Микозы и микотоксикозы методы лабораторной диагностики
МИКОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ , комплекс методов, применяемых в н.-и. и диагностич. лабораториях для выяснения роли грибов в этиологии болезней животных.
Микологическое исследование при диагностике микозов включает микроскопию патол. материала для обнаружения возбудителя в органах и тканях больного животного, выделение чистой культуры и её [ее] идентификацию. В неясных случаях проверяют патогенность выделенных культур биол. пробой. Дополнительно используют серологич., аллергич., люминесцентный методы диагностики.
Отбор патол. материала при дерматомикозах производят с периферии свежих, поражённых [пораженных] очагов (корочки и волосы); при эпизоодич. лимфангите, споротрихозе, актиномикозе стерильно извлекают гной из невскрывшихся абсцессов; при кандидамикозе, аспергиллёзе [аспергиллезе] и др. висцеральных микозах берут соскобы с наложений на слизистых оболочках, а также кусочки поражённых [пораженных] внутренних органов. Патол. материал помещают в стерильные чашки Петри, Для лучшего выявления элементов грибов из патол. материала готовят препараты на предметном стекле в капле 10—20%-ного р-ра едкого натра с добавлением 50% -ного водного р-ра глицерина. Микроскопируют неокрашенные препараты (реже окрашенные по Граму) при малом увеличении, затем при X 400 или X 600. Первичную культуру возбудителей получают посевом патол. материала на агар Сабуро, МПА с глюкозой, кровяной, печёночный [печеночный] , сусло-агар (10—12 пробирок). При значит. загрязнении посторонней микрофлорой можно применить предпосевную обработку патол. материала или добавить антибиотики в питат. среду. Оптимальный рН питат. сред для патогенных грибов составляет 6,0—7,2, темп-pa культивирования 26—30°С, для отдельных представителей 37°С. Посевы выдерживают до 30 сут, т. к. первичные культуры чаще развиваются медленно. Детальное изучение культурально-морфологич. признаков, ферментативной активности и определение вида гриба проводят гл. обр. на спец. средах. Патогенность культур проверяют заражением белых мышей, морских свинок, кроликов, хомяков через скарифицированную кожу, подкожно, интраперитониально, внутривенно, ингаляционным методом. Серологич. реакции (РСК, преципитации, агглютинации), аллергич. внутрикожные пробы применяют в комплексе с др. методами при диагностике преим. кандидамикоза, гистоплазмоза, эпизоотич. лимфангита. Люминесцентным методом выявляют у животных микроспорию.
Для микологического исследования при диагностике микотоксикозов берут ср. пробы из партий кормов, вызвавших алиментарное отравление животных. Предварительно исключают инфекц. болезни, отравления ядовитыми растениями и ядохимикатами. М. и. состоит из органолептич., микроскопич. анализов корма, выявления микофлоры и идентификации выделенных культур грибов. Используют биол. и физико-химич. методы исследования кормов и культур грибов на токсичность.
При органолептич. анализе учитывают влажность, цвет, запах, налёты [налеты] спороношений грибов (нередко корма, поражённые [пораженные] токсичными грибами, не отличаются по внешнему виду от доброкачественных). Для выявления поверхностной микофлоры зерно высевают в чашки Петри на агар Чапека. Глубинное поражение зерна грибами определяют после предварит. обработки его р-ром сулемы 1 : 1000, 3%-ным р-ром формальдегида с последующей про мывкой стерильной водой (для нейтрализации р-ра формальдегида добавляют каплю 5%-ного р-ра аммиака). Затем зерно (10—15 шт.) раскладывают на агар Чапека в чашки Петри. При выделении грибов из муки, отрубей, комбикорма пользуются гл. обр. методом разливки. Взвесь корма (10 г на 100 мл стерильной воды) встряхивают в шуттель-аппарате и по 1 мл взвеси дальнейшего разведения (1 : 1000—10000) распределяют по поверхности агара Чапека на 8—10 чашек Петри. Грубые корма (сено, солома) высевают в чашки Петри на фильтровальную бумагу, увлажнённую [увлажненную] стерильным р-ром Ван Итерсона. Посевы кормов выдерживают 7—10 сут при t 22, 26°С. На 3—5-е сут ориентировочно определяют микофлору просмотром колоний грибов на месте роста и микроскопией в капле стерильной воды или физиол. р-ра. По частоте обнаружения колоний отдельных видов грибов можно приближённо [приближенно] судить о степени поражённости [пораженности] корма. При посеве методом разливки нагрузку диаспор на 1 г корма учитывают более точно. Из колоний делают отсевы на агар Чапека в пробирки для получения чистых культур грибов и определения их вида. Выделение токсичных вариантов грибов из исследуемых образцов корма — решающий момент в диагностике микотоксикозов. Токсичность образцов корма и культур грибов определяют кожной реакцией на кролике и скармливанием лабораторным животным. Для выявления в кормах и культурах грибов афлатоксинов и зеараленона (Fз) применяют метод тонкослойной хроматографии на силикагеле в сочетании с люминесцентным анализом.
Лит.: Саркисов А. X. [и др.], Диагностика грибных болезней (микозов и микотоксикозов) животных, М., 1971; Курасова В. В., Костин В. В., Малиновская Л. С., Методы исследования в ветеринарной микологии, М., 1971.
Микозы — группа болезней, вызываемых патогенными микроскопическими грибами, активно паразитирующими в организме животного. К микозам относят и дерматофитозы — заразные заболевания кожи, характеризующиеся образованием на коже округлых шелушащихся, покрытых корками пятен с обломанными волосами.
К возбудителям дерматофитозов относят микроскопические грибы родов Microsporum и Trichophyton.
Источник возбудителей — больное животное. Факторы передачи возбудителя инфекции — контаминированные предметы ухода за животными, подстилка, навоз, переносчиками могут быть эктопаразиты. Заражение происходит контактным способом. Случаи заболевания наиболее часты осенью и зимой. Считается, что в 85 % случаев заболевания людей микроспорией связаны с заражением от кошек.
Различают следующие формы трихофитии: поверхностную, глубокую (фолликулярную), стертую (атипичную). Микроспория протекает преимущественно в поверхностной и стертой формах.
Диагноз устанавливается комплексно. Лабораторные исследования включают люминесцентное исследование и микроскопию патологического материала (соскоба кожи), выделение культуры возбудителя, его идентификацию.
С лечебной целью применяют противотрихофитийные вакцины для каждого вида животных. В настоящее время существуют следующие вакцины против трихофитии животных:
ТФ-130, ЛТФ-130, ТФ-130К для крупного рогатого скота;
СП-1 для лошадей; ментавак для пушных зверей и кроликов;
триховис для овец;
ателвак-ТС для верблюдов;
миколам, поливак-ТМ, вакдерм для собак, кошек, пушных зверей.
К микозам относят также аспергиллез (возбудитель — грибы из рода Aspergillus), мукоромикоз (возбудитель из рода Мисог), кокцидиоидомикоз (Coccidioidesimmi), кандидамикоз (возбудитель из рода Candida — дрожжеподобный гриб), пеницеллез (возбудитель из рода Penicillium), эпизоотический лимфангит (Histoplasma farciminosus). Возбудители широко распространены в природе и обнаруживаются на слизистых оболочках млекопитающих.
Микозы часто возникают при ослаблении резистентности макроорганизма, на фоне других инфекций.
Аспергиллез — инфекционная болезнь птиц, реже млекопитающих. При заболевании отмечаются характерные поражения в основном органов дыхания, образование фибринозных узелков различной формы и цвета.
Мукоромикоз — хронический микоз животных и человека, характеризующийся поражением органов дыхания и лимфатических узлов с образованием казеино-известковых гранулем. Болеют многие виды животных и человек, заражение происходит аэрогенным и алиментарными путями.
Кокцидиоидомикоз — глубокий микоз, протекающий в виде доброкачественной гранулемы дыхательных путей и лимфатических узлов. Восприимчивы крупный рогатый скот, собаки, овцы, ослы, кошки, кролики, обезьяны и т.д. Источник возбудителя — больные животные. Заражение происходит аэрогенным путем, иногда алиментарным путем.
Кандидамикоз (молочница, оидомикоз) — заболевание животных и человека, характеризующееся поражением слизистых оболочек пищеварительного тракта с образованием творожистых пленок, грануломатозных процессов во внутренних органах. Обнаруживают поражения ротовой полости, молочной железы у коров, кишечника у свиней, иногда и кожи. Грибы рода Candida в естественных условиях патогенны для домашней птицы, млекопитающих и рыб (преимущественно поражается молодняк).
Ведущий фактор в патогенезе кокцидозной инфекции — состояние макроорганизма. Снижение резистентности организма ведет к активации, размножению гриба, который входит в состав нормальной микрофлоры слизистых оболочек.
Леницеллез — микоз человека и животных, сопровождающийся поражением ногтей, уха, верхних дыхательных путей, легких. Возможна генерализованная инфекция. Поражаются многие сельскохозяйственные животные и человек.
Специфическая профилактика и терапия отсутствуют.
Эпизоотический лимфангит — хроническая инфекционная болезнь однокопытных, характеризующаяся воспалением лимфатических сосудов кожи и подкожной клетчатки с образованием гнойных фонусов и язв. Возбудитель попадает в организм через поврежденную кожу. Переболевшие животные приобретают пожизненный иммунитет.
Диагностика микозов основывается на патологоанатомических данных, клинических признаках, аллергической пробе и лабораторных исследованиях, включающих микроскопию патологического материала, получение чистой культуры гриба.
Микотоксикозы — болезни сельскохозяйственных животных, возникающие после скармливания им кормов, загрязненных токсинами грибов, паразитирующих на вегетативных растениях, и отравления токсинами грибов-сапрофитов, поражающих корма во время их хранения.
Возбудитель: Claviceps paspali — вызывает клавицепстоксикоз — алиментарный токсикоз сельскохозяйственных животных, возникающий при поедании кормов растительного происхождения, пораженных спорыньевыми грибами. Токсин обладает нейротропным действием, содержится только в склероциях гриба, из которых выделяются алкалоиды.
Восприимчивы овцы, ослы, лошади, крупный рогатый скот, свиньи, гуси всех возрастов. Диагноз устанавливается на основании клинических признаков, анализа кормов, при выявлении склероциев и микотоксинов. Специфические средства профилактики отсутствуют, лечение симптоматическое.
Эрготизм — алиментарный микотоксикоз, возникающий при поедании хлебных, дикорастущих злаков, продуктов переработки с примесью рожков спорыньи. Возбудители эрготизма — Claviceps purpure и Claviceps microcephala, поражающие рожь, ячмень, овес, пшеницу в период вегетации. Чувствительны к ним животные многих видов, чаще поражаются крупный рогатый скот, овцы, свиньи, лошади. Токсины спорыньи вызывают у животных нервные симптомы, гангрену, диарею, сужение кровеносных сосудов, паралич, гибель.
Диагностика. В спорных случаях зараженность кормов определяют люминисцентным и химическим методами.
Стахиботриотоксикоз — остро или подостро протекающий микотоксикоз сельскохозяйственных животных, возникающий при поедании кормов, пораженных токсичным грибом Stachybotrys alternaus, растущим на сене и соломе. Восприимчивы лошади, свиньи и жвачные. Вспышка стахиботриотоксикоза отмечена у буйволов, лосей, бизонов. Стахиботриотоксин поражает центральную нервную и кровеносную систему.
Диагноз устанавливается на основании лабораторных исследований, которые заключаются в микроскопии патологического материала, выделении S. alternaus из кормов и определении его токсичности методом кожной пробы на кроликах.
Специфические средства терапии и профилактики отсутствуют.
Дендродохиотоксикоз — это остро протекающий микотоксикоз сельскохозяйственных животных вследствие поедания грубых кормов, пораженных грибом Dendrodochium toxicum. Дендродохины — цитоплазматические яды. Болеют лошади, овцы, собаки, кошки, куры, кролики. Диагноз устанавливается комплексно.
Специфические средства терапии и профилактики не разработаны.
Аспергиллотоксикоз — алиментарный микотоксикоз сельскохозяйственных животных, возникающий при скармливании кормов, пораженных грибом, чаще всего Aspergillus fumigatus (аспергиллофумигатотоксикоз), Aspergillus flavus (аспергиллофлавитоксикоз, афлатоксикоз). Токсины аспергиллов обладают местным (воспалительным) и общим (поражение центральной нервной системы, нарушение иммуногенеза) действием. Токсичность грибов устанавливают на лабораторных животных. Обнаружение афлатоксинов проводят методом тонкослойной хроматографии.
Фузариотоксикоз — алиментарный микотоксикоз, вызываемый грибами рода Fusarium: F. sporotrichiella, F. graminearum, F. nivale.
К фузариотоксикозам восприимчивы сельскохозяйственные животные всех видов. Токсины грибов поражают центральную нервную систему, желудочно-кишечный тракт, паренхиматозные органы, костный мозг. Токсичность корма проверяют на кроликах кожной , реакцией или подкожным заражением белых мышей, аквариумных рыбок, 1,5 —2-месячных цыплят, 9-дневных куриных эмбрионов.
Для диагностики разработаны серологические реакции.
Специфические средства терапии и профилактики не разработаны.
Инфекционный кератоконъюнктивит — острая инфекционная болезнь животных, характеризующаяся поражением глаз с развитием конъюнктивита и кератита. Восприимчивы крупный рогатый скот, овцы, козы, верблюды, свиньи и птицы. Источник возбудителя — больное животное. Насекомые являются механическими переносчиками возбудителя.
Окончательный диагноз устанавливается после микроскопического исследования мазков-соскобов с поверхности пораженной конъюнктивы.
Лабораторная работа. Лабораторная диагностика микозов и микотоксикозов
Специальность 111801 Ветеринария
Составитель: профессор, д-р биол. наук А. В. Андреева
доцент, канд. биол. наук З. З. Ильясова
Рецензент: заведующий кафедрой морфологии, патологии, фармации и незаразных болезней, д-р ветеринар. наук Гимранов В.В.
Ответственный за выпуск:
зав. кафедрой инфекционных болезней, зоогигиены и ветсанэкспертизы, д. б. н., профессор Андреева А.В.
г. Уфа, БГАУ, кафедра инфекционных болезней,
зоогигиены и ветсанэкспертизы
Лабораторная работа №15
Лабораторная диагностика микозов и микотоксикозов.
Цель занятия: Ознакомить студентов со свойствами возбудителей. Методами микробиологического исследования и этапами лабораторной диагностики трихофитии, микроскопии, эпизоотического лимфангита, а также с характеристикой микотоксинов, вызывающих микотоксикозы, грибами-продуцентами этих токсинов и методами исследований для постановки диагноза на микотоксикозы.
Оборудование и материалы. Культуры грибов родов Mucor, Aspergillus, Candida на плотной питательной среде Сабуро или др.; плакаты, таблицы; биопрепараты.
1 Общие сведения
Возбудители дерматомикозов (стригущего лишая и парши). Относят к несовершенным грибам к порядку Hyphomycetales, родам Trichophyton, Microsporum и Achorioti.
Возбудитель трихофитии рода Trichophyton (tricho - волос, phytum - растение). Основные виды трихофитона Т. faviforme, T. verrucosum вызывают заболевание преимущественно у молодняка крупного рогатого скота и овец, реже у лошадей, собак, верблюдов; Т. equinum — возбудитель лишая лошадей (1. 2 % случаев); Т. gypseum, Т. mentagrophytes — основные возбудители трихофитии у мышей, крыс, собак, кроликов, кошек, морских свинок, пушных зверей, редко лошадей, крупного рогатого скота.
Культивирование. Для выделения чистых культур материал после десятиминутной обработки 5. 10%-м раствором щелочи промывают стерильным физиологическим раствором при центрифугировании. Обломки волосков длиной 1. 2 см переносят на агар Сабуро в 8. 10 пробирок и располагают их на расстоянии 1 см друг от друга. Культивируют при 26. 28°С в аэробных условиях. Из-за сильной загрязненности патологического материала в питательную среду добавляют пенициллин и стрептомицин по 100. 200ЕД/мл.
Время появления и характер роста колоний зависят от вида гриба - возбудителя дерматомикоза.
1.2 СТРИГУЩИЙ ЛИШАИ, вызванный грибом рода Microsporum, по клиническому проявлению не отличается от трихофитии, за исключением того, что волосы на пораженных участках кожи головы, ног обламываются ближе к поверхности кожи. К микроспории восприимчивы кошки, собаки, лошади, пушные звери, обезьяны, тигры, а также человек (особенно дети). Взятие патологического материала, порядок его исследования такие же, как при трихофитии.
Различают три вица данного рода гриба: Microsporum lanosun, M. eqinum M.gypseun
Необходимо проводить дифференциацию трихофитона и микроспорума ввиду различного их антигенного строения.
Люминесцентная диагностика микроспории. Осуществляют с помощью ПРК- 4 с фильтром Вуда в темном помещении. При наличии возбудителя последний обнаруживают по характерному зеленоватому свечению под действием ультрафиолетового излучения (возбудители трихофитии не флуоресцируют). Возможна идентификация видов и родов возбудителей трихофитии и микроспории методом флуоресцирующих антител.
Различие в антигенном строении разных видов дерматомицетов имеет значение в создании профилактических специфических биопрепаратов. Биологическая промышленность выпускает вакцину для иммунизации животных против стригущего лишая с использованием культуры гриба Т.faviforme (вакцина ЛТФ-130).
Биопроба. Микроспорию можно воспроизвести у морских свинок, кроликов путем втирания культуры возбудителя или патологического материала в скарифицированную кожу.
Заведующий лабораторией — к.в.н. Маноян Марина Геворковна
Свою историю лаборатория ведет с 1973 г., когда в составе лаборатории антибиотиков был образован сектор микозов, ставший в 1997 г. самостоятельным подразделением. В 2002 г. сектор микозов был преобразован в лабораторию контроля качества и стандартизации лекарственных средств против микозов и микотоксикозов животных, впоследствии в 2016 году согласно спектру проводимых исследований лаборатория получила современное название, лаборатория микологической экспертизы и стандартизации лекарственных средств против микозов и микотоксикозов.
Лаборатория микологической экспертизы и стандартизации лекарственных средств против микозов и микотоксикозов является преемником научной школы заслуженного деятеля науки РСФСР, Героя Социалистического Труда, профессора, академика А.Х.Саркисова – основоположника микотоксикологии и отечественной школы ветеринарной микологии. Исследования, проведенные под его руководством, заложили основы вакцинопрофилактики и вакцинотерапии микозов животных, создали целое направление в ветеринарной микологии, которое с успехом развивали в дальнейшем его ученики.
Ученые лаборатории участвовали в разработке и внедрении в ветеринарную практику моно- и ассоциированных вакцин против дерматофитозов различных видов животных (ЛТФ-130, Трихостав, Вермет, Микродерм,), что стало качественно новым этапом в борьбе с микозами. Участие сотрудников лаборатории в подготовке досье на вакцину ЛТФ-130 согласно международным требованиям позволило единственную отечественную вакцину зарегистрировать в ЕС.
Специалистами лаборатории разработан и внедрен в российскую производственную практику технологический стандарт Master/Working Seed Lot System для вакцинных штаммов грибов, ранее применявшийся только в производстве бактериальных и вирусных препаратов.
В рамках выполнения государственного задания лаборатория микологической экспертизы и стандартизации лекарственных средств против микозов и микотоксикозов проводят:
- Исследования лекарственных средств для ветеринарного применения в рамках государственного мониторинга и выборочного контроля;
- Экспертизу лекарственных препаратов для ветеринарного применения с целью их государственной регистрации;
- Ведение и пополнение Всероссийской коллекции штаммов.
В лаборатории создана и пополняется не имеющая аналогов в РФ коллекция грибов-возбудителей дерматомикозов и оппортунистических микозов животных, в которой насчитывается более 80 штаммов различных видов грибов, в том числе выделенных впервые: Malassezia pachydermatis, M. sympodialis, Geotrichum candidum, Chrysosporium an., Nannizziopsis vriesii и другие.
Эксперты лаборатории отвечают за качественное проведение сертификационных испытаний отечественных и зарубежных биопрепаратов (вакцины, иммуномодуляторы, разбавители и диагностикумы) и инспекционный контроль лекарственных средств (подтверждение действия сертификата).
Сотрудники лаборатории принимали участие в разработке ГОСТов и Методических указаний:
В лаборатории осуществляется широкий спектр прикладных микологических исследований, включая диагностические, санитарно-микробиологические, экспертные, научно-исследовательские работы и т.д.
В подразделении разработаны различные модели грибковых инфекций животных, такие как грибковая септицемия, не инвазивные и инвазивные микозы ЖКТ, микозы дыхательных путей различных животных и птиц, кандидозный вагинит, дерматофитозы волосистой и гладкой кожи, онихомикозы и другие. Данные модели активно используются при проведении доклинических исследований противогрибковых лекарственных средств.
Основные направления деятельности сотрудников Лаборатории:
Сотрудники лабораторий являются членами Национальной Академии Микологии, Европейской конфедерации медицинской микологии. Лаборатория сотрудничает с Рабочей группой по ветеринарной микологии ISHAM (International Society for Human and Animal Mycology) в процессе составления международного обзора по эпизоотологии грибковых заболеваний животных.
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА ТОКСИКОЗОВ, ВЫЗВАННЫХ МИКРОСКОПИЧЕСКИМИ ГРИБАМИ ИЗ РОДА PENICILLIUM
Пенициллотоксикозы (Penicillotoxicosis) - отравления сельскохозяйственных животных кормами, содержащими токсичные продукты жизнедеятельности пенициллов.
Лабораторная диагностика микотоксикозов основана на результатах токсико-биологических, органолептических, микологических и физико-химических исследований.
Материал для исследования. В лабораторию направляют пробы всех кормов, входивших в суточный рацион животного в течение одного месяца до проявления болезни, а также остатки кормов из кормушек, содержимое желудочно-кишечного тракта павших животных и др. Отбор средних проб корма проводят ветеринарные и зооинженерные специалисты с представителями предприятий. Отобранную среднюю пробу делят на две части, упаковывают в чистые сухие стеклянные банки объемом 2. 3 л, герметически закрывают и пломбируют. Одну часть отправляют в лабораторию, другую хранят в хозяйстве в течение одного месяца в условиях, предотвращающих порчу или вторичное загрязнение. В документе указывают цель исследования, вид кормового средства, назначение, массу всей партии, место отбора пробы, основные клинические признаки у больных животных. Прилагают копию акта вскрытия трупов (при гибели животных), копию экспертиз ветеринарной лаборатории об исключении инфекционных болезней и отравлений животных химическими или растительными ядами (если такие исследования были проделаны лабораторией).
Органолептическое исследование. Определяют внешний вид, цвет, запах корма, выявляют признаки, отличающие дефектный корм от доброкачественного (изменение цвета; затхлый, плесневелый или гнилостный запах; наличие на поверхности корма мицелия гриба и др.). О санитарном качестве зерна можно косвенно судить по цвету и состоянию зерновых оболочек.
Токсикологическое исследование. Проводят на различных биологических моделях: кроликах, аквариумных рыбках гуппи породы Винер, белых мышах или сельскохозяйственных животных.
Микологический анализ. Включает в себя выделение из кормов и идентификацию грибов-продуцентов микотоксинов. С этой целью из кормов делают посевы в чашки Петри с агаром Чапека, сусло-агаром или в жидкую среду Билай. Грубые корма высевают во влажные камеры со средой Ван—Итерсона.
Физико-химический анализ. Его цель — качественное и количественное определение микотоксинов в кормах и других материалах с помощью различных методов — люминесцентного анализа, хроматографии и т.д.
При диагностике микотоксикоза наибольшее внимание уделяют обнаружению токсина, поскольку гриб-продуцент в ряде случаев к моменту исследования погибает и, кроме того, один и тот же микотоксин могут синтезировать различные виды грибов.
Возникает насущная потребность в ознакомлении широких кругов специалистов с результатами исследования токсинобразующих грибов с целью их дальнейшего изучения и создания системы мероприятий по борьбе с вызываемыми ими заболеваниями. Несомненно также, что изучение токсинобразующих грибов представляет одну из актуальных проблем экспериментальной микологии, имеющую важнейшее значение для здоровья человека и его благосостояния. Успешное выполнение этих ответственных задач на современном уровне научного эксперимента в значительной степени зависит от комплексных исследований микологов, химиков, медиков, ветеринарных врачей и других специалистов.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
Агольцов В.А., Полников И.А. Рекомендации по диагностике, профилактике и мерам борьбы с микозами и микотоксикозами сельскохозяйственных животных. Саратов. Аквариус, 2002.
Жуленко В.Н., Рабинович М.И., Таланов Г.А.. Ветеринарная токсикология, 2011.
Саркисов А. X. [и др.], Диагностика грибных болезней (микозов и микотоксикозов) животных, М., 1971.
Тутельян В.А. и Кравченко Л.В. Микотоксины (Медицинские и биологические аспекты), М., 1985.
Заведующая лаборатории микологического мониторинга и биологии грибов - кандидат биологических наук Богомолова Татьяна Сергеевна, член ISHAM (Международного общества по медицинской и ветеринарной микологии) и ECMM (Европейской конфедерации медицинской микологии). Богомолова Т.С. имеет большой стаж работы в медицинской микологии, прошла стажировку в Нидерландах по лабораторной диагностике микозов и микологическому обследованию помещений.
Телефоны лаборатории: - (812) 510-62-69, 303-51-40 (доб. 4136).
История
С момента создания НИО глубоких микозов в его состав входила микологическая лаборатория, сотрудники которой занимались изучением биологических особенностей патогенных грибов. В 1988 году была организована лаборатория морфологии, объединившая специалистов- микологов и патоморфологов с целью комплексного исследования тканевых и культуральных форм возбудителей микозов. В 1998 лаборатория была преобразована в НИЛ морфологии и биологии грибов, руководителем которой была назначена к.б.н. Н. В. Васильева.
Приказом ректора ГОУ ДПО СПб МАПО № 110 от 20.06.2005 г. на базе НИЛ морфологии и биологии грибов была создана Научно-исследовательская лаборатория микологического мониторинга и биологии грибов (референс-лаборатория). Среди сотрудников, работавших в НИЛ в предшествующий период, были известные специалисты - микологи, как проф. В. Б. Антонов, к.б.н. Г. И. Горшкова, к.м.н. М. А. Михайлова и др.
1 ряд (слева направо): н.с. Маметьева А.А., проф. Елинов Н.П., проф. Васильева Н.В., зав. НИЛ Богомолова Т.С., н.с. Павлова И.Э., 2 ряд (слева направо): зав. РКПГ Чилина Г.А., врач-лабораторный миколог Босак И.А., н.с. Выборнова И.В., н.с. Доршакова Е.В.
Задачи научных исследований биологической лаборатории грибов:
1. Изучение экологии грибковых патогенов и условных патогенов в различных географических регионах.
2.Создание референтных штаммов микромицетов - патогенов и условных патогенов -чувствительных и резистентных в антимикотикам.
3. Изучение микобиоты в жилых помещениях, в медицинских и других учрежденияхс определением её морфолого – физиологических особенностей.
4. Токсигенные грибы и микотоксикозы – возбудители, индуцируемые ими патологические процессы у пациентов. Характеристика микотоксинов и оценка их вкладов в патогенез разных микозов у людей и животных.
5. Мониторинг грибов в процессах биоразрушения различных объектов, и определения их доли и роли в ассоциациях с другими организмами. Подбор соответствующих биоцидов и рекомендации по их использованию на практике.
6. Штрих – кодирование избранных тест - культур с использованием ДНК микромицетов и последующим её секвенированием (совместная работа с НИЛ молекулярно –генетической микологии).
В референс-лаборатории микологического мониторинга и биологии грибов выделено несколько направлений работы
Изучение морфолого-биологических свойств микроскопических грибов (микромицетов) – возбудителей заболеваний у человека
Основные научные исследования направлены на изучение штаммовых различий грибов – возбудителей заболеваний у человека по морфологическим и биологическим свойствам, в том числе и признакам патогенности. В настоящее время в качестве возбудителей микозов у человека известно около 500 видов микромицетов. Ежегодно появляются новые патогены, меняется этиологическая структура инвазивных и поверхностных микозов, что создаёт трудности в их диагностике и лечении.
зав. НИЛ Богомолова Т.С.
вед. н.с. Аравийский Р.А.,
врач - лабораторный миколог Босак И.А.
н.с. Доршакова Е.В.
лаб. Колосова Е.А.,
лаб. Герасина Ю.Б.
Сотрудники НИЛ изучают видовой спектр возбудителей микозов в России, их распространённость, выявляют редкие и необычные виды при консультативной помощи з.д.н. РФ, проф. Н.П. Елинова.
На должности ведущего научного сотрудника лаборатории
работает д.м.н. профессор
Р. А. Аравийский, имеющий большой опыт изучения тканевых форм патогенных грибов, разработки экспериментальных моделей различных форм микозов и исследования противогрибковой активности новых препаратов invitro и invivo.
С 2010 года в лаборатории проводят видовую идентификацию культур грибов не только традиционными методами (по морфологическим и физиологическим свойствам), но и методом ДНК - секвенирования в тесном контакте с НИЛ молекулярно - генетической микологии.
В лаборатории начаты уникальные исследования токсигенности грибов - возбудителей микотоксикозов.
зам. директора по научной работе з.д.н. РФ, профессор Н.П. Елинов,
н.с. Доршакова Е.В.
Диссертационные исследования, проводимые с участием сотрудников лаборатории по темам:
Мониторинг чувствительностимикроскопических грибов к антимикотикам
Мониторинг чувствительности и резистентности микромицетов к антимикотикам и дезинфектантам – важнейшее направление деятельности лаборатории. В лаборатории впервые проведено проспективное исследование чувствительности дрожжевых организмов – возбудителей инвазивных и поверхностных микозов, выделенных от больных в Санкт – Петербурге, к наиболее распространённым антимикотикам, применяемым для лечения: флуконазолу и вориконазолу. Работа была частью Международного многоцентрового исследования ARTEMISDisk.
Заведующая лабораторией Богомолова Т.С. и научный сотрудник Выборнова И.В. обсуждают результаты исследования чувствительности C. neoformans, изолированного от ВИЧ –инфицированного пациента к флуконазолу.
В рамках Международного научного исследования SCAREStudy начато изучение резистентности возбудителей аспергиллёза к азолам: итраконазолу, вориконазолу, позаконазолу. Изучено 38 изолятов Aspergillusspp. Выявлено 3 штамма, резистентных к азолам.
Диссертационные исследования, проводимые с участием сотрудников лаборатории по темам:
За 5 лет изучено более 2000 штаммов возбудителя. Отмечено возрастание частоты микозов, обусловленных не-albicansвидамиCandida, в том числе C. guilliermondii. Показано снижение доли чувствительныхк флуконазолу штаммов среди возбудителей кандидоза.
Изучение микромицетов – контаминантов и биодеструкторовпомещений
Микроскопические грибы, присутствующие в воздухе больничных помещений, в воздухе сырых жилых помещений и развивающиеся в строительных материалах и конструкциях производственных (в том числе медицинских ) и жилых зданий, обуславливают профессиональные и бытовые микозы, а также нозокомиальные микозы и микоаллергозы. Это аспергиллез бронхов и лёгких, микогенная аллергия, аллергический бронхолёгочный аспергиллёз, экзогенный альвеолит, мукороз, пенициллиоз и др. микозы органов дыхания, индуцируемые микромицетами.
н.с. Маметьева А.А.
руководитель Российской коллекцией патогенных грибов Чилина Г.А.
Сотрудники лаборатории осуществляют микологический мониторинг больничных, жилых, служебных и производственных помещений, разрабатывают меры борьбы с биодеструкцией зданий, обусловленной микроскопическими грибами. При обследовании помещений с нарушенным температурно - влажностным режимом (подвергшихся протечкам, затоплению после пожара, с отсутствием гидроизоляции и т.п.) специалисты лаборатории выявляют очаги биоповреждений, отбирают пробы воздуха, соскобы и смывы с поражённых поверхностей. По результатам микологического исследования образцов выдаётся заключение о количестве обнаруженных микроскопических грибов, их видах и потенциальной опасности для здоровья.
 |  |
 |
Диссертационные исследования, проводимые с участием сотрудников лаборатории по темам:
(ассистент кафедры клинической микологии, аллергологии и иммунологии Козлова Я.И.; научные руководители: д.б.н., проф. Васильева Н.В., д.м.н., проф. Н.Н. Климко).
Установлено, что факторами развития микогенной аллергии являются признаки плесневого поражения и определённая концентрация спор микромицетов в воздухе. Предложено предельное значение концентрации грибных спор в воздухе для своевременного принятия мер по эрадикации грибов и снижения заболеваемости, связанной с присутствием плесени.
- Определен спектр чувствительности к флуконазолу и вориконазолу 2400 штаммов дрожжей, выделенных от больных в Санкт-Петербурге. Выявлена тенденция к росту числа нечувствительных к флуконазолу возбудителей инвазивного кандидоза.
- Выявлен основной природный резервуар возбудителя криптококкоза в Санкт-Петербурге. Проведено сравнительное изучение биологических свойств природных и клинических изолятов Cryptococcusneoformans.
- Установлены распространённость и источники возбудителей инвазивного аспергиллёза в больницах Санкт-Петербурга.
- Выявлен спектр возбудителей онихомикоза стоп в различных федеральных округах России.
- Установлен спектр грибов - биодеструкторов жилых и больничных зданий. Определены причины биоповреждений и меры борьбы с грибковой контаминацией помещений.
Изучена противогрибковая активность основных строительных биоцидов и дезинфектантов. Показана негрибостойкость некоторых строительных материалов.
- На базе НИЛ выполнены и защищены 4 диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук и 1 диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук.
- За 2006-2010 г.г. опубликовано 127 печатных работ, сделано 57 докладов на Российских и международных научных конференциях.
Сотрудники лаборатории принимают участие в повышении квалификации слушателей кафедры микробиологии и микологии, оказывают консультативную помощь.
Лаборатория в качестве референтной, оказывает консультативно - диагностическую помощь ЛПУ города и России по вопросам диагностики микозов и идентификации возбудителей, используя методики международного уровня и в соответствии с международными стандартами.
Совещание по идентификации возбудителей редких микозов. На фото слева направо:
зав. лабораторией к.б.н.
зам. директора по научной работе з.д.н. РФ, профессор Н.П. Елинов,
директор НИИ медицинской микологии им. П. Н. Кашкина д.б.н. профессор
Зав. лабораторией к.б.н. Т.С. Богомолова проводит микроскопические и культуральные исследования патологического материала на грибы. Микроскопические исследования осуществляются с помощью световой и люминесцентной микроскопии.
Проводятся исследования чувствительности к антимикотикаммикроскопических грибов – возбудителей заболеваний.
 |  |
