Селективная добавка для выделения трихомонад

Назначение набора для визуального выявления Trichomonas vaginalis

Набор СВТ предназначен для выявления Trichomonas vaginalis в отделяемом из цервикального канала и влагалища, в семенной жидкости, в секрете предстательной железы, в отделяемом уретры и в центрифугате мочи.

Набор рассчитан на проведение 100 определений наличия Trichomonas vaginalis в исследуемом материале.

Принцип метода

Метод определения основан на использовании питательной среды, компоненты которой обеспечивают оптимальные условия для роста Trichomonas vaginalis до количеств, необходимых для их визуальной оценки с помощью микроскопа, а селективный компонент подавляет рост простейших грибов и большинства представителей бактериальной флоры, потенциально содержащихся в образце.

Состав набора для визуального выявления Trichomonas vaginalis

• Питательная среда для обнаружения Trichomonas vaginalis, лиофилизированная – 1 фл.

Потенциальный риск применения набора - класс 2а.

Набор СВТ предназначен только для in vitro диагностики. Компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными.

При работе с набором следует соблюдать "Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.).

• термостат, поддерживающий температуру 37 ± 1 °С;
• дозаторы пипеточные или пипетки стеклянные.

• Приготовление жидкой питательной среды

Во флакон с лиофилизированной питательной средой для выделения Trichmonas vaginalis добавить 100 мл дистиллированной воды. Содержимое флакона перемешать до полного растворения (в течение 1 мин.). Полученный прозрачный раствор от светло-соломенного до янтарного цвета разлить по 1 мл в пробирки для микропроб, закрыть и хранить до применения при температуре 2 - 8 °С не более 1 недели или при температуре минус 7 °С и ниже не более 3 месяцев.

Помутневшие в процессе хранения среды использовать для определения нельзя!

Приготовление проб для исследования 1

Перед взятием материала для посева обследуемому пациенту необходимо, по крайней мере, на 1 - 2 дня исключить применение местного лечения; в противном случае это может повлиять на результаты культивирования.

У мужчин материал отбирать после длительного воздержания от мочеиспускания в течение времени не менее 3 - 4 часов. Отделяемое слизистой оболочки брать петлей из глубины уретры, предварительно очистив ее отверстие тампоном, смоченным изотоническим раствором хлорида натрия. При малом количестве выделений до взятия материала необходимо провести массаж уретры в дистальном направлении.

У женщин образец из уретры и цервикального канала отбирать в зеркалах ватным тампоном, специальной щеточкой или ложечкой. Необходимо тщательно очистить наружное отверстие цервикального канала (при помощи большого марлевого тампона) от вагинальных выделений для предотвращения возможной контаминации.

Для более успешной диагностики забор материала необходимо производить из разных очагов поражения (уретра, предстательная железа и семенные пузырьки – у мужчин, влагалище, уретра, цервикальный канал - у женщин) в сочетании с анализами центрифугата свежесобранной мочи.

1 Методические указания № 2003/34 "Обеспечение качества подготовки образцов биологических материалов для цитологических исследований", МЗ РФ, Москва, 2003 г.

Посев и учет результатов

Посев материала в маркированные пробирки с предварительно прогретой до 37 °С питательной средой осуществлять щеточкой или тампоном однократного применения.

Пробирки со средой сразу после посева поместить в термостат при температуре 37 °С. Рекомендуется проводить просмотр сред на наличие Trichomonas vaginalis через 48 - 96 часов после посева, при отрицательном результате - еще через 7 - 10 дней.

При обильном росте Trichmonas vaginalis можно обнаружить методом микроскопии уже через 48 часов после посева. Наиболее интенсивно трихомонады размножаются в придонном слое среды, поэтому при контроле посевов материал надо брать с помощью пастеровской пипетки со дна пробирки, после чего на предметном стекле приготовить препарат "раздавленная капля" и просматривать в затемненном поле микроскопа при увеличении в 400 - 600 раз. При обильном росте в поле зрения можно видеть 5 - 50 и более трихомонад. При микроскопии среди клеточных элементов (эпителий, лейкоциты) трихомонады различают по их форме (грушевидная, овальная), характерны толчкообразные, поступательные и вращательные движения за счет жгутиков и ундулирующей мембраны.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к микробиологии, и может быть использовано для культуральной диагностики трихомоноза. Питательная среда содержит твердую и жидкую фазы. Твердая фаза представлена коагулированной сывороткой. Жидкая фаза содержит питательную среду 199, раствор натриевой соли бензил-пенициллина и раствор стрептомицина. Изобретение позволяет повысить чувствительность питательной среды для выделения трихомонад. 2 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно микробиологии, и может быть использовано, в частности, для культуральной диагностики трихомоноза.

Так, например, начиная с 40-х годов прошлого века широкое распространение получила среда Джонсона-Трасселя (CPLM), которая в модификации ЦНИИКВИ представляет собой жидкую среду зеленоватого цвета, обладающую высокими ростовыми качествами, однако она нестандартна (готовится в лабораторных условиях), имеет ограниченный срок годности.

К середине 90-х годов сложилась парадоксальная ситуация: при эпидемии инфекций передаваемых половым путем (ИППП), и в том числе трихомоноза, в России фактически отсутствовал производственный выпуск стандартных питательных сред для культуральной диагностики этого заболевания. В практике использовались среды, приготовленные в лабораториях, что, естественно, сказывалось на их качестве.

В то же время имеется настоятельная необходимость шире использовать культуральную диагностику трихомоноза, необходимую при постановке диагноза, особенно при сомнительных результатах микроскопии, а также при хроническом рецидивирующем инфекционном процессе, обследовании детей, беременных женщин и ряде других случаев.

Использование питательной среды с высокими ростовыми показателями, стандартного состава и простотой приготовления несомненно приведет к адекватной диагностике такого широко распространенного, отягощенного разнообразными осложнениями заболевания, как мочеполовой трихомоноз.

Наиболее близкой по составу к предлагаемой среде является среда следующего состава: питательная среда 199 - 10 мл, солевой раствор - 100 мл, дрожжевой автолизат - 10 мл, сыворотка крупного рогатого скота или лошади - 30 мл, 20%-ный раствор мальтозы - 10 мл, пенициллин - 160000 ЕД и стрептомицин - 160000 ЕД (Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций. - Москва: Медицинская книга, Н.Новгород: Издательство НГМА, 2003. C.180-181).

Однако применение этой среды не исключает необходимость последующей микроскопии с целью установления наличия трихомонад в исследуемом материале. Целью представленного изобретения является повышение чувствительности среды для выделения трихомонад.

Поставленная цель достигается тем, что предлагаемая питательная двухфазная среда содержит твердую фазу, представленную коагулированной сывороткой, в количестве 5 мл и жидкую фазу, содержащую питательную среду 199, в количестве 5 мл с раствором натриевой соли бензил-пенициллина 10000-30000 ЕД /мл и раствором стрептомицина 10000-30000 мкг/мл - 1 мл соответственно.

Предлагаемая среда была апробирована на кафедре общей и биоорганической химии Астраханской государственной медицинской академии на 50 образцах материала от больных в течение 2003 г.

Ниже приводятся результаты апробации.

Для приготовления среды используют компоненты в следующих количествах, мл:

Р-р натриевой соли бензил-пенициллина 10000 ЕД /мл - 1

Р-р стрептомицина 10000 мкг/мл - 1

Антибиотики разводят каждый в 1 мл 0,9% стерильного раствора хлорида натрия и асептически вносят в среду 199.

Посев исследуемого материала осуществляют на поверхность коагулированной сыворотки штрихом бактериологической петлей. Затем на сыворотку наслаивают среду 199 с антибиотиками.

Инкубацию посевов осуществляют при 37°С до 7 суток при отсутствии роста в течение первых дней. При наличии трихомонад в исследуемом материале на границе раздела сред отмечается их обильный рост. Бесприборная визуализация роста трихомонад возможна еще и потому, что среда 199 содержит цветной индикатор, который в случае роста клеток и как следствие этого изменения рН раствора изменяет цвет с красного на желтый.

Среду готовят в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующих количествах, мл:

Р-р натриевой соли бензил-пенициллина 20000 ЕД /мл - 1

Р-р стрептомицина 20000 мкг/мл - 1

Антибиотики стерильно разводят каждый в 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия и асептически вносят в среду 199.

При наличии трихомонад в исследуемом материале на границе раздела сред отмечается их обильный рост при изменении цвета жидкой фазы.

Среду готовят в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующих количествах, мл:

Р-р натриевой соли бензил-пенициллина 30000 ЕД /мл - 1

Р-р стрептомицина 30000 мкг/мл - 1

Антибиотики разводят каждый в 1 мл 0,9% стерильного раствора хлорида натрия и асептически вносят в среду 199.

При наличии трихомонад в исследуемом материале на границе раздела сред отмечается их обильный рост и изменение цвета жидкой фазы.

При посеве на предлагаемую среду материала от больных рост сопутствующей бактериальной флоры подавляется.

В таблице 1 даны результаты испытания трех вариантов предлагаемой среды.

Преимуществом предлагаемой среды является ускорение роста трихомонад по сравнению с ростом на среде Био-Рад в связи с тем, что среда 199 содержит питательные компоненты, необходимые для роста эукариотических клеток, к которым и относятся трихомонады. В таблице 2 даны результаты чувствительности известной и предлагаемой сред при посеве трихомонад.

Кроме того, наличие роста трихомонад при посеве их на предлагаемую среду считывается визуально в результате изменения цвета рН-индикатора, в связи с чем отпадает необходимость в последующей микроскопии, что ускоряет процесс постановки диагноза и делает анализ менее трудоемким и дорогостоящим.

Таким образом, использование новой среды значительно повышает чувствительность бактериологического исследования, направленного на выявление трихомонад в материале от больных и обследуемых лиц.

Изобретение может быть рекомендовано к применению в практическом здравоохранении в венерологических, урологических и андрологических учреждениях, а также в научной работе лабораторий соответствующего профиля.

Классы МПК:	C12N1/10 простейшие; питательные среды для них C12R1/90 простейшие
Автор(ы):	Бойко Оксана Витальевна (RU) , Николаев Александр Аркадьевич (RU) , Бойко Андрей Виталиевич (RU) , Плосконос Мария Вячеславовна (RU) , Луцкий Дмитрий Леонидович (RU) , Гудинская Наталья Игоревна (RU)
Патентообладатель(и):	Николаев Александр Аркадьевич (RU)
Приоритеты:

Таблица 1 Ингибирующее влияние на сопутствующую микрофлору и стимулирующее влияние на рост трихомонад компонентов испытуемой среды
Содержание ингредиентов в среде	Наличие визуального роста трихомонад через 24 ч инкубации	Наличие роста сопутствующей микрофлоры через 24 ч инкубации
Минимальное	Слабый рост	Единичные колонии бактерий на поверхности твердой фазы
Оптимальное	Обильный рост	Отсутствие роста
Максимальное	Умеренный рост	Отсутствие роста

Таблица 2 Результаты посевов трихомонад на испытуемую среду и среду Био-Рад
Посевная доза, число клеток в 1 мл	Результаты посевов на сравниваемые среды (количество часов, после которых рост трихомонад фиксируется визуально)
Предлагаемая среда	Среда Био-Рад
100	48	96
500	24	48

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Питательная двухфазная среда для выделения трихомонад, содержащая твердую фазу, представленную коагулированной сывороткой в количестве 5 мл, и жидкую фазу, содержащую питательную среду 199, в количестве 5 мл с раствором натриевой соли бензил-пенициллина 10000-30000 ЕД/мл и раствором стрептомицина 10000-30000 мкг/мл - 1 мл соответственно.

Владельцы патента RU 2381269:

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при диагностике трихомонадной инфекции. Питательная среда с селективной добавкой содержит пептон, дрожжевой экстракт, L-цистеин, мальтозу, NaCl, KCl, сыворотку крови лошади, пенициллин G, стрептомицин, амфотерицин-В, воду. Изобретение позволяет повысить скорость роста биомассы Trichomonas vaginalis (число простейших в культуре уже через 20 часов инкубации достигает 5×10 4 особей в 1 мл среды) при полном подавлении посторонней микрофлоры и снизить концентрацию антибиотика, проявляющего противогрибковую активность. 2 н.п. ф-лы.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для культуральной диагностики трихомоноза.

В настоящее время известны различные питательные среды для культивирования трихомонад и селективные добавки к ним.

В частности, известна (RU 2272834, 27.03.2006) питательная двухфазная среда для выделения трихомонад, содержащая:

- коагулированную сыворотку в количестве 5 мл,

- питательную среду 199 в количестве 5 мл,

- раствор натриевой соли бензил-пенициллина 10000-30000 Ед/мл в количестве 1 мл,

- раствор стрептомицина 10000-30000 Ед/мл в количестве 1 мл.

Известна селективная добавка для выращивания и культивирования трихомонад (каталожный номер FD099), содержащая

стрептомицин в количестве 500,00 мг,

бензил-пенициллин в количестве 125000 ME.

Известна среда Trichosel broth (производитель Becton Dickinson, США) для выращивания и культивирования трихомонад (номер по каталогу 211747), содержащая бычий экстракт, дрожжевой экстракт, панкреатический казеин, L-цистеин, мальтозу, агар, хлорамфеникол, метиленовый синий.

Указанные селективные добавки для выращивания и культивирования трихомонад и среды, содержащие селективные добавки, позволяют либо подавить только сопутствующую бактериальную микрофлору, либо являются дорогостоящими и многим лабораториям не доступными и также не позволяют подавлять грибковую сопутствующую микрофлору.

Кроме того, из анализа уровня техники известна (Урогенитальный трихомониаз. Актуальные вопросы диагностики и лечения, Пособие для врачей, 2001) питательная среда, содержащая в 1 л дистиллированной воды:

Белковый порошок 12,5 г,

Хлорид калия 0,1 г,

Хлорид кальция 0,1 г,

Двууглекислый натрий 0,1 г,

Аскорбиновая кислота 0,6 г,

Лимонная кислота 0,12 г,

Оротоновая кислота 0,075 г,

Лактат кальция 1,0 г,

Лошадиная сыворотка 220 мл.

Среда содержит в качестве антибиотиков: пенициллин в количестве 1000 мкг/мл, стрептомицин, в количестве 1000 мкг/мл, амфоглюкамицин в количестве 40 ед/мл. Данная питательная среда выбрана в качестве ближайшего аналога изобретения.

К недостаткам указанной среды может быть отнесен недостаточно высокий и недостаточно быстрый рост биомассы Trichomonas vaginalis.

Задача заявленного изобретения заключается в создании новой селективной добавки и среды, содержащей добавку, позволяющую ликвидировать вышеуказанные недостатки известных сред и селективных добавок.

Технический результат заключается в повышении скорости роста биомассы Trichomonas vaginalis (число простейших в культуре уже через 20 часов инкубации достигало 5×10 4 особей в 1 мл среды) и снижении концентрации антибиотика, проявляющего противогрибковую активность.

Указанный технический результат достигается в результате использования в питательной среде для выделения и культивирования Trichomonas vaginalis селективной добавки, содержащей:

пенициллин G в концентрации 900-1100 ед/мл,

стрептомицин, в концентрации 1030-1260 ед/мл,

амфотерицин-В в концентрации 4,5-5,5 ед/мл.

Питательная среда для выделения и культивирования Trichomonas vaginalis содержит на 100 мл среды:

Пептон 1,44-1,76 г,

Дрожжевой экстракт 1,26-1,54 г,

L-цистеин 0,9-1,1 г,

Мальтоза 0,72-0,88 г,

сыворотка крови лошади 18,0-22,0,

пенициллин G в концентрации 900-1100 ед/мл,

стрептомицин в концентрации 1030-1260 ед/мл,

амфотерицин-В в концентрации 4,5-5,5 ед/мл,

Селективные питательные среды могут быть получены сразу в жидкой форме, а также сухой и лиофильно высушенной форме с последующим разведением их водой перед использованием. Получение селективных питательных сред в лиофильной форме проводили путем смешивания всех входящих в их состав компонентов, в том числе и воды, с последующей лиофилизацией биологических объектов в замороженном состоянии под вакуумом. Оптимальными условиями лиофильного высушивания питательной среды и селективной добавки к питательной среде для выделения и культивирования Trichomonas vaginalis, позволяющими сохранять их биологические и физико-химические свойства, являются: длительность сушки в течение 8 часов, давление 50 Pa и температура замораживания конденсатора 40°С.

Получение селективных питательных сред в порошковидной форме осуществляли смешиванием входящих в их состав компонентов без воды. В целях обеспечения стерильности разрабатываемых диагностикумов, полученных в порошковидной форме, применялась электронно-лучевая стерилизация. Высоконадежная стерильность среды была обеспечена при дозе излучения 25 кГр. В качестве источника ионизирующего излучения были выбраны ускоренные электроны, так как при их воздействии наблюдалась максимальная антимикробная эффективность.

Изобретение может быть проиллюстрировано следующими примерами.

Пример 1. Способ получения селективной питательной среды.

В мерный химический стакан объемом 100 мл вносили сухую питательную среду, содержавшую:

Дрожжевой экстракт 1,4 г,

сыворотка крови лошади - 20,0.

Добавляли дистиллированную воду объемом 70 мл. Тщательно перемешивали на магнитной мешалке компоненты селективной среды до полного их растворения при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем вносили селективную добавку, содержавшую:

пенициллин G в концентрации 1000 ед/мл,

стрептомицин в концентрации 1145 ед/мл,

амфотерицин-B в концентрации 5 ед/мл,

и тщательно перемешивали в течение 15 минут при комнатной температуре. Измеряли рН среды и доводили значение рН питательной среды до значения 6,0±0,2 (рН Trichomonas vaginalis) путем капельного добавления, по 0,1 молярного NaOH. Объем 0,1 NaOH, потраченного на доведение рН-среды, равнялся 10 мл.

После приготовления жидкой питательной среды ее автоклавировали, после чего она была готова к посеву культур Т. vaginalis.

Для посевов на селективную питательную среду для выделения и культивирования Trichomonas vaginalis применялись культуры Trichomonas vaginalis в объеме 0,1 мл, содержавшие 10 5 микроорганизмов.

Пример 2. Способ культивирования Trichomonas vaginalis.

На питательную селективную среду, полученную в примере 1, осуществляли посев лабораторного штамма Trichomonas vaginalis. Сравнительную оценку диагностической эффективности селективной питательной среды для выделения и культивирования Trichomonas vaginalis проводили путем подсчета количества выросших на среде простейших с использованием камеры Горяева через 18, 20, 24, 48, 72, 96, 120 часов после посева культур на среду. Число простейших в культуре уже через 20 часов инкубации достигало 5×10 4 особей в 1 мл среды, в то время как при проведении опыта согласно прототипу установлено, что число трихомонад в культуре достигало 5×10 4 особей в 1 мл среды, только через 24 часа инкубации.

Методика подсчета живых микроорганизмов состояла в следующем: пробирки с культурами Trichomonas vaginalis осторожно встряхивали для обеспечения полного перемешивания осадка, содержавшего трихомонады, с надосадочной культуральной средой с целью равномерного распределения трихомонад во всем объеме среды. Со дна пробирки со средой, содержавшей Trichomonas vaginalis, стерильной пастеровской пипеткой брался материал (1 капля), которым заполнялась камера Горяева и производился подсчет трихомонад в 5-и расположенных по диагонали больших квадратах, каждый из которых разделен на 16 маленьких квадратов.

Количество трихомонад вычислялся по формуле:

X - количество микроорганизмов в 1 мм 3 культуры;

а - количество микроорганизмов в 5-и больших квадратах;

б - число маленьких квадратов в 5-и сосчитанных больших квадратах;

4000 - маленькие квадраты, объем которых всегда равен 1/4000 мм 3 .

Для того чтобы получить число трихомонад в одном миллилитре среды, число Х умножалось на 1000, так как 1 мл 3 равен 1000 мм 3 .

Одним из важных критериев оценки диагностической эффективности селективной среды для выделения и культивирования Trichomonas vaginalis являлась оценка морфологических свойств культур Trichomonas vaginalis и их подвижности. Типичные трихомонады имели округлую или овальную форму, ундулирующую мембрану и 5 жгутиков; при этом 4 жгутика расположены в передней части трихомонады и 1 - по краю ундулирующей мембраны. Особи с типичной формой активно передвигались, совершая волнообразные движения ундулирующей мембраной и пропеллероподобные движения жгутиками.

Пример 3. Способ выращивания Trichomonas vaginalis.

Опыт проводили аналогично примеру 2, изменяли только концентрацию компонентов селективной добавки, при этом концентрация компонентов варьировала в следующих пределах:

пенициллин G в концентрации 900-1100 ед/мл,

стрептомицин в концентрации 1030-1260 ед/мл,

амфотерицин-B в концентрации 4,5-5,5 ед/мл.

Исследования показали результаты, аналогичные результатам, приведенным в примере 2.

На указанную в примере 1 питательную среду с селективной добавкой производили посев лабораторных штаммов следующих микроорганизмов: S. epidermidis, E.coli, С.albicans, Trichomonas vaginalis. Через 24 часа производили оценку наличия роста штаммов микроорганизмов. Анализ показал, что в результате эксперимента был полностью подавлен рост сопутствующей микрофлоры (S. epidermidis, E.coli, С.albicans), при обильном росте лабораторного штамма Trichomonas vaginalis.

Как видно из представленных примеров, изобретение позволяет повысить скорость роста биомассы Trichomonas vaginalis (число простейших в культуре уже через 20 часов инкубации достигало 5×10 4 особей в 1 мл среды) при полном подавлении посторонней микрофлоры и снизить концентрацию антибиотика, проявляющего противогрибковую активность.

1. Селективная добавка к питательной среде для выделения и культивирования Trichomonas vaginalis, включающая антибиотик, отличающаяся тем, что в качестве антибиотика содержит: пенициллин G в концентрации 900-1100 ед./мл, стрептомицин в концентрации 1030-1260 ед./мл и амфотерицин-В в концентрации 4,5-5,5 ед./мл.

2. Питательная среда для выделения и культивирования Trichomonas vaginalis, содержащая на 100 мл среды:

Сухие питательные среды для микоплазм

Информация о продукции

Кол-во грамм на литр среды

Frey mycoplasma broth base

Основа бульона для микоплазм (по Фрею)

Эту среду с добавкой лошадиной сыворотки используют для культивирования микоплазм птичьего происхождения. Рекомендуемая добавка: RM1239 – 2,25 л на 500г среды.

рекомендуется для выделения и культивирования микоплазм, трихомонад или стрептококков
Рекомендуемые среды: M1050-2,25л. Хранить при t (-20С)

Mycoplasma urogenital broth base

Основа бульона для урогенитальных микоплазм

Эта среда рекомендуется для селективного культивирования Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum.
Хранить при t +10 до+30С. Рекомендуемые среды: RM1239 – 1,8 литров, FD025 – 35 фл, FD175 – 35 фл, FD157 – 35 фл на 500г среды

Vitamino growth supplement

Витаминная ростовая добавка

для культивирования широкого круга микроорганизмов
Рекомендуемые среды: M1374 – 35 фл на 500г среды. Хранить при t +2 +80С

Mycoplasma urogenital selective supplement

Селективная добавка для выделения урогенитальных микоплазм

Рекомендуется для селективного культивирования микоплазм сзязанный с урогенитальной инфекцией. Рекомендуемые среды: М1374-35 фл на 500г среды. Хранить при t +2 +80С

Mycoplasma agar base (PPLO agar base)

Основа агара для микоплазм

Флакон 100г. 500г.

Эта среда с обогащающей добавкой используется для выделения и культивирования микоплазм (PPLO).
Хранить порошок при t +10+300С. Рекомендуемые добавки: RM1239 – 4,2 литра, FD075 – 139 фл.на 500г среды

Mycoplasma cultivation broth base w/o CV

Основа бульона для микоплазм без кристаллического фиолетового

Эта среда с обогащающей добавкой используется для выделения и культивирования микоплазм (PPLO). . Хранить порошок при t +10+300С. Рекомендуемые добавки: RM1239 – 7,2 литра, FD075 – 239 фл. на 500г среды.

Mycoplasma broth base w/ CV (PPLO broth base w/ CV)

Основа бульона для микоплазм с кристаллическим фиолетовым

Эта среда с обогащающей добавкой используется для выделения и культивирования микоплазм (PPLO). Хранить при t +10 до +30С. Рекомендуемые среды: RM1239 – 7,2 литров, FD052 – 7 фл ; FD075 – 239 фл на 500г среды

Рекомендуется для селективного выделения стафилококков и коринебактерий
Рекомендуемая среда: М268-7 фл на 500г среды. Хранить при t +2 +80С

Mycoplasma enrichment supplement

Селективная добавка для выделения микоплазм

Рекомендуется для выделения микоплазм
Рекомендуемая среда: М266-139 фл, М267-238 фл, М268-239 фл., на 500 г среды. Хранить при t +2 +80С

Сердечно-мозговой агар с дрожжевым экстрактом (для культивирования микоплазм и L-форм бактерий)

Данная среда является упрощенной средой для культивирования микоплазм и близких к ним микроорганизмов, а также L-форм бактерий

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Г. Р. Мустафина, З. Р. Хисматуллина, А. Р. Мавзютов, Г. Р. Шакирова

METHOD OF TRICHOMONAS VAGINALIS ISOLATION

Method of identification of Trichomonas vaginalis using nutrient medium with ferric (III) — hydroxide polyisomaltose complex has been elaborated. The method shortens the time of trichomonas vaginalis isolation from patient’s material.

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ TRICHOMONAS VAGINALIS

Г. Р. Мустафина, З. Р. Хисматуллина, А. Р. Мавзютов, Г. Р. Шакирова

Согласно методическим рекомендациям по приготовлению новых питательных сред для культуральной диагностики уроге-нитального трихомоноза, утвержденным Министерством здравоохранения СССР № 10-8/23 от 18.04.77 г., в состав применяемых сред входят мясопептонный бульон (МПБ), препараты печени, минеральные соли, сахара, сыворотка крови человека или животных, солянокислый цистеин и другие ингредиенты.

Известны питательные среды для диагностики урогенитального трихомониаза — среда Джонсона — Трасселя (CPLM), среда СКДС. Данные среды обладают высокими ростовыми качествами, но имеют ряд недостатков [2]. Общими недостатками таких сред являются нестандартность их основы (готовятся в лабораторных условиях), трудоемкость приготовления, ограниченные сроки хранения [2]. Для диагностики необхо-

дим инкубационный период от 5 до 7 дней, являющийся слишком длительным ввиду инфицирования контактов пациента и распространения инфекции [4].

Trichomonas vaginalis — это облигатный паразит, не способный самостоятельно синтезировать макромолекулы (пурины, пири-мидины, липиды, витамины, минералы, аминокислоты и следы металлов), а важнейшие питательные компоненты получает из вагинального, уретрального секрета (путем осмоса и фагоцитоза эпителия и бактериальных клеток мочеполовых путей) [4, 7]. Кластеры с содержанием железа и серы локализуются преимущественно в гидрогеносомах Trichomonas vaginalis, способствуя реализации метаболических процессов клетки [6].

Нами была поставлена цель: повысить чувствительность среды для выделения Trichomonas vaginalis.

Материалы и методы

В питательную среду для выделения Trichomonas vaginalis, содержащую дрожжевой аутолизат, сыворотку крупного рогатого скота, концентрат среды 199 для культур тканей, глюкозу, мальтозу, пептон, L-цистеин, антибиотики (бензилпеницил-лин, ампициллин, стрептомицин, нистатин, амфотерицин-В), добавлено железо [III] гидроксид полиизомальтозат в виде раствора для внутримышечной инъекции в дозе 0,6 мл на 5 мл среды.

сид полиизомальтозат), затем среду заливают слоем стерильного вазелинового масла толщиной 5 мм.

Результаты исследования испытуемой питательной среды представлены в таблицах 1—3.

Технический результат при использо-

Вид Срок идентификации Trichomonas vaginalis после высева (дни)

0,1 мл 0,2 мл 0,3 мл 0,4 мл 0,5 мл 0,6 мл 0,7 мл 0,8 мл 0,9 мл

Trichomonas vaginalis 3-4 3-4 3-4 3-4 3-4 2-3 2-3 2-3 2-3

Динамика проявления роста и идентификация Trichomonas vaginalis из материала от больного

Вид Появление Trichomonas vaginalis (дни) Идентификация Trichomonas vaginalis (дни)

Среда 1 * Среда 2 ** Среда 1 * Среда 2 **

Trichomonas vaginalis 1-2 2-3 2-3 3-4

Динамика проявления роста и подвижности Trichomonas vaginalis

Дни Накопление культуры (кл/мл) Подвижность (%)

Среда 1 * Среда 2 ** Среда 1 * Среда 2 **

3 12,3*103 9,6*103 47,7 26,7

5 8,7*103 4,1*103 19,3 10,3

6 5,1*103 2,6*103 17,4 8,1

вании изобретения — идентификация Trichomonas vaginalis на 2-й день и выявление наибольшего процента подвижных клеток на 3-й день после высева.

Динамика накопления культуры Trichomonas и дальнейшей идентификации Trichomonas vaginalis представлена в таблице 2.

Динамика накопления культуры и подвижности Trichomonas vaginalis представлена в таблице 3.

При оценке подвижности клеток показано, что на 3-й день выявляется наибольший

процент подвижных клеток Trichomonas vaginalis (47,7%), а при увеличении срока культивирования (до 6 дней) отмечена тенденция к снижению количества подвижных форм до 17,4%.

На контрольной среде накопление культуры Trichomonas vaginalis отмечается на 3-й день в среднем до 9,6 *103 кл/мл, снижение количества клеток — на 5-й день до 4,1 * 103 кл/мл и 6-й день культивирования, в среднем до 2,6* 103 кл/мл.

Таким образом, применение новой питательной среды ведет к сокращению сроков выделения Trichomonas vaginalis, что позволяет своевременно установить диагноз и скорректировать назначенную терапию.

1. Беднова В. Н. Методы получения чистой культуры влагалищных трихомонад/ В. Н. Беднова, М. М. Васильев//Вестн. дерматологии и венерологии.— 1985.— № 12.— С. 22—25.

2. Дмитриев Г. А. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций.— М.: Медицинская книга, Н. Новгород: изд-во НГМА, 2003.— 336 с.

3. Теличко И. Н. Диагностика и лечение трихомоноза: микробиологические и иммунологические аспекты: Автореф. дис. . д-ра мед. наук.— СПб., 2007.— 47 с.

4. Урогенитальный трихомониаз: актуальные вопросы диагностики и лечения (пособие для врачей)/В. М. Копылов, Е. Г. Боч-карев, В. М. Говорун и др.— М., 2001.— 40 с.

5. Abonyi A. Examination of nonflagellate and flagellate round forms of Trichomonas vaginalis by transmission electron microscopy/ A. Abonyi//Appl. Parasitol.— 1995.— Vol. 36.— P. 303—310.

6. Schwarts D. E. Comparative pharmacokinetic studies of tinidazole and metronidazole in

man/D. E. Schwarts, F. Jeunet//J. Chemotherapy.— 1976.— Vol. 22.— P. 19—29. 7. Schwebke J. R. Trichomoniasis/J. R Schwebke, D. Burgess//Clin. Microbiol. Rev.— 2004.— Vol. 17.— № 4.— P. 794—803.

G. R. Mustafina, Z. R. Khismatullina, A. R. Mavzyutov, G. R. Shakirova

METHOD OF TRICHOMONAS VAGINALIS ISOLATION

Method of identification of Trichomonas vaginalis using nutrient medium with ferric (III) — hydroxide polyisomaltose complex has been elaborated. The method shortens the time of trichomonas vaginalis isolation from patient's material.

Keywords: trichomonas vaginalis, ferric (III) hydroxide polyisomaltose complex, time of isolation.

Республиканский кожно-венерологический диспансер, г. Уфа,

Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа