Вектор бест корь инструкция

Новые наборы для экспресс-диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом Ханта-IgМ-экспресс-БЕСТ и Ханта-IgG-экспресс-БЕСТ more

ID] => 2351 [TIMESTAMP_X] => 18.06.2019 09:49:14 [

TIMESTAMP_X] => 18.06.2019 09:49:14 [MODIFIED_BY] => 9321 [

MODIFIED_BY] => 9321 [DATE_CREATE] => 18.06.2019 09:49:14 [

DATE_CREATE] => 18.06.2019 09:49:14 [CREATED_BY] => 9321 [

CREATED_BY] => 9321 [IBLOCK_ID] => 17 [

IBLOCK_ID] => 17 [IBLOCK_SECTION_ID] => 2350 [

IBLOCK_SECTION_ID] => 2350 [ACTIVE] => Y [

ACTIVE] => Y [GLOBAL_ACTIVE] => Y [

GLOBAL_ACTIVE] => Y [SORT] => 3600 [

SORT] => 3600 [NAME] => Корь [

NAME] => Корь [PICTURE] => [

PICTURE] => [LEFT_MARGIN] => 69 [

LEFT_MARGIN] => 69 [RIGHT_MARGIN] => 70 [

RIGHT_MARGIN] => 70 [DEPTH_LEVEL] => 3 [

DEPTH_LEVEL] => 3 [DESCRIPTION] => [

DESCRIPTION] => [DESCRIPTION_TYPE] => text [

DESCRIPTION_TYPE] => text [SEARCHABLE_CONTENT] => КОРЬ [

SEARCHABLE_CONTENT] => КОРЬ [CODE] => [

SOCNET_GROUP_ID] => [LIST_PAGE_URL] => /prod/index.php [

LIST_PAGE_URL] => /prod/index.php [SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2351 [

SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2351 [IBLOCK_TYPE_ID] => products [

IBLOCK_TYPE_ID] => products [IBLOCK_CODE] => catalog [

IBLOCK_CODE] => catalog [IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [

EXTERNAL_ID] => [IPROPERTY_VALUES] => Array ( ) [PATH] => Array ( [0] => Array ( [ID] => 2316 [

ID] => 2316 [CODE] => root_ifa [

CODE] => root_ifa [XML_ID] => [

EXTERNAL_ID] => [IBLOCK_ID] => 17 [

IBLOCK_ID] => 17 [IBLOCK_SECTION_ID] => [

IBLOCK_SECTION_ID] => [SORT] => 100 [

SORT] => 100 [NAME] => Иммуноферментная диагностика [

NAME] => Иммуноферментная диагностика [ACTIVE] => Y [

ACTIVE] => Y [DEPTH_LEVEL] => 1 [

DEPTH_LEVEL] => 1 [SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2316 [

SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2316 [IBLOCK_TYPE_ID] => products [

IBLOCK_TYPE_ID] => products [IBLOCK_CODE] => catalog [

IBLOCK_CODE] => catalog [IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [

IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [GLOBAL_ACTIVE] => Y [

GLOBAL_ACTIVE] => Y [IPROPERTY_VALUES] => Array ( ) ) [1] => Array ( [ID] => 2350 [

EXTERNAL_ID] => [IBLOCK_ID] => 17 [

IBLOCK_ID] => 17 [IBLOCK_SECTION_ID] => 2316 [

IBLOCK_SECTION_ID] => 2316 [SORT] => 3500 [

SORT] => 3500 [NAME] => Вакциноуправляемые инфекции [

NAME] => Вакциноуправляемые инфекции [ACTIVE] => Y [

ACTIVE] => Y [DEPTH_LEVEL] => 2 [

DEPTH_LEVEL] => 2 [SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2350 [

SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2350 [IBLOCK_TYPE_ID] => products [

IBLOCK_TYPE_ID] => products [IBLOCK_CODE] => catalog [

IBLOCK_CODE] => catalog [IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [

IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [GLOBAL_ACTIVE] => Y [

GLOBAL_ACTIVE] => Y [IPROPERTY_VALUES] => Array ( ) ) [2] => Array ( [ID] => 2351 [

EXTERNAL_ID] => [IBLOCK_ID] => 17 [

IBLOCK_ID] => 17 [IBLOCK_SECTION_ID] => 2350 [

IBLOCK_SECTION_ID] => 2350 [SORT] => 3600 [

SORT] => 3600 [NAME] => Корь [

NAME] => Корь [ACTIVE] => Y [

ACTIVE] => Y [DEPTH_LEVEL] => 3 [

DEPTH_LEVEL] => 3 [SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2351 [

SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2351 [IBLOCK_TYPE_ID] => products [

IBLOCK_TYPE_ID] => products [IBLOCK_CODE] => catalog [

IBLOCK_CODE] => catalog [IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [

IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [GLOBAL_ACTIVE] => Y [

GLOBAL_ACTIVE] => Y [IPROPERTY_VALUES] => Array ( ) ) ) ) [SECTIONS_COUNT] => 0 )

Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса М к вирусу кори в сыворотке (плазме) крови.

Владельцы патента RU 2441666:

Комплексный антиген вируса кори, используемый в качестве компонента иммуноферментной тест-системы для диагностики антител к вирусу кори, получен из культуральной жидкости, содержащей штаммы вируса кори Ленинград 16 с титром не менее 10 5.0 ТЦД₅₀/мл, Эдмонстон - не менее 10 6.0 ТЦД₅₀/мл, NovO/96 - не менее 10 8.0 ТЦД₅₀/мл путем инактивации ее инфекционной активности детергентом и выделением белка из клеточного лизата хроматографической очисткой в количестве не менее 2 мкг/мл с чистотой не менее 70%. Культуральная вируссодержащая жидкость получена при раздельном культивировании штаммов вируса кори Ленинград 16, Эдмонстон и NovO/96 на монослое культуры клеток Vero с последующим смешением культуральных вируссодержащих жидкостей в соотношении 1:1:1 по объему. Использование изобретения позволит повысить чувствительность и специфичность комплексного антигена, обладающего свойством выявлять антитела в сыворотке крови. 1 з.п. ф-лы, 4 табл.

Изобретение относится к новому комплексному антигену вируса кори для использования в качестве компонента иммуноферментной диагностической тест-системы и может быть использовано в медицинской вирусологии и микробиологии.

Известен антиген вируса кори, полученный на основе штамма вируса кори Ленинград 16 (Л-16), используемый в качестве компонента диагностической тест-системы (Руководство по вакцинному и сывороточному делу под ред. Академика АМН П.Н.Бургасова. М.: "Медицина", 1978. - с.220-223). Отработка технологии получения антигена вируса кори штамм Л 16 на тканевой культуре из эмбрионов японских перепелок (Васильева Г.А., Бойчук Л.М. - "Специфическая профилактика кори". - Материалы научно-практической конференции ЛНИИЭМ им. Пастера. - Л., 1970. - с.206-210).

Однако данный антиген вируса кори обеспечивает недостаточную чувствительность и специфичность выявления антител с использованием тест-систем на его основе.

Известен антиген вируса кори, полученный на основе штамма вируса кори Эдмонстон (Патент США №4211843, МПК A01N 1/02; А61К 39/12, опубл. 08.07.1980 г.). Штамм Эдмонстон депонирован в Американской Коллекции Клеточных Культур (АТСС - VK-24, 4/92). В ГНЦ ВБ "Вектор" прошел четыре пассажа на культуре клеток Vero. Подлинность штамма установлена методом положительной цепной полимеразной реакции со специфическими праймерами. Штамм относится к генотипу А. Максимальные титры вируса достигают на 5-6 сутки после заражения монослоя клеток Vero и составляют 5×10 6 ТЦПД₅₀/мл [Агафонов А., и соавт.// Вопр.вирусол., 1997, N.1, с.102-205]. Антигенные свойства штамма: выявляет антитела к вирусу кори в сыворотках больных и вакцинированных людей.

Наиболее близким аналогом (прототипом) является антиген вируса кори, полученный на основе штамма вируса кори NovO/96 и используемый в качестве компонента иммуноферментной тест-системы для диагностики антител к вирусу кори (патент РФ №2230785, МПК C12N 7/00, опубл. 20.06.2004 г.). Вирус нарабатывают на монослое клеток Vero, клетки разрушают замораживанием-оттаиванием, лизат клеток получают центрифугированием и ультрафильтрацией. Антиген для ИФА очищают от чужеродных белков ультрацентрифугированием в градиенте плотности сахарозы, который инактивируют прогреванием при 56°С в течение 30 мин.

Однако данный антиген вируса кори также обеспечивает недостаточную чувствительность и специфичность выявления антител с использованием тест-систем на его основе.

Техническим результатом заявляемого изобретения является повышение чувствительности и специфичности комплексного антигена вируса кори, обеспечивающего выявление антител в сыворотке крови.

Указанный технический результат достигается получением комплексного антигена вируса кори, используемого в качестве компонента иммуноферментной тест-системы для диагностики антител к вирусу кори, полученного из культуральной жидкости, содержащей штаммы вируса кори Ленинград 16 с титром не менее 10 5.0 ТЦД₅₀/мл, Эдмонстон - не менее 10 6.0 ТЦД₅₀/мл, NovO/96 -не менее 10 8.0 ТЦД₅₀/мл путем инактивации ее инфекционной активности детергентом и выделением белка из клеточного лизата хроматографической очисткой в количестве не менее 2 мкг/мл с чистотой не менее 70%.

Культуральная вируссодержащая жидкость получена при раздельном культивировании штаммов вируса кори Ленинград 16, Эдмонстон и NovO/96 на монослое культуры клеток Vero с последующим смешением культуральных вируссодержащих жидкостей в соотношении 1:1:1 по объему.

Антигенные свойства комплексного антигена. Выявляет все специфические антитела к вирусу кори в сыворотках больных и вакцинированных людей в более высоких титрах, чем при использовании каждого антигена в отдельности (табл.1).

- иммуносорбента - комплексного антигена вируса кори, сорбированного в лунках полистироловых разборных планшетов;

- К1+ - положительный контрольный образец №1 - сыворотка крови человека, содержащая антитела к вирусу кори и не содержащая антитела к БИЧ-1, ВИЧ-2, ВГС,

- Treponema pallidum и HBs-антиген, инактивированная прогреванием при температуре 56°С в течение 3 ч - 1 фл., 2 мл;

- К2+ - слабоположительный контрольный образец №2 - сыворотка крови человека, содержащая антитела к вирусу кори в минимальном достоверно определяемом количестве, не содержащая антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2, ВГС, Treponema pallidum и HBs-антиген, инактивированная прогреванием в течение 3 ч при температуре 56°С - 1 фл., 2 мл;

- К- - отрицательный контрольный образец - сыворотка крови человека, не содержащая антитела к вирусу кори, ВИЧ-1, ВИЧ-2, ВГС, Treponema pallidum и HBs-антиген, инактивированная прогреванием при температуре 56°С в течение 3 ч - 1 фл., 3 мл;

- РК - раствор конъюгата - раствор моноклональных антител мыши к Ig человека, конъюгированных с пероксидазой хрена - 1 фл., 11 мл;

- РХ - раствор хромогена, содержащий ТМБ - 1 фл., 13 мл;

- ФСБ-Т(×25) - 25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином - 1 фл., 26 мл;

- стоп-реагент - 1 фл., 6 мл.

Пример 1. Способ получения комплексного антигена вируса кори

Получение вируссодержащей жидкости

Исходные клетки Vero хранят в жидком азоте и выращивают путем серийных пересевов. В качестве ростовой среды используют раствор Игла МЕМ с 8-10% эмбриональной сыворотки КРС. Культуру клеток выращивают в течение 3-4 суток при посевной концентрации клеток 5-10×10 5 кл/мл среды и пересевают общепринятым способом.

Соответствующим вирусом кори (штаммы Л-16, Эдмонстон, NovO/96) раздельно заражают 1-литровые культуральные сосуды с монослоем культуры клеток Vero (множественность заражения 1:10). После инкубации при 20-25°С в течение 40 минут в культуральные сосуды добавляют 200 мл питательной среды Игла МЭМ, содержащей 4,0±0,1 мл сыворотки крупного рогатого скота, 0.001% - трипсина, 200 ед/мл бензилпеницилина и 200 нг/мл стрептомицина. После инкубации в течение 5-7 суток при (36±1)°С сливают питательную среду. Титр вируса кори, штамм Л-16, в КВЖ составляет не менее 10 5.0 ТЦД₅₀/мл, штамм Эдмонстон - не менее 10 6.0 ТЦД₅₀/мл, штамм NovO/96 - не менее 10 8.0 ТЦД₅₀/мл.

Получение лизата клеток Vero

Пример 2. Подбор условий хроматографической очистки комплексного антигена

Пример 3. Хроматографическая очистка комплексного антигена

Колонку с ДЕАЕ-целлюлозой уравновешивают буфером 20 мМ Трис-HCl, рН 7,6. Объединенную суспензию антигенного материала трех штаммов вируса кори наносят на колонку из расчета 1 мл суспензии на 1 мл сорбента. После нанесения колонку промывают тем же буфером, содержащим 0,2 М NaCl. Элюцию целевого комплексного антигена проводят 0,4 М NaCl в том же буфере. Целевую фракцию контролируют на соответствие качества антигена по чувствительности и специфичности методом ИФА.

№ по каталогу	Наименование и краткое описание	Количество определений
D-1356	Набор реагентов для иммуноферментного количественного и качественного определения иммуноглобулинов класса G к вирусу кори в сыворотке (плазме) крови.	12x8
D-1358

Таблица 3
Результаты ИФА при постановке положительного и отрицательного образцов с применением иммуносорбента, изготовленного на основе разных фракций хроматографической очистки комплексного антигена
Концентрация NaCl для элюции фракции антигена с колонки	О.П. положительного образца	О.П. отрицательного образца	ОП(+)/ОП(-)
Несорбирующаяся фракция (проскок)	0,117	0,256	0,5
0,1 М NaCl	0,075	0,179	0,4
0,2 М NaCl	0,187	0,120	1,6
0,3 М NaCl	1,459	0,121	12,1
0,4 М NaCl	2,453	0,163	16.2
0,5 М NaCl	1,469	0,204	7,2
0,7 М NaCl	0,552	0,192	2,9
1 М NaCl	0,340	0,184	1,8

Выход высокоочищенного комплексного антигена с 3 л КВЖ и лизата клеток составляет 15-20 мг.

Пример 4. Изготовление иммуносорбента

Иммуносорбент готовят добавлением 0,20±0,06 мл комплексного антигена вируса кори после очистки на колонке (см. Пример 3) к 1,00±0,01 л р-ра для сорбции. Состав р-ра для сорбции: 2,00±0,01 г натрия углекислого, 0,50±0,01 г натрия азида, 0,400±0,012 мл 2% фенолфталеина, вода очищенная - до 1 литра. Иммуносорбент перемешивают на магнитной мешалке в течение 1 ч при температуре от 18°С до 24°С.

Пример 5. Методика применения набора реагентов для одностадийного ИФА "Анти-корь Ig Трисорбент"

Для проведения анализа используется сыворотка или плазма крови человека. Для проведения анализа достаточно 10 мкл образца. Для выявления антител класса G к вирусу кори можно использовать сыворотку (плазму) крови человека как свежеприготовленную, так и хранившуюся не более 7 суток при температуре от 2°С до 8°С при условии отсутствия микробной контаминации либо не более 12 месяцев при температуре минус 20°С. Допускается замораживание сыворотки (плазмы) до температуры минус 20°С не более двух раз.

Для проведения реакции во все лунки планшета вносят по 90 мкл р-ра для разведения образца (состав: 2,00±0,01 г натрия углекислого, 0,50±0,01 г натрия азида, 0,400±0,012 мл 2% фенолфталеина, вода очищенная - до 1 литра). В лунку планшета А1 вносят 10 мкл К1+, в лунки В1 и С1 вносят по 10 мкл К2+. В лунку D1 вносят 10 мкл К-. В остальные лунки планшета вносят по 10 мкл исследуемых сывороток (конечное разведение контрольных и исследуемых образцов - 10 раз). Раствор перемешивают пипетированием и инкубируют в течение 40 мин при температуре 37°С. По окончании инкубации содержимое лунок удаляют и планшет промывают семь раз рабочим раствором ФСБ-Т. В каждую лунку вносят по 100 мкл р-ра хромагена и планшет помещают на 15 мин в защищенное от света место при температуре 37°С. Реакцию останавливают внесением в каждую лунку планшета по 50 мкл стоп-реагента.

Величину ОП растворов в лунках иммуносорбента измеряют на спектрофотометре в двухволновом режиме: основной фильтр - 450 нм, референс-фильтр - в диапазоне от 620 до 700 нм. Результаты теста считают положительными, если ОП исследуемой сыворотки больше ОПК2+ср. (нижняя граница положительных значений соответствует 0,28 МЕ/мл). Результаты теста считают отрицательными, если ОП исследуемой сыворотки меньше ОПК2+ср. - 20% (верхняя граница отрицательных значений соответствует 0,12 МЕ/мл).

Псыв. рассчитывают по формуле:

где ОПсыв. - значение ОП исследуемой сыворотки.

Асыв. (титр антител в МЕ) рассчитывают по формуле:

где а и b - константы, специфичные для каждой серии (указаны в Инструкции, которая сопровождает каждый набор).

Пример расчета полученных данных приведен в таблице 4.

Таблица 4
Пример расчета титра антител к вирусу кори в исследуемой сыворотке
(ОПК1+ср.) - среднее значение ОП в лунках А1 и В1	2,919 - в диапазоне Приложения
(ОПК2+ср.) - среднее значение ОП в лунках С1 и D1	(0,273+0,275):2=0,274 - в диапазоне Приложения
Нижняя граница положительных значений	>(ОПК2+ср.)=0,274
Верхняя граница отрицательных значений	0,168 =1,47
Ответ: специфическая активность сыворотки 1,47 МЕ/мл

В образцах больных методом ПЦР был обнаружен генетический материал (РНК) вируса кори. Секвенирование показало принадлежность вируса, вызвавшего вспышку, к генотипу Н.

1. Комплексный антиген вируса кори, используемый в качестве компонента иммуноферментной тест-системы для диагностики антител к вирусу кори, полученный из культуральной жидкости, содержащей штаммы вируса кори Ленинград 16 с титром не менее 10 5.0 ТЦД₅₀/мл, Эдмонстон - не менее 10 6.0 ТЦД₅₀/мл, NovO/96 - не менее 10 8.0 ТЦД₅₀/мл путем инактивации ее инфекционной активности детергентом и выделением белка из клеточного лизата хроматографической очисткой в количестве не менее 2 мкг/мл с чистотой не менее 70%.

2. Комплексный антиген по п.1, отличающийся тем, что культуральная вируссодержащая жидкость получена при раздельном культивировании указанных в п.1 штаммов вируса кори на монослое культуры клеток Vero с последующим смешением культуральных вируссодержащих жидкостей в соотношении 1:1:1 по объему.

Автореферат диссертации по медицине на тему Трансплацентарные IgG-антитела к вирусу кори и факторы ангиогенеза/антиангиогенеза при физиологическом и осложненном течении беременности

На правах рукописи

ТРАНСПЛАЦЕНТАРНЫЕ ДО-АНТИТЕЛА К ВИРУСУ КОРИ И ФАКТОРЫ АНГИОГЕНЕЗА/АНТИАНГИОГЕНЕЗА ПРИ ФИЗИОЛОГИЧЕСКОМ И ОСЛОЖНЕННОМ ТЕЧЕНИИ БЕРЕМЕННОСТИ

14.03.09 - Клиническая иммунология, аллергология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ

Костинов Михаил Петрович

Сельков Сергей Алексеевич, доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ, чл.-корр. РАЕН; ФГБНУ Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта, заведующий лабораторией иммунологии с группой по диагностике СПИД

Хромова Серафима Семёновна, доктор биологических наук; ГБОУ ВПО Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова Минздрава России, профессор кафедры микробиологии и вирусологии

Ведущая организация: ФБУН Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора, г. Москва

Защита диссертации состоится 19 ноября 2015 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 001.035.01 при ФГБНУ НИИВС им. И.И. Мечникова по адресу: г. Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А.

Ученый секретарь диссертационного совета

Доктор медицинских наук

Бочарова Ирина Ивановна

кандидат биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДИССЕРТАЦИИ

Актуальность темы. Несмотря на проведение активных мероприятий по ликвидации кори, количество случаев этого опасного заболевания продолжает расти с каждым годом. Так, в 2013 году в мире от кори умерло 145 700 человек, большинство из которых дети в возрасте до 5 лет [WHO, 2015]. В 2014 году в Европейском регионе было зарегистрировано 3616 случаев коревой инфекции [ECDC, 2015]. Заболеваемость корью в Российской Федерации к концу 2014 года увеличилась и составила 3,28, против 0,09 на 100 000 населения в 2010 году. В 71 субъекте РФ было зафиксировано 4 690 случаев кори [Сведения об инфекционных и паразитарных заболеваниях, 2014]. По данным ВОЗ корь по-прежнему остается одной из основных причин смертности среди детей раннего возраста [WHO, 2014]. Наиболее уязвимой группой населения являются новорожденные и дети первых двух лет жизни, у которых корь имеет более тяжелое течение и отличается частым развитием ранних и поздних осложнений [Мазанкова Л.Н. и др., 2012].

Гуморальный иммунитет к вирусу кори у новорожденных и детей первого года жизни формируется, главным образом, за счет специфических IgG-антител, трансплацентарно переданных им от серопозитивных матерей, ранее вакцинированных против кори или переболевших этим заболеванием [Palmeira P. et al., 2012]. Массовая иммунизация населения России против кори проводится с 1968 года, введение бустерной дозы вакцины - с 1998 года [Сергеева Н.М. и др., 2012]. Согласно Национальному календарю профилактических прививок РФ, иммунизация лиц, ранее не болевших корью, невакцинированных или привитых однократно, не имеющих сведений о прививках против кори, регламентирована до 35 лет, а в случае возникновения неблагополучной эпидемиологической ситуации - до 55 лет [Национальный календарь профилактических прививок РФ, 2014]. Установлено, что иммунитет к кори, сформировавшийся в результате

иммунизации, сохраняется менее длительно, чем после перенесенного заболевания [Leuridan Е. et al., 2010; Ярилин A.A., 2010]. Поэтому, в ряде случаев вакцинации, проведенной в детском возрасте, может быть недостаточно для формирования стойкой пожизненной защиты. В результате женщина детородного возраста и ее новорожденный могут оказаться серонегативными к вирусу кори. Однако исследований, оценивающих иммунную прослойку к вирусу кори среди новорожденных и зависимость этого показателя от возраста их матерей, до настоящего времени не проводилось.

Известно, что большинство антител плод получает в течение последнего месяца беременности, а из 5 классов иммуноглобулинов только IgG-антитела способны проникать чрез плацентарный барьер [Saji F. et al., 1999; Palmeira P. et al., 2012]. Было доказано, что трансплацентарная передача IgG-антител осуществляется благодаря наличию неонатальных Fc-рецепторов (FcRn), расположенных на клетках синцитиотрофобласта и эндотелиальных клетках сосудов плаценты [Simister N.E., 2003; Baker К. et. al., 2009].

Согласно данным литературы, эффективность трансплацентарной передачи антител от матери плоду зависит от уровней общего и специфических IgG-антител в крови матери, подклассов IgG, природы антигена, гестационного возраста новорожденного и состояния плаценты [Palmeira Р. et al., 2012]. В то же время роль патологии, сопровождающей беременность, в передаче IgG-антител к вирусу кори пока остается мало изученной.

Плацента играет ключевую роль во внутриутробном развитии плода [Айламазян Э.К. и др., 2009]. Правильное развитие плаценты во многом зависит от процессов васкулогенеза и ангиогенеза. Оба процесса имеют решающее значение, так как от них в дальнейшем зависит эффективная транспортировка веществ и выведение продуктов обмена [Charnock-Jones

D.S., Kaufmann P., Mayhew T.M., 2004; Demir R et. al., 2007; Соколов Д.И., Сельков С.А., 2012]. Образование сосудов сначала в ходе васкулогенеза, а затем ангиогенеза контролируется, главным образом, фактором роста эндотелия сосудов (VEGF) с помощью рецепторов VEGFR-1 и VEGFR-2, а также белком семейства ангиопоэтинов — ангиопоэтином-1 (Ang-1), действующим на эндотелиальные клетки через рецепторы Tie-1 и Tie-2 [Risau W„ Flamme I., 1995; Risau W„ 1997; Geva E. et al., 2002; Seval Y. et al. 2008]. Жизнедеятельность и апоптоз эндотелиальных клеток — процессы, зависящие от баланса проангиогенных (VEGF, Ang-1 и др.) и антиангиогенных (TGF-ß и др.) факторов [Bertolino Р. et al. 2005; Demir R. et al., 2007; Соколов Д.И., 2007; Arroyo Y. А., Winn V.D., 2008].

Согласно данным литературы, развитие патологии беременности может быть обусловлено рядом факторов, в том числе контролирующих ангиогенез и апоптоз, приводящих к нарушению формирования и функционирования сосудистой сети плаценты [Соколов Д.И., Сельков С.А., 2012]. Следовательно, существует высокая вероятность влияния факторов ангиогенеза/антиангиогенеза на трансплацентарную передачу веществ, в том числе иммуноглобулинов класса G, что представляет интерес для исследования.

Изучить особенности трансплацентарной передачи IgG-антител к вирусу кори и факторы ангиогенеза/антиангиогенеза при физиологическом и осложненном течении беременности.

1. Определить уровни трансплацентарных IgG-антител к вирусу кори у новорожденных г. Москвы, Московской области и г. Ростова-на-Дону.

2. Провести анализ влияния возраста женщин и особенностей течения беременности на концентрацию противокоревых IgG-антител в пуповинной крови новорожденных.

3. Изучить степень авидности ^в-антител к вирусу кори у новорожденных.

4. Дать комплексную характеристику изменений уровней трансплацентарных противокоревых ^О-антител и проангиогенных (УЕвР, Ang-l), антиангиогенных (ТвР-Р) факторов в пуповинной крови новорожденных при физиологической и осложненно протекающей беременности.

5. Исследовать соотношение значений факторов, регулирующих ангиогенез (УЕОР, Агщ-1, ТвР-Р), и трансплацентарных ^в-антител к вирусу кори при физиологическом течении беременности и плацентарной недостаточности.

6. Разработать практические рекомендации по вакцинации детей первого года жизни и их матерей при неблагоприятной эпидемиологической ситуации по кори.

Впервые дана оценка иммунной прослойки к вирусу кори у новорожденных на современном этапе и определены группы риска по заболеваемости коревой инфекцией.

Установлено влияние патологических состояний, осложняющих течение беременности, на трансплацентарную передачу ^О-антител к вирусу кори: показано достоверное снижение уровня противокоревых 1§С-антител в пуповинной крови детей, рожденных матерями, беременность которых осложнена плацентарной недостаточностью, внутриутробной инфекцией и преэклампсией.

Впервые выявлен дисбаланс проангиогенных и антиангиогенных факторов - снижение концентрации фактора роста эндотелия сосудов (УЕОР) и ангиопоэтина-1 (Аг^-1) с одновременным повышением уровня трансформирующего фактора роста р (ТвР-Р), в пуповинной крови

серонегативных к вирусу кори младенцев, рожденных матерями с плацентарной недостаточностью во время беременности.

Практическая значимость Определен и научно обоснован перечень мероприятий по профилактике коревой инфекции у беременных и детей первого года жизни при возникновении неблагополучной эпидемиологической ситуации по кори.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В крови новорожденных из различных регионов РФ уровни противокоревых ^О-антител не имеют достоверных различий. Дети, рожденные матерями в возрасте 26-30 лет, чаще (25%) являются серонегативными к вирусу кори.

2. Плацентарная недостаточность и внутриутробная инфекция у беременных относятся к достоверным факторам риска рождения серонегативных к вирусу кори детей.

3. Беременность, осложненная плацентарной недостаточностью, внутриутробной инфекцией и преэклампсией, сопровождается снижением в плодово-плацентарном кровотоке концентрации фактора роста эндотелия сосудов (УЕОР) и низким уровнем ^в-антител к вирусу кори у новорожденных.

4. Снижение уровня фактора ангиогенеза УЕОР в плодово-плацентарном кровотоке может служить предиктором плацентарной недостаточности, ухудшающей внутриутробную передачу противокоревых ^в-антител от матери плоду. Проангиогенный — /\ng-1 - и антиангиогенный - ТОР-(3 - факторы являются маркерами нарушения механизма трансплацентарной передачи ^в-антител к вирусу кори.

По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ, из них 4 -в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Объём и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы материалы и методы исследования, 2 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендация и списка литературы. Диссертация изложена на 102 страницах машинописного текста, иллюстрирована 8 таблицами и 14 рисунками. Библиография включает 159 источников: 53 отечественных и 106 - иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследования

Был осуществлен детальный клинический анализ данных 1213 стационарных карт рожениц. Для выявления соматической патологии матери, нарушения течения беременности и родов, патологии

Все кандидаты на участие в программе исследования предварительно оценивались по критериям включения и исключения из протокола. Установление диагноза и наблюдение за пациентами проводилось совместно с врачами акушером-гинекологом и неонатологом.

Согласно возрасту 672 роженицы были разделены на 5 групп: 1 группа — 78 (12%) женщин в возрасте 16-20 лет; 2- 172 (25%) - 21-25 лет; 3 - 209 (31%) - 26-30 лет; 4 - 128 (19%) - 31-35 лет; 5-85 (13%)-36-43 года.

В зависимости от клинического течения беременности 317 рожениц были разделены на группы:

I — 155 (49%) женщин, беременность которых протекала с осложнениями (угроза прерывания, отеки, преэклампсия, плацентарная недостаточность (ПН));

II - 43 (14%) роженицы, у которых во время беременности диагностирована внутриутробная инфекция (ВУИ) у плода или ВУИ у новорожденного;

III - 119 (37%) женщин с неосложненным течением беременности, родивших здоровых новорожденных.

Поскольку плацента играет ключевую роль в передаче IgG-антител от матери плоду, то I группа в последующем была разделена на 2 подгруппы: IA — 86 (27%) женщин, у которых во время беременности имелась плацентарная недостаточность; 1Б — 69 (22%) рожениц, у которых во время беременности не было плацентарной недостаточности.

Новорожденные по уровню IgG-антител в пуповинной крови делились на серонегативных ( 0,18 МЕ/мл).

В зависимости от содержания защитных IgG-антител были выделены следующие группы новорожденных: А - с низким уровнем антител - >0,18 и 1,0 и 5 МЕ/мл.

1 — 32 женщины с неосложненным течением беременности и их новорожденные; II - 34 матери, у которых беременность была осложнена плацентарной недостаточностью, и их новорожденные.

Уровни факторов ангиогенеза/антиангиогенеза оценивали путем проведения твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА). В качестве тестовых систем использовали следующие стандартные наборы:

Результаты исследования и их обсуждение 1. Сравнительный анализ концентрации трансплацентарных IgG-антител к вирусу кори у новорожденных г. Москвы, Московской области и г. Ростова-на-Дону

Проведенное сравнительное исследование по определению содержания IgG-антител к вирусу кори в сыворотках пуповинной крови новорожденных г. Москвы, Московской области (МО) и г. Ростова-на-Дону статистически значимых различий не выявило (табл. 1). У 20,1% из 672 новорожденных г. Москвы и МО и у 18,7% из 475 - Ростова-на-Дону, результаты были серонегативными. У младенцев наблюдалась схожая картина распределения защитных (>0,18 МЕ/мл) IgG-антител к вирусу кори. Было отмечено преобладание антител низкого (>0,18 и 1,0 и 5 МЕ/мл) уровня в обеих группах исследования (р 3]

Сравниваемые показатели г. Москва и МО (п=672) г. Ростов-на-Дону (п=457)

Серо(+), абс. (%) 537 (79,9 %) 386 (81,3 %)

Серо(-), абс. (%) 135 (20,1 %) 89(18,7%)

Уровень 1§0-АТ, МЕ/мл 0,5 [0,2; 1,72] 0,6 [0,2; 1,6]

Таблица 2 Уровни защитных 1§С-антител к вирусу кори в пуповинной крови

Уровень защитных ДО-АТ г. Москва и МО г. Ростов-на-Дону

А, абс. (%) 313 (58,3 %) 219(56,7%) *.**

Б, абс. (%) 178 (33,1 %) 123(31,9%)

В, абс. (%) 46 (8,6 %) 44(11,4%)

Примечание. Значимость различий (р 5,0 МЕ/мл) низкоавидные выявлены не были (р 1 ;С>3]_

Группы | п Серо(-), абс. (%) Серо(+), абс. (%) Уровень IgG-AT, МЕ/мл

IA 86 24 (27,9%) ** 62 (72,1%) 0,5 [0,15; 1,4]

1Б 69 11 (15,9%) *** 58 (84,1%) 0,65 [0,3; 1,9]

II 43 14 (32,6%) # 29 (67,4%) 0,3 [0,17; 0,8]

III 119 13(10,9%) 106 (89,1%) 0,7 [0,3; 1,9]

Всего 317 62(19,6%) 255 (80,4%) 0,5 [0,24; 1,4]

Примечание. Значимость различий (р 1;03]_

Без патологии (п=46) ПН (п =51) ВУИ (п =56) Преэклампсия (п =41)

\gf3-AT (МЕ/мл) 0,7 *** [0,4; 2,3] (п=46) 0,45 [0,08; 1,0] (п=51) 0,49 [0,18; 1,0] (п=56) 0,38 [0,17; 0,9] (п=41)

УЕвР (пг/мл) 934,2 [435,6; 1296,0] (п=37) 325,55 [20,9; 750,1] (п=38) 362,55 [172,8; 729,2] (п=40) 317,4 [64,5; 745,0] (п=35)

Апд-1 (пг/мл) 1440,0 [1116,0;1661,0] (п=10) 913,15 [616,3; 1384,0] (п=14) 965,0 [816,0; 1238,0] (п=13) 901,0 [680,0; 1291,0] (п=12)

ТвР-р (пг/мл) 419,0 [158,35; 794,5] (п=20) 679,0 [316,7; 826,0] (п=21) 692,25 [459,6; 871,0] (п=18) 718,0 [598,0; 870,7] (п=17)

Читайте также: