Титры пцр коронавирус

Временное определение случая заболевания, 14 июля 2015 г.

Эти определения случаев заболевания были пересмотрены на основе новой информации, полученной после опубликования предыдущих определений. ВОЗ продолжит их рассмотрение и обновление по мере поступления новой информации.

Просьба учесть, что эти определения предназначены для классификации и отчетности. Поэтому их не следует воспринимать как рекомендации относительно того, когда и кем должно проводиться тестирование. Рекомендации относительно эпиднадзора можно найти на веб-сайте ВОЗ, посвященном этому коронавирусу.

Не было внесено никаких изменений.

Человек с лабораторно подтвержденной инфекцией БВРС-КоВ 1 , независимо от клинических признаков и симптомов.

Лихорадочное острое респираторное заболевание с клиническим, рентгенологическим или гистологическим подтверждением легочной паренхиматозной болезни (например, пневмонии или острого респираторного дистресс-синдрома);
И
Прямая эпидемиологическая связь 2 с подтвержденным случаем БВРС-КоВ; и
И
Тестирование на БВРС-КоВ невозможно, является отрицательным на одном неадекватном образце 3 или неокончательным. 4
Лихорадочное острое респираторное заболевание с клиническим, рентгенологическим, гистологическим подтверждением легочной паренхиматозной болезни (например, пневмонии или острого респираторного дистресс-синдрома);
И
Человек, проживающий на Ближнем Востоке или совершивший поездку на Ближний Восток, или проживающий в стране с известной циркуляцией БВРС-КоВ среди одногорбых верблюдов, или же в районе, где недавно произошли инфекции людей;
И
Тестирование на БВРС-КоВ является неокончательным. 4
Острое лихорадочное респираторное заболевание любой степени тяжести;
И
Прямая эпидемиологическая связь с подтвержденным случаем БВРС-КоВ 2
И
Тестирование на БВРС-КоВ является неокончательным. 4

1 Случай может быть подтвержден лабораторно в результате обнаружения нуклеиновой кислоты вируса или серологического анализа. Присутствие нуклеиновой кислоты вируса может быть подтверждено либо положительным результатом ПЦР-РВ тестирования не менее двух специфичных геномных мишеней или одной положительной мишени с секвенированием второй мишени. Случай, подтвержденный серологией, требует демонстрации сероконверсии в двух образцах, в идеале взятых с интервалом в 14 дней, посредством скрининга (ELISA, ИФА) и пробы на нейтрализацию. Однако временные рекомендации для лабораторного тестирования на БВРС-КоВ должны соответствовать самому последнему стандарту лабораторного подтверждения.

2 Прямая эпидемиологическая связь с подтвержденным случаем БВРС-КоВ может включать:

Воздействие, связанное с оказанием медицинской помощи, включая оказание непосредственной помощи больным с БВРС-КоВ, с медработниками, инфицированными БВРС-КоВ, с посещением больных или с нахождением в замкнутом пространстве вместе с человеком, инфицированным БВРС-КоВ.
Совместную работу в непосредственной близости или нахождение в одном помещении с людьми, инфицированными БВРС-КоВ.
Совместные поездки с людьми, инфицированными БВРС-КоВ, на любом виде транспорта.
Проживание в том же домашнем хозяйстве, что и люди, инфицированные БВРС-КоВ .
Эпидемиологическая связь может возникнуть в течение 14-дневного периода до или после наступления болезни у рассматриваемого случая.

3 Неадекватные образцы включают мазок из носоглотки без сопровождающего образца из нижних дыхательных путей, образец, с которым неправильно обращались, который был признан низкокачественным лабораторией, проводящей тестирование, или образец, взятый слишком поздно в ходе болезни.

4 Неокончательные тесты могут включать:

положительный результат скрининга на одной мишени ПЦР-РВ без последующего подтверждения;
подтверждение с помощью одного образца сыворотки, взятой в фазе выздоровления, в идеале не позднее чем через 14 дней после скринингового исследования (ELISA, или ИФА) и пробы на нейтрализацию, в отсутствие молекулярного подтверждения на респираторных образцах.

Неокончательное тестирование: Пациенты с неокончательными результатами первоначального тестирования должны подвергнуться дополнительному вирусологическому и серологическому тестированию для их классификации в качестве подтвержденного случая БВРС-КоВ. Настоятельно рекомендуется, чтобы, по возможности, были получены и протестированы многочисленные образцы из нижних дыхательных путей, такие как мокрота, эндотрахеальные аспираты или жидкость бронхоальвеарного лаважа. Если у пациентов нет признаков или симптомов заболевания нижних дыхательных путей и образцы из нижних дыхательных путей отсутствуют или не показаны клинически, следует получить образцы носоглоточных или ротоглоточных мазков.

Если первоначальное тестирование носоглоточных мазков является отрицательным у пациента с сильным подозрением на инфекцию БВРС-КоВ, таких пациентов следует тестировать повторно с помощью образцов из нижних дыхательных путей или повторных образцов из носоглотки с дополнительным ротоглоточным образцом, если невозможно получить образец из нижних дыхательных путей, а также взятых своевременно серологических образцов с сопоставлением острой фазы и фазы выздоровления.

В случае необходимости также могут быть рассмотрены другие виды клинических образцов для молекулярного тестирования, включая кровь/сыворотку, мочу или кал. Они, как правило, имеют более низкие титры вируса, чем образцы, взятые из нижних дыхательных путей, но используются для подтверждения случаев, если другие образцы являются неадекватными или если их невозможно получить. Лаборатории, которые получают несогласующиеся результаты тестирования ПЦР и имеют ограниченный опыт в выявлении БВРС-КоВ, должны рассмотреть возможность отправки своих образцов в лаборатории с большим опытом для подтверждения.

Хронические вирусные инфекции – это заболевания, вызываемые вирусом, которые отличаются длительным инкубационным периодом. Носительство вируса без выраженных симптомов может длиться от нескольких недель до нескольких лет. Животное может заразиться еще до рождения – внутриутробно, а также в любом возрасте при контакте с больными животными или носителями вируса.

Коронавирусная инфекция и инфекционный перитонит кошек – пожалуй, одна из самых коварных тем в практике ветеринарного врача. В интернет-источниках можно найти множество сведений об этом, но, к сожалению, далеко не вся информация правдива. Иногда это связано с недостаточно глубоким изучением данного вопроса автором. Это сложная тема, и даже у ученых, глубоко занимающихся данным вопросом, часто недостает данных. И, что еще более важно, существует путаница между коронавирусной кишечной инфекцией – как правило, бессимптомной и на первый взгляд неопасной, и инфекционным (вирусным) перитонитом кошек, неизлечимой болезнью, являющейся одной из самых распространенных причин гибели кошек, в основном молодых. Эти два заболевания нередко путают между собой не только владельцы кошек, но и ветеринарные врачи. Многие лаборатории проводят анализы на коронавирус, называя их анализами на инфекционный перитонит кошек. В этой статье мы попробуем разобраться в этой теме подробнее, для чего в первую очередь стоит разделить между собой два понятия: коронавирусная кишечная инфекция и инфекционный перитонит кошек.

Об инфекции и симптомах

Коронавирусная инфекция (Feline Coronavirus, FCoV) встречается примерно у 40-50% кошек и чаще всего протекает бессимптомно. Инфицируются только кошки – для человека вирус не представляет опасности. Вирус обитает только в тканях, контактирующих с внешней средой организма: основное место его локализации – кишечник, но также он обнаруживается в слизистой дыхательных путей и мочеполовой системы.

Как правило, кошки заражаются в среде, где содержатся группами (питомники, приюты и пр.) через кал. Если коронавирусная кишечная инфекция сопутствует другому заболеванию желудочно-кишечного тракта, симптомы этого заболевания могут быть усилены. Чаще всего симптомы диареи или рвоты вызваны другими заболеваниями, и только после их исключения можно предполагать, что причина симптомов в коронавирусе. В редких случаях коронавирус может вызывать легкие непродолжительные симптомы диареи, рвоты, чихания. Также описаны случаи хронической диареи у постоянных носителей вируса.

Для профилактики распространения инфекции и избавления от нее необходимо принимать меры, предотвращающие контакты кошки с калом, поскольку он является основным источником коронавируса. Для этого:

регулярно убирайте лоток, вычищая кал сразу после дефекации;
используйте наполнитель, не липнущий к лапам;
если у вас несколько кошек, поставьте дополнительные лотки (по количеству кошек + один);
рекомендовано по возможности проводить мытье подхвостовой области после дефекации и стрижку шерсти у длинношерстных кошек;
если у вас живет много кошек, нужно разделить их на группы, не более чем по 5 животных, и содержать изолированно тех, кто выделяет вирус.

В большинстве случаев кошки избавляются от коронавируса самостоятельно в течение 2-3 месяцев. Не существует лекарств от него с подтвержденной достаточной эффективностью, помочь справиться с заболеванием может только гигиена. Около 10% кошек по статистике могут выделять вирус постоянно, то есть являются хроническими носителями.

При приобретении кошек стоит выбирать питомники, свободные от коронавируса.

О диагностике и ее целесообразности

Во-первых стоит отметить, что все доступные сегодня тесты не различают вирус кишечного коронавируса (FCoV) и вирус инфекционного перитонита кошек (FIPV). Некоторые лаборатории разделяют эти анализы, но это не более чем маркетинговый ход.

Возможны следующие варианты диагностики коронавируса:

Анализ кала методом ПЦР. Важно отметить, что однократное исследование не может точно исключить инфекцию – установить отсутствие коронавируса можно лишь получив 4-6 отрицательных результатов анализа с интервалом в 1-4 недели. Постоянных носителей коронавируса обнаруживают при получении 8 положительных результатов анализа с интервалом 1-4 недели. Такая обстоятельная диагностика имеет смысл в питомниках или приютах, где ведется тщательный отбор животных, свободных от данной инфекции, при очищении питомника от коронавируса, и не имеет особого смысла для обычных домашних кошек. Кошек, выделяющих вирус, нужно содержать отдельно, уделяя особое внимание гигиене и уборке лотков.

Другой доступный метод диагностики коронавируса – обнаружение антител в крови, определение их уровня (титров). Анализ указывает на то, как иммунитет отреагировал на контакт с инфекцией, то есть какое количество защитных белков (антител) вырабатывается. Кошки, имевшие или имеющие контакт с вирусом, могут вырабатывать антитела с разной интенсивностью. Как правило, высокие уровни (от 1:100 до 1:400) обнаруживают у животных, выделяющих вирус с калом или болеющих инфекционным перитонитом (ИПК). Этот анализ сам по себе не может быть основанием для постановки диагноза, так как многие абсолютно здоровые кошки также имеют высокий уровень антител (часто это животные из приютов, где высока распространенность кишечной коронавирусной инфекции). Мониторинг титров в динамике может быть полезен при освобождении питомников и приютов от инфекции, так как снижение титров и получение нулевого результата, как правило, указывает на освобождение кошки от вируса.

Для питомников и приютов

По статистике именно питомники являются основным источником коронавируса, так как там кошки содержатся большими группами и могут легко контактировать друг с другом и с калом других животных через лоток. В большинстве питомников в России не проводится должного контроля наличия коронавируса в среде обитания кошек. Статистика говорит, что именно породистые кошки чаще являются носителями, и они же чаще болеют инфекционным перитонитом кошек (предполагается, что это связано с дефектом иммунной системы, который может наследоваться). Поэтому именно заводчикам рекомендуется тщательно проводить контроль наличия коронавирусной инфекции: корректную диагностику и профилактику. Только профилактика заражения кошек и котят коронавирусом и выведения из разведения кошек, в помете которых были котята с инфекционным перитонитом (ИПК), может снизить частоту возникновения такого опасного заболевания, как ИПК. Помните, что однократный анализ кала не исключает наличие инфекции (см. раздел о диагностике).

О заболевании и симптомах

Инфекционный перитонит кошек (ИПК, Feline Infectious Peritonitis, FIPV) – это тяжелое неизлечимое заболевание иммунной системы, причиной которого становится мутантная форма коронавируса кошек. При этой болезни коронавирус, который должен по своей природе обитать только в эпителиальных тканях (кишечнике), мутирует и распространяется в другие органы кошки (лимфоузлы, селезенка, печень, почки, кровь и т.д.) с клетками иммунной системы. Развитие болезни может происходить спустя несколько недель или месяцев после мутации вируса. Кошки могут долгое время быть внешне здоровыми.

Основные симптомы этой болезни – вялость, отказ от еды, высокая температура тела, а также скопление жидкости (характерного состава) в полостях тела (брюшная, грудная полость, редко – околосердечная сумка), поражения глаз (чаще увеит), увеличение и изменение структуры лимфоузлов, кишечника, почек, печени и селезенки, что может быть выявлено с помощью УЗИ.

Это заболевание не заразно, оно возникает у предрасположенных, как правило, молодых кошек (чаще в возрасте от 6 месяцев до 2 лет). Возможно, в развитии заболевания играет роль генетическая предрасположенность и дефект иммунной системы, а также стресс. Основная мера профилактики этой болезни у кошек с коронавирусной кишечной инфекцией – профилактика стресса и помощь в избавлении от кишечной формы инфекции – гигиена (см. выше).

Диагностика инфекционного перитонита кошек – сложная задача, поскольку не существует простых и малотравматичных методов, позволяющих достоверно поставить диагноз. Поэтому для диагностики используется специальный алгоритм, включающий в себя оценку симптомов, анализов крови, анализов жидкости из брюшной или грудной полости, данных УЗИ брюшной/грудной полости, а также специальных анализов (анализ жидкости и измененных органов методом ПЦР, анализы на антитела к коронавирусу, цитологическое и гистологическое исследование измененных тканей).

Характерные признаки болезни могут развиваться постепенно или присутствовать не полностью, что еще сильнее усложняет диагностику. Данный алгоритм позволяет с большей или меньшей вероятностью предполагать наличие ИПК у кошки, и когда все признаки болезни совпадают с картиной, он является достоверным способом диагностики. Окончательный диагноз может быть установлен с помощью биопсии измененных органов с последующим гистологическим и иммуногистохимическим анализом. Это требует проведения операции для забора измененных тканей (лапароскопия или лапаротомия). Иммуногистохимическое исследование позволяет выявить коронавирус в тканях, а не в полости кишечника (как при кишечной форме), что характерно только для инфекционного перитонита кошек, как системного заболевания. К сожалению, часто пациенты с ИПК находятся в столь тяжелом состоянии, что проведение такого исследования представляется невозможным или очень рискованным. Диагноз может быть установлен по результатам патологоанатомического вскрытия.

Доступные специальные лабораторные методы диагностики обнаруживают коронавирус (FCoV), не отличая его мутантный подвид – вирус инфекционного перитонита (FIPV) кошек, или реакцию иммунитета на него (анализ на антитела, серологический тест на титр антител). Этими анализами невозможно отличить кишечную форму инфекции от системного заболевания (ИПК). Однако по исследованиям крайне высокие титры антител к коронавирусу (более 1:1600), как правило, обнаруживаются у животных с ИПК, и гораздо реже при коронавирусной кишечной инфекции. Тем не менее, кошки могут иметь и низкие титры к коронавирусу, включая нулевые результаты, болея при этом ИПК.

О лечении, наблюдении и прогнозе

В настоящее время не существует лекарств, действие которых с доказанной долей эффективности может помочь продлить жизнь или вылечить кошек с ИПК. Лечение носит симптоматический характер, то есть направлено на улучшение качества жизни животного. Как правило, это препараты, угнетающие неправильное действие иммунной системы (иммунодепрессанты), жаропонижающие, антибиотики, стимуляторы аппетита, капельницы при необходимости.

Для мониторинга условно стабильных пациентов необходим периодический осмотр ветеринарного врача, контроль веса и температуры тела, анализов крови, при необходимости – УЗИ брюшной полости. Можно проводить мониторинг титров антител к коронавирусу каждые 2-3 месяца, однако информативность этого метода не всегда достаточна для обоснованного прогноза.

При ухудшении состояния (отказ от еды или хронический недобор веса, развитие анемии, нарушения свертывающей системы крови) проводится эвтаназия.

Прогноз заболевания крайне неблагоприятный (от нескольких дней до нескольких месяцев жизни).

В борьбе с ИПК кошек главную роль отводят профилактике распространения коронавирусной инфекции в питомниках (см. выше) и исключению из разведения кошек, в помете которых были котята с подозрением на ИПК или окончательно диагностированным заболеванием. Согласно исследованиям, вероятность развития ИПК у коронавирус-инфицированных кошек группового содержания не превышает 5%. Однако если речь идет о котятах из одного помета, где одно из животных болеет ИПК, эта вероятность для других котят помета вырастает до 20%. Именно ваша забота об их рождении и первых неделях жизни может значительно снизить риски развития этого смертельного заболевания.

Широкий спектр исследований позволяет диагностировать максимальное количество известных науке заболеваний животных: стригущий лишай (микроспория), пироплазмоз, гемобортенеллез, дирофиляриоз и другие гельминтозы, иммунодифицит и лейкемия кошек, ВИП (вирусный инфекционный перитонит), чума плотоядных, парвовирусный энтерит и др. В нашей лаборатории проводятся исследования крови на уровень гормонов, ферментов (панкреатическая липаза, печеночные трансферазы и пр.), гемоглобина, лейкоцитов, аллергенов и множество других показателей, необходимых для постановки точного диагноза. Так же мы выполняем гистологические и цитологические исследования, имеющие особенное значение при онкологических заболеваниях.

Исследования выполняются на современных автоматизированных системах, что позволяет значительно повысить достоверность полученного результата и сократить время выполнения анализа. Большинство исследований выполняется в течение суток, существует возможность срочного выполнения анализов — за 3 часа. Результаты анализов можно получить в регистратуре клиники, по факсу или электронной почте.

Лабораторные исследования в ветеринарной клинике ЦЕНТР

Мы проводим все традиционные исследования:

Биохимические исследования сыворотки крови (по 30 показателям), характеризующие белковый, липидный, углеводный, пигментный, водно-электролитный обмены.
Биохимические исследования мочи (по 8 показателям, фракционная экскрекция электролитов, клиренс креатинина, определение тяжести белковых потерь) для ранней и более точной диагностики заболеваний почек.
Клинический анализ крови, включающий: Нв, эритроциты, гематокрит, лейкоциты, тромбоциты, СОЭ, эритроцитарные характеристики (для диагностики анемий), ретикулоциты, лейкоцитарная формула.
Коагулограмма, включающая определение протромбинового времени, тромбинового времени, АЧТВ, концентрации фибриногена, концентрации антитромбина III и позволяющая выявить нарушения внешнего и внутреннего пути свертывания, предупредить кровотечение, коагулопатию, ДВС-синдром.
Выявление кровепаразитов (бабезий, гемобартонелл, дирофилярий, эрлихий, анаплазм).
Кислотно-щелочное состояние крови, включающее: парциальное давление кислорода и углекислого газа, концентрацию ионов бикарбоната, рН крови, буферную емкость, значения гемоглобина и гематокрита, содержание ионов калия, натрия, хлора, кальция.
Клинический анализ мочи с микроскопией осадка.
Диагностика вирусных заболеваний собак (чума плотоядных, парвовирусный энтерит) и кошек (панлейкопения, иммунодефицит, лейкемия кошек, вирусный перитонит кошек).
Бактериологические исследования пат. материала, крови и мочи.
Копрологический анализ для выявления нарушений работы органов желудочно-кишечного тракта.
Обнаружение эндопаразитов в кале.
Обнаружение эктопаразитов и дерматофитов в соскобах с кожи.

Исследование гормонального статуса животных:

При заболеваниях щитовидной железы — Т3, Т4 (общий и свободный)
При заболеваниях надпочечников — кортизол
При заболеваниях половой сферы, проявляющихся нарушением полового цикла, протеканием беременности, для контроля за возникновением и, выявления опухолевых процессов в матке или яичниках и т.д..- эстрадиол, прогестерон, тестостерон.

Цитологические исследования соскобов и отпечатков с органов, кожи и слизистых, эндоскопического материала, транссудатов, секретов, экссудатов и асцитной жидкости.

Цитологическое исследование: мочи для обнаружения атипичных клеток мочевого пузыря, влагалищных мазков для установления дня овуляции, выявления ранних эндометритов.

Гистологические исследования биопсийного и послеоперационного материала для выявления стадии онкологического процесса.

Исследования на другие инфекционные болезни

Исследование на боррелиоз (Болезнь Лайма). Заболевание, вызываемое спирохетой Borrelia burgdorferi, передающееся иксодовыми клещами и вызывающее поражение центральной нервной, сердечно-сосудистой системы, опорно-двигательного аппарата. Иммуноферментный тест для качественного определения IgG и IgM антител к Borrelia burgdorferi в сыворотке крови животных на всех этапах заболевания.

Исследование на хламидиоз собак, кошек, птиц:

выявление хламидий в мазках со слизистых
наличие титра антител к Chl.psittaci

Исследование на токсоплазмоз собак и кошек:

наличие титра антител к Toxoplasma gondii у собак и кошек

Исследование на микоплазмоз собак

Исследование на герпес вирус

Диагностика дирофиляриоза

Заболевание, вызываемое воздействием личинок нематод семейства Onchocercidae, сопровождающееся сердечной недостаточностью, повреждением сосудов, воспалительными процессами в легких и печени.

Проводится выявление микрофилярий методом микроскопии и количественное определение методом Кнотта (позволяет оценить степень инвазии и эффективность проводимого лечения).

Сразу несколько групп ученых в России и во всем мире ведут разработку максимально точного теста на антитела к новому коронавирусу. Где-то эти тесты уже применяются, в других странах идет процесс их официальной регистрации. Результат такого теста может стать для человека пропуском для выхода из карантина: если вы, сами того не зная, переболели COVID-19, то сможете какое-то время жить и работать без опасений снова подхватить инфекцию.

Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (Food and Drug Administration, FDA) 1 апреля одобрило для применения первый тест такого типа, получение результатов которого занимает всего 15–20 минут. У теста на антитела (можно также встретить название "серологический тест", происходящее от названия науки о свойствах сыворотки крови) может быть несколько применений: он может использоваться в сочетании с "классическими" ПЦР-тестами на коронавирус для более полного анализа, но главное – при достаточной точности его можно использовать в качестве "пропуска" для выхода человека из карантина в условиях продолжающейся пандемии. Наличие антител к 2019-nCoV означает, что на определенный срок их носитель защищен от нового коронавируса собственным иммунитетом.

Так, немецкий Центр по исследованию инфекционных заболеваний уже сообщил, что после тестирования как минимум 100 тысяч человек будет готов выдавать подобные "паспорта" обладателям иммунитета от нового коронавируса. Израиль, как пишут журналисты из этой страны, уже попросил Россию продать наборы для серологических тестов. Здесь обсуждается возможность тотального тестирования жителей религиозного квартала Бней-Брак в Тель-Авиве, оцепленного полицией из-за вспышки коронавируса. Бывший министр здравоохранения России, а ныне глава Федерального медико-биологического агентства Вероника Скворцова утверждает, что российские тесты на антитела к коронавирусу будут готовы уже в ближайшие дни.

Чтобы приблизить создание российского теста на антитела к 2019-nCoV, нужно собрать максимально возможное количество образцов крови людей, переболевших COVID-19. С призывом к таким людям сдать образцы своей крови обратился у себя в фейсбуке Григорий Ефимов, глава лаборатории трансплантационной иммунологии в Национальном медицинском исследовательском центре гематологии Минздрава России. В интервью Радио Свобода Ефимов рассказывает, зачем еще может понадобиться серологический тест на коронавирус; как долго человек может обладать иммунитетом к болезни, которая унесла жизни уже более 100 тысяч человек во всем мире; а также объясняет, почему ему пришлось бросать клич о помощи со сбором крови переболевших в социальных сетях.

– Что такое серологический тест, в частности серологический тест на коронавирус? И чем он отличается от тестов, которые сейчас массово производятся практически во всех странах мира? Как он работает?

– Серологический тест – это тест не на сам вирус, а тест, который выявляет антитела, специфичные к вирусу. Антитела развиваются у тех людей, которые переболели, или через некоторое время после того, как они встречаются с вирусом. Серологический тест обладает тем преимуществом, что хотя он чуть-чуть и запаздывает по времени, зато у него гораздо более высокая специфичность, потому что у подавляющего большинства людей, практически у всех, развивается антительный ответ к вирусу и мы можем достаточно точно сказать, что человек болел именно этой инфекцией. В частности, по данным китайских исследователей, которые наиболее продвинулись в этой области, после 10-го дня показатель антител даже более достоверен, чем выявление самого вируса, потому что у вируса короткое "окно" активной репликации, в которое можно "не попасть" и просто не поймать живого возбудителя в ту пробу, которая отбирается при ПЦР-тесте.

– В некоторых странах уже делают тесты на антитела к коронавирусу: например, в Чехии предлагают на выбор два: подешевле, когда кровь берут из пальца, а результат готов уже через 15 минут, и подороже, когда кровь берут из вены, а результат сообщают через несколько дней. Зачем вы занимаетесь разработкой нового теста на антитела к коронавирусу, если такие тесты уже есть?

– Безусловно, такие тесты в каких-то странах уже появились, в других странах они активно разрабатываются сразу многими группами, в России их разрабатывают несколько групп. Я знаю, что один из тестов, как было заявлено в СМИ, уже вот-вот будет зарегистрирован. Зачем разрабатывать свой, если есть импортные аналоги? Во-первых, рынок сейчас огромен, потому что происходит эпидемия невиданных масштабов, и производителям, конечно, приходится очень быстро перестраиваться, быстро производить эти тесты. Естественно, каждый производитель думает о том, чтобы обеспечить нужды жителей той страны, в которой он работает. Во-вторых, для того чтобы тест применялся в клинической практике, он должен быть зарегистрирован, и подаваться на регистрацию он должен в каждой стране отдельно. То есть производители зарубежных тестов должны иметь достаточные мощности, чтобы поставлять их и в Россию тоже, а во-вторых, они должны иметь достаточную заинтересованность, чтобы подать здесь документы на регистрацию. Думаю, что в ситуации такой остроты и такого уровня эпидемии это не очень вероятный сценарий. Если какие-то западные тесты появятся в доступности в России, это будет очень хорошо, потому что, чем больше тестов, тем больше суммарной информации о том, как устроен иммунный ответ на вирус, и как исследователю, мне, конечно, будет интересно сравнить результаты, потому что разные тесты используют разные вирусные фрагменты в качестве "приманки" для антител из крови пациентов. Любопытно, если окажется, что у каких-то пациентов возникает иммунный ответ на одни вирусные фрагменты, а на другие возникает в меньшей степени или не возникает вообще.

– О том, что у человека, перенесшего коронавирус, появляется иммунитет, сейчас уже можно говорить без всяких сомнений?

– Да, это так. И очевидно, что иммунитет появляется как минимум на какое-то время, как минимум несколько месяцев человек, перенесший коронавирусную инфекцию, может не беспокоиться о том, что он заболеет тем же самым штаммом возбудителя.

– Несколько месяцев – звучит не очень оптимистично. То есть каждые несколько месяцев надо будет проверять, остался ли иммунитет или уже исчез?

– Мы не знаем, как поведет себя конкретно этот вирус и как иммунная система с ним взаимодействует. Есть примеры вирусов, к которым развивается стойкий пожизненный иммунитет, он обеспечивает полную защиту от повторной инфекции, а есть примеры противоположные – как вирусы, которые вызывают простудные заболевания, иммунитет к которым по той или иной причине очень нестойкий, и мы снова и снова заражаемся теми же самыми вирусами. Такие примеры есть и среди коронавирусов. Другое дело, что коронавирусы, которые вызывают частые респираторные инфекции, – это вирусы, которые в эволюционном масштабе уже очень долго живут с людьми, и они научились приспосабливаться к уходу от мести иммунной системы. Если судить по вирусу, который вызывает атипичную пневмонию, SARS, то антитела к нему определялись в течение одного-двух лет после инфекции.

– Какова точность уже существующих на рынке тестов на антитела к коронавирусу и какой точности вы бы хотели добиться?

– Я, к сожалению, не могу судить, у меня нет информации по точности уже существующих тестов. Про точность, которой мы хотим добиться, вопрос тоже достаточно сложный. Мы сейчас используем в качестве положительного контроля сыворотки, которые мы собираем от людей, которые переболели, выздоровели и выписались из больницы, которые имеют высокий титр антител. С их помощью мы оцениваем процент выявляемости, поскольку мы используем только пациентов, у которых был заведомо детектирован РНК нового коронавируса в носоглотке. В качестве отрицательного контроля – поскольку мы не можем знать, что люди, которые не лежали в больнице и которым не был поставлен диагноз, не перенесли инфекцию в какой-то легкой форме – мы используем панель сывороток, которые были заморожены давно, до эпидемии. Люди, ставшие в свое время донорами крови для этих сывороток, тоже могли иметь ранее контакты с коронавирусами, вызывающими частую респираторную инфекцию, но не могли встречать этого конкретного возбудителя. Когда будут результаты по точности и специфичности, мы их, конечно, сделаем публичными.

– Какие антитела появляются в крови и костном мозге человека после заражения коронавирусом? Как быстро это происходит и какой у них срок жизни, сколько есть времени, чтобы успеть их "поймать" и выяснить, болел ли человек, перенес ли он инфекцию?

– Антитела появляются начиная с четвертого дня, и растягивается этот процесс у некоторых больных до 45-го дня, но наиболее часто они появляются в районе 14-го дня. После 28-го дня 95 процентов больных уже серопозитивны, то есть имеют высокий титр антител. Что касается того, как долго они сохраняются, это зависит от конкретного возбудителя, и мы пока не можем ответить на этот вопрос, поскольку пандемия длится не так долго. Как минимум они должны существовать в высоких продуктивных титрах три месяца, что для наших целей выявления является вполне достаточным окном.

– Можно ли положительный результат теста на антитела к коронавирусу использовать как своего рода пропуск в жизнь во время тотального карантина? Ведь если у человека есть иммунитет, он уже не рискует заразиться.

– Я оговорюсь, что отвечу вам как иммунолог, а не как официальное лицо, которое занимается здравоохранением. С моей точки зрения как иммунолога, да: мы предполагаем, что человек, который имеет напряженный иммунитет, высокий титр антител против коронавируса, у которого есть какая-то концентрация Т-лимфоцитов, специфичных к вирусам, не заразится повторно и может более смело контактировать с окружающим миром, чем непереболевшие люди.

– Может ли при этом человек, уже переболевший COVID-19, быть опасным для окружающих в качестве переносчика вируса?

– Из того, что мы сейчас знаем, нет. Недавно было проведено исследование на приматах, обезьян целенаправленно заражали коронавирусом, потом давали им выздороветь, а после выздоровления заражали повторно. Это было, конечно, ограниченное исследование, там было всего несколько животных, но самый тщательный анализ, с аутопсией, не выявил в этих животных никаких следов вируса. То есть пока про какое-то хроническое вирусоносительство и выделение вируса в такой ситуации речь не идет.

– Каким будет тест, над которым вы работаете? Сколько времени займет получение результата? Нужна ли будет для этого лаборатория или результат можно будет получить дома или в обычной клинике?

– Принципиальный подход, который мы используем, может быть в дальнейшем внедрен как в качестве количественного теста, который делается в формате иммуноферментного анализа, так и в качестве быстрого теста, про который вы говорили: это тест-полоска, где достаточно капли крови, чтобы дать ответ – "да" или "нет". Это уже зависит от конкретного производителя. Мы не производители, мы разработчики, мы занимаемся более ранней стадией разработки. Эту разработку можно реализовать и так, и так. Сколько времени занимает анализ? Он будет занимать, наверное, столько же, сколько анализ на антитела к любому другому вирусу, поскольку принцип его действия абсолютно такой же.

– О каком сроке примерно идет речь?

– В коммерческой лаборатории предлагают ответ по антителам к вирусу гепатита в течение срока от 1 до 3 рабочих дней. И это связано, скорее, с логистикой. Сам анализ и получение результата занимают несколько часов.

– Какую еще информацию, кроме того, переболел ли человек коронавирусом, позволяет узнать тест на антитела? Чем эта информация может быть полезна ученым или медикам?

– Во-первых, это позволяет отбирать переболевших пациентов, которые выздоровели, у которых высокая концентрация антител в крови, чтобы они могли быть донорами плазмы, которая может быть использована для лечения тяжелых больных. Такой метод лечения сейчас вроде бы уже начинает применяться и в России, он применялся в Китае и в других странах тоже. Для этого нужно определить, сколько антител есть в крови, и отобрать самых лучших доноров. Второй аспект – изменение динамики прироста антител может быть показателем, прогнозом того, насколько тяжело будет протекать инфекция у того или иного человека. Это важно и для дополнительной диагностики: как я сказал, можно "пропустить" вирус при обычном ПЦР-тесте, но увидеть антитела и понять, что это коронавирусная инфекция, а динамика прироста антител может быть диагностическим фактором.

– Насколько важна массовость такого тестирования во время пандемии? Всемирная организация здравоохранения говорит, что важно тестировать как можно больше людей на сам вирус. Насколько важна массовость серологических тестов во время эпидемии или пандемии?

– Если мы предполагаем, что многие люди уже могли перенести коронавирус без симптомов или в мягкой форме, а основания полагать так у нас есть, то это важно. Во-первых, для прогнозирования того, сколько осталось незараженных и с какой скоростью будет дальше развиваться инфекция. Во-вторых, это важно для того, чтобы можно было выпускать людей из изоляции, чтобы они могли как-то заниматься хозяйственной деятельностью и приносить пользу себе и окружающим.

– Вы обратились в фейсбуке к своим читателям, у которых был выявлен коронавирус и которые переболели COVID-19, с просьбой поделиться кровью для разработки теста на антитела. Почему вам приходится бросать клич в социальной сети? Неужели российский Минздрав, в структуру которого входит ваша лаборатория, не отбирает у переболевших кровь централизованно для будущих научных исследований?

– Автоматически кровь для исследований ни у кого отбирать нельзя. Существуют этические нормы, человек должен добровольно сдать кровь. Это одно соображение. Второе соображение: мы, конечно, взаимодействуем с различными клиниками, сейчас все больше и больше налаживаются цепочки, и они будут перенаправлять пациентов к нам, говорить им, что проходит такое исследование, предлагать им в нем участвовать. Зачем я это сделал через социальные сети? Во-первых, в такое время все люди очень активно помогают друг другу, и это тоже неплохой способ.

Во-вторых, нам было важно получить кровь от людей, которые уже вышли из больницы, уже прошли необходимый карантин после госпитализации. Эти люди уже находятся дома, они уже не в ведении врачей, и таких людей, на самом деле, не так много, потому что это самая первая волна тех, кто прошел все стадии болезни. Так их просто удобнее находить, и этот призыв уже можно считать успешным: мы нашли большое количество людей, которые откликнулись, целыми семьями, они приезжают и сдают кровь. На первом этапе нам было важно отобрать людей, которые уже не представляют никакой опасности с точки зрения выделения вируса, чтобы мы могли у них взять кровь.

– Вы пишете, что вам и еще одной группе российских ученых уже удалось разработать прототип теста на антитела к новому коронавирусу. Чем прототип отличается от работающего теста? И сколько времени может занять путь от прототипа к готовому продукту?

– Я думаю, что тест другой группы, о которой заявил Роспотребнадзор, будет зарегистрирован в течение ближайшей недели, она продвинулась гораздо дальше. Я знаю еще несколько групп, которые тоже делают свои тесты. Чем отличается прототип от работающего теста? Тем, что, во-первых, прототип произведен в лабораторных условиях, а работающий тест, который будет зарегистрирован, будет произведен на производственной площадке, которая для этого предназначена. Мы сейчас ведем переговоры с разными площадками. Надеемся, что кто-то возьмется производить наш тест. После этого тот тест, который произведен в профессиональных условиях, должен быть валидирован на контрольных образцах, и на последнем этапе должны быть получены расчетные показатели его специфичности, – говорит Григорий Ефимов.

Точность серологических тестов остается одним из основных препятствий на пути к их массовому применению. В Великобритании, сообщает Guardian, правительство заказало 3,5 миллиона таких тестов, однако, как выяснилось, они слишком часто дают ложноположительный результат, реагируя на антитела к "обычным", ранее известным коронавирусам. Человек с таким результатом теста может ошибочно полагать, что он неуязвим для 2019-nCoV. Премьер-министр Великобритании Борис Джонсон, заболевший COVID-19, говорил, что такие тесты могут стать переломным моментом в борьбе с распространением новой инфекции. Теперь депутат от его партии, возглавляющий комитет парламента по науке и технологиям, требует от Национальной службы здравоохранения раскрыть информацию о том, у каких компаний были куплены недостаточно точные тесты на антитела к коронавирусу и почему условием перечисления денег за них не была поставлена фактическая точность тестирования.

Читайте также: