В инвитро герпес 6 типа у детей

Вирусом герпеса заражено практически все население нашей планеты. Существует несколько видов герпеса, и если одни не особенно опасны, то другие могут создать серьезные проблемы со здоровьем, а в определенных ситуациях, например при беременности, последствия деятельности вируса могут стать фатальными.

Масштабы проблемы и роль диагностики герпеса

Герпес можно назвать самым распространенным вирусным заболеванием в мире. Заразиться им очень просто — он может передаваться при любых контактах (поцелуях, половом акте), во время родов от матери к ребенку, бытовым путем, иногда — воздушно-капельным. К моменту достижения взрослого возраста герпесом заражен практически каждый.

Попадая в кровь, вирус может жить в организме годами, никак не проявляя себя. Но рано или поздно он дожидается момента, когда наша иммунная система слабеет. Спусковым крючком может стать серьезная болезнь, стресс, переутомление и хроническая нехватка сна, переохлаждение, гормональная перестройка, словом, практически любая встряска для организма.

Проявления герпеса зависят от типа вируса.

Существует 8 типов герпеса:

  • Герпес 1-го типа. Самый распространенный тип. Именно он вызывает появление зудящих пузырьков, наполненных жидкостью, на губах, языке, слизистых оболочках рта. Иногда за несколько часов перед появлением пузырьков человек чувствует повышение температуры и слабость, хотя очень часто вирус атакует без предупреждения.

Многие считают, что избавиться от герпеса невозможно. И в этом утверждении есть доля истины — но лишь доля. Да, на сегодняшний день нельзя полностью уничтожить вирус в организме. Но можно подавить его деятельность настолько, что проявления не будут вас беспокоить. Лечение обычно комбинированное, используются противовирусные препараты, средства, укрепляющие иммунитет, используются также физиотерапевтические методы (озонотерапия и другие), а при обострении — местные обезболивающие и противовирусные средства.

Диагностировать и лечить герпес необходимо, и это особенно важно для тех, кто готовится стать родителями. Взрослым вирус герпеса причиняет дискомфорт, но для новорожденных детей он может быть смертельно опасным.

Диагностика герпеса разделяется на два этапа — врачебный осмотр и лабораторные исследования, цель которых — найти и идентифицировать вирус герпеса в крови и других биоматериалах.

Зачастую уже при осмотре доктор в состоянии определить, с каким именно типом герпеса он имеет дело. Однако визуальные признаки могут ввести в заблуждение, например, генитальный герпес может походить на сифилис, а для некоторых типов герпеса внешние проявления вообще не характерны. Поэтому врач обязательно направит вас на анализы на герпес.

Лабораторные методы — основа диагностики герпеса. Они позволяют определить наличие вируса даже с том случае, если он неактивен, а также установить тип возбудителя и его концентрацию.

Анализы на герпес следует сдавать регулярно, даже если никаких проявлений болезни нет, — это нормальная мера контроля состояния здоровья. Но в некоторых случаях анализы на герпес обязательны.

  • во время планирования и ведения беременности;
  • перед подготовкой к трансплантации органов;
  • при появлении на коже пузырьков и высыпаний, причину которых сложно определить во время осмотра.

Лабораторная диагностика герпеса включает в себя несколько видов анализов. Какой анализ на герпес необходим в каждом конкретном случае, решает лечащий врач. Иногда для полной уверенности потребуется пройти несколько разных исследований.

  • Полимеразная цепная реакция (ПЦР) . Доступный и чрезвычайно простой метод, который позволяет быстро выявить вирус даже в том случае, если его концентрация в крови крайне мала. Методом ПЦР можно исследовать практически любой биоматериал. В основе ПЦР лежит метод многократного копирования части ДНК возбудителя болезни и последующей идентификации вируса и его типа.
  • Иммуноферментный анализ (ИФА) . При помощи этого метода можно выявить наличие антител IgM и IgG (качественный ИФА) и подсчитать их концентрацию (количественный ИФА). При обострении высоко содержание IgM, а в хронической стадии — IgG. Таким образом, этот способ дает возможность установить фазу болезни.
  • Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) . При этом методе биоматериал обрабатывается особым веществом, под воздействием которого антигены начинают светиться и их можно быстро обнаружить при микроскопическом исследовании. Этот способ хорошо работает в том случае, если концентрация возбудителя в крови высока.
  • Культуральный метод . Точный и надежный метод, единственным существенным минусом которого является долгое ожидание результатов. При исследовании культуральным методом биоматериал переносится на питательную среду. Вирус начинает активно захватывать здоровые клетки и исследователь, наблюдая за их изменениями, получает возможность идентифицировать вирус. Ложноположительный или ложноотрицательный результат при использовании культурального метода почти исключен, но результата приходится ждать 1–2 недели.
  • Серологический метод . Самый распространенный и доступный метод диагностики герпеса, определяющий антитела класса G. Часто назначают при подозрении на герпес 2-го типа (генитальный герпес). Биоматериалом для этого исследования является кровь из вены.
  • Иммунограмма . Это не столько анализ на герпес или какой-либо другой вирус, сколько проверка работы иммунной системы. Специалист исследует кровь из вены и определяет общее количество иммунных клеток, а также их соотношение. Этот анализ позволяет определить, каких иммуноглобулинов не хватает. Иммунограмму назначают для подбора правильной терапии для стимуляции защитной системы организма.
  • Дот-гибридизация . Метод, во многом похожий на ПЦР — он также направлен на выявление ДНК возбудителя. Способ диагностики можно использовать даже тогда, когда внешних проявлений болезни еще нет.
  • Вульвокольпоцервикоскопия . Этот метод относится к качественным и применяется для диагностики генитального герпеса у женщин. Врач осматривает слизистые оболочки влагалища и шейки матки при помощи специального микроскопа — он дает не очень большое увеличение, однако этого достаточно для того, чтобы увидеть характерные для герпеса высыпания.

Стоимость анализов на герпес значительно различается в разных частных лабораториях Москвы, поэтому мы приводим средние расценки.

ПЦР-анализ обойдется примерно в 900–1500 рублей, если анализ проводится на все типы герпеса, и в 300–500 рублей, если анализ проводится на какой-то один тип. ИФА стоит в среднем 750–900 рублей, РИФ — 450–700 рублей.

К стоимости самого анализа нужно добавить и стоимость забора биоматериала — в среднем 200–300 рублей за забор крови и 300–400 рублей за забор мазка.

Традиционный список анализов при герпесе включает в себя ПЦР, ИФА и РИФ. Дополнительные исследования назначаются в том случае, если даже эти три метода в совокупности дали неоднозначный результат, что бывает достаточно редко.



Что­бы ре­зуль­та­ты ана­ли­зов бы­ли точ­ны­ми, об­ра­щай­тесь в круп­ные ла­бо­ра­то­рии, где стро­го кон­тро­ли­ру­ет­ся весь про­цесс — от за­бо­ра био­ма­те­ри­а­ла до про­ве­де­ния ис­сле­до­ва­ния. Кро­ме то­го, са­мим па­ци­ен­там важ­но со­блю­дать пра­ви­ла под­го­тов­ки к ана­ли­зам. Они до­ста­точ­но про­с­ты — за 8 ча­сов до за­бо­ра био­ма­те­ри­а­ла не­льзя есть и пить (ис­клю­че­ние — обыч­ная во­да), упо­треб­лять ал­ко­голь, за­ни­мать­ся спор­том, же­ла­тель­но огра­дить се­бя от стрес­со­вых си­ту­а­ций.

Серологический маркёр текущей или имевшей место в прошлом инфекции герпесвирусом человека типа 6.

См. также тесты № 316 и № 352 – определение ДНК герпесвируса типа 6.

К настоящему времени установлено, что инфекция HHV-6 широко распространена, вирус имеет 2 подтипа – А и В (в данном тесте не различимы), подтип вируса HHV-6В является основной причиной внезапной экзантемы (детской розеолы), одной из детских инфекций, протекающей с высокой температурой и сыпью. К 2 - 3 годам жизни вирусом HHV-6 заражаются почти все дети. Инфекция может протекать также и в виде неспецифического лихорадочного заболевания или быть бессимптомной. В некоторых случаях могут наблюдаться осложнения со стороны центральной нервной системы (судороги на фоне высокой температуры, редко - другие неврологические осложнения, включая энцефалит, менингоэнцефалит, серозный менингит).

В популяции взрослых людей IgG антитела к данному вирусу выявляются у 70 - 90% людей. Первичная инфекция HHV-6 у взрослых людей редка, такие случаи могут быть ассоциированы с инфекционным мононуклеозом, отрицательным по вирусу Эпштейна-Барр, фульминантным гепатитом. Наиболее вероятный путь передачи инфекции – воздушно-капельный, со слюной, не исключена вертикальная передача инфекции от матери к ребёнку во время беременности. Вирус проявляет тропность к лимфоцитам. Полная репликация вируса происходит только в Т-лимфоцитах, но он может быть выявлен и в других клетках - моноцитах, В-лимфоцитах, а также в ткани мозга, печени, слюнных желез, эндотелии и пр.

При необходимости точно выяснить этиологию лихорадочного заболевания у детей, диагноз первичной инфекции HHV-6 может быть подтвержден сероконверсией – появлением ранее отсутствующих специфических антител или 4-кратным нарастанием титра IgG антител в парных сыворотках. IgG-антитела появляются на 7-й день лихорадки, достигая максимума через 2 - 3 недели, персистируют длительное время. При рождении в крови детей могут обнаруживаться материнские IgG-антитела, титр которых снижается к 5 месяцам.

Как и другие герпесвирусы, HHV-6 после первичной инфекции может персистировать в организме, активируясь при угнетении иммунитета. Трансплантация стволовых клеток и пересадка внутренних органов повышает риск инфекций, вызванных HHV-6 (в большинстве случаев, это, видимо, обусловлено реактивацией латентной инфекции в результате угнетения иммунитета на фоне иммуносупрессивной терапии). HHV-6 действует как оппортунистическая инфекция и у ВИЧ-инфицированных. Клиническими проявлениями реактивации вируса у пациентов с угнетённым иммунитетом могут быть повышение температуры, сыпь, цитопения, гепатит, пневмония, энцефалит. Обследование реципиентов до и после трансплантации на присутствие в крови маркёров инфекции HHV-6, наряду с цитомегаловирусом и вирусом Эпштейна-Барр, рекомендуется для возможно более раннего выявления вирус-ассоциированных заболеваний и успешности трансплантации.

В настоящее время интенсивно исследуется возможная роль HHV-6 в патогенезе рассеянного склероза, синдрома хронической усталости, лимфопролиферативных заболеваний, его влияния на характер течения ВИЧ-инфекции. Но, поскольку инфекция HHV-6 распространена повсеместно, выявление антител к данному вирусу и даже выделение самого вируса, сами по себе, не могут служить подтверждением его этиологической роли в различных синдромах старшего возраста.

  • Дифференциальная диагностика детских инфекций, протекающих с высокой температурой и сыпью.
  • Диагностика инфекционного мононуклеоза, отрицательного по вирусу Эпштейна-Барр.
  • При необходимости, в комплексе обследований пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями и гемобластозами.
  • В комплексе обследований реципиентов органов и тканей до и после трансплантации.
  • В диагностике вирус-ассоциированных заболеваний у ВИЧ-инфицированных и при других иммунодефицитных состояниях.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения в лаборатории ИНВИТРО: Результаты выдаются в терминах >, >, >.


"В течение ближайшего месяца мы будем разрабатывать технологическую базу и начнем выполнять тесты для выявления инфицирования новым коронавирусом. К проведению исследования будет подключено четыре лабораторных комплекса, расположенных в Москве, Санкт-Петербурге, Новосибирске и Челябинске", - сообщили в компании. При этом сдать анализы можно будет в разветвленной сети офисов "Инвитро", которые работают сегодня по всей стране. "Точный список медофисов будет доступен на нашем сайте", - уточняют в компании. И подчеркивают, что для безопасности пациентов будут принимать не более трех человек в помещении одновременно, соблюдая все необходимые меры предосторожности.



"Мы делаем всё для того, чтобы обеспечить максимальную безопасность нашим пациентам и сотрудникам: персонал будет снабжен всем необходимым, включая медицинские маски, одноразовые перчатки и специальные дезинфицирующие средства. Лабораторные комплексы компании переведены на усиленный режим работы", - уточнили в компании. Тестирование будет платным, его стоимость в "Инвитро" пока не называют. При этом в компании выполняют множество диагностических тестов, в том числе и на всевозможные вирусные инфекции. Например, выполнить анализ на норовирус, вызывающий диарейный синдром, в Москве стоит 1660 рублей. А обнаружить различные типы герпеса - от 370 до 770 рублей. Разнообразные тесты для идентификации ВИЧ обходятся в сумму от 490 до 12 тыс. рублей. А весь спектр гепатитов (А, В, С, D, G, Е) - от 740 до 8 тыс. рублей.

Тест на COVID-19 будет проводиться по методу полимеразной цепной реакции. Это хорошо известный и давно применяемый метод диагностики. Продолжительность выполнения анализа - примерно двое суток. Его же используют государственные медучреждения системы Роспотребнадзора с помощью тест-систем, разработанных в ГНЦ "Вектор". Впрочем, монополистом на рынке коммерческой диагностики "Инвитро" явно не останется. Практически одновременно с ней о планах начать тестирование заявила еще одна крупная частная компания CMD, также специализирующаяся на лабораторной диагностике. Кроме того, проходит сейчас регистрацию еще одна тест-система для экспресс-анализа COVID-19. Этот тест - совместная разработка российских и японских ученых, проект по ее созданию поддержал Российский фонд прямых инвестиций (РФПИ). Как пояснил "РГ" представитель РФПИ Арсений Палагин, достоинство экспресс-системы в простоте ее использования, анализ можно сделать даже в мобильной лаборатории. Впрочем, РФПИ планирует сотрудничать с государственными медучреждениями, а в них тестирование пациентов проводят без оплаты.

Вице-премьер Татьяна Голикова заявила в начале недели, что правительство планирует расширить возможности по лабораторной диагностике COVID-19. При этом она подчеркнула, что всех подряд граждан тестировать сейчас нужды нет. Анализы берут у трех категорий пациентов: людей, вернувшихся из стран с неблагополучной эпидситуацией по вирусу, у тех, кто контактировал с заболевшими, а также у пациентов с признаками заболевания (например, при диагнозе "пневмония")

В течение какого срока остается угроза заражения?

ВОЗ призвала все страны расширять тестирование на COVID-19. Даже люди, не имеющие симптомов заболевания, могут выделять вирус и быть источником заражения для окружающих. Глава ВОЗ доктор Тедрос Гебрейесус пояснил, в течение какого времени после исчезновения симптомов болезни выздоравливающий человек остается источником инфекции для окружающих. "Необходимо проверять каждый подозрительный случай, и если тест дает положительный результат, нужно изолировать больного и выяснить, с кем он находился в тесном контакте в течение двух дней до возникновения симптомов заболевания", - сказал глава ВОЗ. При этом люди, инфицированные COVID-19, могут по-прежнему заражать других и после того, как у них исчезли симптомы болезни. "Поэтому меры изоляции должны соблюдаться в течение не менее двух недель после исчезновения симптомов. Допускать контакты с другими людьми нельзя до конца этого периода", - уточнил доктор Гебрейесус.

Страница создана 14.03.2017 и обновлена 12.03.2019



Выберите тип маршрута и кликните на карте для указания места отправления

Мед клиники и поликлиники поблизости

Косметологическая клиника АсМедия на Гражданском

Городская поликлиника №86 на Киришской

Центр рентгенодиагностики Пикассо на Гражданском

Центр имплантации и стоматологии Интан на Просвещения

Клиника МедЭксперт

Лаборатория ЛабСтори на Ушинского

Стоматология Дентал Клиник

Стоматология Ле Дент
Рекомендованы для посещения Петербургом2

База отдыха Шишки на Лампушке

Клиника гинекологии и урологии Нарвская

Салон красоты Be Box

Зоопарк на Лампушке
Медицинская лаборатория Инвитро на Гражданском: отзывы посетителей










Онлайн-трансляция Схождения Благодатного огня

В Петербурге количество зараженных коронавирусом увеличилось до 1,5 тыс. человек

Планы на выходные: чем заняться 17 - 19 апреля

Трансляция Пасхального богослужения в Храме Христа Спасителя

Человек, нам надо поговорить: мемы с котами

Ваши вопросы

Прежде чем задать вопрос, прочтите раздел "О ВИЧ". Если вы не нашли ответ на интересующий вас вопрос, можете задать его врачу-консультанту.

Наш ФОРУМ! Добро пожаловать!

Здравствуйте! Скажите пожалуйста, финальный тест надо сдавать через 24 недели (168 дней) или 6 месяцев(180 дней)? И надо ли с небольшим перевесом дней сдавать анализ, для уверенности, или это не имеет значения?

Если контакт был с ВИЧ-инфицированным, то по рекомендации санитарных правил обследование проводиться через 3, 6 месяцев.

Подскажите, имеет ли значение когда сдавать анализ на ВИЧ: утром или вечером? Прием пищи, кофе, чай и т. п. влияют на результаты?

Исследование ИФА на ВИЧ, гепатиты, сифилис и др. инфекции желательно проводить на голодный желудок, или, хотя бы, за 3 часа не употреблять жирную пищу, чтобы не было хилеза сыворотки, в этом случае анализ просто не получится. Чай, кофе не влияют никак.

Да забыл написать, что ранок на пальце не было и тем более там на попе, ну дырки))). Правда иногда могу после туалета как по большому схожу , подтереться и вижу кровь на туалетной бумаге. Но ничего не подумайте. Я натурал. Просто может сильно и усердно вытираю. А еще бывает как недомогание, ну тяжесть в правом боку. Когда сильно волнуюсь, я постоянно сглатываю слюну. Может из за этого.

". кровь на туалетной бумаге" - в ам нужно исключить геморрой; ". тяжесть в правом боку" - проверьте печень, желчевыводящие пути.

Здравствуйте. У меня опять тупая ситуация. В общем вчера была кровь на пальце засохшая, не знаю, я ее с мочил слюной и вот прямо в этот момент почесалась попа. Ну вот прямо там возле отверстия). Ничего не подумайте. Я серьезно. Ну и почесал. А кровь на пальце до конца не убрал. Я вчера был на работе. И после рабочего дня помылся в душе. Потом быстро сел в машину и сразу домой. Ни с кем не контактировал, за руку не держался. После сходил в магазин. Быстро туда обратно. Купил буквально воду и ушел. В магазине тоже ни чего не трогал. После пришел домой разогреть поесть, помыл руки снова. То есть после работы минимум 2 раза помыл руки. Но вот обнаружил кровь на пальце после того уже как поел и помыл руки. Возможно что просто сидел в телефоне и не заметил как мог покавырять в носу. Так как после подошел к зеркалу и достал большую козявки кровавую.))) вот и не знаю есть риск или нет. Прошу уважаемые врачи отнеситесь к моему вопросу серьезно. Так как уже и так 9 месяцев паникую. То с девушкой вот 9 месяцев прошло, после драки 4 месяца, а вот сейчас это. Я конечно тоже понимаю , что возможно бред пишу, но все же кровь и все тут, ничего не могу с собой подделать. Возможно обращаться к психологу. Так как так уже жить не могу.

В вашей сттуации абсолютно никакого риска заражения ВИЧ не было. Учитывая ваше состояние рекомендуем обратиться к хорошему психологу или психотерапевту.

Добрый день, уважаемые специалисты. Старалась не беспокоить Вас лишними вопросами, ответы на которые вы уже нам всем неоднократно давали. Но все равно не понимаю что происходит с организмом. Незащищённый половой контакт был 8 месяцев назад (семяизвержение внутрь). В течении этого времени неоднократно сдавала анализы на вич в инвитро. Последний анализ 7,5 месяцев назад, направление дали в областной поликлинике. Результат отрицательный.
Но температура все равно держится где то месяцев 5, в среднем 36,9 - 37,2. И самочувствие в целом плохое. Обращалась в поликлинику по месту жительства. Назначили много анализов, и биохимию, и на ВЭБ, и общий анализ крови, рентген легких. Все по результатам анализов в порядке, рентген тоже. Единственное, лор диагностировал хронический фарингит и хронический тонзиллит. Хотела спросить, можно ли с уверенностью исключить вич. И может ли хронический фарингит давать столь продолжительную температуру, или стоит дальше искать причину. (Цитосиатики и постконтактную профилактику не принимала). Благодарю за ответ

Про фарингит нужно было спросить у ЛОР-врача. Возможен также термоневроз. ВИЧ-инфекция у вас исключена однозначно, без всяких оговорок.

  • КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Герпес, мирамистин, ВПГ

Герпетическая инфекция, обусловленная вирусом простого герпеса (ВПГ) 1-го и 2-го типов, занимает одно из ведущих мест по распространенности среди вирусных заболеваний. У большинства здоровых людей ВПГ-1 и ВПГ-2 вызывают широкий спектр заболеваний, причем как острую первичную инфекцию, так и рецидивирующие заболевания кожи и слизистых оболочек. У новорожденных и лиц с иммунодефицитами инфекция может протекать особенно тяжело и заканчиваться летальным исходом. Для профилактики и терапии инфекции ВПГ предложено много средств, однако препаратами выбора остаются нуклеозидные аналоги (например, ацикловир), которые обладают селективной антигерпесвирусной активностью, обусловленной подавлением репликации вируса и инактивацией вирусной ДНК-полимеразы. С 1982 г. стали регистрироваться штаммы ВПГ, устойчивые к действию ацикловира (АЦВ), а за последние 10 лет, когда АЦВ стал основным противогерпетическим средством, частота выделения таких штаммов резко возросла, особенно от иммунокомпрометированных лиц [1]. По данным разных авторов, АЦВ-резистентные штаммы ВПГ встречаются в 4–14% случаев у онкологических больных, ВИЧ-инфицированных и лиц, перенесших трансплантацию органов и тканей или получающих длительную иммуносупрессивную терапию. В этой связи актуальной задачей является поиск и изучение новых противогерпетических средств с альтернативным механизмом противовирусного действия.

Препарат Мирамистин® (мирамистин) из группы катионных антисептиков широко используется для индивидуальной профилактики заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП), в том числе герпесвирусной инфекции (ГИ), а также для лечения бактериальных и грибковых осложнений у больных ЗППП. Имеются данные об успешном применении мирамистина при лечении воспалительных заболеваний верхних дыхательных путей и легких различной этиологии. Сообщалось, что мирамистин проявляет антимикробную активность в отношении бактерий, грибов, простейших, а также обладает иммуномодулирующим и регенерирующим действиями, способностью повышать неспецифическую резистентность организма. Имеются данные о противовирусном действии мирамистина в отношении ретровирусов (ВИЧ), парамиксовирусов (корь, паротит) и некоторых других [2, 3]. Обнаружено, что мирамистин проявляет активность на ранних этапах инфекционного процесса; в основе его действия лежит предотвращение адсорбции и пенетрации вируса в клетки хозяина. Учитывая, что механизм противовирусного действия мирамистина отличается от действия АЦВ, можно предположить, что использование мирамистина для профилактики и комплексной терапии ГИ позволило бы снизить не только частоту появления штаммов ВПГ, резистентных к действию ацикловира и его аналогов, но и снизить распространенность вируса среди лиц групп риска, а также повысить эффективность противогерпетического лечения.

После полного формирования в лунках планшета монослоя клеток Vero B (в течение 24 ч) ростовую среду удаляли, клетки троекратно отмывали средой Игла и вносили в лунки в составе поддерживающей среды мирамистин (в максимально переносимых и меньших концентрациях) по одной из нижеприведенных схем. Противовирусную активность препаратов (ПАП) оценивали общепринятыми методами по их способности предотвращать развитие индуцируемого вирусами цитопатического действия (ЦПД) и ингибировать репродукцию вирусов в культуре клеток, а также по наличию вирулицидного действия [4–6]. Для профилактики герпесвирусной инфекции широко применяются вирулицидные препараты, оказывающие непосредственное разрушающее действие на вирусные частицы (например, оксолиновая мазь). Оценку вирулицидного действия проводили для того, чтобы выяснить, посредством какого механизма мирамистин проявляет свою активность в отношении вируса простого герпеса: подавления репродукции вируса или в результате разрушения (повреждения) им вирусных частиц.

Схема 1 (оценка цитотоксического действия препарата на неинфицированные клетки): различные концентрации препарата вводили в состав поддерживающей среды, которой покрывали сформировавшийся монослой. Планшеты инкубировали в течение 96 ч, как указано выше. Действие препарата оценивали ежедневно методом световой микроскопии по степени изменения морфологии клеточного монослоя.

Определяли ТЦД50 препарата, которая соответствовала концентрации, вызывающей видимые нарушения морфологии у 50% клеток монослоя, и максимально переносимую концентрацию (МПК) – наи­более высокую дозу препарата, не вызывающую видимых изменений клеточного монослоя, по сравнению с контролем. Для дальнейшего исследования применяли концентрации препаратов, не превышающие МПК.

Схема 2 (определение прямого вирулицидного действия препарата на вирионы ВПГ): в течение 1 ч инкубировали суспензии штаммов ВПГ-2 или ВПГ-1 в присутствии различных концентраций препарата мирамистин в среде Игла, при 37 °С в атмосфере с 5% СO2 с последующим титрованием суспензии в культуре клеток. Инокулюмы из серийных разведений (101–106) вносили в лунки планшета с монослоем, планшеты инкубировали 1 ч при 37 °С в атмосфере с 5% СO2, затем суспензию вируса удаляли, клетки троекратно отмывали средой Игла и вносили в лунки свежую питательную среду, после чего планшеты инкубировали 96 ч в тех же условиях.

Схема 3 (оценка ранней профилактической активности): внесение препарата за 1 ч до инфицирования клеток. В лунки планшета с отмытым монослоем вносили питательную среду, содержащую мирамистин в указанных концентрациях, и инкубировали, как описано выше. Через 1 ч в лунки планшета вносили суспензию вируса и инкубировали в течение 1 ч. Затем суспензию вируса удаляли, в лунки вносили питательную среду, не содержащую препарат, и планшеты инкубировали, как описано выше, в течение 96 ч.

Схема 4 (оценка экстреннопрофилактической активности): внесение препарата через 1 ч после инфицирования клеток. Клетки инкубировали в обычных условиях. В лунки планшета вносили суспензию вируса и инкубировали 1 ч. Затем в лунки планшета вносили питательную среду, содержащую мирамистин в указанных концентрациях, и клетки инкубировали, затем среду с несвязавшимися вирусами удаляли и вносили в лунки питательную среду, содержащую препарат в тех же концентрациях. Через 15 мин действие препарата останавливали внесением в каждую лунку по 100 мкл ЭТС, планшеты помещали в термостат и выдерживали в тех же условиях в течение 96 ч.

Схема 5 (оценка поздней профилактической активности): внесение препарата через 12 ч после инфицирования клеток. В лунки планшета с отмытым монослоем вносили суспензию вируса и инкубировали в течение 12 ч. Затем суспензию вируса удаляли и вносили в лунки питательную среду, содержащую препарат в указанных концентрациях. Через 15 мин действие препарата останавливали внесением в каждую лунку по 100 мкл ЭТС, планшеты помещали в термостат и выдерживали в течение 96 ч в указанных выше условиях.

С целью изучения влияния различных концентраций мирамистина на репродукцию вируса на 3–4-е сутки после инфицирования отбирали соответствующие пробы вируса и определяли его остаточную инфекционность. Пробы отбирали в микропробирки с крышкой (Eppendorf) и сохраняли при -70 °С. Перед постановкой опыта пробы подвергали троекратному замораживанию-оттаиванию. Затем клеточный дебрис удаляли центрифугированием, готовили серийные 10-кратные разведения проб, которыми в дальнейшем инфицировали отмытый монослой клеток Vero B. Планшеты инкубировали 1 ч, затем суспензию вируса удаляли, троекратно отмывали клетки от несвязавшегося вируса и вносили в лунки свежую питательную среду. Планшеты выдерживали в течение 96 ч в указанных ранее условиях. Результаты титрования оценивали по общепринятой методике.

Противовирусную активность препарата оценивали по 50% ингибиторной концентрации (ИК50), то есть минимальной концентрации препарата, при которой ЦПД вируса уменьшалось наполовину по сравнению с контролем.

Читайте также:

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.

Copyright © Иммунитет и инфекции

Анонимный пользователь 31 января 2014 г. 19:44