Сыворотка антитоксическая против анаэробной дизентерии ягнят и энтеротоксемии овец

Наставление
по применению антитоксической сыворотки против анаэробной дизентерии ягнят и инфекционной энтеротоксемии овец
(утв. Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 28 мая 1968 г.)

1. Антитоксическая сыворотка против анаэробной дизентерии ягнят и инфекционной энтеротоксемии овец представляет собой прозрачную, слегка опалесцирующую жидкость желтого цвета с выпавшим на дно флакона осадком, который при встряхивании флакона разбивается в равномерную взвесь.

Сыворотка содержит антитоксины Clostridium perfringens типов В, С и D. Сыворотка пригодна в течение 4 лет со дня ее изготовления при условии хранения в темном, сухом помещении при температуре от 2 до 15°. Сыворотка, подвергавшаяся замораживанию, к применению непригодна.

2. Флаконы с сывороткой должны быть плотно закрыты пробками и металлическими колпачками. При встряхивании и переворачивании флакона сыворотка не должна просачиваться через пробку.

На каждом флаконе должна быть этикетка с указанием наименования биофабрики, изготовившей сыворотку, наименования биопрепарата, его количества во флаконе, номера серии и контроля, даты изготовления, срока годности, количества АЕ (антитоксических единиц) антитоксина Clostridium perfringens типов В, С и D в 1 мл сыворотки, доз ее применения с профилактической и лечебной целями.

При наличии в сыворотке посторонних примесей, не разбивающихся при встряхивании хлопьев, плесени и т.п., при нарушении укупорки и целости флакона, отсутствии этикетки, наличии гнилостного запаха, а также при неиспользовании сыворотки в день открытия флакона ее бракуют.

Перед применением флаконы с сывороткой встряхивают и подогревают в водяной бане до 36-38°.

3. Сыворотку против анаэробной дизентерии ягнят и инфекционной энтеротоксемии овец применяют с профилактической и лечебной целями в хозяйствах (отарах), где появились случаи дизентерии ягнят или энтеротоксемии овец, обусловленные возбудителем Clostridium perfringens типов В, С и D и подтвержденные лабораторными исследованиями,

При проведении прививок сывороткой соблюдают установленные правила асептики и антисептики (стерилизация инструментов, обработка места введения сыворотки и т.д.).

4. В отарах овец, стационарно неблагополучных по дизентерии ягнят, сыворотку вводят с предохранительной целью всем новорожденным ягнятам через 1-2 дня после рождения, а в отарах, где появилась энтеротоксемия овец, сыворотку вводят и ягнятам, и взрослым овцам.

Сыворотку с предохранительной целью против дизентерии вводят ягнятам подкожно в дозе, содержащей не менее 50 АЕ (антитоксических единиц), а против энтеротоксемии ягнятам в дозе не менее 100 АЕ и овцам не менее 200 АЕ антитоксина соответствующего типа.

У животных, привитых сывороткой с профилактической целью, иммунитет сохраняется в течение 14-18 дней.

5. С лечебной целью сыворотку вводят внутримышечно или в вену: при дизентерии ягнятам в дозе 100-200 АЕ, а при энтеротоксемии - ягнятам 200-400 АЕ, овцам 400-1000 АЕ (в зависимости от состояния больного животного). В случае необходимости сыворотку в указанных дозах вводят повторно.

Сыворотка оказывает лечебное действие при применении ее в начале заболевания животных дизентерией или энтеротоксемией. Эффективность лечения повышается, если одновременно с сывороткой применяют антибиотики (синтомицин, биомицин, террамицин), сульфаниламидные препараты, а также симптоматические средства.

Сывороткой лечат всех животных, больных дизентерией или энтеротоксемией. Больных животных при этом содержат изолированно (подсосные ягнята вместе с матерями) и обслуживают отдельно от здорового поголовья.

6. В зависимости от титра сыворотки на этикетках флаконов указывается количество АЕ (антитоксических единиц в 1 мл сыворотки данной серии) каждого типа Clostridium perfringens.

Для вычисления дозы сыворотки данной серии нужно разделить требуемую профилактическую (200 АЕ, 50 АЕ) или лечебную (1000 АЕ, 400 АЕ) дозу на количество АЕ в 1 мл, указанное на этикетке. Частное oт деления этих чисел и будет дозой сыворотки данной серии. Например, в 1 мл сыворотки содержится 10 АЕ антитоксина Clostridium perfringens типа В, доза сыворотки, требуемая для введения с профилактической целью ягненку, - 50 АЕ, значит, искомая доза сыворотки данной серии равна 50 : 10 = 5 мл.

7. Через 8-10 дней после введения сыворотки против инфекционной энтеротоксемии овец проводят вакцинацию животных согласно наставлению по применению соответствующей вакцины.

Одновременно вводить животным сыворотку и вакцину не разрешается, так как это отрицательно влияет на формирование вакцинального (активного) иммунитета.

8. Наряду с применением сыворотки в хозяйствах, неблагополучных по дизентерии ягнят и инфекционной энтеротоксемии овец, проводят комплекс ветеринарно-санитарных и зоотехнических мероприятий, предусмотренных инструкциями по борьбе с этими болезнями.

9. В случае осложнений или падежа животных, вызванных введением сыворотки, дальнейшее применение сыворотки данной серии прекращают и об этом немедленно сообщают в Государственный научно-контрольный институт ветпрепаратов МСХ СССР (г. Москва, Д-22, Звенигородское шоссе, 5) и биофабрике, изготовившей сыворотку, с указанием номера серии препарата, времени прививок, количества привитых животных и характера осложнений. Одновременно в институт высылают не менее двух флаконов с сывороткой из серии, давшей осложнения.

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.

Наставление по применению антитоксической сыворотки против анаэробной дизентерии ягнят и инфекционной энтеротоксемии овец (утв. Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 28 мая 1968 г.)

Текст наставления официально опубликован не был

Текст ГОСТ 28417-89 Вакцина против инфекционной энтеротоксемии овец, анаэробной дизентерии ягнят и некротического энтерита поросят, вызываемых клостридиум перфрингенс типов С, D. Технические требования и методы контроля

ВАКЦИНА ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОЙ ЭНТЕРОТОКСЕМИИ ОВЕЦ, АНАЭРОБНОЙ ДИЗЕНТЕРИИ ЯГНЯТ И НЕКРОТИЧЕСКОГО ЭНТЕРИТА ПОРОСЯТ, ВЫЗЫВАЕМЫХ КЛОСТРИДИУМ ПЕРФРИНГЕНС ТИПОВ С, D

ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ И МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

Технические требования и методы контроля 28417—89

Vaccine against sheep infectious enterotoxeamia, anaerobic lamb dysentery and pig necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens, types C, D. Technical requirements and control methods

MKC 11.220 ОКСТУ 9384

Дата введения 01.07.90

Настоящий стандарт распространяется на вакцину против энтеротоксемии овец и анаэробной дизентерии ягнят, изготовленную из производственных штаммов Клостридиум перфрингенс типов С и D, инактивированных теплом и формалином и сорбированных на геле гидрата окиси алюминия.

Препарат содержит анатоксины и микробные клетки указанных производственных штаммов и используется для профилактической иммунизации овец и ягнят в возрасте старше 3 мес, свиноматок. Профилактическую иммунизацию свиноматок применяют в договорно-правовых отношениях.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1. Вакцина по своим физическим и иммунобиологическим свойствам должна соответствовать требованиям и нормам, указанным в таблице.

Характеристика и нормы

Суспензия серовато-белого цвета, после отстаивания на дне флакона образуется рыхлый осадок серого цвета, надосадочная жидкость при этом прозрачная светло-коричневого цвета. Осадок при встряхивании разбивается в равномерную взвесь

2. Наличие посторонних примесей, плесени, неразбившихся хлопьев, негерметичного укупоривания, трещин флаконов

3. Концентрация водородных ионов (pH)

Должна быть стерильной

Подкожное введение вакцины 5 морским свинкам массой 350—400 г в объеме 5 см 3 в два места в области брюшных мышц (по 2,5 см 3 ) не должно вызывать заболевания и гибель животных в течение 10 сут наблюдения. На месте введения вакцины допускается образование ограниченной припухлости, исчезающей через 2—3 сут

Издание официальное Перепечатка воспрещена

Характеристика и нормы

6. Биологическая активность в реакции нейтрализации типовых токсинов сыворотками крови иммунизированных овец после двукратной прививки, АЕ/см 3 , не менее

7. Погрешность розлива

2. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИИ

2.1. Отбор проб

2.1.1. Для проверки качества вакцины из различных мест каждой серии препарата отбирают выборку в объеме 0,4 л/й

(где п — количество флаконов в серии).

Из выборки отбирают 20 флаконов, из которых 10 используют для проведения испытаний, а 10 хранят в архиве государственного контролера в течение срока годности препарата.

2.1.2. Флаконы, предназначенные для хранения, сопровождают документом с указанием: наименования биопрепарата;

даты изготовления; номера госконтролера; даты отбора проб;

общего количества упаковочных единиц; объема серии; срока годности;

обозначения настоящего стандарта; должности и подписи лица, отобравшего пробу.

2.2. Определение внешнего вида

2.2.1. Определение внешнего вида, наличия посторонних примесей, плесени, изменения консистенции проводят визуально, просматривая каждый флакон в проходящем свете. Флаконы предварительно встряхивают. Одновременно проверяют плотность укупорки, наличие трещин и правильность этикетирования флаконов.

2.3. Определение концентрации водородных ионов (pH)

Сущность метода заключается в измерении разности потенциалов между двумя электродами pH-метра, погруженными в исследуемую пробу.

2.3.1. Аппаратура и материалы

pH-метр, позволяющий проводить измерения с погрешностью не более 0,05 единицы. Термометр.

Стаканы химические В-1 ТХС по ГОСТ 25336.

Растворы буферные с pH 6,8—7,2.

2.3.2. Подготовка к испытанию

pH-метр и электроды подготовляют к работе в соответствии с инструкцией, прилагаемой к прибору.

2.3.3. Проведение испытаний

Для испытания используют 2 флакона с вакциной. Измеряют температуру пробы и устанавливают терморегулятор прибора на полученное значение температуры. Погружают электроды в пробу и через 30 с отсчитывают значение pH.

2.3.4. Оценка результатов

Значение pH устанавливают по двум измерениям каждой пробы, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,1 единицы.

2.4. Определение контаминации посторонней микрофлорой — по ГОСТ 28085.

2.5. Определение безвредности

Сущность метода заключается в определении реакции у лабораторных животных на подкожное введение вакцины в тест-дозе.

2.5.1. Аппаратура и материалы

Флаконы стеклянные вместимостью 100 см 3 .

Пипетки мерные вместимостью 1, 5, 10 см 3 по НТД.

Шприцы вместимостью 5 см 3 .

Иглы инъекционные по ГОСТ 25377*.

Морские свинки массой 350—400 г.

2.5.2. Проведение испытания

Для испытания используют смесь вакцины, взятую в равных объемах из 3 отобранных флаконов. Препарат вводят подкожно 5 морским свинкам в дозе 5 см 3 в область брюшных мышц в два места (по 2,5 см 3 ).

2.5.3. Оценка результатов

Вакцина не должна вызывать заболевания и гибель животных в течение 10 сут наблюдения. На месте введения препарата допускается образование ограниченной припухлости, исчезающей через 2—3 сут.

2.6. Определение биологической активности

Сущность метода заключается в определении количества антитоксических антител в сыворотке крови вакцинированных овец.

2.6.1. Аппаратура и материалы

Термостат с температурой нагрева (37 + 0,5) °С.

Весы лабораторные с погрешностью взвешивания 0,0001 г.

Флаконы стеклянные вместимостью 100 см 3 по ТУ 64—2—100.

Пипетки мерные вместимостью 1, 5 и 10 см 3 по НТД.

Иглы инъекционные по ГОСТ 25377.

Шприцы вместимостью 1 и 5 см 3 по ГОСТ 22967.

Пробирки лабораторные по ГОСТ 25336.

Токсины сухие Клостридиум перфрингенс типов С и D.

Раствор физиологический с pH 7,2—7,4.

Овцы взрослые массой не менее 30 кг.

Белые мыши массой 16—18 г.

2.6.2. Подготовка к испытанию

Для испытания биологической активности используют общую пробу вакцины, взятую в равных объемах из 10 флаконов.

2.6.3. Проведение испытания

2.6.3.1. Получение объединенной пробы сывороток крови вакцинированных овец

5 овцам массой не менее 30 кг, в сыворотке крови которых не содержится специфических антител к Клостридиум перфрингенс или их уровень не превышает 0,04 АЕ/см 3 , вводят вакцину дважды подкожно в бесшерстную область за локтевым суставом в дозе 4 см 3 с интервалом 18—20 сут. Через 18—20 сут после второй вакцинации от каждого животного берут кровь.

Готовят объединенную пробу полученных сывороток, смешанных в равных объемах.

2.6.3.2. Определение минимальной летальной дозы типовых токсинов

Для определения минимальной летальной дозы (ДЛМ) типовых токсинов делают навески каждого токсина по 100 мг, которые растворяют в 100 см 3 физиологического раствора с pH 7,2—7,4.

Основное разведение содержит 1 мг токсина в 1 см 3 раствора. Из него готовят последовательные разведения: 1:10, 1:15, 1:20 и т. д. до предполагаемого титра, пользуясь при этом разными пипетками. Каждое разведение токсинов вводят внутривенно по 0,5 см 3 2 белым мышам массой 16—18 г. Результаты учитывают через 48 ч. За титр токсина принимают то его разведение, при введении которого еще наблюдается гибель мышей.

Например. Мыши пали от разведения 1:20, а после разведения 1:25 остались живы. Следовательно, 1 мг сухого токсина содержит 40 ДЛМ для мышей массой 16—18 г.

2.6.3.3. Постановка реакции нейтрализации типовых токсинов объединенной пробой сыворотки крови вакцинированных овец

Готовят разведения типовых токсинов, содержащие 12 ДЛМ/см 3 . Испытуемую сыворотку овец разводят 1:4, 1 см 3 которой смешивают с 1 см 3 разведенного токсина, и смесь выдерживают 30 мин при температуре 37 °С—38 °С. Затем смесь сыворотки и токсина по 0,5 см 3 вводят внутривенно 4 белым мышам. Одновременно ставят контроли токсинов. Для этого готовят разведения, содержащие 0,5; 1,0 и 2,0 ДЛМ в объеме 0,5 см 3 . Каждое разведение вводят внутривенно 2 белым мышам в объеме 0,5 см 3 . Наблюдение за животными ведут в течение 48 ч.

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 25377—82.

2.6.4. Оценка результатов

Гибель контрольных мышей, которым токсин был введен в количестве 1 и 2 ДЛМ, и отсутствие гибели в группе мышей, которым токсин был введен в количестве 0,5 ДЛМ, и в группе мышей, которым токсин введен в смеси с сывороткой, означает, что сыворотка крови вакцинированных овец содержит 0,48 АЕ/см 3 (при гибели отдельных животных) или более 0,48 АЕ/см 3 (при выживании всех животных опытной группы).

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Главком ветеринарии при Госкомиссии Совмина СССР по продовольствию и закупкам

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 28.12.89 № 4203

3. СТАНДАРТ ПОЛНОСТЬЮ СООТВЕТСТВУЕТ СТ СЭВ 6536-88

4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Использование ветеринарная иммунология , профилактика инфекционных болез ней сельскохозяйственных животных, анаэробная дизентерия ягнят и инфекционная энтеротоксемия овец Сущность изобретения составными компонентами препарата являются антитоксическая сыворотка против анаэробной дизентерии ягнят г,ч IVS. и инфекционной энтеротоксемии овец, содержащая антитоксины Кл перфригенс типов В, С и Д, полиэтиленгликоль-6000 и феракрил Соотношение сыворотки, полиэтиленгликоля и феракрила установлено опытным путем (мае %) 90-95 сыворотки, 5-10 полиэтиленгликоля 6000, 0,1-0,2 феракрила Препарат применяют против указанных инфекций с профилактической и лечебной целью в зонах, неблагополучных по этим болезням При появлении в отаре первых случаев инфекционной энтеротоксемии или анаэробной дизентерии животным вводят сыворотку подкожно в верхнюю треть шеи в дозе 200-400 АЕ взрослым и 50-100 АЕ новорожденным Однократная иммунизация иммобилизованной сывороткой профилактирует инфекционную энтеротоксемию и анаэробную дизентерию ягнят в сезон болезней Способ избавляет от необходимости 2-3-кратной иммунизации вакциной после применения сыворотки . V Ё

РЕСПУБЛИК (я>s А 61 К 39/40

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4807397/13 (22) 23.01.90 (46) 15.07,92. Бюл, N. 26 (71) Прикаспийский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт (72) Н.Х. Мамаев, М.А. Бектемиров и П.Д. Устарханов (53) 615.371/373(088.8) (56) Патент Великобритании N . 1357023, кл. А 61 К 23/00, 1974.

Ветеринарное законодательство, М„

1972, т. 1, с. 626 вЂ” 627, (54) СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ИНФЕКЦИОННОЙ ЭНТЕРОТОКСЕМИИ И АНАЭРОБНОЙ ДИЗЕНТЕРИИ ОВЕЦ И ЯГНЯТ (57) Использование: ветеринарная иммунология, профилактика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных, анаэробная дизентерия ягнят и инфекционная энтеротоксемия овец. Сущность изобретения: составными компонентами препарата являются антитоксическая сыворотка против анаэробной дизентерии ягнят

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к ветеринарной иммунологии, и может быть использовано для профилактики инфекционных болезней сельскохозяйственных животных вЂ” инфекционной энтеротоксемии овец и анаэробной дизентерии ягнят.

Известно использование полиэтиленгликоля при изготовлении препаратов, предназначенных против клостридиозов овец.

50 вЂ” 100 АЕ новорожденным. Однократная иммунизация иммобилизованной сывороткой профилактирует инфекционную энтеротоксемию и анаэробную дизентерию ягнят в сезон болезней. Способ избавляет от необходимости 2-3-кратной иммунизации вакциной после применения сыворотки..Известен способ профилактики дизентерии ягнят с использованием сыворотки.

Эту сыворотку применяют с профилактической и лечебной целями в отарах, где среди новорожденных ягнят появились случаи дизентерии, сопровождающиеся характерными изменениями в кишечнике. С предохранительной целью в отарах овец стационарно неблагополучных по дизентерии ягнят сыворотку вводят всем новорожденным ягнятам через 1-2 ч после рождения. У животных. привитых сывороткой, иммунитет сохраняется до 14 дн.

Известен также способ профилактики инфекционной энтеротоксемии овец и анаэробной дизентерии ягнят.

Сыворотка содержит айтитоксины Клостридиум перфрингенс типов В, С, D. Применяют ее с профилактической и лечебной целями в хозяйствах, где появились случаи дизентерии ягнят или энтеротоксемии овец, обусловленных возбудителем Клостридиум перфрингенс типов В, С, D и подтвержденные лабораторными исследованиями.

В отарах овец, стационарно неблагополучных по дизентерии ягнят, сыворотку вводят с предохранительной целью всем новорожденным ягнятам через 1-2 дня после рождения, а в отарах, где появилась энтеротоксемия овец, и взрослым овцам, С предохранительной целью против дизентерии ягнятам сыворотку вводят подкожно в дозе, содержащей не менее 50 АЕ (антитоксических единиц), а против энтеротоксемии вЂ” ягнят в дозе не менее 100 AE u овцам не менее 200 АЕ соответствующего типа.

У животных, привитых сывороткой с профилактической целью, иммунитет сохраняется в течение 14 вЂ” 18 дней, С лечебной целью сыворотку вводят внутримышечно или в вену: при дизентерии ягнятам s дозе 100 вЂ” 200 АЕ, а при энтеротоксемии я гнятам 200 вЂ” 400 АЕ, овцам 400.-1000 АЕ.

Сыворотка оказывает лечебное действие при применении ее в начале заболевания животных дизентерией или энтеротоксемией, через 8-10 дней после введения сыворотки проводят вакцинацию животных поливалентной гидроокисьалюминиевой вакциной против брадзота, инфекционной энтеротоксемии, злокачественного отека овец и дизентерии ягнят.

Недостатком антитоксической сы воротки против анаэробной дизентерии ягнят и инфекционной энтеротоксемии овец является непродолжительный срок ее действия

14-18 дней в связи с тем, что она представляет собой нативный препарат, полученный гипериммунизацией животных анатоксинами соответствующих типов Кл. перфрингенс.

Другим недостатком антитоксической сыворотки против анаэробной дизентерии ягнят и инфекционной энтеротоксемии овец является то, что через 8-10 дней после ее введения иммунитет созданный сывороткой обязательно должен быть подкреплен двух-, в некоторых случаях трехкратной вакцинацией.

Таким образом, известный способ профилактики инфекционной энтеротоксемии овец и анаэробной дизентерии ягнят B не10

55 благополучных хозяйствах включает 3-4 операции вЂ” введение бивалентной сыворотки и затем 2-3-кратная вакцинация полианатоксином.

Цель изобретения вЂ” разработка способа профилактики вышеуказанных инфекций однократным введением иммобилизованной сыворотки, Сущность изобретения состоит в способе профилактики инфекционной энтеротоксемии овец и анаэробной дизентерии ягнят антитоксической сывороткой, содержащей конформационно измененные полиэтиленгликолем и стабилизированные феракрилом иммуноглобулины, отличающейся от прототипа большим сроком профилактического действия, сокращением кратности иммунизации, снижением материальных и трудовых затрат, Кроме того, в состав антитоксической сыворотки введен полиэтиленгликоль с мол.м. 6000Дальтон, который полимеризует иммуноглобулины сыворотки, а также феракрил, способствующий стабилизации их конформацион ной подвижности, Кроме .того, отработаны и предлождены эффективные соотношения антитоксической сыворотки и полиэтиленгликоля, Составными компонентами предполагаемого изобретения являются антитоксическая, сыворотка против анаэробной дизентерии ягнят и инфекционной энтеротоксемии овец, содержащая антитоксины.

Клостридиус перфрингенс типов В, С и D, полиэтиленгликоль 6000, и феракрил.

Феракрил вЂ” неполная железная соль полиакриловой кислоты, применяемый в качестве кровеостанавливающего средства.

Препарат выпускается медицинской промышленностью в виде 2 -ного раствора, Представляет собой слабо-желтую прозрачную жидкость, хорошо растворим в воде.

Приготовление сыворотки с конформационно измененными и стабилизированными иммуноглобули нами состоит из следующих операций.

Из полиэтиленгликоля делают 30оь-ный водный раствор и стерилизуют автоклавированием при 110-115 С в течение 40 вЂ” 45 мин, После охлаждения до комнатной температуры в стерильных условиях к сыворотке добавляют полиэтиленгликоля до содержания 5-10, феракрила до 0,1-0,27; и перемешивают.

При испытании феракрила неожиданно выяснился факт стабилизации пространственно измененных молекул,иммуноглобулинов, В результате такого эффекта конформационно измененные и стабилизированные иммуноглобулины приобретают

1747078 более устойчивую форму к денатурирующим факторам организма животных с сохранением своей активности.

Постепенное высвобождение иммуноглобулинов из иммобилизованного состояния создаетдостаточный их уровень в крови для нейтрализации токсинов клостридий в течение 35-40 дней.

В связи с этим пассивно приобретенный иммунитет увеличивается в 2 с лишним раза по сравнению с применением прототипа, Предлагаемый препарат против анаэробной дизентерии ягнят и инфекционной энтеротоксемии овец применяют с профилактической и лечебной целью в зонах, неблагополучных по этим болезням. При появлении в отаре первых случаев инфекционной энтеротоксемии или анаэробной дизентерии животным вводят сыворотку подкожно в верхнюю треть шеи в дозе 200вЂ”

400 АЕ взрослым и 50-100 АЕ новорожденным, Таким образом дозировка препарата уменьшается в 2 раза по сравнению с прототипом, Однократная инъекция предлагаемого препарата обеспечивает надежную профилактику инфекционной энтеротоксемии овец и анаэробной дизентерии ягнят в сезон болезни. .Соотношения сыворотки, полиэтиленгликоля и феракрила установлены опытным путем и являются наиболее оптимальными.

Подтверждением этого служат результаты следующих испытаний.

Пример 1. Заражение оттитрованной смертельной дозой токсина мышей иммунизированных предлагаемым препаратом, приготовленной в соотношении 90-95 ч сыворотки, 5-10 ч полиэтиленгликоля, 0,1 вЂ” 0,2 ч феракрила показало 100 -ную эффективность через 30 дней после иммунизации.

Снижение содержания полиэтиленгликоля в препарате менее 5 оказывалось недостаточным для полной полимерации иммуноглобулинов сыворотки.

Увеличение его содержания более 10% приводило к черезмерной полимеризации, в результате чего образуемый комплекс в ви.де плотного осадка не растворяется при встряхивании, Препарат с содержанием менее 0.1 феракрила предохранял иммунизирован5

55 ных животных только в течение 19 дней, в связи с чем стабилизирующий эффект считается недостаточным.

Увеличение содержания в сыворотке водного раствора феракрила более 0,2 не оказало улучшения показателей исследований.

Пример 2. Препарат в соотношениях

96-98 ч. сыворотки. 2-4 ч полиэтиленгликоля и 0,05 ч феракрила через 30 дней после иммунизации предохранил 57 животных.

Пример 3. Испытание препарата, содержащего 86 вЂ” 88 ч. сыворотки, 12-14 ч полиэтиленгликоля и 0,5 ч. феракрила показало 70 -ную эффективность через 30 дн, после иммунизации. Кроме того, данные пропорции препарата имели некоторую токсичность для лабораторных животных, Таким образом, предполагаемое изобретение состоит в изменении физико-химического состояния иммуноглобулинов сыворотки путем иммобилизации их полиэтиленгликолем и стабилизации конформационной подвижности феракрилом, В результате постепенного высвобождения иммуноглобулинов из иммобилизованного состояния профилактическое действие их увеличивается в 2 с лишним раза, а дозировку становится возможным уменьшить дважды по сравнению с прототипом, Предлагаемый способ профилактики инфекционной энтеротоксемии овец и анаэробной дизентерии ягнят по сравнению с известным способом профилактики этих инфекций, позволяет исключить 2-3-кратную иммунизацию овец вакциной, увеличить срок специфического действия сыворотки, уменьшить дозировку препарата дважды и исключить материальные и трудовые затраты.

Способ профилактики инфекционной энтеротоксемии и анаэробной дизентерии овец и ягнят путем иммунизации животных антитоксической сывороткой, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения профилактического действия за счет стабилизации свойств иммуноглобулинов, к антитоксической сыворотке добавляют Ilo лиэтиленгликоль с мол.м, 6000 и феракрил до концентрации 5-10 и 0,1 вЂ” 0,27 соответственно и полученный препаратом иммунизируют взрослых животных в дозе 200 вЂ” 400

Купить бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Цена на этот документ пока неизвестна. Нажмите кнопку "Купить" и сделайте заказ, и мы пришлем вам цену.

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
Курьерская доставка (7 дней)
Самовывоз из московского офиса
Почта РФ

Дата введения	01.02.2020
Добавлен в базу	01.01.2019
Актуализация	01.02.2020

15.02.1984	Утвержден	Главное управление ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР
Издан	Россельхозиздат	1984 г.

Одним -из важнейших резервов в овцеводстве, особенно в условиях отгонно-пастбищного содержания поголовья, наряду с укреплением кормовой базы, улучшением кормления и условий содержания овец, является снижение заболеваемости и падежа животных опт различных инфекционных, инвазионных и незаразных болезней. Анализ причин падежа овец в ДАССР показал, что от анаэробных заболеваний <энтеротоксемия овец, дизентерия япнят) гибнет животных больше, чем от всех инфекционных болезней вместе взятых.

Успех лечебно-профилактических мер против указанных клост-ридиозов во многом зависит от точно и своевременно поставленного диагноза. По существующей инструкции он устанавливается в течение восьми суток путем проведения сложных лабораторных исследований с использованием множества белых мышей.

Поэтому перед ветеринарной наукой стоит задача разработать более ускоренные и чувствительные методы диагностики клосТ|риди-оз-oiB и внедрить их в лабораторную практику.

Одним из таких методов является люминесцентно-серологический, сущность которого заключается в соединении меченых флуорохромами антител со специфическими антигенами и выявлении образовавшихся светящихся комплексов при люминесцентной микроскопии.

В настоящее время этим методом диагностируются такие инфекционные заболевания животных, как сибирская язва, туберкулез, лист ери оз, сальмонеллезы, бешенство и др.

На возможность использования реакции иммунофлуоресценции для дифференциации типов Кл. перфрингенс указали Козловский Е, Г. и Ефанова М. И. (1970). Однако исследования Полынико-ва Д. Г. (1969) не дали положительных результатов.

В ВИЭВ под руководством профессора И. И. Архангельского и зав. лаб. болезней овец Ю. Д. Караваева выполнены исследования по идентификации микробояз Кл, перфрингенс с использованием реакции иммунофлуоресценции. При этом было установлено, что эта реакция, хотя и вызывает свечение в-сей группы микроорганизмов, но типизировать Кл. перфрингенс не позволяет.

Учитывая перспективность реакции иммунофлуорееценции, мы применили ее для экспресс-дивпностики инфекционной энтероток-семии овец и анаэробной дизентерии ягнят.

Для этого мы изготовили антигены из микробов Кл. перфрингенс пипов А, В, С, Д, а также из mix токсинов. Путем гипериммунизации баранов этими ант*- генами получили противобактериальные и антитоксические сыворотки, глобулиновые фракции, которых после конъюгирования с изотиоционатом флусресцеина использовали для идентификации микробов Кл. перфрингенс методом флуоресцирующих антител.

Сцецифичность окрашивания меченых иммуноглобулинов проверяли на препаратах, приготовленных и.з различных штаммов музейных культур Кл. перфрингенс типа А, В, С и Д, а также Кл. оеде-матиенс и Кл. сепии кум.

Результаты многократно проведенных исследований показали, что полученные антибактериальные флуоресцирующие сыворотки типа А, В, С и Д специфически окрашивают соответствующие гомологичные микробы Кл. перфрингенс. Характерным для них было четкое золотисто-зеленого цвета свечение периферийных участков микробной клетки, тогда как центральная часть выглядела более темной. Такое -свечение микробов считали специфичным и оценивали на три или четыре креста. За счет образования вокруг клеток светящегося комплекса ободка микробы выглядят несколько длиннее и толще, чем при обычной световой микроскопии. Иногда указанные антибактериальные сыворотки, особенно типа А и С, вызывали слабо заметное межтиповое свечение микробов Кл. перфрингенс, оцениваемое на один и, очень редко, на два креста.

При использовании непрямого варианта препараты обрабатывали первоначально немечеными антибактериальными сыворотками (А, В, С и Д), затем — во второй стадии — антмеидовой флуоресцирующей сывороткой.

В этих случаях микробы Кл. перфрингенс светились так же, как и в прямом методе.

При отрицательном результате бактерии просматривались в поле зрения микроскопа в виде слабо заметных серых палочек.

Следует отметить, что специфическое окрашивание микробов во многом зависит от правильной техники приготовления препаратов. Для этого мы предварительно готовили взвесь микробов, содержащую 0,5—1 млрд, клеток в 1 мл, из которой затем изготавливали тонкие мазки площадью примерно 0,5 ем 2 .

В мазке, приготовленном из неразведенной культуры клеток, микробы располагались очень густо и слабо окрашивались, что не давало возможности судить о специфичности свечения.

Мы испытывали различные способы фиксации мазков перед окрашиванием: ацетоном, этиловым и метиловым спиртами, над пламенем спиртовки, а так же соляной кислотой при температуре 4°, 18—20° продолжительностью от 2 до 40 минут.

Установлены хорошие результаты гяри фиксации этиловым или метиловым спиртами при комнатной температуре в течение 7— 10 минут. Оптимальное время окрашивания мазков в термостате при 37° составляло 20 минут, е при комнатной температуре — 40 минут.

При микроскопировании мазков рекомендуется на покровное стекло наносить нефлуоресцирующее иммерсионное масло или же его заменитель — диметилфталат. Исследованиями установлено, что эти дефицитные препараты с успехом можно замернить чистым глицерином или вазелиновым маслом. Положительно окрашенные с использованием глицерина препараты при хранении в холодильнике не теряли специфического свечения в течение восьми месяцев (срок наблюдения). При исследовании таких мазков под микроскопом еще можно увидеть красивую панораму, представляющую собой равномерно расположенные микробы с ярко светящимся золотистого цвета ободком вокруг темного тела клетки.

При постановке люминесцентно-серологической реакции определенное значение имеет и возраст изучаемых культур. Наибольшая интенсивность свечения у Кл. перфрингенс начиналась с 6— 7-часового роста и удерживалась на этом уровне в еченм,е суток, а в последующие сутки снижалась с 4-х крестов до 3-х- Наряду с этим уменьшалось количество специфически окрашенных клеток.

Помимо идентификации музейных штаммов этот метод, параллельно с бактериологическими исследованиями,, испытывали в Республиканской и Кочубейокой ветлабораториях при установлении диагноза на вышеуказанные анаэробные болезни.

В процессе типизации 67 выделенных токоиген1ных культур Кл. перфрингенс антибактериальными флуоресцирующими сыворотками в реакции иммунофлуоресценции в 46 случаях установлен пип Д, в четырнадцати — С, в трех — (В, в двух — А. В то же время микро орган и з м ы двух культур не реагировали ни с одним

из меченых глобулинов.

Ценным диагностическим тестом является люминесцентно-микроскопическое исследование мазков-отпечатков из пораженных участков кишечника, брыжеечных лимфоузлов и паренхиматозных органов.

В положительных случаях на препаратах, приготовленных из различных участков кишечника и мезентериальных лимфоузлов, наблюдали большое количество микробов Кл, перфрингенс, ярко окрашенных мечеными глобулинами.

При энтеротоксемии, вызванной типом С, аналогичных микробов обнаруживали также в мазках-отпечатках из печени, селезенки, почек, сердца и надпочечников

В результате исследования препаратов, изготовленных из кишечника и мезентериальных лимфатических узлов овец, павших от других причин, очень редко обнаруживались специфически светящиеся микробы Кл. перфрингенс при просмотре даже в 20—30 и более полях зрения.

Этот тест позволяет не только обнаружить в течение одного-двух часов обеемененность органов микроорганизмами Кл. 'перфрингенс, но и одновременно установить типы возбудителя знте-ротоксемии.

Наряду с испытанием изготовленных в нашей лаборатории антибактериальных и антитоксических сыврроток Кл. лерфрин-генс мы проводили исследования, направленные на /выяснение возможности использования фабричных типоспецифических антитоксических сывороток для люминесцентно-серологической диагностики инфекционной энтеротоксемии овец и анаэробной дизентерии ягнят.

Результаты этих исследований показали, что антитоксичеокие сыворотки типа А, В, С, Д также окрашивали гомолюпичные музей мые штаммы и выделенные культуры Кл. перфрингенс на три и четыре креста. Однако при их использовании нередко отмечалось межтиповое свечение микробных тел, оцениваемое на один или два креста. Это затрудняло точную типизацию культур Кл. перфрингенс, В то же время этот метод позволяет дифференцировать микробы группы Кл. перфрингенс от других видов шю-стридий.

Таким образом, исследованиями уста новлемо, что предлагаемый метод иммунофлуоресцентной дифференциации микроорганизмов группы Кл. перф|рингенс с использованием антибактериальных меченых глобулинов очень удобен прост и весьма эффективен, а главное — требует минимального /времени для пос-танов!ки диагноза на инфекционную эн те р от о ксемию овец и анаэробную дизентерию ягнят*

ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНЦИИ ПРИ ДИАГНОСТИКЕ ИНФЕКЦИОННОЙ ЭНТЕРОТОКСЕМИИ ОВЕЦ И АНАЭРОБНОЙ ДИЗЕНТЕРИИ ЯГНЯТ

Рекомендуется ветеринарным лабораториям Дагестанской АССР.

Метод основан на выявлении различных типов Кл. перфрин-гене в мазках из кишечника и других паренхимато зных .органов, а также из культур, выделенных из патмет-ерлала, путем .иополь-завання реакции и!мму!нофлуоре|С)Це1нции.

1. ЛЮМИ1Несцентньi:й микрОс-лок любой марки (МЛ-2, МЛ-4, МЯД, ЛЮМАМ или обычный биологический микроскоп МБИ-1, МБИ-3, МБ'И-4) в сочетании с люминесцентным Осветителем ОИ-17.

3. Этиловый или метиловый спирт.

4. Предметные и покровные стекла.

5. Смесь глицерича с физиологическим раствором в соотношении 9:1 иш нефЛ'уюреюцир^щее иммерсионное масло.

6. 0,15 или 0,88%-ный раствор хлористого натрия.

7. Кюветы или чашки Петри,

Препараты готовят из исследуемых орланов (кишечник, мезентериальный лимфатический узел, печень, селезенка, сердце, пачки и надпочечники) в виде отпечатков или мазков. В последнем случае Органы разрезают на мелке кусочки, которые тщательно растирают б ступке с физиологическим раствором >в соотношении 1 : 5.

После осаждения крупных частиц из разных участков поверхности суспензии .готовят по 3—4 мазка на тщательно обезвреженных предметных стеклах. Для изготовления отпечатков из органов вырезают кусочки размером 1X1 см и слегка

фламбируют их над пламенем. Затем стерильными ножницами отсекают часть кусочка и срезом делают на предметных стеклах отпечатки.

Часть мазков и отпечатков окрашивают по Граму и микросюо-пируют для определения микробов Кл. перфрингенс.

Вторую часть отпечатков после высушивания в течение 7— 10 минут фиксируют метиловым или этиловым спиртом.

Определение возбудителей инфекционной энтеротоксемии и анаэробной дизентерии в культуре

Для выделения культур возбудителя, не дожидаясь результатов первичной световой и люминесцентной микроскопии, из патм-атериала делают посевы на общепринятые для этих -возбудителей среды.

Исследуют только чистые или смешанные культуры сразу же после появления макроскопически видимого роста. Обычно такой рост у Кл. перфрингенс типа В наблюдается через 3 часа-, у типа С и Д — через 6 часов. Мазки готовят очень тонкими, чтобы в поле зрения микроскопа было несколько десятков микробных клеток. Густые мазки для исследований непригодны. На одном предметном стекле готовят 3—4 мазка площадью не более 1 см й . Место нанесения микробов очерчивают восковым карандашом, подоуш;ив₁ают, маркируют и фиксируют спиртами. После фиксации и испарения спирта мазки ополаскивают физраствором. На слегка подсушенный мазок наносят соответствующую сыворотку, предварительно раз веденную физраствором СрН 7,4), как указано на этикетке ампулы.

Окрашивание .мазков производят прямым или непрямым методами.

При непрял ом методе на мазок наносят по 1—2 кашли фабричной типо-специфической сыворотки Кл. перфрингенс тиле А, В, С и Д (каждой в -отдельности). Предварительно устанавливают их красящий титр и рабочее разведение. Красящий питр этих сывороток определяют путем их титрования в разведениях 1 : 1 1 :2, 1 : 4, 1 : 8, 1 : 16 и т. д. с люминесцирующей сывороткой. Затем микроскопией устанавливают максимальное разе едение, которое дает характерное свечение гомологичных микробов Кл. перфрингенс, оцениваемое в три и четыре креста. Это раз-

ведение является титром сыворотки, Концентрация рабочего разе едения сыворотки должна быть -в две раза больше «концентрации красящего титра. В дальнейших исследованиях их используют без предварителынюй проверки.

Окрашивание мазков прямым методом

На мазки наносят 1—2 капли флуоресцирующей антибактериальной сыворотки типа В, С и Д каждую в отдельности е рабочем титре, указанном на ампуле, «помещают во влажную камеру (закрытые чашки Петри или кюветы) м 20 мин. выдерживают в термостате при температуре 37°, а «в условиях комнаты —40 мин. Затем предметные стекла в течение 10 мин, тщательно промывают в физио логическом растворе или дистиллированной -воде, препараты подсушивают на воздухе и просматривают под люминесцентным микроскопом.

На поверхность препаратов, окрашенных прямым или непрямым методом, наносят буферную смесь из 9 частей глицерина и 1 части физраствора, накрывают покровным стеклом. «На покровное стекло наносят ту же буферную смесь или нефлуорес-цмрующее иммерсионное масло и исследуют под люминесцентным микроскопом с использованием светофильтров СЗС-14-4, БС-8-2, ФС-1-2 при силе тока 4А, объективе 90, апертуре 1,25, окуляре 5. Люминесцентный микроскоп устанавливают в затемненной части комнаты.

Результаты люминесцентной микроскопии оценивают по четырехкрестовой системе:

++ + Н--очень яркая золотисто^зеленого цвета люминесцен

ция по периферии морфологически типичных микробов, четко контрастируемая с телом клетки;

Н“ + + — яркая люминесценция периферии микробной клетки;

“Н- — недостаточно яркое, зеленовато-желтое свечение микробов;

4- — еле заметный светящийся ободок вокруг микробной клетки;

--отсутствие свечения микробных клеток.

При положительных случаях в мазках-отпечатках из кишечника, мезентериальных лимфоузлов, а также в м-азках из вьделенных культур обнаруживается огромное количество Кл. перфрин-генс, светящихся на +++ и ++++ при окрашивании типоспецифическими сыворотками В, С и Д. При свечении микробных тел на ++ и + результат следует считать сомнительным.

Реакцию иммунофлуоресценции необходимо ставить с-о следующим контролем:

1. Окрашивание м-аз^в одной антибараньей меченой сывороткой <отрицательная реакция).

2. Окрашивание мазков после присоединения типоопецифи-ческой сыворотки гетерологичной меченой сывороткой (отсутствие свечения).

3. Окрашивание известных микробов Кл. перфрингенс непрямым методом (положительный контроль).

Таким образом, диагноз на инфекционную энтеротоксемию ец и анаэробную дизентерию ягнят следует считать установленным при наличии к л и н и ко-эни зоот ол отчески х и лаггологоана-томических данных и обнаружении специфически светящихся микробов Кл. перфрингенс в мазках-отпечатках из пораженных органов и свежевыделен1ных культур, окрашенных сыворотками типа В, С и Д. При сомнительном или отрицательном результате реакции иммунофлуоресценции проводят полное бактериологическое исследование.

Читайте также: