Что такое аскосфероз и аспергиллеза пчел

Существует множество пчелиных болезней. Каждая порода в той или иной мере имеет сильные и слабые стороны, то есть может сопротивляться тем или иным болезням. Но существуют такие опасные заболевания, которые поражают все виды – не щадят ни натуральных, ни селекционных насекомых, гибнет весь расплод. Речь идёт о таких напастях, как аскосфероз и аспергиллез пчел.

Аспергиллез пчел — вирусная болезнь

Эти недуги являются инфекционными, быстро распространяются, могут сначала заразить одни семьи, а далее перекинуться и на остальные ульи. В таких случаях вводят карантин и приступают к немедленному лечению. Главное — вовремя обнаружить заболевание, так как рано или поздно наступает момент, когда сделать уже ничего нельзя, и семья, в том числе расплод, погибает. Рассмотрим проблемы по отдельности.

Аскосфероз

Это не что иное, как заражение семьи грибком Ascosphaera, который поражает личинки своей корневой системой. Нужно знать, что попадает внутрь пчелиной личинки спора (семя) вместе с пищей, а через несколько дней начинает развиваться. В результате личинка превращается в кусочек извести, как это выглядит, можно увидеть на фото.

Аскосфероз поражает весь расплод, все личинки без исключения

Другие названия болезни:

известковый расплод;
меловой расплод;
сухой гнилец.

То есть взрослые пчелы являются лишь переносчиками инфекции, но сами не болеют, заражается только расплод. Личинки погибают, в результате насекомые выкидывают их из улья. Распознать такое заболевание несложно. Нужно осмотреть землю возле летка, нет ли сереньких известковых камешков, это мертвый расплод. Если есть, вы имеете дело как раз с тем самым грибком Ascosphaera apis.

Главное условие, чтобы они были не совсем юными. То есть заглатывают спору они тогда, когда им исполняется 3 или 4 дня, в зависимости от случая. Итак, поражаются личинки:

Чаще всего лечение производится без использования химических средств, так как считается, что они могут попасть в организм человека с медом и вызвать отравление или аллергию. Некоторые пасечники используют обыкновенный чеснок, но эффективность такого метода стоит под вопросом.

Матку изолируют на три недели, а улей подлежит дезинфекции. На всей пасеке вводится карантин и ограничение по сбору меда в определенном радиусе (до 10 км). Нужно избавиться от плесени, сырости, просушить улей, заменить подушки, прокладки. В некоторых случаях используют несильные химсредства. Главная защита от болезни – тепло и свежий воздух в ульях.

Аспергиллез

Аспергиллез – каменный расплод. Это также инфекционная болезнь, но в этот раз поражает семью (не только расплод) другой грибок – Aspergillus (аспергиллус). Поражает не только личинки, но и взрослых пчел.

Этот гриб уже опасней, так как попадает внутрь насекомых двумя путями:

Если заболела взрослая пчела, то у неё появляется воротничок – это проявление корневой системы грибка. Такая пчелка уже не выживет, дни её сочтены. Работники слабеют, и можно найти их тельца возле улья. Это и будет являться основным симптомом, по которому можно распознать болезнь. Насекомые:

Каменный расплод – до того серьёзная болезнь, что от аспергиллеза пчел (поражение грибом аспергиллус) до сих пор не придумали эффективного лечения. Взрослые пчелы, расплод – гибнут практически все. Когда замечено заражение, изолируют здоровых пчел и проводят дезинфекцию улья.

Чаще всего взрослый выводок и расплод уничтожают. В принципе, расплод – это лишь зародыши, то есть уничтожение расплода не такой страшный шаг. Вот уничтожение пчел – всегда боль для пасечника. Чтобы расплод не заболел, он должен быть сыт.

Аспергиллез (каменный расплод) — инфекционная болезнь взрослых пчел и расплода. Аспергиллезом болеют человек, птица и животные.

Возбудитель — Aspergillus flavus (встречаются A. niger и A. fumigatus). Хорошо растет при температуре 33—37 °С и рН 3,1— 4,4. Для роста требуется много кислот, он сбраживает углеводы, особенно поли- и моносахариды, разжижает желатин и створаживает молоко. Высокая влажность в улье способствует распространению болезни. Стойкость спор и гифов к нагреванию невысокая, и гриб уже при 60 °С погибает в течение 30 мин. Споры убивают 2—3%-ная карболовая кислота и 5%-ный формалин. A. flavus бесцветный, размером (400—1000) х (5—15) мкм, растет вверх. Находящиеся на стеригмах споры неравномерно круглые или грушеобразные, их наружная поверхность гладкая или шиповатая. Плодовое тело гриба вместе со спорами достигает в диаметре 90 мкм. У других видов гриба встречаются споры с относительно толстой оболочкой, окрашенной в разные цвета. Старые колонии имеют желтовато-серый и оливково-коричневый цвета.

Эпизоотологические данные. Гриб широко распространен в природе и в улей заносится пчелами с нектаром и пыльцой. Способствуют заболеванию высокая влажность в ульях, сырая дождливая погода. Болезнь возникает весной и протекает в виде спорадических случаев с поражением отдельных семей. Наибольшую гибель пчел и расплода отмечают в слабых семьях.

Патогенез. Расплод и взрослые пчелы заражаются через корм, инфицированный спорами гриба. Проникновение гриба в организм насекомых возможно и через кутикулу. Патогенное действие A. flavus заключается не только в образовании мицелия, который прорастает сквозь тело хозяина, но и главным образом в действии выделяющихся токсинов, которые разрушают ткани расплода и взрослых пчел. Строение гриба способствует его распространению в улье. Пчелы легко приходят в соприкосновение со спорами и на ножках, волосках тела, ротовом аппарате переносят их при уходе за расплодом на личинок, а также передают друг другу. Кроме того, при чистке ячеек споры переносятся на здоровые особи более активно, чем при других заболеваниях.

Клинические признаки. Гриб после инфицирования развивается с различной скоростью, и первые изменения в расплоде наблюдаются в течение нескольких дней. Больные личинки становятся малоподвижны и быстро погибают. Пчеловоды обнаруживают заболевание в основном по изменению цвета и состоянию расплода.

Проникновение мицелия через наружные покровы начинается у головы личинки или между сегментами в первые 1—2 дня. Поверхность тела становится грубой, сморщенной, приобретает кремово-белый цвет, исчезает сегментация. Погибают личинки на 5— 6-й день или в начале стадии распрямления и мумифицируются. Мумифицированных личинок часто трудно извлечь из ячеек, так как мицелий соединен с их стенками. Гриб может так сильно разрастаться, что закрывает поверхность расплода, и создается впечатление, что это желто-зеленая пыльца. Различные виды гриба имеют на открытой части ячейки различный вид. В закрытых ячейках крышечки большей частью провалившиеся, зараженные личинки лежат отдельными или сплошными участками. Взрослые пчелы при заражении грибом становятся беспокойными, покидают улей, полет их становится слабым, тяжелым, вскоре пчела совершенно теряет способность к полету и погибает через несколько часов. Внешне живые, пораженные грибом пчелы не отличаются от здоровых, пока есть еще слабые движения. Затем брюшко и грудь быстро твердеют. Кишечник и окружающие ткани также становятся твердыми и их трудно препарировать. Мицелий проникает через тонкие нежные участки тела, отверстия и образует в этих местах при влажной среде поверхностный слой мицелия и спор. Попытка пчел удалить их не удается, заболевание прогрессирует, и споры распространяются дальше среди пчел и расплода.

Диагноз. Ставят его на основании эпизоотологических данных, клинических признаков болезни, а также результатов микроскопического анализа препаратов и наличия типичных колоний в посевах. В лабораторию отправляют не менее 50 пчел с клиническими признаками или трупов из свежего подмора, а также кусочек сота с больным расплодом. На агаре Чапека при температуре 25—30 °С через 3—4 дня появляются желто-зеленые мелкозернистые колонии с воздушным мицелием по краям. На концах конидиеносцев имеются булавовидные утолщения с радиально расположенными стеригмами и цепочками спор. Дифференциальный диагноз. Исключают аскосфероз.

Профилактика. Пасеки размещают в сухих, хорошо освещенных местах. Содержат сильные пчелиные семьи в хорошо утепленных ульях с достаточным количеством углеводного и белкового кормов. В ульях постоянно поддерживают чистоту. Нельзя применять антибиотики для стимуляции развития пчелиных семей и профилактики заболеваний.

Меры борьбы. Необходимо строго выполнять ветеринарно-санитарные мероприятия. Учитывая быстрое и легкое распространение возбудителя и его большую опасность для пчеловодов, пчелиные семьи с клиническими признаками болезни уничтожают закуриванием сернистым газом, а подушки, потолочины, рамки и пчел сжигают. Ульи и инвентарь после механической очистки обеззараживают 5%-ным раствором формальдегида. Почву, где стоял улей, обрабатывают 4%-ным раствором формальдегида из расчета 10 л/м2 и перекапывают на глубину 10—15 см. Мед и пергу, взятые из больных семей, нельзя использовать в пищу и для подкормки пчел. Пчелиные семьи подкармливают сахарным сиропом. При работе с патологическим материалом и осмотре больных семей необходимо соблюдать правила личной профилактики: работать в марлевых повязках и специальных очках, после работы лицо и руки вымыть водой с мылом. Пасеку объявляют благополучной через месяц после ликвидации болезни и проведения заключительной дезинфекции.

Лечение. Применяют те же препараты, что и для лечения аскосфероза.

Wide (default)
Fluid
Narrow

blue
cyan
deep
default
orange
purple

default
left-main
left-right-main
main-left-right
main-left
main-only
main-right-left
main-right
right-main-left

Mega
Css
Dropline
Split

Аскосфероз и аспергиллез пчел

Аскосфероз пчел (известковый, меловой расплод, сухой гнилец) – инфекционное заболевание трутневых, пчелиных и маточных личинок, вызванное грибом аскосфера апис. Аскосфероз встречается во влажных местностях, вызывая гибель пчелосемей.

Гриб и его споры устойчивы во внешней среде. Личинки аскосфероза на периферии расплода заглатывают споры, они прорастают в их тканях и вызывают гибель, покрывая все тело белой плесенью, что напоминает известь. Взрослые пчелы аскосферозом не болеют, но являются носителями. Заражаются пчелы с кормом, от других пчел, при переселении маток, возбудитель заносится человеком из неблагополучных пасек. Способствует чрезмерное скармливание пчелам антибиотиков, необеспеченность пергой. Заболевание регистрируется весной, летом и осенью.

Для постановки диагноза в лабораторию направляют соты с больными личинками 10х15 см, 10 г перги или пыльцы.

При выявлении аскосфероза запрещено вывозить пчелиные семьи, маток, продукты пчеловодства. Медосбор разрешен в 5-7 км от благополучных пасек. Ликвидация аскосфероза происходит без медикаментов, иначе они попадают в мед и вызывают аллергию у людей. Пчел лишают расплода, изолировав матку на 21 день. Потом пчелиную семью переводят в продезинфицированный улей. Влажные подушки заменяют сухими, соты с плесенью перетапливают на воск, сокращают и утепляют гнезда, усиливают кормление и вентиляцию в ульях. При наличии в сотах меда его, как инфицированный удаляют. При наличии взятка ставят искусственную вощину. Мед с неблагополучных пасек используют в пищу людям, но не пчелам. Ульи, инвентарь, цветочную пыльцу и др. можно использовать после дезинфекции.

Профилактика аскосфероза

Для профилактики аскосфероза ставят ульи в сухих местах и утепляют. В гнезде не должно быть пустых сот. На зимне-весенний период обеспечивают пчел медом и пергой. Нужно помнить, что обогретая и сытая личинка не болеет, а разделенная пчелосемья становится восприимчивой к заболеванию из-за потери температурной стабильности.

Аспергиллез пчел.

Аспергиллез пчел (каменный расплод, аспергилломикоз) – заболевание, которое вызывают плесневые грибы рода аспергиллюс. Они распространены в природе, живут в почве, навозе, на растениях (в т.ч. на тычинках и нектарниках цветов). Заболевание возникает в слабых семьях в конце зимы и весной при высокой влажности и переохлаждении пчел; в низинной местности возле водоемов; когда ульи стоят близко к поверхности земли и т.п. Аспергиллезом могут заболеть млекопитающие и люди.

Пчелы заносят споры гриба в гнездо с нектаром и пыльцой. Пчелы и личинки разного возраста заглатывают возбудителя и его токсины. Их гибель наступает через 2-4 дня. При выраженной форме аспергиллеза чаще погибает расплод. Он покрывается серой плесенью и сморщивается, потом становится твердым, желто-зеленым или черным, напоминая камешки. Взрослые пчелы при заболевании возбуждены, потом слабеют, падают и погибают, покрываясь плесенью.

Для постановки диагноза в лабораторию ветеринарной медицины отправляют соты с больным расплодом и трупы пчел. В статье описаны лабораторные методы диагностики аспергиллеза.

При возникновении аспергиллеза запрещено вывозить пчел и продукты пчеловодства в другие хозяйства. Их изолируют на расстоянии 5-7 км от других пасек. Мед и пергу от больных семей использовать запрещено. Ульи дезинфицируют огнем или дезсредствами.

Для оздоровления пчелосемьи матку изолируют, чтобы 21 день не было расплода, и количество возбудителя резко сокращается. Лучше поменять матку, взяв здоровой семьи. Для развития пчелосемьи ее обеспечивают сахарным сиропом, пергой и др. Профилактика аспергиллеза Для профилактики аспергиллеза содержат сильные семьи, удаляют из улья пустые соты. В семьях должно быть 6-8 кг меда и достаточно перги. Ульи ставят в сухих, солнечных местах, обеспечивают вентиляцию. Лекарственные средства не используют

Микозы наносят значительный экономический ущерб пасекам, снижая продуктивность пчелиных семей на 50–60%. Их значительное распространение, по мнению большинства исследователей, связано с нарушением равновесия нормальной микрофлоры в пчелиной семье, которое вызвано бесконтрольным применением антибиотиков и других химиотерапевтических препаратов. Факторы, способствующие развитию этих заболеваний, — резкие колебания температуры и повышенная влажность воздуха.

Как правило, оздоровить семьи пчел за один сезон не удается. Целесообразно после второго-третьего курса лечения заменить лекарственные средства другими, еще не используемыми на пасеке.

Наиболее часто встречаются такие заболевания, как аскосфероз и аспергиллез. Инфекционное заболевание пчелиных семей — аскосфероз (известковый расплод) сопровождается поражением трутневых, пчелиных и маточных личинок и куколок; снижается на 20–40% продуктивность пчелиных семей. В течение последних 20–25 лет аскосфероз широко распространился на пасеках ряда стран.

Давно замечено, что от этой болезни особенно страдают отводки, слабые семьи и нуклеусы. Известно также, что деление сильной здоровой семьи на две может привести к заболеванию обеих семей аскосферозом.

Болезнь чаще всего появляется в весенне-летний период, но может возникать на протяжении всего лета. Максимума своего развития она достигает в июне—августе. Развитию способствуют охлаждение гнезда, холодная влажная погода, чрезмерная влажность в ульях, недостаточная вентиляция. Одна из причин возникновения аскосфероза — бесконтрольное применение антибиотиков и акарицидных препаратов, вызывающих дисбактериоз, нарушение обмена веществ в организме и ослабление естественной резистентности пчел.

Щавелевая и в меньшей степени молочная кислота за счет увеличения влажности и кислотности, обработанных ими субстратов, при определенных условиях могут оказывать стимулирующее действие на рост и развитие гриба, а также изменять чувствительность расплода пчел к заражению. В связи с этим на неблагополучных по аскосферозу пасеках не следует применять щавелевую, молочную кислоты, и прежде всего, для борьбы с варроатозом.

К появлению аскосфероза приводит использование цветочной пыльцы или перги, полученных на пораженных аскосферозом пасеках. При этом не было ни одного случая массового поражения пчел этим заболеванием там, где нет варроатоза.

Самки клеща варроа, питаясь гемолимфой личинки, травмируют ее кожные покровы, ослабляют и значительно снижают ее устойчивость, а также способствуют проникновению спор гриба через ранки. Клещ способен сохранять в своем теле и активно переносить болезнетворные для пчел вирусы и бактерии. Есть сведения, что семьи, содержащиеся преимущественно на темных сотах, примерно в 7 раз чаще поражаются аскосферозом, чем на светлых.

К заболеванию особенно восприимчивы 3–4-дневные личинки. Вначале они располагаются вдоль ячеек, в то время как в норме до запечатывания имеют форму кольца на дне. Трутневый расплод поражается в первую очередь. Взрослые особи чувствуют себя угнетенными.

Заражение личинок спорами происходит в основном через внешние покровы и реже при попадании спор с кормом в кишечник. В первом случае на теле личинки они прорастают, образующийся мицелий через кутикулу проникает в глубь личинки, во втором — мицелий проникает через кишечник наружу. Прорастая через ткани и органы личинки, мицелий активно растет, разрушает их, вызывая гибель личинок, которые превращаются в плотную сухую обызвествленную массу белого или грязно-белого цвета — мумию.

Если личинку поразил однополый мицелий, то мумия будет белая, а если мицелий обоеполый и он образовал плодовое тело, то цвет ее грязно-коричневый или грязно-серый.

Ячейки с личинками 3–4-дневного возраста не запечатываются. Если заражение произошло позднее этого возраста, то они могут быть запечатаны. В этом случае мицелий прорастает через крышечки.

Болезнь встречается в острой и скрытой формах. При скрытой возбудитель находится в меду, перге, сотах, кишечнике личинок. Большой гибели трутневого или пчелиного расплода при этой форме не бывает. Нередко аскосфероз отмечают как вторичную инфекцию при европейском гнильце, мешотчатом или застуженном расплоде.

Переходу скрытой формы в острую способствуют продолжительная влажная погода, ослабление семьи, большое количество трутневого расплода, плохо обогреваемого пчелами, недостаточное утепление гнезд.

Возбудитель аскосфероза обладает значительной устойчивостью во внешней среде. Споры могут длительное время сохраняться в семье, не теряя жизнеспособности в течение 4–15 лет. В пустых ульях, на сотах, пчеловодном инвентаре, а также в меду и перге при хранении их в пасечных условиях возбудитель остается жизнеспособным в течение четырех лет. При температуре –27°С гриб сохраняется в течение года. Его споры устойчивы к действию химических веществ: 1%-ный раствор формальдегида убивает их спустя 20 мин, 1%-ный раствор перекиси водорода — через 30 мин, 3%-ный раствор хлорной извести — через 10 мин.

Споры аскосфероза устойчивы к воздействию сернистого ангидрида и паров формалина.

Мед и пергу больных семей нельзя использовать для подкормки пчел. Исключена возможность получения от них пыльцы, так как она может служить источником распространения возбудителя в благополучных регионах.

Взрослые пчелы, извлекая погибших личинок из ячеек, выгрызают их из сотов, в результате чего на поверхности отстроенной вощины образуются углубления диаметром 3–5 мм и более. На соседнем соте пчелы начинают оттягивать ячейки с целью сокращения расстояния между ними. На поверхности таких сотовых рамок наблюдаются чередования возвышений и углублений, что придает сотам холмистую поверхность.

Взрослые особи аскосферозом не болеют, однако могут быть носителями возбудителя. В их пищеварительном тракте обнаруживают споры и мицелий гриба, которые при кормовых связях пчел распространяются внутри семьи. Очищая ячейки от погибших личинок, пчелы загрязняют части своего тела спорами гриба и механически распространяют возбудителя как внутри своего гнезда, так и в другие семьи. Заражение идет через мед, расплод, соты, пчел и трутней, маток больных семей, а также вредителей и паразитов. Пчеловод, не соблюдающий правила гигиены, также может служить переносчиком болезни.

Диагноз устанавливают на основании клинических исследований и по результатам микроскопии мицелия, взятого с больных и погибших личинок. Для исследований в лабораторию направляют кусочки сотов размером 10x15 см или 10–15 личинок с признаками заболевания.

Аспергиллез (каменный расплод) — болезнь, вызывающая гибель и высыхание расплода и взрослых пчел. Опасен для человека и животных.

Грибы-аспергиллы — строгие аэробы, свет на их рост влияния не оказывает. Они имеют ферменты, разлагающие белки, полисахариды (крахмал, гликоген), дисахариды (лактоза, сахароза, мальтоза) и моносахариды (глюкоза, фруктоза, галактоза), а также алкоголь, образуя в большом количестве кислоты.

Аспергиллы выделяют стойкие к нагреванию токсины, действующие на нервную и мышечную ткани; введение их в кровь теплокровных животных и насекомых вызывает судороги, а затем смерть.

Возбудитель болезни погибает при нагревании до 60°С в течение 30 мин. Быстро разрушается сулемой в разведении 1:1000; 2–5%-ным раствором фенола и 5%-ным раствором формалина.

Аспергиллы широко распространены в природе. Естественным местом их обитания является почва. Они живут и размножаются на различных органических мертвых субстратах, а также на растениях, в том числе в тычинках цветов и нектарниках. В улей аспергилл заносят пчелы с нектаром и пыльцой, где при наличии повышенной влажности они развиваются на сотах, в перге и в погибших насекомых. Способствуют возникновению болезни высокая влажность, сырая, дождливая погода. Наиболее часто заболевание встречается на пасеках, находящихся в затененных местах и на сырой почве. Болезнь протекает преимущественно весной в отдельных семьях и развивается при обильном приносе пчелами пыльцы в улей. Взрослые особи, пораженные грибом, становятся возбужденными, быстро двигаются, затем гибнут.

Аспергиллез поражает расплод всех возрастов, в том числе и куколок. Они и куколки сморщиваются, твердеют, их сегментация исчезает, окраска тела тускнеет, приобретая желтоватый оттенок, а затем они становятся желтовато-зелеными или черными в зависимости от вида грибов. У взрослых личинок раньше высыхает обращенная кверху боковая поверхность, и в результате труп приобретает изогнутую форму. Мицелий гриба прорастает через кожицу личинки в виде кольца позади головы, образуя своеобразный воротник. В течение 1–2 дней гриб распространяется по хитиновому покрову и формирует белую оболочку, состоящую из мицелия. При удалении пчелами плесени с высохших личинок (мумий) они становятся более светлыми, а если они покрывают ее прополисом, она становится бурой. При сдавливании брюшка больной пчелы между пальцами ощущается затвердение. Брюшко становится еще более твердым через несколько часов после смерти.

Поскольку аспергиллез опасен для человека и животных, при работе с больными семьями необходимо защищать глаза специальными очками, а рот и нос — влажной марлевой повязкой, чтобы споры не попали на слизистые оболочки. Пораженные соты из гнезда следует вынимать осторожно, лучше в тихую безветренную погоду.

Стрессовые факторы, физические, химические, биологические, экстремальные температуры и высокая влажность, загрязнение окружающей среды, отравление пестицидами, бесконтрольное применение антибиотиков, паразитарные инвазии - вызывают снижение резистентности организма насекомого к микозам, нарушая иммунную систему, защитные барьеры оболочек тела, пищеварительного тракта, трахей и способствуя развитию грибковой инфекции [1; 2].

Из микозов, патогенных для пчел, значительное распространение повсеместно получил известковый расплод - аскосфероз. В пятидесятых годах прошлого столетия аскосфероз был зарегистрирован в США и Канаде на пчелах - листорезах и одиночных пчелах Antrophora pacifica, а уже через десять лет имел широкое распространение на пасеках мира.

Заболевание чаще наблюдается в активный период жизнедеятельности пчелосемьи, при наличии расплода. Заражение пчел грибами начинается с прорастания спор. Инвазивная гифа проникает через кутикулу механически и энзиматически, попадает в гемоцель, где быстро развивается и прорастает. Иногда заражение может начинаться от заглоченных спор грибов, которые прорастают в кишечнике. Вначале поражаются трутневые личинки. Из спор прорастает мицелий, который постепенно поражает все органы и ткани насекомого, прорастает на поверхность, покрывая головной конец личинки войлочным налетом [2; 3; 5].

Цель исследований: выделить чистую культуру гриба Ascosphaera apis.

Для этого необходимо:

изучить и дифференцировать с помощью электронной микроскопии два подвида этого гриба Ascosphaera apis var. apis, A. apis var. major, отличающихся размерами споровых цист и спор;
дифференцировать полученную культуру гриба путем микроскопического и микологического исследований, имея в виду аспергиллез и возможность развития на перге гриба Battsia alvei (Ascosphaera).

Материалы и методы

При проведении исследований использовались методические указания по лабораторной диагностике аскосфероза пчел и выделению возбудителя из пыльцы (перги); утвержденные 9 апреля 1986 года [4].

В исследованиях использовали следующие материалы:

образцы сотов (соты) размером 10×15 см с больными и погибшими личинками, куколками;
предметное стекло, 50%-ный водный раствор глицерина для микроскопического исследования. Исследование проводили при малом увеличении микроскопа (7×10);
питательная среда - агар Сабуро для получения чистой культуры гриба из патологического материала;
микрофотосъемку гистологических препаратов проводили на микроскопе Axio Scope 40 (Carl Zeiss) и Axio Star (Carl Zeiss) с встроенным ТV-адаптером и цифровой видеокамерой Carl Zeiss Imager, A1, окуляр W-PI 10x/23, объективы: Achroplan 20х/0,45, 40x/0,60, 63x/0,80 и 100x/1,25 oil.

Результаты исследований и их обсуждение

Для получения чистой культуры гриба из патологического материала (1-2 трупов пораженных личинок и 10%-ной эмульсии пыльцы (перги) на стерильном физиологическом растворе) делали посев на питательную среду агар Сабуро.

Рис. 1. Посев на питательную среду агар Сабуро.

Перед посевом питательный агар расплавляли в водяной бане и после охлаждения до 45-50 °С добавляли в него антибиотики (пенициллин 50 ЕД и стрептомицин 100 ЕД на 1 мл среды) для подавления сопутствующей бактериальной микрофлоры.

Пораженные личинки извлекали из ячеек, помещали в стерильную чашку Петри, разламывали их с помощью препаровальной иглы. Затем частицы размером не более 1 мм и эмульсию пыльцы помещали при помощи бактериологической петли в чашки Петри с одной из питательных сред в 3-5 точек (по одной частице в каждую точку). Посевы выдерживали при 26-30 °С и наблюдали за ними в течение 10 сут., имея в виду, что в процессе развития гриба на поверхности среды на 3-5-е сут. появляются белые пушистые колонии, которые в дальнейшем могут приобретать вид зеленовато-серого, войлокообразного налета.

Рис. 2. культура гриба Ascosphaera apis.

Чистую культуру гриба Ascosphaera apis получили путем дополнительного пересева культуры с периферии колоний, характерных для данного гриба.

Рис. 3. Пересев культуры гриба Ascosphaera apis.

Мазки из культуры исследовали под микроскопом. При положительном результате обнаружили многоклеточный септированный мицелий с многоядерными клетками, ветвистые гифы, споровые шары, которые, в свою очередь, заключены в шаровидную цисту. Споры мелкие, эллиптические, гладкие.

Рис. 4. В поле зрения гифы, споровые цисты.

Встречаются два подвида этого гриба: Ascosphaera apis var. Apis и Ascosphaera apis var. major, отличающиеся размерами споровых цист и спор.

Ascosphaera apis var. apis имеет размеры спор 3-3,8 × 2,3 мкм и диаметр споровых цист 32-99 мкм (в среднем 65,8 мкм), а A. apis var. major имеют размеры спор 3,3-4,2 × 2,5 мкм и диаметр споровых цист 88.4-168 мкм (в среднем 128,4 мкм).

Рис. 5. В поле зрения немногочисленные споровые цисты Ascosphaera apis var. apis. Размер споровых цист 39,41 мкм.

Одновременно дифференцировали полученную культуру гриба (аспергиллез) и возможность развития на перге гриба Battsia alvei (Ascosphaera), отличающегося от возбудителя аскосфероза пчел тем, что он не поражает расплод пчелиных семей, а часто поражает ячейки с пыльцой (пергой) осенью и весной, так как лучше растет при температуре до 20 °С. Гриб Battsia alvei не образует внутри спороцисты споровых шаров, и аскоспоры лежат свободно в спороцисте.

Лабораторный диагноз на аскосфероз устанавливали на основании положительных результатов микроскопического и микологического исследований.

Срок лабораторного исследования до 10 дней. При выделении из пыльцы (перги) гриба Ascosphaera apis ее нельзя использовать в качестве белковой подкормки пчелиным семьям.

Выводы

Из микозов, патогенных для пчел и наносящих большой ущерб пчеловодству на пасеках Омской области, получил распространение известковый расплод - аскосфероз.

В ходе проведенных исследований:

выделена культура гриба Ascosphaera apis;
изучены и дифференцированы с помощью электронной микроскопии два подвида этого гриба Ascosphaera apis var. apis, Ascosphaera apis var. мajor;
дифференцирована полученная культура гриба путем микроскопического и микологического исследований (аспергиллез) и возможность развития на перге гриба Battsia alvei (Ascosphaera).

Рецензенты

Рудаков Н.В., д.мед.н., профессор, директор Омского научно-исследовательского института природноочаговых инфекций, г. Омск.
Бажин М.А., д.вет.н., профессор Всероссийского НИИ бруцеллеза и туберкулеза животных Россельхозакадемии, г. Омск.

Читайте также: