Диагностика микозов в ветеринарии

Микозы — группа болезней, вызываемых патогенными микроскопическими грибами, активно паразитирующими в организме животного. К микозам относят и дерматофитозы — заразные заболевания кожи, характеризующиеся образованием на коже округлых шелушащихся, покрытых корками пятен с обломанными волосами.

К возбудителям дерматофитозов относят микроскопические грибы родов Microsporum и Trichophyton.

Источник возбудителей — больное животное. Факторы передачи возбудителя инфекции — контаминированные предметы ухода за животными, подстилка, навоз, переносчиками могут быть эктопаразиты. Заражение происходит контактным способом. Случаи заболевания наиболее часты осенью и зимой. Считается, что в 85 % случаев заболевания людей микроспорией связаны с заражением от кошек.

Различают следующие формы трихофитии: поверхностную, глубокую (фолликулярную), стертую (атипичную). Микроспория протекает преимущественно в поверхностной и стертой формах.

Диагноз устанавливается комплексно. Лабораторные исследования включают люминесцентное исследование и микроскопию патологического материала (соскоба кожи), выделение культуры возбудителя, его идентификацию.

С лечебной целью применяют противотрихофитийные вакцины для каждого вида животных. В настоящее время существуют следующие вакцины против трихофитии животных:

ТФ-130, ЛТФ-130, ТФ-130К для крупного рогатого скота;

СП-1 для лошадей; ментавак для пушных зверей и кроликов;

триховис для овец;

ателвак-ТС для верблюдов;

миколам, поливак-ТМ, вакдерм для собак, кошек, пушных зверей.

К микозам относят также аспергиллез (возбудитель — грибы из рода Aspergillus), мукоромикоз (возбудитель из рода Мисог), кокцидиоидомикоз (Coccidioidesimmi), кандидамикоз (возбудитель из рода Candida — дрожжеподобный гриб), пеницеллез (возбудитель из рода Penicillium), эпизоотический лимфангит (Histoplasma farciminosus). Возбудители широко распространены в природе и обнаруживаются на слизистых оболочках млекопитающих.

Микозы часто возникают при ослаблении резистентности макроорганизма, на фоне других инфекций.

Аспергиллез — инфекционная болезнь птиц, реже млекопитающих. При заболевании отмечаются характерные поражения в основном органов дыхания, образование фибринозных узелков различной формы и цвета.

Мукоромикоз — хронический микоз животных и человека, характеризующийся поражением органов дыхания и лимфатических узлов с образованием казеино-известковых гранулем. Болеют многие виды животных и человек, заражение происходит аэрогенным и алиментарными путями.

Кокцидиоидомикоз — глубокий микоз, протекающий в виде доброкачественной гранулемы дыхательных путей и лимфатических узлов. Восприимчивы крупный рогатый скот, собаки, овцы, ослы, кошки, кролики, обезьяны и т.д. Источник возбудителя — больные животные. Заражение происходит аэрогенным путем, иногда алиментарным путем.

Кандидамикоз (молочница, оидомикоз) — заболевание животных и человека, характеризующееся поражением слизистых оболочек пищеварительного тракта с образованием творожистых пленок, грануломатозных процессов во внутренних органах. Обнаруживают поражения ротовой полости, молочной железы у коров, кишечника у свиней, иногда и кожи. Грибы рода Candida в естественных условиях патогенны для домашней птицы, млекопитающих и рыб (преимущественно поражается молодняк).

Ведущий фактор в патогенезе кокцидозной инфекции — состояние макроорганизма. Снижение резистентности организма ведет к активации, размножению гриба, который входит в состав нормальной микрофлоры слизистых оболочек.

Леницеллез — микоз человека и животных, сопровождающийся поражением ногтей, уха, верхних дыхательных путей, легких. Возможна генерализованная инфекция. Поражаются многие сельскохозяйственные животные и человек.

Специфическая профилактика и терапия отсутствуют.

Эпизоотический лимфангит — хроническая инфекционная болезнь однокопытных, характеризующаяся воспалением лимфатических сосудов кожи и подкожной клетчатки с образованием гнойных фонусов и язв. Возбудитель попадает в организм через поврежденную кожу. Переболевшие животные приобретают пожизненный иммунитет.

Диагностика микозов основывается на патологоанатомических данных, клинических признаках, аллергической пробе и лабораторных исследованиях, включающих микроскопию патологического материала, получение чистой культуры гриба.

Микотоксикозы — болезни сельскохозяйственных животных, возникающие после скармливания им кормов, загрязненных токсинами грибов, паразитирующих на вегетативных растениях, и отравления токсинами грибов-сапрофитов, поражающих корма во время их хранения.

Возбудитель: Claviceps paspali — вызывает клавицепстоксикоз — алиментарный токсикоз сельскохозяйственных животных, возникающий при поедании кормов растительного происхождения, пораженных спорыньевыми грибами. Токсин обладает нейротропным действием, содержится только в склероциях гриба, из которых выделяются алкалоиды.

Восприимчивы овцы, ослы, лошади, крупный рогатый скот, свиньи, гуси всех возрастов. Диагноз устанавливается на основании клинических признаков, анализа кормов, при выявлении склероциев и микотоксинов. Специфические средства профилактики отсутствуют, лечение симптоматическое.

Эрготизм — алиментарный микотоксикоз, возникающий при поедании хлебных, дикорастущих злаков, продуктов переработки с примесью рожков спорыньи. Возбудители эрготизма — Claviceps purpure и Claviceps microcephala, поражающие рожь, ячмень, овес, пшеницу в период вегетации. Чувствительны к ним животные многих видов, чаще поражаются крупный рогатый скот, овцы, свиньи, лошади. Токсины спорыньи вызывают у животных нервные симптомы, гангрену, диарею, сужение кровеносных сосудов, паралич, гибель.

Диагностика. В спорных случаях зараженность кормов определяют люминисцентным и химическим методами.

Стахиботриотоксикоз — остро или подостро протекающий микотоксикоз сельскохозяйственных животных, возникающий при поедании кормов, пораженных токсичным грибом Stachybotrys alternaus, растущим на сене и соломе. Восприимчивы лошади, свиньи и жвачные. Вспышка стахиботриотоксикоза отмечена у буйволов, лосей, бизонов. Стахиботриотоксин поражает центральную нервную и кровеносную систему.

Диагноз устанавливается на основании лабораторных исследований, которые заключаются в микроскопии патологического материала, выделении S. alternaus из кормов и определении его токсичности методом кожной пробы на кроликах.

Специфические средства терапии и профилактики отсутствуют.

Дендродохиотоксикоз — это остро протекающий микотоксикоз сельскохозяйственных животных вследствие поедания грубых кормов, пораженных грибом Dendrodochium toxicum. Дендродохины — цитоплазматические яды. Болеют лошади, овцы, собаки, кошки, куры, кролики. Диагноз устанавливается комплексно.

Специфические средства терапии и профилактики не разработаны.

Аспергиллотоксикоз — алиментарный микотоксикоз сельскохозяйственных животных, возникающий при скармливании кормов, пораженных грибом, чаще всего Aspergillus fumigatus (аспергиллофумигатотоксикоз), Aspergillus flavus (аспергиллофлавитоксикоз, афлатоксикоз). Токсины аспергиллов обладают местным (воспалительным) и общим (поражение центральной нервной системы, нарушение иммуногенеза) действием. Токсичность грибов устанавливают на лабораторных животных. Обнаружение афлатоксинов проводят методом тонкослойной хроматографии.

Фузариотоксикоз — алиментарный микотоксикоз, вызываемый грибами рода Fusarium: F. sporotrichiella, F. graminearum, F. nivale.

К фузариотоксикозам восприимчивы сельскохозяйственные животные всех видов. Токсины грибов поражают центральную нервную систему, желудочно-кишечный тракт, паренхиматозные органы, костный мозг. Токсичность корма проверяют на кроликах кожной , реакцией или подкожным заражением белых мышей, аквариумных рыбок, 1,5 —2-месячных цыплят, 9-дневных куриных эмбрионов.

Для диагностики разработаны серологические реакции.

Специфические средства терапии и профилактики не разработаны.

Инфекционный кератоконъюнктивит — острая инфекционная болезнь животных, характеризующаяся поражением глаз с развитием конъюнктивита и кератита. Восприимчивы крупный рогатый скот, овцы, козы, верблюды, свиньи и птицы. Источник возбудителя — больное животное. Насекомые являются механическими переносчиками возбудителя.

Окончательный диагноз устанавливается после микроскопического исследования мазков-соскобов с поверхности пораженной конъюнктивы.

Масимов Э.Н., к.б.н., ветеринарный врач ИВЦ МВА, г. Москва

В современном мире постоянно совершенствующихся высоких технологий и невиданных информационных потоков различные метаморфозы произошли не только с человеком, животными, но и с микробиотами, в том числе и относящимися к царству грибов – микромицетов.

К концу ХХ века лидирующее положение занял антропофильный дерматофитный гриб – красный трихофитон, вызывающий рубромикоз гладкой кожи и ногтей – онихомикоз.

Статистический анализ заболеваемости дерматомикозами за последнее десятилетие показал, что число больных во всем мпире, в том числе и в Росийской Федерации, ежегодно увеличивается. Распространенность этих заболеваний в популяции, по различным данным, приближается к 10%Б 1 .

В настоящее время дерматофитозы собак, кошек (микроспория, трихофития) широко распространены в нашей стране и других странах мира. Они занимают одно из ведущих мест (от 7 до 61%) в патологии кожи и ее производных. Это связано с ростом численности бездомных животных, служащих основным источником возбудителя инфекции, высокой восприимчивостью собак к заражению, со способностью патогенных дерматофитов длительное время выдерживать неблагоприятные воздействия внешней среды, с отсутствием или несвоевременным проведением диагностических, лечебных и профилактических мероприятий 5 .

Нередко, исходя из практики, к врачу специалисту в области ветеринарной дерматологии направляются пациенты, диагностика дерматофитозов у которых была проведена некорректно. В следствие чего назначено неправильное лечение, не имеющее соответственно положительной динамики. Владельцы уходят из клиники, появляются негативные отзывы, врач также недоволен собственной работой.

Клиническая картина дерматомикозов весьма полиморфна, поэтому во всех случаях диагноз должен быть подтвержден данными лабораторного исследования.

Для лабораторной диагностики дерматомикозов используют микроскопический, люминесцентный, культуральный, иммунологический методы исследования. Лабораторная диагностика дерматофитозов и дерматомикозов состоит из нескольких этапов. В обычной клинической практике многие ветеринарные врачи ограничиваются микроскопическим и люминесцентным исследованием. При необходимости их дополняют культуральным исследованием.

Прежде, чем приступить к лабораторной диагностике дерматофитозов, ветеринарному врачу необходим тщательно собранный анамнез, список дифференциальных диагнозов.

Клинические симптомы дерматофитоза, вызванного например Microsporum canis у кошек могут варьировать от асимптоматического носительства до поражения кожи с образованием струпа. Типичное проявление заболевания - единичные или множественные, быстро распространяющиеся кольцеобразные поражения округлой или неправильной формы, сопровождающиеся эритемой, чешуйками7. Дерматофитные мицетомы или псевдомицетомы являются подкожными узловыми или изьязвленными формами со свищевыми ходами, видимыми у персов и, иногда, у других длинношерстных пород 2 .

Поскольку, клиническая картина может быть сильно вариабельна, дерматофитоз должен подозреваться почти у всех животных, но особенно кошек, которые имеют фокальную или мультифокальную алопецию, шелушение и корки; диффузную алопецию, себоррею и шелушение; узлы и свищевые ходы; воспаление, эритему, эрозии и язвы; и фолликулиты и фурункулезы 2 .

Самым частым патогеном у кошек является M.canis. У собак основными патогенами будут M.canis, M.gypseum и T.mentagrophytes. Стоит учитывать также географическую особенность для возникновения заболевания 3 .

Устройство и режим работы ветеринарной лаборатории являются важным, если не ключевым фактором в диагностике дерматофитии у животных. Лаборатория должна обеспечивать предупреждение рассеивания патологического материала в окружающей среде, чтобы избежать заражения и распространения инфекции.

Успех диагностики, в том числе и лабораторной, дерматофитозов во многом зависит от правильного взятия патологического материала, а также выбранных методов диагностики. В ветеринарной дерматологии чаще всего приходится иметь дело с микозами, при которых исследованию на патогены подлежат кожные чешуйки, волосы, когти.

За несколько дней или недель до исследования в очагах на коже, из которых предполагается брать патологический материал, необходимо прекратить всякое лечение 1 .

Распространённая схема диагностики базируется на люминесцентном тесте и прямой микроскопии патологического материала. Что касается первого метода, то он является ориентировочным и не может служить основанием для постановки диагноза, нередко даёт как ложноположительные, так и ложноотрицательные результаты, о чём большинство практикующих врачей осведомлены. В роли основного диагностического метода выступает микроскопия, главным достоинством которой является быстрота 4 .

Многие врачи пренебрегают предварительной обработкой участка, с которого будет набран материал. Непосредственно перед взятием патологического материала очаг поражения необходимо обработать 96% этанолом или раствором ксилитола. Материал лучше всего брать всего со свежих, но уже полностью развившихся очагов поражения.

Рис.1 Микроскопия пораженного волоса

Рис.2 Микроскопия пораженного волоса

Культуральное исследование является высокочувствительным методом лабораторной диагностики дерматофитозов. Данное исследование необходимо проводить независимо от результатов микроскопии, так как этот вариант диагностики позволяет выявлять возбудителя при отрицательных данных. Данный вид исследования позволяет определить род, вид возбудителя. Особенно полезен данный метод для диагностики латентных форм заболевания, асимптоматического носительства.

Информативным является тест “Dermatophyte Test Medium” или DTM-агар, который содержит Сабуро-агар, циклогексимид, гентамицин и хлортетрациклин и индикатор рН-среды фенол-красный.

Рис.3 Среда DTM при проведении исследования.

Дерматофиты предпочитают поглощать протеины. Далее, образуют щелочные продукты обмена, которые изменяют цвет среды на красный. Дерматофиты продуцируют эти метаболиты в процессе роста колонии, и изменение окраски среды происходит через 2-7 дней после посева (иногда этот процесс занимает 14 дней). Сапрофитные грибы метаболизируют углеводы, производя при этом нейтральные и кислые метаболиты, которые не меняют цвет среды. Правильно интерпретировать результат исследования можно только в случае ежедневного осмотра растущих колоний.

Следует учитывать, что чем больше фрагментов патматериала будет посеяно на среды, тем достовернее будут результаты. Данный вид исследования доступен как в специализированных лабораториях, так и в небольших ветеринарных лабораториях, при ветклиниках.

Иммунологические методы исследования используют для выявления специфической перестройки организма и серологической диагностики грибковых заболеваний. Метод ПЦР, в котором выявляется геном возбудителя, поэтому ПЦР позволяет точно дифференцировать возбудителя. Метод обладает высокой чувствительностью, поэтому даже минимальные количества возбудителя могут быть обнаружены в клиническом материале.

Сопоставление результатов серологических, культуральных и микроскопических исследований оказывается полезным для диагностики, и для прогнозирования течения дерматофитозов.

Следует уделить внимание и гистологическому исследованию. Патоморфологические изменения в очагах поражения обусловлены внедрением грибов в роговой слой эпидермиса, волосы и когти и ответной воспалительной реакцией кожи, которая может быть острой, подосторой или хронической.

Диагноз можно считать установленным только в том случае, если в гистологических препаратах обнаруживают элементы грибов. Собственно, грибы выявляются в небольшом количестве в виде нитей спор и мицелия.