Эмбрион вакцина против оспы птиц из штамма кэм

Владельцы патента RU 2493253:

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, в частности, к получению нового штамма вируса оспы кур, который пригоден для изготовления средств диагностики и специфической профилактики оспы птиц.

Оспа птиц - контагиозная, медленно распространяющаяся вирусная болезнь птиц, которая характеризуется образованием локализованных пролиферативно-некротических поражений на коже и дифтеритического воспаления слизистой оболочки ротовой полости, верхних дыхательных путей и конъюнктивы глаз [1, 2]. Болезнь распространена по всему миру, в том числе и в РФ, и наносит существенный экономический ущерб птицеводческим хозяйствам в связи со снижением яйценоскости, замедлением роста птиц, повышением смертности и вынужденным убоем [3, 4, 5, 6, 7, 8].

В соответствии с классификацией, установленной Международной комиссией по таксономии вирусов (International Committee on Taxonomy of Viruses - ICTV), вирус оспы птиц относится к роду Avipoxvirus, семейства Poxviridae.

Основным способом борьбы с этим заболеванием является специфическая профилактика. С этой целью применяют живые вакцины на основе аттенуированных штаммов вируса.

Недостатком штамма-прототипа также является необходимость использования для его культивирования клеточных культур [12, 13], что в свою очередь существенно усложняет технологический процесс изготовления на его основе вирус-вакцин.

В задачу создания настоящего изобретения входило получение нового штамма вируса оспы кур, обладающего аттенуированным фенотипом и высокой иммуногенной активностью, способного к культивированию на эмбрионах кур как на более технологически простой системе и обеспечивающего изготовление высокоиммуногенных и безвредных биопрепаратов для профилактики и диагностики оспы птиц.

Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала вакцинных штаммов вируса оспы кур, генетически аутентичных, безвредных, обладающих аттенуированным фенотипом и высокой иммуногенностью, способных к культивированию на эмбрионах кур как на более технологически простой системе, и пригодных для изготовления биопрепаратов специфической профилактики оспы птиц, тем самым, усиливая в данном аспекте биологическую безопасность государства.

Генетическая аутентичность штамма.

Условия проведения ПЦР. В пробирку емкостью 0,5 мл вносили следующие компоненты: деионизованная вода (9 мкл), растворы праймеров (по 1,0 мкл), дНТФ (0,5 мкл), 25 мМ р-р хлорида магния (3,5 мкл), 5х буфер для ПЦР (5,0 мкл), Taq ДНК-полимераза (1-2 ед.), ДНК (исследуемый образец, 5 мкл).

Смесь переносили в амплификатор и проводили ПЦР при следующих режимах: 95°С - 5 мин, 30 циклов с параметрами: 95°С - 20 с, 58°С - 30 с, 72°С - 120 с, финальный прогрев 72°С - 5 мин. Далее проводили электрофорез ПЦР-фрагментов в геле 2% агарозы с последующей очисткой для определения нуклеотидной последовательности. Секвенирование очищенной кДНК осуществляли на автоматическом секвенаторе ABI Prism 3100 (Applied Biosystems, США).

Культуральные свойства штамма.

Использовали развивающиеся эмбрионы кур международной категории SPF (Specific Pathogen Free). Эмбрионы заражали осветленной фильтрованием вируссодержащей суспензией ткани хориоаллантоисной оболочки (ХАО) в дозе 3 Ig ЭИД₅₀/0,2 см 3 . Определяли параметры культивирования: возраст эмбрионов, способ заражения, место локализации вируса. Критерием оценки являлась величина инфекционного титра в экстраэмбриональной жидкости (ЭЭЖ), в суспензии ткани тела эмбриона и ткани ХАО. Результаты представлены в таблице 1.

Характеристика вирусного материала.

В таблице 2 приведена характеристика необходимой дисперсности тканевой взвеси, получаемой после осветления гомогената ткани вируссодержащих ХАО.

Сущность предлагаемого изобретения поясняется следующими графическими материалами:

Фиг.2 - Диаграмма значений долей защищенных птиц (с) соответственно испытанным прививным дозам вируса (IgD) через 21÷28 суток после вакцинации; пунктиром показан график зависимости исследуемых параметров, построенный по регрессионному уравнению вида "c=f["y=1,21(IgD)-0,25];

Фиг.3 - Диаграмма распределения долей защищенных птиц (с) в подопытных группах соответственно времени после вакцинации.

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.

В параллельных экспериментах определяли соотношение инфекционных титров вируса, установленных для 25-45-суточных цыплят методом интрадермальной прививки в перепонку крыла (Ig ИД₅₀/см 3 ) и для СПФ-эмбрионов путем введения инфицирующей жидкости на ХАО (Ig ЭИД₅₀/см 3 ). В экспериментах были использованы вируссодержащие материалы различной биологической активности. Соответствующие результаты приведены в таблице 3.

Безвредность вируса для птиц.

Проводили оценку воздействия различных доз вируса на физиологическое состояние птиц. Цыплятам в возрасте старше 25 суток инъецировали интрадермально вирусный материал в дозах 0÷3,7 Ig ИД₅₀. Результаты клинических наблюдений представлены в таблице 4.

Иммунизирующая доза вируса, обеспечивающая защиту 95% привитых птиц (ИмД₉₅).

Для заданных прививных доз (D) определяли долю защищенных птиц в группе (с). Полученные величины с преобразовывали в табличные пробит-эквиваленты (y=f(c)) для построения линейной модели вида "y=y₀+k(IgD), где "y - прогнозируемый пробит-эквивалент с для заданной величины IgD. На основании построенной модели определяли прогнозируемую величину прививной дозы, гарантирующую защиту 95% иммунизированных птиц. Далее по таблице производили обратное преобразование по типу "c=f("y). Полученные результаты в графическом виде представлены виде диаграммы (Фиг.2).

Динамика напряженности иммунитета у цыплят, вакцинированных штаммом.

Устойчивость аттенуированного фенотипа вируса при пассажах в системе культивирования.

Устойчивость аттенуированного фенотипа штамма при пассажах на птице.

Препарат применяли однократно методом внутрикожной инъекции в перепонку крыла с помощью двухигольного инъектора в соответствии с прилагаемой инструкцией. На протяжении 21 суток после прививки за птицей вели клиническое наблюдение.

Препарат оценивали по следующим показателям:

1. Оценка эффективности вакцинации. Показателем результативности прививки (приживления вируса) являлась воспалительная реакция на месте инъекции. Определяли представительство (процент) птицы с поствакцинальной реакцией. Соответствующие результаты представлены в таблице 8. Критерием эффективности вакцинации (наличие поствакцинального иммунитета) считали отсутствие местной воспалительной реакции у птиц после вторичной прививки препарата, проведенной в противоположное крыло через 21-67 суток после первой вакцинации. С этой целью в каждом цехе выделяли группу вакцинированных птиц в количестве 40-70 голов, которым производили повторную прививку и в течение 10 суток вели клиническое наблюдение. Определяли процент иммунных птиц. Полученные результаты по оценке эффективности вакцинации представлены в таблице 8.

В вакцинированном поголовье иммунная птица составила 100%. Эмбрион-вакцина является иммуногенной.

2. Оценка сохранности и продуктивности птицепоголовья. Сопоставили показатели продуктивности птиц и сохранности (яйценоскость и среднесуточный падеж за 7 суток) до и после проведения вакцинации. Полученные результаты представлены в таблице 9.

Данные, представленные в таблице 9, демонстрируют, что применение эмбрион-вакцины не оказывает выраженного влияния на показатели сохранности и продуктивности иммунизированного птицепоголовья.

Таблица 9
Сопоставление показателей сохранности и продуктивности до и после вакцинации кур-несушек по птичникам
№ птичника	Яйценоскость, %	Среднесуточный падеж птицы, гол.
до вакцинации	после вакцинации	до вакцинации	после вакцинации
1	94	91	2	5
2	83	86	27	26
3	81	81	10	10
4	67	62	13	25
5	85	83	16	17

2. Штамм по п.1, характеризующийся тем, что он адаптирован к организму развивающихся эмбрионов кур, где способен накапливаться в ткани ХАО в среднем титре (6,3±0,18) Ig ЭИД₅₀/см 3 .

3. Штамм по п.1, характеризующийся тем, что он является умеренно реактогенным и безвредным для птицы при интрадермальной инъекции в дозах до 3,7 IgИД₅₀/0,004 см 3 .

4. Штамм по п.1, характеризующийся тем, что он является иммуногенным с иммунизирующей дозой 3 Ig ЭИД₅₀/0,004 см 3 , обеспечивающей защиту 95% привитых птиц при контрольном заражении вирулентным вирусом оспы кур.

5. Штамм по п.4, характеризующийся тем, что он индуцирует поствакцинальный иммунитет (не менее 80% защищенности поголовья) продолжительностью 360 суток после прививки.

6. Штамм по п.1, характеризующийся тем, что он сохраняет аттенуированный фенотип при пассажах как в системе культивирования, так и на естественно восприимчивой птице.

Images

Abstract

Description

Генетическая аутентичность штамма.

Культуральные свойства штамма.

Характеристика вирусного материала.

Сущность предлагаемого изобретения поясняется следующими графическими материалами:

Безвредность вируса для птиц.

Иммунизирующая доза вируса, обеспечивающая защиту 95% привитых птиц (ИмД₉₅).

Динамика напряженности иммунитета у цыплят, вакцинированных штаммом.

Устойчивость аттенуированного фенотипа вируса при пассажах в системе культивирования.

Устойчивость аттенуированного фенотипа штамма при пассажах на птице.

Препарат оценивали по следующим показателям:

В вакцинированном поголовье иммунная птица составила 100%. Эмбрион-вакцина является иммуногенной.

У кур появились какие то наростки и у некоторых опух внутренняя сторона рта

На фото не очень понятно,проверьте на наличие клеща,он может быть под кожей и выглядеть как бородавка.

во рту-трихоионоз похоже. метронидазол нужен. а вот пятна на голове похоже на оспу.точно не знаю

а вот пятна на голове похоже на оспу.

Никогда не бойся делать то, что ты не умеешь. Помни, ковчег был построен любителем. Профессионалы построили "Титаник".

какой клещ на фиг? Это оспа.

Здравствуйте! Возможно не по теме но, может кто знает где можно приобрести вакцину от куриной оспы в подмосковье и Москве?

Да, кажется оспа! Делаю укол линкоспектин, даю воду разбавленный антибиотик!

Тоже как-раз вчера возила свою подрощенную браму ветеринару с оспой, он назначил лечение, выписал лекарства.

Да, кажется оспа! Делаю укол линкоспектин, даю воду разбавленный антибиотик!

оспа это вирус, антибиотиками не лечится.

А какое лечение прописали и в каких дозах?

Вы кого спрашиваете?Если меня, то вот:
эмбрион-вакцина против оспы птиц из штамма "КЭМ-7" серия 2 и разбавитель к ней.
плюс витамины поликомплекс солюшн 1 кубик на 1 литр воды, пропаивать 5 дней. А вообще-то Вам бы обратиться к ветеринару.

Лен- ча, спасибо за ответ, это меня подруга на счёт своих курочек спросила, она в своём городе не нашла ни одного вет врача который бы занимался птицей, а у её по описанию ну точно оспа и надо хоть что то делать(. А эта вакцина колется и здоровым по виду и больным уже курам? Где её вообще можно приобрести, в обычных вет аптеках?

Я возила свою брамку в ветклинику в нашей станице, там при ней ветаптека.Врач посмотрел и выписал лекарства, там же в ветаптеке я и купила.Да, сказал прокалывать всему поголовью кур ( у меня ещё взрослые "старушки" есть), гусям и уткам не надо.Они должны будут объяснить как колоть, с помощью швейной иглы.Ну и витаминами сказал пропоить.

Вам не лекарство выписали, а вакцину, что бы привить птицу. Это совсем разные вещи.

Видимо так посчитал нужным ветеринар.Мне без разницы, лишь бы птица выздоровела.

Вакцинируют здоровую птицу. А больных надо лечить.

Видимо так посчитал нужным ветеринар.Мне без разницы, лишь бы птица выздоровела.

Вакцинируют здоровую птицу. А больных надо лечить.

Я предпочитаю довериться ветеринару, он же лучше знает, что делать.Тем более здесь на форуме всегда пишут, обращайтесь к специалисту, вот и обратилась. Кстати и раньше у меня куры один раз болели, лечение такое же было назначено.Ни одна не сдохла.
Хотя, если считаете, что это не правильно, посоветуйте ТС, как лечить, так как она сетовала, что у них ветеринаров нет.

Общие положения

Биологические свойства вакцины

Порядок применения вакцины

Эмбрион-вакцина предназначена для специфической профилактики ИЛТ/кур.
Вакцина может быть применена двумя способами: окулярным (нанесение на конъюнктиву глаза) или оральным (выпаивание).
Окулярный способ. Вакцину применяют в виде суспензии, приготовленной на разбавителе. В соответствии с объемом разбавителя (концентрата), указанным на флаконе образуют его рабочее разведение предназначенное для суспендирования вакцины. Используя чистую кипяченую или дистиллированную воду, содержимое одного флакона разбавителя доводят до рабочего разведения, соблюдая следующее соотношение: 7см 3 концентрата доводят до 50 см 3 , 14см 3 — до 100 см 3 , 21см 3 — до 150 см 3 .

Окулярная форма вакцины должна содержать одну прививную дозу в 0,05 см 3 суспензии, что соответствует объему одной капли при истечении из носика стандартной глазной пипетки. Объем рабочего разведения разбавителя (см 3 ), необходимый для суспендирования одного флакона вакцины определяют по формуле (число прививных доз во флаконе)/20.

Требуемый «объем суспендированной вакцины (см 3 ) рассчитывают по формуле: (численность поголовья)/20.

Пример. Окулярным способом необходимо вакцинировать 8720 голов птицы. Один флакон вакцины данной серии содержит 2000 окулярных доз. На основании этих условий определяют:

объем рабочего разведения разбавителя для суспендирования одного флакона вакцины, 2000/20=100(см 3 );
требуемый объем суспендированной вакцины, 8720/20=436(см 3 ).

Окулярную прививку проводят следующим образом: одну каплю суспензии наносят на конъюнктиву под нижнее веко глаза и ожидают ее равномерного распределения. В случае истечения из-под века большей части дозы допускается однократное повторение операции в другой глаз.

Вакцина в виде суспензии должна быть использована в течение 2 часов.

Оральный способ. До вакцинации, соответственно породе и возрасту птицы, определяют величину прививного объема — среднего объема жидкости (см 3 ) выпиваемого одной птицей в течение 30 мин. Вакцину применяют в виде суспензии, приготовленной на каком-либо из следующих разбавителей: пастеризованное обезжиренное молоко (10%); сухое обезжиренное молоко (1%); пептон (0,5%). Основой перечисленных разбавителей служит чистая кипяченая вода.

Оральная форма вакцины в прививном объеме должна содержать 4 окулярные дозы. Объем разбавителя (см 3 ), необходимый для суспендирования одного флакона вакцины рассчитывают по формуле: (число прививных доз во флаконе х прививной объем)/4 .Требуемый объем суспендированной вакцины (см 3 ) рассчитывают по формуле: численность поголовья х прививной объем.

Пример. Оральным способом необходимо вакцинировать 8720 голов птицы. Один флакон вакцины данной серии содержит 2000 окулярных доз. Прививной объем составил 6,7 см 3 . На основании этих условий определяют:

объем разбавителя для суспендирования одного флакона вакцины, 2000х6,7/4 = 3350 (см 3 );
требуемый объем суспендированной вакцины 8720х6,7=58424(см 3 ).

Вакцину выпаивают один раз в сутки. 11еред вакцинацией птицу мясных пород выдерживают без воды в течение 2-3 часов, птицу яичных пород — в течение 4-8 часов. Вакцину распределяют через поилки, которые должны быть промыты и не содержать на внутренней поверхности дезсредств. Продолжительность присутствия вакцины в системе поилок не более 2 час.

Вакцинации подлежит клинически здоровая птица в возрасте старше 15 сут. Птица в возрасте до 60 сут. вакцинируется дважды с интервалом 14 сут. Птица в возрасте старше 60 сут. возраста вакцинируется однократно.
Мясо и яйца вакцинированных птиц могут быть использованы без ограничений.

Читайте также:

Эмбрион вакцина против оспы птиц из штамма кэм

Links

Images

Abstract

Description