Посев эякулята на герпес
Описание
Посев на культуре клеток (ВПГ, ЦМВ) — не только выявляет вирус, но и даёт информацию о его активности (агрессивности). Анализ результатов посева на фоне лечения, позволяет делать заключение об эффективности проводимой терапии.
Вирус простого герпеса (ВПГ), или герпес, бывает двух видов: вирус простого герпеса первого типа (ВПГ-1) и вирус простого герпеса второго типа (ВПГ-2). Обе формы вируса — высококонтагиозны.
Основной путь передачи герпеса: воздушно-капельный, контактный, половой, внутриутробный, гемотрансфузионный, при пересадке органов. Первичная герпевирусная инфекция и реактивация инфекции (в гораздо меньшей степени) в период беременности могут вызывать патологию беременности или внутриутробное инфицирование плода. Причиной внутриутробного инфицирования плода чаще бывает ВПГ-2, но не исключено заражение и ВПГ-1. Кроме того, роженицы могут передать вирус новорождённому при родах, что может вызвать неонатальный герпес — редкое заболевание с летальным исходом.
К типичным симптомам ВПГ-1 относят:
- высыпание на губах и слизистой оболочке рта группы скученных мелких пузырьков (везикул), наполненных прозрачным содержимым;
- воспалённость, отёчность кожи и слизистой в области высыпаний.
ВПГ-2 — относится к числу инфекций, передаваемых половым путем, которые могут вызвать генитальный герпес.
Распространяется, главным образом, половым путём при кожном контакте.
Вирус генитального герпеса Herpes simplex 2 типа поражает, преимущественно, покровные ткани (эпителий) шейки матки у женщин и полового члена у мужчин, вызывая боль, зуд, появление прозрачных пузырьков (везикул) на месте которых образуются эрозии/язвочки. Однако при оральных контактах возможно поражение покровной ткани губ и ротовой полости.
HSV и беременность
У беременных: вирус может проникнуть через плаценту в плод и вызвать у него врождённые дефекты. Герпес может вызвать также самопроизвольный аборт или преждевременные роды. Но особенно вероятна опасность заражения плода в процессе родов, при прохождении через шейку матки и влагалище при первичной или рецидивирующей генитальной инфекции у матери. Такое заражение на 50% повышает смертность новорождённых или развитие у них тяжёлых повреждений головного мозга или глаз. При этом определённый риск инфицирования плода существует даже в тех случаях, когда у матери ко времени родов отсутствуют какие-либо симптомы генитального герпеса. Ребёнок может заразиться и после рождения, если у матери или у отца имеются поражения, во рту, или получить вирус с материнским молоком.
Цитомегаловирус (или ЦМВ) — это разновидность из группы герпесвирусов (Herpesvirus), относящаяся к роду Cytomegalovirus подсемейства 3-herpesviridae. Встречается везде. Статистика частоты встречаемости очень вариативна — вероятно, из-за того, что у значительной массы носителей вируса заболевание протекает бессимптомно. Способов полного излечения от герпеса пока нет, т.е. заражённый человек остается носителем возбудителя на всю жизнь.
ЦМВ — это инфекция, сходная с герпесом или ветрянкой, только с гораздо более серьёзными и неожиданными последствиями — от повреждения внутренних органов до необратимых изменений ЦНС. Определить данное заболевание на ранних стадиях проблематично, его точный инкубационный период пока неизвестен. Проявления инфекции могут быть приняты за воспаление органов мочеполовой системы, обычные недомогания типа ОРВИ (острая респираторная вирусная инфекция) и прочие обычные болезни. Весьма часто ЦМВ приводит к возникновению многочисленных воспалений сразу в нескольких внутренних органах.
При беременности вирус не всегда передаётся от больной матери к ребёнку. Но если инфицирование ЦМВ произошло в период беременности или болезнь усилилась, то вероятность передачи заболевания плоду значительно возрастает.
Цитомегаловирусная инфекция передаётся половым путем, через слюну, материнское молоко, при беременности (от матери к ребёнку), через общую мочалку, полотенце, посуду и т.д.
Наиболее часто цитомегаловирусная инфекция проявляется как острая респираторно-вирусная инфекция. От больных поступают жалобы на общее недомогание, насморк, быструю утомляемость. Происходит увеличение и воспаление слюнных желёз, сопровождающееся беловатым налётом на языке и дёснах, а так же обильным выделением слюны.
У женщин и мужчин поражение мочеполовой системы даёт симптомы хронического не специфического воспаления. В этом случае, если не обнаружена вирусная природа патологии, лечение заболевания при помощи антибиотиков будет малоэффективно.
Самые серьёзные и опасные осложнения цитомегаловируса — это патология беременности, плода и новорождённого. Если произошло инфицирование плода во время беременности, то риск развития этой патологии будет максимальным. Однако, не стоит забывать, что проблемы могут возникнуть так же у беременных при активации латентной ЦМВ-ифекции, когда вирус попадает в кровь, впоследствии заражая плод. Согласно статистике, ЦМВ является наиболее частой причиной не вынашивания беременности. Внутриутробная цитомегаловирусная инфекция является причиной поражений центральной нервной системы (тугоухость и отставание в умственном развитии). В 20–30% случаев заканчивается смертью ребёнка.
Преимущества посева на культуре клеток
Главным преимуществом посева на культуре клеток является высокая точность исследования в случае положительного результата. Кроме того, по культуре клеток можно определять, вирусом герпеса какого типа — первого, второго или ЦМВ, была вызвана инфекция. Если результат лабораторной диагностики на культуре клеток окажется у вас положительным, можете быть уверенным, что у вас вирус герпеса.
Основным недостатком посева на культуре клеток является высокий процент ложноотрицательных результатов. Поскольку для посева вирус должен находиться в активном состоянии, если герпетический пузырёк или язвочка маленького размера или уже начинает заживать, то для нормального исследования количества вируса может быть недостаточно. При проведении диагностики позднее, чем через 48 часов после появления симптомов, высока угроза ложноотрицательного результата. Посев вируса на культуре клеток бывает еще менее достоверным при диагностике во время рецидивов (положительные результаты получают лишь в 30% случаев повторных вспышек герпеса).
Подготовка
Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приёма пищи. Кровь берется в пробирку с ЭДТА.
Сбор мочи
Накануне сдачи анализа не рекомендуется употреблять в пищу овощи и фрукты, которые могут изменить цвет мочи (свёкла, морковь, клюква и т.п.), принимать диуретики.
Перед сбором мочи необходимо провести тщательный гигиенический туалет внешних половых органов. Собирают строго утреннюю порцию мочи, выделенную сразу же после сна. Женщинам не рекомендуется сдавать анализ мочи во время менструации; во избежание попадания в мочу выделений из влагалища, рекомендуется ввести во влагалище тампон.
За сутки до сдачи исключить приём алкоголя и половой акт.
Материал собирается в стерильный пластиковый контейнер. Собирается средняя порция утренней мочи. При первом утреннем мочеиспускании небольшое количество мочи (первые 3–5 сек) выпустить в унитаз, а затем, не прерывая мочеиспускания, собрать среднюю порцию мочи в чистую ёмкость. Продолжить мочеиспускание в унитаз. Ёмкость закрыть, промаркировать.
Нужно постараться максимально сократить срок доставки материала в лабораторию. Длительное хранение приводит к размножению бактерий.
Доставить контейнер с мочой в медицинский офис необходимо как можно скорее с момента взятия биоматериала. Моча в стерильном пластиковом контейнере для посева стабильна не более 2 часов при температуре 18–20°С, не более 6 часов при температуре хранения 4–8°С.
Подготовка ко взятию слюны:
- желательно собирать утром;
- зубы не чистить, не есть как минимум 4 часа;
- слюна собирается в стерильный контейнер.
Мазок из урогенитального тракта женщины
Сдача мазка не допускается в дни менструации. За трое суток до взятия необходимо отказаться от применения вагинальных свечей, тампонов, спермицидов, за сутки исключить половые контакты. Нельзя спринцеваться накануне проведения обследования. После УЗИ-исследования с применением вагинального датчика, кольпоскопии, биопсии должно пройти не менее 48 часов.
Мазок из урогенитального тракта мужчины
За 1–2 суток до взятия мазка, необходимо исключить половые контакты. Нельзя мочиться в течение 1,5–2 часов до процедуры.
Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Шушакова Е.К., Рублева О.В.
В клинику обратилась супружеская пара, в которой мужчина с криптозооспермией , гемиспермией получал ранее терапию, не давшую эффекта. В бактериальном посеве эякулята ранее была выявлена условнопатогенная флора и бесплодие у данного пациента связывали с проявлением бактериальной инфекции. После 2-х курсов антибактериальной терапии ни в бактериальном посеве, ни в спермограмме улучшений не было. Далее с помощью культурального метода обследования эякулята выявлен вирус простого герпеса и назначена противовирусная терапия. После чего показатели спермограммы значительно улучшились: значительно возросло общее количество сперматозоидов, улучшилась их подвижность, появились морфологически нормальные клетки, но сохранялись единичные эритроциты.
Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Шушакова Е.К., Рублева О.В.
HERPES SIMPLEX VIRUS AS THE CAUSE OF MALE INFERTILITY (A CLINICAL CASE)
The couple in the clinic was contacted, in which a man with cryptozoospermia, hemispermia received previous therapy, which did not have the effect. In the bacterial sowing of ejaculate, the conditionally pathogenic flora and infertility in this patient was associated with the manifestation of a bacterial infection. After 2 courses of antibacterial therapy, neither in bacterial culture, nor in the spermogram, there were improvements. Then, using the culture method of ejaculate examination, a herpes simplex virus was detected and antiviral therapy was prescribed. After that the parameters of the spermogram were significantly improved: the total number of spermatozoa increased significantly, their mobility improved, morphologically normal cells appeared, but individual red blood cells.
ВИРУС ПРОСТОГО ГЕРПЕСА КАК ПРИЧИНА МУЖСКОГО БЕСПЛОДИЯ (КЛИНИЧЕСКИЙ СЛУЧАЙ)
Шушакова Е.К., Рублева О.В.
ООО Городской центр медицинских исследований, г. Москва, Российская Федерация
Аннотация: В клинику обратилась супружеская пара, в которой мужчина с криптозооспермией, гемиспермией получал ранее терапию, не давшую эффекта. В бактериальном посеве эякулята ранее была выявлена условнопатогенная флора и бесплодие у данного пациента связывали с проявлением бактериальной инфекции. После 2-х курсов антибактериальной терапии ни в бактериальном посеве, ни в спермограмме улучшений не было. Далее с помощью культурального метода обследования эякулята выявлен вирус простого герпеса и назначена противовирусная терапия. После чего показатели спермограммы значительно улучшились: значительно возросло общее количество сперматозоидов, улучшилась их подвижность, появились морфологически нормальные клетки, но сохранялись единичные эритроциты.
Ключевые слова: мужское бесплодие, криптозооспермия, гемоспермия, вирус простого герпеса, алпизарин
В настоящее время нарушение репродуктивной функции мужчин, по данным различных клиник, составляет 15-45% среди обратившихся пар. Причины, влияющие на состояние мужской репродуктивной системы весьма разнообразны, однако большое значение имеют различные инфекции, как вирусные, так и бактериальные.
При уточнении этиологии мужского бесплодия, считается, что ранее перенесенные бактериальные инфекции чаще всего приводят к обтурационной аспер-мии, возникающей вследствие обструкции семявыно-сящих путей. К таким осложнениям приводят: острая гонорея, хламидийная инфекция, микоплазы, уреаплазмы, трихомонады, листерии, стафилококки, кишечная палочка и др. Но при микст-инфекции роль инфекционного фактора отходит на второй план, а ведущими являются тканевые пролиферативные реакции, нейроэндокринные реакции, аутоиммунный компонент. Однако определить роль инфекционного фактора в структуре причин бесплодия достаточно сложно [1]. Сами по себе урогенитальные инфекции практически не нарушают морфогенез, однако оказывают влияние на подвижность сперматозоидов и ведут к изменению физико-химических параметров семенной плазмы, в частности ее кислотности и вязкости, в связи с наличием окислительного стресса и увеличением провоспалительных интерлейкинов [1, 2].
Мета-анализ группы китайских авторов с Medline, PubMed, EMBASE и двух китайских баз данных (CNKI и ВАН Fang) показал, что жизнеспособность сперматозоидов, общая подвижность, а также процент сперматозоидов с прогрессивным движением у пациентов с
хроническим бактериальным простатитом (ХБП) значительно ниже, чем в контрольных группах. Тем не менее, ХБП не оказал существенного влияния на объем спермы, концентрацию сперматозоидов и продолжительность разжижения семенной жидкости [3]. Роль вирусов и, особенно, вирусов семейства герпеса в развитии бесплодия как у женщин, так и у мужчин велика и часто этиологическим фактором является вирус простого герпеса (ВПГ). Однако некоторые авторы считают не совсем доказанным влияние различных инфекций, передаваемых половым путем, в том числе, ВПГ на развитие бесплодия, хотя не отрицают ухудшение качества спермы при хронических инфекциях, как вирусных, так и бактериальных [4, 5]. Тем не менее, большинство ученых рассматривают вирусные инфекции как прямую и/или косвенную причину мужского фактора бесплодия [6].
В связи с вышесказанным, представляем клинический случай ГВ инфекции у мужчины с первичным бесплодием. На прием обратилась супружеская пара с жалобами на отсутствие беременности при регулярной половой жизни без контрацепции в течение 5 лет. Возраст супругов на момент обращения: мужчина 40 лет, женщина 32 лет (информированное согласие от обоих супругов получено). Из анамнеза известно, что в течение последнего года применение вспомогательных репродуктивных технологий: 2 ЭКО+ИКСИ и 5 криопе-реносов эффекта не дало. Женщина обследована, здорова, жалоб не предъявляла. Ее супруг ранее проходил обследование и лечение у уролога с диагнозом крипто-зооспермия. В бактериальном посеве эякулята выделены условнопатогенные микроорганизмы: Е.соИ
Журнал включен в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК
1х107; Proteus mirabilis 1х103; Klebsiella pneumonia 1х103; Enterococcus faecalis 1х107. После чего урологом была назначена антибактериальная терапия - цефик-сим (Супракс) 400 мг 1 раз в сутки длительность курса 7 дней, а также Флогэнзим по 2 таблетки 3 раза в день в течение 2 месяцев, азоксимера бромид (Полиоксидо-ний) суппозитории 12 мг per rectum через день, №10. В повторном бактериальном посеве снова выделены Enterococcus faecalis 1х107 и Pseudomonas aeruginosa 1х103 и рекомендован повторный курс антибактериальной терапии - ципрофлоксацин 0,5 г 2 раза в сутки 7 дней, оротовая кислота (Калия оротата таблетки 0,5 г) 0,5 г 3 раза в день, 3 недели, суппозитории аминоди-гидрофталазиндион натрия (Галавит) 0,1 per rectum через день, №10.
В посеве эякулята после двух курсов антибиотико-терапии вновь выделен фекальный энтерококк 1х105 и кишечная палочка 1х107. Все это время у пациента были выраженные изменения в спермограмме по типу криптозооспермии, гемоспермии, присутствующие в каждом анализе в течение 2014-2015 г.г. (см. таб. 1). Со слов пациента, обследования на вирусы проводили, обоим партнерам брали мазки, (диагностику проводили методом ПЦР) результаты были отрицательные. Антитела к ВГ в крови ни у одного из супругов не исследовали.
На момент обращения в клинику гемоспермия явилась поводом для исследования спермы на вирус простого герпеса 1 и 2 типа культуральным методом. В посеве на культуре клеток выделено 35% зараженных клеток вирусом простого герпеса, данный метод обследования типирования не предполагает. У женщины в соскобе из цервикального канала и влагалища, тем же культуральным методом выделено 40% зараженных клеток вирусом простого герпеса.
После выделения ВПГ супружеской паре назначен противовирусный препарат тетрагидроксиглюкопи-ранозилксантен (Алпизарин) по схеме 2 таблетки 3 раза в сутки, курс 21 день, с перерывом 21 день, 3 курса, биологически активная добавка к пище Цинкит по 1 таблетке 1 раз в сутки 1 месяц. После каждого курса Алпизарина через 10 дней исследовался эякулят: спермограмма и посев на культуру клеток для выделения ВПГ. В посевах культуральным методом ВПГ не выявлен уже после первого курса противовирусной терапии. Отсутствие ВПГ в эякуляте сохранялось после всех трех курсов лечения. В таблице представлены результаты спермограмм после первого курса (14.02.16), после второго (20.03.16), и третьего курса противовирусного препарата.
Дата/показатели спермограммы 05.07.14 -18.11.15 14.02.2016 20.03.2016 30.04.2016
Концентрация (млн/мл) 5 22 8
Общ. кол-во сперматозоидов (млн.) Единичные в поле зрения 8 66 24
Подвижность сперм.(А+В+С) Единичные в поле зрения 1,5 72,5
Сперм. с прогресс. движением (А+В) 0 0 18,75
С быстрым поступат. движением (А), % 0,5 0
С медленным поступат. движением (В), % 1 18,75
С непоступательным движением (С), % 35,71 7,96 53,75
Неподвижные сперматозоиды ф), % Единичные в поле зрения 64,29 90,54 27,5
Морф. норм. формы нет 0 28 38
Дефекты головки 85 44 34
Дефекты шейки или средней части 14 25 23
Дефекты хвоста 1 3 5
Жизнеспособность (% живых) 72 61 79
Клетки сперматогенеза (на 100 сперм-дов) 0-1 0 1 1
Лейкоциты 1*106 Единичные 0,1 0,3
Эритроциты Единичные Единичные Единичные Единичные
Из таблицы видно, что на фоне проведенной противовирусной терапии прослеживается отчетливая положительная динамика показателей спермограммы: увеличение количества сперматозоидов, улучшение их подвижности, появление морфологически нормальных клеток. Однако сохраняются единичные эритроциты, что вероятно, говорит о слабом течении инфекционно-воспалительного процесса и необходимости продолжения наблюдения.
Таким образом, обнаружение условно-патогенной флоры в эякуляте было расценено, как причина бесплодия, прекращены дальнейшие попытки диагностики и отсутствовала этиотропная терапия. Отрицательный результат, полученный методом ПЦР, по ряду причин, не всегда означает отсутствие вируса и в сомнительных случаях можно думать о культуральном методе диагностики ГВ инфекции, в комплексе со стандартными методиками обследования.
Журнал включен в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК
[1] Акопян А. С. Урогенитальные инфекции как причина мужского бесплодия // Урология сегодня. 2009. №4. С.1-2.
[2] Castiglione R, Salemi M, Vicari LO, Vicari E. Relationship of semen hyperviscosity with IL-6, TNF-a, IL-10 and ROS production in seminal plasma of infertile patients with prostatitis and prostata-vesiculitis. Andrologia. 2014; Dec;46(10):1148-55.
[3] Shang Y, Liu C, Cui D, Han G, Yi S. The effect of chronic bacterial prostatitis on semen quality in adult men: a meta-
analysis of case-control studies. Sci Rep. 2014; Nov 28;4:7233.
[4] Chen M, Cai LY, Kanno N, Kato T, Lu J, Jin F et al, Detection of human herpesviruses (HHVs) in semen of human male infertile patients. J. Reprod Dev. 2013 Oct;59(5):457-62.
[5] Gimenes F., Souza R.P., Bento J.C., Teixeira J.J., Maria-Engler S.S., Bonini M.G., Consolaro M.E. Male infertility: a public health issue caused by sexually transmitted pathogens. Nat Rev Urol. 2014 Dec;11(12):672-87
[6] Науменко В.А., Кущ А.А. Герпесы и мужское бесплодие: есть ли связь? // Вопросы вирусологии. 2013. №3. С. 4-9.
HERPES SIMPLEX VIRUS AS THE CAUSE OF MALE INFERTILITY (A CLINICAL CASE)
Shushakova E.K., Rubleva O.V.
City Medical Research Center, Moscow, Russian Federation
Annotation: The couple in the clinic was contacted, in which a man with cryptozoospermia, hemispermia received previous therapy, which did not have the effect. In the bacterial sowing of ejaculate, the conditionally pathogenic flora and infertility in this patient was associated with the manifestation of a bacterial infection. After 2 courses of antibacterial therapy, neither in bacterial culture, nor in the spermogram, there were improvements. Then, using the culture method of ejaculate examination, a herpes simplex virus was detected and antiviral therapy was prescribed. After that the parameters of the spermogram were significantly improved: the total number of spermatozoa increased significantly, their mobility improved, morphologically normal cells appeared, but individual red blood cells. Key words: male infertility, kriptozoospermiya, gemospermiya, herpes simplex virus, alpizarin.
[1] Akopjan A. S. Urogenital infections as the cause of male infertility // Urology Today. 2009. №4. pp.1-2.
[2] Castiglione R, Salemi M, Vicari LO, Vicari E. Relationship of semen hyperviscosity with IL-6, TNF-a, IL-10 and ROS production in seminal plasma of infertile patients with prostatitis and prostata-vesiculitis. Andrologia. 2014; Dec;46(10):1148-55.
[3] Shang Y, Liu C, Cui D, Han G, Yi S. The effect of chronic bacterial prostatitis on semen quality in adult men: a metaanalysis of case-control studies. Sci Rep. 2014; Nov 28;4:7233.
[4] Chen M, Cai LY, Kanno N, Kato T, Lu J, Jin F et al, Detection of human herpesviruses (HHVs) in semen of human male infertile patients. J. Reprod Dev. 2013 Oct;59(5):457-62.
[5] Gimenes F., Souza R.P., Bento J.C., Teixeira J.J., Maria-Engler S.S., Bonini M.G., Consolaro M.E. Male infertility: a public health issue caused by sexually transmitted pathogens. Nat Rev Urol. 2014 Dec;11(12):672-87
[6] Naumenko V.A., Kushh A.A. Herpes and male infertility: is there a connection? // Questions of Virology. 2013. №3. pp. 4-9.
Журнал включен в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК
Вирус простого герпеса (ВПГ) – ДНК–содержащий вирус Herpes simplex virus семейства Herpesviridae подсемейства Alphaherpesvirinae. Согласно статистическим данным ВОЗ, инфекции, обусловленные ВПГ, занимают второе место по распространенности среди вирусных заболеваний человека. Различают два серотипа ВПГ – ВПГ-1 и ВПГ-2. Оба типа вируса вызывают инфекционные заболевания человека различной степени тяжести от характерных везикулезных или пустулезных высыпаний на коже и слизистых до поражений ЦНС. ВПГ-1 – причина офтальмогерпеса, протекающего в форме кератита или кератоиридоциклита, реже увеита, в единичных случаях — ретинита, блефароконъюнктивита. Заболевание может привести к помутнению роговицы и вторичной глаукоме. ВПГ-1 — основная причина энцефалита у взрослого населения стран умеренного климата, при этом только у 6–10% больных отмечается одновременное поражение кожи.
В ходе проведения эпидемиологических исследований установлено наличие специфических АТ к ВПГ у 90–95% обследуемых лиц среди взрослого населения, при этом первичная инфекция манифестно протекает лишь у 20–30% инфицированных.
ВПГ характеризуется коротким циклом репродукции в клеточных культурах и оказывает сильное цитопатическое действие. Он способен к репродукции в различных типах клеток, чаще персистирует в ЦНС, преимущественно в ганглиях, поддерживая латентную инфекцию с возможностью периодической реактивации. Наиболее часто вызывает кожно-слизистые формы заболевания, а также поражение ЦНС и глаз. Геном ВПГможет интегрироваться с генами других вирусов (включая ВИЧ), вызывая их активацию, также возможен его переход в активное состояние на фоне развития иных вирусных и бактериальных инфекций.
Пути передачи ВПГ: воздушно-капельный, половой, контактно-бытовой, вертикальный, парентеральный. Факторами передачи ВПГ служат кровь, слюна, моча, везикулярный и вагинальный секрет, сперма. Входными воротами являются поврежденные слизистые оболочки и кожа. По периферическим нервам вирус доходит до ганглиев, где сохраняется пожизненно. При активации ВПГ распространяется по нерву к первоначальному очагу поражения (механизм “замкнутого цикла” – циклическая миграция вируса между ганглием и поверхностью кожи). Может происходить лимфогенная и гематогенная диссеминация возбудителя, что особенно характерно для недоношенных новорожденных и лиц с выраженным иммунодефицитом (в т. ч. при ВИЧ-инфекции). ВПГ обнаруживается на лимфоцитах, эритроцитах, тромбоцитах, при проникновении вируса в ткани и органы возможно их повреждение вследствие его цитопатического действия. Сохраняющиеся в течение всей жизни у человека вируснейтрализующие АТ (даже в высоких титрах), хотя и препятствуют распространению инфекции, но не предупреждают рецидивов.
Выделение ВПГ продолжается значительное время при первичном инфицировании (ДНК выявляется в плазме крови в течение 4–6 недель), при рецидивах – не более 10 дней. Формирование противогерпетического иммунитета происходит как при манифестном, так и при бессимптомном течении инфекции. При первом контакте АГ с клетками иммунной системы в течение 14–28 дней формируется первичный иммунный ответ, который у иммунокомпетентных лиц проявляется образованием интерферонов, выработкой специфических АТ (вначале – IgM, впоследствии – IgA и IgG), повышением активности естественных киллеров – NK-клеток и формированием мощного пула высокоспециализированных киллеров. В случае реактивации или реинфекции возникает повторный контакт клеток иммунной системы с АГ, образуются АТ и Т-киллеры. Реактивация сопровождается продукцией АТ IgM (редко даже при наличии типичных высыпаний), АТ IgА (чаще) и IgG.
ВПГ (преимущественно ВПГ-2) вызывает генитальный герпес – хроническое рецидивирующее заболевание. Клинические проявления первичного эпизода инфекции, вызванной разными типами вируса сходны, однако инфекции, вызванной ВПГ-2, в гораздо большей степени свойственен рецидивирующий характер. Передача вируса происходит при половых контактах, очаг инфекции локализуется на слизистой и коже половых органов и перигенитальной зоны. Размножение вируса в клетках эпителия приводит к образованию очага сгруппированных пузырьков (папул, везикул), в которых содержатся вирусные частицы, сопровождается покраснением, зудом. Первичный эпизод протекает острее (обычно с симптомами интоксикации), чем последующие рецидивы. Часто возникают симптомы дизурии, признаки эрозии шейки матки.
На ранних стадиях ВИЧ-инфекции течение заболеваний, вызванных ВПГ-1 или ВПГ-2, короткое и типичное. Частым признаком углубления иммуносупрессии и перехода латентной стадии ВИЧ-инфекции в стадию вторичных заболеваний служит развитие опоясывающего лишая. Наличие стойких глубоких вирусных поражений кожи, повторный или диссеминированный опоясывающий лишай, локализованная саркома Капоши — одни из клинических критериев стадии вторичных заболеваний ВИЧ-инфекции. У больных с количеством CD4+-клеток менее 50 клеток/мкл отсутствует тенденция к самостоятельному заживлению эрозивно-язвенных дефектов. Частота герпетического энцефалита среди поражений ЦНС при ВИЧ-инфекции — около 1–3%. У больных СПИДом с наличием глубокого иммунодефицита заболевание нередко протекает атипично: болезнь начинается подостро и медленно прогрессирует до тяжелейших проявлений энцефалита.
Герпетическая инфекция даже при бессимптомном течении способна вызвать целый ряд патологий у беременной и новорожденного. Наибольшую угрозу репродуктивной функции представляет генитальный герпес, который в 80% случаев обусловлен ВПГ-2 и в 20% – ВПГ-1. Бессимптомное течение чаще имеет место у женщин и более типично для ВПГ-2, чем для ВПГ-1. Первичное инфицирование или рецидивы во время беременности наиболее опасны для плода, поскольку могут привести к самопроизвольному выкидышу, гибели плода, мертворождению, порокам развития. Заражение плода и новорожденного чаще отмечается при бессимптомном течении генитального герпеса, чем при клинически выраженном типичном течении. Новорожденный может приобрести герпетическую инфекцию внутриутробно, во время родов (в 75–80% случаев), либо постнатально.
ВПГ-2 может проникать в полость матки через цервикальный канал с поражением плода в 20–30% случаев; трансплацентарное инфицирование может происходить в 5–20% случаев, инфицирование во время родов – в 40% случаев. Возможна передача вируса при выполнении медицинских процедур. При типичных клинических проявлениях диагноз герпетической инфекции трудностей не представляет, тогда как при атипичных формах верифицируется на основании результатов лабораторных исследований, при этом приоритетными должны быть исследования, направленные на выявление маркеров текущей (активной) инфекции. Активация инфекционного процесса при герпетической инфекции, даже при наличии клинических проявлений в стадии обострения, редко сопровождается выработкой АТ-ВПГ IgM (чаще – при первичной инфекции либо реинфекции), как правило, при этом отмечают появление АТ-ВПГ IgА.
Целесообразными являются диагностические исследования для обнаружения ВПГ или его маркеров при наличии в анамнезе пациента указаний на рецидивирующую инфекцию либо на дебют герпетической инфекции в период беременности.
Дифференциальная диагностика. При наличии инфекционного синдрома (длительный субфебрилитет, лимфаденопатия, гепато- или гепатоспленомегалия) – токсоплазмоз, цитомегаловирусная инфекция и инфекция, вызванная ВЭБ; контактный дерматит, инфекционные заболевания, сопровождающиеся везикулезными высыпаниями на коже и слизистых оболочках (ветряная оспа, опоясывающий герпес, пиодермия и др.); эрозивно–язвенные поражения гениталий, обусловленные Treponema pallidum, Haemophilus ducreyi; болезнь Крона, синдром Бехчета, фиксированная токсикодермия, менингоэнцефалиты и менингиты неясной этиологии, увеиты и кератоконъюнктивиты неясной этиологии).
Показания к обследованию
- Планирование беременности;
- женщины, имеющие в анамнезе либо на момент обращения типичные герпетические высыпания любой локализации, в т. ч. рецидивирующий генитальный герпес, или наличие пузырьковых и/или эрозивных высыпаний на коже, ягодицах, бедрах, слизисто–гнойные выделения из влагалища;
- наличие полового контакта с партнером, имеющим генитальный герпес;
- атипичная форма заболевания: отсутствие зуда или жжения, отсутствие везикул, веррукозные узелки; обширные кожные поражения (до 10% случаев предполагаемого опоясывающего герпеса обусловлено не ВЗВ, а ВПГ);
- женщины с отягощенным акушерским анамнезом (перинатальные потери, рождение ребенка с врожденными пороками развития);
- беременные женщины (в первую очередь имеющие УЗИ-признаки внутриутробной инфекции, лимфоаденопатии, лихорадку, гепатит и гепатоспленомегалию неясного генеза);
- дети с признаками внутриутробной инфекции, врожденными пороками развития или наличием на коже или слизистых оболочках везикул или корочек;
- дети, рожденные от матерей, перенесших генитальный герпес во время беременности;
- ациенты (в первую очередь новорожденные) с сепсисом, гепатитами, менингоэнцефалитом, пневмонией, поражением глаз (увеит, кератит, ретинит, ретинальный некроз), поражением ЖКТ.
Материал для исследования
- Содержимое пузырьков/везикул со слизистых оболочек и кожи половых органов мужчин и женщин – микроскопические исследования, культуральные исследования, выявление АГ, выявление ДНК;
- мазки (соскобы) со слизистых оболочек цервикального канала, уретры (при отсутствии видимых пузырьковых высыпаний или эрозивно-язвенных поражений) – выявление ДНК;
- сыворотка крови, СМЖ (по показаниям) – выявление АТ.
Этиологическая лабораторная диагностика включает микроскопическое исследование, выделение и идентификация вируса в культуре клеток, выявление АГ или ДНК возбудителя, определение специфических АТ.
Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики (вирус простого герпеса - анализ). Среди методов лабораторной диагностики “золотым стандартом” долгое время считали выделение ВПГ в культуре клеток из крови, СМЖ, содержимого везикулезных или пустулезных высыпаний и других локусов (носоглотки, конъюнктивы, уретры, влагалища, цервикального канала). Данный метод предполагает изоляцию вируса при заражении биологическим материалом чувствительных культур клеток с его последующей идентификацией. К неоспоримым преимуществам метода относятся: возможность определения активности инфекции при наличии клинических проявлений и проведения типирования вируса, а также установления чувствительности к противовирусным препаратам. Однако длительность анализа (1–8 дней), трудоемкость, высокая стоимость и необходимость определенных условий проведения исследований затрудняет применение данного метода для рутинной лабораторной диагностики заболевания. Чувствительность достигает 70–80%, специфичность – 100%.
Материал с поверхности высыпаний может быть использован для микроскопических (окраска препаратов по Романовскому–Гимзе) или цитологических (окраска препаратов по Тцанку и Папаниколау) исследований. Названные процедуры имеют низкую диагностическую специфичность (не позволяют дифференцировать ВПГ от других герпес-вирусов) и чувствительность (не более 60%), поэтому не могут считаться надежными методами диагностики.
Выявление АГ ВПГ в крови, СМЖ, содержимом везикулезных или пустулезных высыпаний и других локусов (носоглотки, конъюнктивы, уретры, влагалища, цервикального канала) проводят методами РИФ и РНИФ с использованием моноклональных или высокоочищенных поликлональных АТ. При использовании метода ИФА чувствительность исследования возрастает до 95% и более, специфичность при манифестном герпесе варьирует от 62 до 100%. Однако большинство наборов реагентов для выявления антигена ВПГ методом ИФА не позволяют провести дифференцирование серотипов вируса.
Обнаружение ДНК ВПГ-1 и/или ВПГ-2 при использовании ПЦР в различном биологическом материале превосходит чувствительность обнаружения ВПГ при использовании вирусологического исследования. Выявление ВПГ в соскобах со слизистых оболочек полости рта, урогенитального тракта, в отделяемом пузырьковых высыпаний (везикул) и эрозивно–язвенных поражений кожи с помощью ПЦР является методом выбора. Несомненную ценность имеет определение количества ДНК ВПГ методом ПЦР в режиме реального времени, результаты исследования можно использовать как с диагностической целью, так и для оценки эффективности лечения.
Для выявления АТ к ВПГ разных классов IgА, IgG, IgM, суммарных к антигенам ВПГ обоих типов или типоспецифичных, применяют методы РНИФ или ИФА, для определения авидности АТ IgG – метод ИФА. Наибольшее диагностическое значение имеет детекция АТ IgM как показателя активности процесса, их выявление может свидетельствовать об остром заболевании, реинфекции, суперинфекции или реактивации. Однако в клинически выраженных случаях, в т. ч. при типичном течении генитального или неонатального герпеса, специфические АТ IgM выявляются редко (в 3–6% случаев). Определение авидности АТ-ВПГ IgG несет низкую информационную нагрузку: реактивация при клинически выраженных случаях сопровождалась наличием высокоавидных АТ. Тест на выявление АТ-ВПГ IgА является методом выбора наряду с определением ДНК либо АГ ВПГ при определении активности инфекционного процесса.
Показания к применению различных лабораторных исследований. Определение АТ целесообразно проводить для подтверждения первичной инфекции, а также установления диагноза у пациентов с бессимптомным и атипичным течением заболевания.
У беременных женщин (скрининг) целесообразно проведение исследований для выявления АТ-ВПГ IgМ, а также выявление АТ-ВПГ IgА. Для беременных высокого инфекционного риска дополнительно рекомендуется определение ДНК и АГ ВПГ в лейкоцитарной взвеси или в материале из предполагаемого очага.
При подозрении на внутриутробную инфекцию рекомендуется выявление ДНК вируса в пуповинной крови, у новорожденных – детекция ДНК вируса в различных биологических пробах (отделяемое пузырьковых высыпаний (везикул) эрозивно– язвенных поражений кожи и слизистых оболочек, ротоглотки, конъюнктивы; периферическая кровь, СМЖ, моча и др.), а также определение АТ-ВПГ IgМ и IgА в крови. Учитывая высокую диагностическую значимость определения ДНК вируса методом ПЦР и наличие зависимости между летальностью у новорожденных и виремией, вызванной ВПГ, некоторые исследователи рекомендуют использовать этот метод для лабораторного скрининга генерализованной герпетической инфекции детей, относящихся к группе высокого риска.
Выявление АГ-ВПГ в различных биологических пробах предлагается применять в качестве экспресс-тестов для дифференцирования типов вируса при скрининге популяций с высоким уровнем заболеваемости, а также при мониторинге заболевания.
У больных ВИЧ-инфекцией с атипичными клиническими проявлениями кожных поражений в диагностике отдается предпочтение выявлению ДНК ВПГ методом ПЦР как самому чувствительному методу лабораторной диагностики.
Особенности интерпретации результатов. Обнаружение вирусоспецифических АТ IgM может свидетельствовать о первичной инфекции, реже – о реактивации или реинфекции, выявление АТ-ВПГ IgА – об активности инфекционного процесса (затяжное течение при дебюте герпетической инфекции, реинфекции или реактивации). О врожденной инфекции (неонатальный герпес) свидетельствует присутствие АТ-ВПГ IgM и(или) IgА. Выявление АТ IgG отражает латентную инфекцию (инфицирование).
Выявление ДНК ВПГ свидетельствует о наличии активной (репликативной) стадии вирусной инфекции с учетом выраженности клинических проявлений. Выявление ДНК ВПГ-1 и/или ВПГ-2 методом ПЦР позволяет при однократном тестировании установить факт внутриутробного инфицирования плода; при проведении обследования в первые 24–48 ч после рождения лабораторно подтвердить врожденную инфекцию, вызванную ВПГ.
Диагностическое значение (специфичность и чувствительность) обнаружения ДНК ВПГ в СМЖ у больных ВИЧ-инфекцией с поражением ЦНС окончательно не установлены. Возможно, для подтверждения герпетической этиологии энцефалита необходимо определение концентрации ДНК ВПГ в СМЖ. Исследование для обнаружения ДНК ВПГ в крови малоинформативно в связи кратковременным нахождением ВПГ в сосудистом русле, следовательно, возможно получение отрицательного результата несмотря на развитие клинически выраженного заболевания.
Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.
Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 1998 - 2020
! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.
Читайте также:
