - хламидоспоры концевые и интрекалярные; 14 - алейрии; 15 - макро- и микроконидии.

· конидии (конидиоспоры) круглой или яйцевидной формы с гладкой или шероховатой оболочкой, диаметром 3-5х5-8 мкм, образующиеся на специальных конидиеносцах по бо­кам либо на концах мицелия и прикрепляющиеся к нему непосредствен­но или тонкой ножкой. К конидиям также относят крупные веретенообразные формы длиной 6-8-40 мк, шириной 3-12 мк с попереч­ными перегородками (макроконидии). В патологиче­ском материале из очагов поражения от больных микозами обнаруживаются достаточно однообразные элементы гриба (споры, нити мицелия), не по­хожие на элементы гриба в культурах.

Культуральные признаки некото­рых патогенных грибов, выращивае­мых при разных температурах, могут быть различны. Так, например, возбудители кокцидиоидного микоза, бластомикозов, гистоплазмоза при температуре 30-33 0 С и ниже дают мицелиальные формы, а при темпера­туре 35-37 0 С-дрожжевые формы, почти совсем лишенные мицелия.

Культуры патогенных грибов от­личаются большим разнообразием. Разнообразие колоний зависит от видовых и возрастных особен­ностей гриба, состава питательной среды и условий культивирования.

Диаметр колоний колеб­лется от 0,5 до 3 см и более, цвет также варьирует - наряду с бес­цветными колониями встречаются беловато-жел­товатые, желтые, коричневые, розо­вые, красные, зеленоватые, оранже­вые, фиолетовые, черные. Колонии одних грибов плоские и ровные, других - складчатые, бугристые, морщини­стые, в некоторых случаях кратеро-образные или куполовыпуклые. По­верхность колоний у одних грибов гладкая, кожистая, иногда блестя­ще-сального оттенка, у других пуши­стая, бархатистая или мучнистая.Консистенция культур тоже раз­лична: у одних кожистая, плотная, у других мягкая, тестообразная, слизисто-тягучая, у некоторых крошковатая. Отношение грибов к субстрату так­же различное: одни глубоко внед­ряются в среду, другие легко отде­ляются от питательной среды.

Патогенные грибы являются аэробами, использующими для своего питания различные белки, углеводы, липиды, кератин и т.д. Глу­бина разложения питательных субстратов различна у разных грибов. Так, одни грибы разлагают белки только до аминокислот, другие до аммиака и сероводорода. Разложение углеводов одними грибами сопро­вождается кислотообразованием, тогда как другие грибы расщепляют их до углекислоты и воды.

Большинство патогенных грибов лучше развиваются в кислых средах (рН 6,0-6,5) при оптимальной температуре 28-33 0 С, однако они способны хорошо расти при комнатной температуре (16-20 0 С) и при температуре 35-37 0 С.Наиболее часто для культивирования грибов применяют плотную или жидкую среду Сабуро, содержащую пептон и мальтозу.

Лабораторная диагностика микозов

У больных микроспорией в лучах люминесцентной лампы пораженные волосы имеют изумрудно-зеленое свечение.

Для диагностики микозов применяется широкий комплекс лабораторных исследований (микроскопический, микологический, аллергический, серологический, генетические методы, биопроба – схема 23).

Схема 23. Лабораторные методы диагностики микозов

Микроскопический метод играет важную роль в диагностике микозов, т.к. дает возможность быстро выявить в нативных и окрашенных препаратах наличие и расположение клеток, спор гриба и нитей мицелия в патологическом материале. Наиболее часто для окраски грибов применяют общепринятые методы Грама, Романовского-Гимза, Циля-Нильсена, Бурри. Разработан также широкий набор специальных методов окраски грибов.

Экспресс-диагностика микозов осуществляется с помощью прямой РИФ.

Микологический метод(выделение чистой культуры гриба и ее идентификация) является важнейшей составной частью лабораторного исследования при микозах. Посевы производят на специальные плотные и жидкие (неселективные и селективные) питательные среды (среды Сабуро – мальтозо-пептонная, сусло-агар, Чапека; кукурузный, рисовый, картофельный, кровя­ной, шоколадный, сердечно-мозговой, угольно-дрожжевой агар и т.д.). Селективные среды содержат антибиотики (левомицетин, стрептомицин, пенициллин и др.), красители (бенгальский розовый и др.) или дезинфицирующие вещества. В отличие от слабощелочных сред для выращивания большинства бактерий, среды для культивирования грибов имеют кислую или слабокислую рН (5,7-6,8).

Для первичной дифференциации грибов разработан агар CHROMс хромогенными субстратами, расщепляющимися ферментами грибов с образованием окрашенных соединений, в результате чего колонии различных видов грибов окрашиваются в разные цвета – красный, желтый, белый, кремовый, ко­ричневый, черный и т.д.

Культивирование грибов осуществляют обычно при температуре 22-28 0 С в течение 2-4 недель. Идентификацию выделенной культуры гриба проводят на основании характеристики колоний (внешний вид, форма, консистенция, цвет), микроскопического строения гриба (строение мицелия, форма и расположение конидиеносцев и конидий – спор), а также по биохимическим и другим признакам.

Серологический метод– определение антител к грибам или их антигенам в сыворотке крови больных микозами с помощью РА, РСК, РНГА, РИФ, ИФА, иммуноблотинга

Аллергический метод –постановка внутрикожных аллергических проб. Проводят с грибковыми аллергенами, представляющих собой взве­си из убитых грибов, фильтраты обезвреженных нагреванием культур, полисахаридные и бел­ковые фракции клеток гриба. Результаты аллергических проб учитывают через 20 мин (не­медленные) и через 24-48 ч (замедленные реакции).

Для выявления грибковой сенсибилизации орга­низма также применяют иммунологические тесты in vitro (дегрануляция базофилов как тест гиперчувствительно­сти немедленного типа, а для выявления гиперчувстви­тельности замедленного типа - реакцию торможения миграции лейкоцитов или бласттрансформации лимфоцитов).

Биопроба-заражение чувствительных жи­вотных (мыши, крысы, хомяки, кролики, морские свинки, соба­ки, кошки) различными способами (накожно, внутрикожно, подкожно, внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно, внутрисердечно, интрацеребрально, перорально, интратрахеально) для выделения чистой культуры гриба.

Гистологический методнаправленна обнару­жение гриба в тканях, полученных при биопсии и аутопсии.

Генодиагностика.Разработана ПЦР для выявления в материале от больного специфических фрагментов ДНК грибов, позволяющая вы­явить около 40 видов грибов, в том числе Candidaalbicans и ее варианты,Т. rubrum и С. neoformans, различные видыAspergillus, возбудителей паракокцидиоидомикоза (Paracoccidioides brasiliensis) и гистоплазмоза (Histoplasma capsulatum).