Разработка вакцины против сальмонеллеза птиц

Еще фото

По заключению экспертов Всемирной организации здравоохранения сальмонеллез, как зооантропонозная инфекция не имеет себе равных по сложности эпизоотологии, эпидемиологии и трудностями борьбы с ним.

Продолжающийся рост заболеваемости сальмонеллезами во многих странах, увеличение числа сероваров сальмонелл, обнаруженных у птиц, животных и у людей, значительная контаминация сальмонеллами пищевых продуктов животного происхождения, объектов окружающей среды, выдвигают эту инфекцию в ряд важнейших не только ветеринарных, но и медико-экологических и социальных проблем.

В среднем в РФ ежегодно регистрируется около 50000 случаев заболевания сальмонеллезом у человека. Летальность от этой инфекции составляет 0,01-0,02 на 100 тысяч населения, среди детей – 0,03.

Заболеваемость сальмонеллезными инфекциями в январе-июне 2011г. составила 15,4 на 100 тыс. населения, а за аналогичный период 2012 года – 15,8.

Среди выделенных в РФ серотипов сальмонелл, доминирующую позицию занимает Salmonella enteritidis, за ней следуют Salmonella typhimurium и Salmonella infantis.

Особую озабоченность вызывает тот факт, что птица, являясь носителем не адаптированных сероваров сальмонелл, часто не проявляет видимых клинических признаков заболевания. В тоже время, мясо и другие птицепродукты, полученные от них, опасны для здоровья человека

Во внешней среде, возбудитель сальмонеллеза может сохраняться длительное время, а при благоприятных условиях - активно размножаться.

Наряду с предотвращением вертикальной передачи возбудителя болезни, необходимо предотвращать и горизонтальный путь передачи инфекции. Этого можно достичь при высоком уровне стандартов гигиены и биобезопасности.

В профилактике сальмонеллезной инфекцией в птицеводстве должен использоваться системный подход, предусматривающий выполнение ветеринарно-санитарных мероприятий по предупреждению заноса возбудителей заразных болезней в хозяйство, включая проведение мониторинговых диагностических исследований по всей технологической цепи производства, применение эффективных препаратов специфичес­кой и неспецифической профилактики, выявление, и акцентирование внимания на точ­ках критического контроля (НАССР) с целью обеспечения отсутствия сальмонелл в родительском стаде птиц, в кормах и в воде.

Микробиологический диагностический мониторинг включает проведение патологоанатомических и бактериологических исследований биологических объектов: эмбрионов-задохликов, трупов цыплят и кур всех техноло­гических возрастов.

Прижизненный диагностический микробиологический мониторинг включает исследова­ние проб мекония, групповых проб свежего помета от цыплят всех возрастов и кур.

Существенным этапом профилактики сальмонеллеза птиц яв­ляется качественная подготовка инкубационных яиц и контроль за процессом инкубации.

Отбор проб для проведения контрольного исследования рекомендуется проводить в выводном шкафу инкубатора, в первые 10 дней выращивания, далее в 4 и 16 недель. В период яйцекладки исследования должны проводиться каждые две недели.

В обязательном порядке не реже 1 раза в квартал следует проводить исследование персонала, работающего с птицей, на возможное сальмонеллоносительство.

Необходимо проводить микробиологический контроль на сальмонеллез ввозимых и хранящихся в хозяйстве комбикормов и кормовых ингридиентов, а также воды, используемой для поения птиц. Кормление птиц должно осуществляться комбикормами, прошедшими термообработку (гранулированные корма). Кроме того, необходимо вводить в корма органические кислоты или препараты на их основе для предупреждения повторного обсеменения комбикормов сальмонеллами.

Особое внимание следует уделять предубойной подготовке птиц, выбраковывать больных и ослабленных птиц, выдерживать птиц без корма перед убоем. На этапе убоя необходимо обеспечить контроль за соблюдением ветеринарно-санитарных требований, технологического режима первичной переработки (оглушение, обескровливание, температура и продолжительность шпарки, качество эвентерации и туалета тушек). На этапе охлаждения и упаковывания – за соблюдением технологических режимов охлаждения (температура среды охлаждения, соответствие микробиологических показателей среды охлаждения установленным требованиям, проведение исследования произведенной продукции на сальмонеллез), за отсутствием перекрёстной контаминации в процессе охлаждения и после него через оборудование, руки и одежду работников.

Применение антибактериальных препаратов - один из методов контроля бактериальных инфекций при выращивании и содержании птицы. Контролем эффективности их применения также является учет динамики подневного падежа цыплят и учет частоты встречаемых патологоанатомических признаков. Применение эффективных ан­тибиотиков следует проводить под контролем чувствительности к ним культур, выделенных в хозяйстве.

Однако, по мнению многих исследователей и комитета экспертов ВОЗ по сальмонеллезу EFSA (Европейское агентство по пищевой безопасности), проблема не может быть решена только применением антибиотиков и химиопрепаратов. Их постоянное применение приводит к возникновению полирезистентных расс микроорганизмов ( Kolasa A и др., 2007). Инфицированные продукты птицеводства становятся источником генов множественной лекарственной устойчивости для возбудителей опасных для человека. По этой причине в США и многих странах Европы применение антибиотиков в птицеводстве строго регламентируется. В этой связи в комплексе профилактических мероприятий активно рекомендуется использовать методы специфической профилактики.

Сейчас, когда стало понятным, что антибиотики не могут быть панацеей от всех инфекционных заболеваний, появляются все новые данные об использовании для лечения и профилактики инфекционных заболеваний человека и животных бактериофагов - вирусов, специфически лизирующих бактериальные клетки.

Поскольку, бактериофаги инфицируют и убивают бактерии естественным путем, изначально предполагалась возможность их использования в медицине для лечения инфекционных заболеваний, что впоследствии нашло подтверждение. Не менее важна также возможность использования фагов для санации и лечения сельскохозяйственных животных, часто являющихся носителями возбудителей опасных заболеваний.

Таким образом, разработка нетоксичных, специфичных антибактериальных бактериофаговых препаратов и применение их в индустрии производства мяса, является важным этапом на пути получения экологически чистых продуктов питания человека.

В птицеводстве для профилактики сальмонелла-энтеритидис инфекции птиц в последние годы все чаще используют инактивированные вакцины.

Для заражения опытных (иммунных) и контрольных (не иммунных) бройлеров использовали патогенный штамм S. enteritidis 92 Rif/R.

Применение вакцины позволяет достичь стойкого эпизоотического благополучия в птицеводческих хозяйствах по сальмонелла-энтеритидис инфекции и снизить затраты, связанные с регулярными обработками птицы антимикробными препаратами.

Обобщая изложенное можно заключить, что сальмонелла-энтеритидис инфекция птиц является актуальной не только для птицеводства, но и для охраны здоровья людей. В связи с этим поддержание эпизоотического благополучия по сальмонеллезу, поставка населению благополучной по отсутствию сальмонелл птицеводческой продукции возможно только при каждодневном проведении специалистами ветеринарной, зоотехнической и инженерной служб птицеводческого предприятия комплекса общехозяйственных и специальных ветеринарных мероприятий, и внедрение Программы профилактики, оздоровления и системы контроля сальмонелл является объективно обоснованным и целесообразным для применения в хозяйствах

В зарубежных странах с развитым птицеводством в течение длительного времени действуют Программы контроля и надзора за эпизоотическим благополучием хозяйств по сальмонеллезу. Вступление России в ВТО потребует разработки аналогичной Программы, гармонизированной с международными ветеринарно-санитарными требованиями, без которой экспорт птицеводческой продукции в страны ВТО будет ограничен.

В настоящее время ведется работа по созданию Национальной Программы по профилактике сальмонеллезов и контролю за распространением сальмонелл в птицеводстве.

Основой системы контроля сальмонеллезной инфекции в хозяйстве (Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н., 1999) является строгое выполнение ветеринарно-санитарных правил, проведение мониторинговых диагностических исследований по всей технологической цепи производства, применение препаратов специфической и неспецифической защиты.

Контроль, в том числе лабораторный, за поставками населению благополучной в ветеринарно-санитарном отношении птицеводческой продукции и благополучием хозяйств по сальмонеллезу должен осуществляться государственной ветеринарной службой в рамках специальной Программы.

Программа должна предусматривать проведение в птицеводческих хозяйствах обязательного комплекса ветеринарно-санитарных и технологических мероприятий по профилактике сальмонеллеза, использование средств специфической профилактики и проведение микробиологического мониторинга за распространением сальмонелл.

1. Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н., Новикова О.Б. Рекомендации по контролю сальмонелла-энтеритидис инфекции птиц. Санкт-Петербург-Ломоносов, 2005г.

2. Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н., Новикова О.Б, Жук И.П., Байбиков Ю.И. Программа профилактики и оздоровления хозяйств от S. enteritidis-инфекции птиц. НПП АВИВАК-20 лет на благо промышленного птицеводства. Санкт-Петербург, 2010г.

3. Малахеева Л.И. Резистентность микроорганизмов и современная стратегия использования антибактериальных препаратов/ Л.И.Малахеева// Новое в диагностике и профилактике болезней птиц: матер. науч.-практ. конф. 3-4 -июня 2008 г.-СПБ-Ломоносов, 2008.-С.127-134

4. Смирнов Д. Д., Рождественская Т.Н., Кононенко Е.В., Светоч Э. Инактивированные вакцины против сальмонеллеза птиц // Птицеводство.-2011.-№8.-С.35-38.

5. Яковлев С.С., Рождественская Т.Н., Кононенко Е.В. Профилактика сальмонеллеза птиц // Веткорм.-2012.-№3.-С.30-32.

Сальмонеллез – инфекционная болезнь животных и человека. Среди животных и птиц сальмонеллезом болеет преимущественно молодняк (телята, поросята, ягнята, жеребята, щенки пушных зверей, цыплята, утята, гусята, индюшата, попугаи, голуби и т.д.). Болезнь проявляется поражением желудочно-кишечного тракта и септицемией, а при подостром и хроническом течении сопровождается пневмонией и артритами.

Наиболее восприимчивы цыплята до двухнедельного возраста. Первые клинические признаки сальмонеллеза у кур можно заметить через 2-4 дня после заражения. Наиболее частые симптомы – отказ от корма, вялость, угнетение, сонливость, мышечная слабость, слезотечение, выделения из носа, затрудненное дыхание, хрипы. Цыплята старше двух недель заболевают реже, а симптоматика выражена не так явно. Заразившиеся куры, как правило, могут болеть бессимптомно, погибая от воспаления клоаки, оваритов, сальпингитов, желточных перитонитов. У цыплят болезнь может протекать остро, подостро, хронически. У индюшат заболевание протекает чаще подостро.

У водоплавающих птиц сальмонеллез протекает остро и хронически и, как правило, поражает в первую очередь кишечник и печень. В кишечнике изменения сильнее всего выражены в двенадцатиперстной кишке. Клоака заполняется коричневой с белыми хлопьями густоватой жидкостью. Печень увеличена, дряблая, рисунок на разрезе сглажен, сосуды переполнены кровью. Видны невооруженным глазом некротические фокусы величиной с просяное зерно. У утят и гусят – картина серозно-фибринозного перигепатита, перикардита, периспленита. Фибрин в виде пленки снимается с поверхности серозных оболочек, селезенка увеличена, почки набухшие, неравномерно окрашены.

Искоренить сальмонеллез с помощью назначения исключительно химиопрепаратов невозможно. Постоянное использование противобактериальных средств ведет к возникновению полирезистентных штаммов микроорганизмов, в том числе опасных для человека. В связи с этим антибиотики целесообразно применять только в исключительных случаях.

Профилактика в первую очередь основывается на комплектации хозяйств суточными цыплятами или инкубационными яйцами от родительских стад, благополучных по сальмонеллезу.

Кормление птиц осуществляется при этом комбикормами, свободными от обсеменения сальмонеллами. Одновременно кормовые добавки, подстилка также не должна содержать сальмонелл. На предприятии необходимо проводить плановую работу по уничтожению грызунов и насекомых – переносчиков сальмонелл и других возбудителей заразных болезней. Также важно установить регулярный микробиологический контроль птиц, помета, подстилки, кормов, воды, обслуживающего персонала, технологического оборудования, окружающей среды на отсутствие сальмонелл, проводить серологическое исследование сывороток крови птиц на наличие антител к возбудителям сальмонеллеза и при необходимости ПЦР диагностику.

Современная профилактика инфекции основана на двух-трехкратной иммунизации птиц живыми и инактивированными вакцинами. В неблагополучных по сальмонеллезу областях также возможно применять бактериофаги. Вакцинации подлежат только клинически здоровые птицы мясного и яичного направления продуктивности.

Наибольший ущерб птицеводству в настоящее время наносят несколько видов сальмонелл. Сальмонеллы паратифозной группы (S. enteritidis, S. typhimurium и S. infantis) инфицируют птицу, как правило, не вызывая клинических и патологических изменений, и через мясо и яйцо заражают человека, результатом чего являются пищевые токсикоинфекции, иногда заканчивающиеся летальным исходом, особенно у детей и лиц пожилого возраста. Поэтому устранению этих возбудителей должно уделяться первоочередное внимание. Выраженная клиническая патология домашней птицы вызывается S. gallinarum. Это острая или хроническая септическая болезнь птиц, которой наиболее подвержена зрелая птица. Однако этот штамм не опасен для человека.

Аннотация научной статьи по истории и археологии, автор научной работы —

В 1898 г. была организована ветеринарная бактериологическая лаборатория Министерства внутренних дел. В 1918 г. она была переименована в Ветеринарно-бактериологический институт Наркомзема РСФСР. А в 1936 г. на базе этого института был образован ЛенНИВИ ГУВ НКЗ СССР. Многие сотрудники учреждения, внесшие огромный вклад в ветеринарию, начали свою научную деятельность именно в этом учреждении. Именно в этом учреждении начали впервые заниматься болезнями птиц. С сентября 1949 г. при институте создана аспирантура. В 1961 г. в стенах этого института был организован отдел болезней птиц.

Похожие темы научных работ по истории и археологии , автор научной работы —

FARM ANIMALS №1 l ЯНВАРЬ 2015

еринарные преп и инструменты кормовые

В 1898 г была организована ветеринарная бактериологическая лаборатория Министерства внутренних дел. В 1918 г. она была переименована в Ветери-нарно-бактериологический институт Наркомзема РСФСР. А в 1936 г на базе этого института был образован ЛенНИ-ВИ ГУВ НКЗ СССР Многие сотрудники учреждения, внесшие огромный вклад в ветеринарию, начали свою научную деятельность именно в этом учреждении. Именно в этом учреждении начали впервые заниматься болезнями птиц. С сентября 1949 г. при институте создана аспирантура. В 1961 г в стенах этого института был организован отдел болезней птиц.

В сентябре 1964 г. было издано постановление ЦК КПСС «Об организации производства яиц и мяса пти-

Первым директором института был Василий Федорович Гусев - крупный учёный, паразитолог, получивший звание профессора без защиты докторской диссертации. На смену ему пришёл Филипп Самой-лович Кудрявцев. Я к этому человеку отношусь с особой теплотой, потому что это мой учитель. В 1983 г.

FARM ANIMALS №1 l ЯНВАРЬ 2015

директором института стал Рудольф Николаевич Коровин.

50 лет - это небольшая дата для науки, но институт за это время создал немало прекрасных разработок, которые до сегодняшнего времени применяются в практическом птицеводстве. Сейчас многие уже и не знают, что большинство из них родом из нашего института. Это и вакцина против болезни Марека, которую разрабатывал Р. Н. Коровин, и вакцина против ньюкаслской болезни, над которой очень кропотливо работал Ф.С. Кудрявцев, разрабатывая схему профилактики и контроля иммунитета. Мы знаем, что количество ветеринарных проблем (особенно вирусных) в птицеводстве увеличивается, и каждый год приходится сталкиваться с новой инфекцией. Болезней становится всё больше и больше, и институт сразу подключается к разработке средств.

Наиболее важными научными разработками в области вирусологии являются:

• вирусвакцины культуральные сухая и жидкая из штамма FC-126 ВГИ;

• вирусвакцина сухая культуральная ВНИВИП против вирусного энтерита гусей;

• вирусвакцина против реовирусного теносиновита кур сухая культуральная;

• вакцина против ССЯ-76 жидкая инактивированная;

• вакцина жидкая инактивированная против аденовирусного гепатита с тельцами включениями - гидроперикардита;

• наборы для диагностики ССЯ-76 в РЗГА и ИФА, набор компонентов для выявления антител к вирусу ИБК, ИЛТ, реовирусного теносиновита в ИФА, ИББ в ИФА и РДП, аденовирусной инфекции в РДП.

Важные научные разработки в области микробиологии:

• антиген сальмонелла пуллорум эритроцитарный;

• антиген сальмонелла тифимуриум эритроцитар-ный;

• вакцина живая авирулентная против сальмонеллеза водоплавающих птиц;

• препарат СТФ-1/56 жидкий;

• вакцина инактивированная сорбированная против пастереллеза птиц;

• вакцина инактивированная против сальмонелла эн-теритидис - инфекции птиц;

• вакцина против колибактериоза птиц инактивиро-ванная сорбированная;

FARM ANIMALS №1 l ЯНВАРЬ 2015

• набор для диагностики респираторного микоплаз-моза птиц в РА; вакцина инактивированная сорбированная против респираторного микоплазмоза;

• вакцина против хламидиоза (орнитоза) птиц культуральная инактивированная.

Разработки в области паразитологии:

• 7 антипаразитарных препаратов и их смесей - хим-кокцид-7, кокцикол, химиркок, 3,5-ДНБА, бухим-стат-5, кокцидин, никарбазин;

• культура кокцидий для иммунохимиопрофилактики кокцидиоза кур;

• препарат кобакцид для одновременной дезинфекции и дезинвазии птицеводческих помещений;

• вакцина против спирохетоза;

• средство для лечения токсоплазмоза;

• выявлен механизм действия антикокцидийных препаратов на паразита.

Вакцины ГНУ ВНИВИП для профилактики живые:

• метапневмовирусной инфекции - серотипы А, В;

• инфекционной бурсальной болезни;

• вирусного энтерита гусей;

• гриппа птиц из серотипов Н5 и Н7. Новые разработки:

• вакцина инактивированная против вирусного энтерита гусей;

• вакцина инактивированная против инфекционного энцефаломиелита птиц;

• вакцина инактивированная против инфекционной анемии цыплят;

• вакцина инактивированная против анаэробной энте-ротоксемии птиц.

Наука может развиваться лишь при хорошем финансировании. И чем лучше финансируется наука, тем более серьезные результаты она даст. К сожалению, требования, которые сегодня предъявляет ФАНО к оценке деятельности институтов и ученых, основаны на индексации и количестве публикаций. Так правильно ли мы считаем, что учёный - это тот, у кого высокий индекс Хирша или чей труд оценивается по тому, в каких журналах и сколько статей и научных трудов он опубликовал? А может быть, правильно было бы оценивать ученого по тому, как результаты его работы применили на практике? Если бы к науке подходили с такой позиции во все времена, то была ли теория относительности Эйнштейна признана гениальным научным открытием? Вопрос, над которым стоит подумать. ■

480 руб. | 150 грн. | 7,5 долл. ', MOUSEOFF, FGCOLOR, '#FFFFCC',BGCOLOR, '#393939');" onMouseOut="return nd();"> Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Автореферат - бесплатно , доставка 10 минут , круглосуточно, без выходных и праздников

Пименов, Николай Васильевич. Разработка средств и совершенствование методов лечения и профилактики сальмонеллеза птиц : диссертация . доктора биологических наук : 03.01.06 / Пименов Николай Васильевич; [Место защиты: ФГОУВПО "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии"].- Москва, 2012.- 409 с.: ил.

Введение к работе

Актуальность темы. По заключению экспертов Всемирной организации здравоохранения сальмонеллез, как зоонозная инфекция, не имеет себе равных по сложности эпизоотологии, эпидемиологии и трудностям борьбы с ним. Хозяйства, сталкиваясь с проблемой сальмонеллеза, несут большие потери из-за смертности молодняка, снижения продуктивности, качества продукции и наложения ограничительных мероприятий на выпуск продукции. Обсемененные сальмонеллами яйца и мясо птиц являются основными причинами пищевых токсикоинфекций у людей.

Эффективность проводимых мероприятий против сальмонеллеза птиц недостаточна. Антибиотикообработки не позволяют избавить птицу от сальмоносительства, не способны профилактировать и ликвидировать инфекцию, а предотвращают лишь массовое клиническое проявление заболевания (Ленев С.В., Малахов Ю.А., 1995; Куриленко А.Н. 2003; Данилевская Н.В., 2007; WHO,1991; Bole-Hribovsek V., 1998).

Требует совершенствования специфическая профилактика сальмонеллеза птиц с использованием средств активной иммунизации. Не разработана эффективная система специфических мероприятий по борьбе с сальмонеллезом в условиях непромышленного, мелкофермерского, частного птицеводства разных направлений и голубеводства.

Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований являлись разработка средств и методов лечения и профилактики сальмонеллеза птиц, совершенствование системы противоэпизоотических мероприятий, направленных на борьбу с сальмонеллезом птиц.

Для достижения поставленной цели были определены задачи:

1. Выяснить этиологическую структуру сальмонеллеза птиц разных видов, изучить биологические свойства и антибиотикорезистентность возбудителя.

2. Определить вирулентные и иммуногенные изоляты возбудителя со свойствами производственных и контрольных штаммов, провести их депонирование.

3. Определить технологические параметры изготовления и эффективность применения инактивированной вакцины против сальмонеллеза голубей.

4. Выделить и провести селекцию, изучение морфологической структуры и биологических свойств бактериофагов со свойствами производственных штаммов.

5. Сконструировать препараты бактериофагов против сальмонеллеза птиц, оценить их терапевтическую эффективность.

6. Разработать метод для лечения сальмонеллеза птиц с использованием препаратов бактериофагов и пробиотика.

7. Сконструировать и определить оптимальную иммунизирующую дозу ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и ньюкаслской болезни птиц.

8. Разработать технологическую схему производства вакцины ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла птиц.

9. Провести доклинические и клинические испытания предложенной вакцины с целью ее регистрации и сертификации на территории РФ.

10. Усовершенствовать систему противоэпизоотических мероприятий по борьбе с сальмонеллезом птиц разных видов путем введения в нее разработанных средств и методов лечения и профилактики болезни.

Научная новизна. Изучена современная эпизоотическая ситуация по сальмонеллезу у птиц разных видов и направлений содержания.

Впервые проведен анализ свойств большого числа изолятов возбудителей сальмонеллеза голубей и декоративных птиц. Производственные и производственно-контрольные штаммы сальмонелл, выделенные автором, депонированы в коллекции ФГУ ВГНКИ и впервые использованы для создания средств специфической профилактики. Впервые разработана и апробирована вакцина инактивированная полиэтиленгликолевая против сальмонеллеза голубей.

Выделены бактериофаги с высокими литическими свойствами, адсорбционными свойствами, специфичностью действия, изучена их морфологическая структура, антигенное родство. Производственные штаммы бактериофагов, выделенные под руководством и с участием автора, депонированы в коллекции ФГУ ВГНКИ и впервые использованы для создания лечебно-профилактических препаратов против сальмонеллеза птиц. Впервые разработан препарат Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза голубей. Усовершенствованы лечебные средства против сальмонеллеза птиц. Впервые разработан метод селективной деконтаминации для лечения сальмонеллеза птиц с использованием предложенных препаратов бактериофагов и пробиотика лактобифадол.

Усовершенствована система лечебно-профилактических мероприятий при сальмонеллезе птиц с использованием новых средств и методов, разработанных автором или под руководством автора.

Разработанные в ходе работы Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза голубей, Бивалентный бактериофаг против сальмонеллеза птиц, вакцина инактивированная полиэтиленгликолевая против сальмонеллеза голубей рекомендованы для применения в качестве средств лечения и профилактики сальмонеллеза. Предложенные новые средства, а также способы их применения и метод селективной деконтаминации позволяют совершенствовать борьбу с сальмонеллезом птиц.

Автору принадлежат организация и проведение работ по выделению бактериофагов, совместно с аспирантом Чирковой И.В. изучение их биологических свойств и депонирование производственных штаммов, разработка и испытание препарата Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза голубей.

Автор принимал непосредственное участие во всех доклинических, клинических регистрационных испытаниях новых, предложенных им, средств и методов лечения и профилактики сальмонеллеза птиц.

Автору принадлежат анализ и обобщение полученных результатов, концепция совершенствования системы лечебно-профилактических мероприятий против сальмонеллеза птиц с использованием новых средств и методов.

Результаты исследований также доложены на международных, всероссийских и академических школах молодых ученых, научно-практических семинарах, методических совещаниях факультета ветеринарной медицины и факультета повышения квалификации, кафедральном и межкафедральных заседаниях ФГБОУ ВПО МГАВМиБ.

Публикации. По теме диссертации и материалам исследований опубликованы 48 научных работ, в т.ч. 20 статей в научных журналах, из которых 18 – в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, в т.ч. 3 патента, а также 1 монография, 3 рекомендации, 24 статьи в сборниках научных трудов.

Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 307 листах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, сведения о практическом использовании результатов исследований, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы (301 источник, в т.ч. 153 – иностранных авторов). Диссертационная работа содержит 42 таблицы, 19 рисунков, 114 листов приложений.

Владельцы патента RU 2377015:

Группа изобретений относится к области биотехнологии. В качестве антигенов вакцина содержит инактивированные 0,3%-ным формалином и осажденные полиэтиленгликолем высокоиммуногенные штаммы Salmonella typhimurium М-5в t -ДЕП, Salmonella typhimurium Д-1в t-ДЕП и Salmonella enteritidis 25 Яв е-ДЕП с итоговой концентрацией каждого - 2 млрд. мкр. кл. в

1 см 3 препарата. Вакцину вводят внутримышечно в толщу грудной мышцы в дозе 0,5 см 3 с 25-30-дневного возраста дважды с интервалом 35-40 дней. Группа изобретений позволяет снизить поствакцинальные осложнения, повысить сохранность птицы и профилактировать ее заражение в течение 12 месяцев при двукратном введении вакцины, 2 н.п. ф-лы.

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к области ветеринарной биотехнологии.

Целью изобретения является разработка и создание нового вакцинного препарата для профилактики сальмонеллеза голубей.

Среди бактериальных инфекций голубей сальмонеллез занимает одно из ведущих мест. Летальность при этой инфекции может достигать 25-40%, а у молодняка - до 80-100% (Гусев, Вал. В. Сальмонеллезная инфекция у голубей / Вал. В. Гусев, Вик. В. Гусев. - Птицеводство, 2003. - №5. - С.48-53). Ущерб от сальмонеллеза также проявляется отставанием в росте и развитии переболевшей птицы, снижении оплодотворяемости голубок, недополучении приплода, ослаблении защитных сил организма голубей. Одновременно больные голуби и переболевшие голуби-бактерионосители являются возможным источником инфицирования животных и человека.

Исследованиями установлено, что серовариант Salmonella typhimurium (S. typhimurium), относящийся к серогруппе В, - является доминирующим возбудителем сальмонеллеза у голубей (94-98%). В 2-4% случаев первичные сальмонеллезы у голубей вызывает серовариант S. enteritidis.

Существующие способы профилактики сальмонеллеза голубей предусматривают проведение общих ветеринарно-санитарных мероприятий и ориентированы на широкое применение антимикробных препаратов (Бессарабов, Б.Ф. Болезни голубей. Монография /Бессарабов, Б.Ф. - М., 2004. - С.97-103; Шорохов, P.P. Меры борьбы и профилактики сальмонеллеза домашних голубей. / P.P.Шорохов, Е.В.Сусский, Г.А.Абарцумян. // Сб. статей ВГНКИ. - М., 2005. - Т.65. - С.135-140 и другие). Известные способы малоэффективны без активных средств специфической профилактики. Одним из основных способов защиты голубей от заболевания сальмонеллезом является вакцинопрофилактика. Для вакцинации необходимо применять высокоиммуногенную инактивированную вакцину.

Вакцинация живыми вакцинами из штаммов S. typhimurium приводит к дегенеративным изменениям в половом аппарате самок голубей, снижению оплодотворяющей способности и выводимости молодняка - голубят. Кроме того, живые вакцины обладают иммунодепрессивным действием, могут вызвать поствакцинальную болезнь, а циркуляция вакцинного штамма дает положительные результаты периодических контрольных исследований и ограничения на деятельность голубеводов.

Цель изобретения достигается созданием инактивированной вакцины против сальмонеллеза голубей. Технический результат заключается в снижении поствакцинальных осложнений, повышении сохранности птицы, высоком профилактическом эффекте в течение 12 месяцев при двукратном вакцинировании.

Для достижения цели и изготовления вакцины использовали штаммы S. typhimurium М-5в t-ДЕП, S. typhimurium Д-1в t-ДЕП, S. enteritidis 25 Яв е-ДЕП, обладающие способностью индуцировать в организме привитых птиц высокую степень напряженности иммунитета. Штаммы получены выделением из трупов голубей с последующей селекцией в 2003-2004 гг., депонированы в коллекции ФГУ ВГНКИ ветпрепаратов в качестве производственных (справки о депонировании 2744/19 от 01.11.2007, 2741/19 от 01.11.2007, 2743/19 от 01.11.2007 соответственно).

Препарат готовили, высевая лиофильно высушенные штаммы в пробирки с бульоном Хоттингера (с питательностью 120 мг% аминного азота). После восстановления свойств и проверки штаммов на отсутствие диссоциации проводили пересев во флаконы с той же средой. Через 18 часов инкубирования при 37°С расплодку пересевали в реакторы или бутыли в объеме не менее 10% от количества среды. В процессе культивирования и перед инактивацией проводили отбор проб для проверки чистоты роста сальмонелл.

Чистые бульонные культуры инактивировали формалином в объеме 0,3% к общему объему в течение 21-22 дней. Осаждение проводили полиэтиленгликолем в течение 72 часов. Надосадочную жидкость удаляли, осадочную массу ресуспендировали в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия до концентрации каждого штамма 6 млрд. мкр. кл. в 1 см 3 . Итоговая концентрация каждого штамма, используемого в изготовлении вакцины, - 2 млрд. мкр. кл. в 1 см 3 препарата.

Готовую вакцину проверяли на стерильность, чистоту, безвредность, иммуногенность.

Стерильность определяли последовательными посевами из вакцины на питательные среды: МПБ, МПА, Китта-Тароцци, Сабуро. Проверку на чистоту осуществляли изучением мазков с вакциной, окрашенных по Граму. Безвредность изучали путем внутривенного и внутримышечного введения вакцины в 2-кратной дозе с последующим 10-дневным наблюдением, убоем птицы и изучением места введения при вскрытии.

Пример конкретного применения

Вакцину инактивированную полиэтиленгликолевую против сальмонеллеза голубей инъецировали внутримышечно в грудную мышцу в дозе 0,5 см 3 . Вакцинацию проводили с 25-30-дневного возраста дважды с интервалом 35-40 дней.

Пример 1 применения препарата

Лабораторное испытание вакцины инактивированной полиэтилен-гликолевой против сальмонеллеза голубей (контроль иммуногенности) проводили на 20 голубях, беспородных, массой 250-280 г.Для этого были созданы две группы (по 10 голубей) 25-30-дневного возраста: опытная и контрольная, которых кормили и содержали по принципу аналогов. Голубей опытной группы прививали вакциной инактивированной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей в дозе 0,5 см 3 , голубям контрольной группы вводили стерильный изотонический раствор хлорида натрия в той же дозе.

Через 21 день проводили инфицирование голубей обеих групп внутримышечно штаммом S. typhimurium М-2ф t-ДЕП (производственно контрольный) в дозе 5 млн. мкр. кл. Инфицирующую дозу определяли, используя оптический стандарт мутности энтеробактерий ГИСК им. Л.А.Тарасевича. Наблюдение вели 14 дней, учитывали заболевших, павших, проводили бактериологический анализ из патологического материала от трупов (печень, селезенка, кровь из сердца, красный костный мозг).

Сохранность в опытной группе составила 90% при 80%-ной летальности в контроле. Клинические признаки заболевания характеризовались потерей аппетита, одышкой, угнетением, взъерошенностью оперения, диареей. От всех трупов (8 голубей контрольной группы и 1 голубя опытной группы) при бактериологическом исследовании патологического материала: окраска мазков-отпечатков по Граму, культивирование на МПА, МПБ, агаре Эндо, висмут-сульфитном агаре, определение ферментативных свойств на средах Гисса, реакция агглютинации - выделена S. typhimurium во всех пробах.

Т.о. вакцина инактивированная полиэтиленгликолевая против сальмонеллеза голубей обладает высокой иммуногенностью.

Пример 2 применения препарата

Определение эффективности вакцины инактивированной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей в полевых условиях проводили на частной голубятне г.Москвы в сентбяре 2006 года. Общее поголовье голубей составляло 160 птиц, в том числе молодняка до года - 104 головы. В течение предшествующего исследованию года у птиц периодически отмечали случаи болезни со следующими клиническими признаками: отказ от корма, угнетение различной степени, расстройство дефекации с появлением зеленой окраски фекалий, истощение. У взрослых голубей болезнь носила хронический характер, проявляясь поражением суставов ног и крыльев и, как следствие, - адинамией и неспособностью к полету, периодическими расстройствами работы желудочно-кишечного тракта. У молодняка в возрасте до 3-4 месяцев болезнь проявлялась быстро наступающим угнетением, отказом от корма, нервными явлениями. В результате проведенных бактериологических иследований трупов павших голубей, а также патологического материала, полученного при вскрытии внутрисуставных абсцессов больных птиц, поставлен диагноз - сальмонеллез.

Для оздоровления данной голубятни в сентябре 2006 года проводили наряду с комплексом ветеринарно-санитарных мероприятий вакцинацию птицы вакциной инактивированной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей двукратно с интервалом 40 дней в дозе 0,5 см 3 . В качестве контроля на ферме было оставлено 20 взрослых голубей без вакцинации, имевших до лечения поражения, характерные для сальмонеллеза. После лечения антибиотиками они были помечены и оставлены в общем помещении с основным вакцинированным поголовьем. В течение срока наблюдения среди контрольных птиц периодически наблюдали признаки заболевания в виде угнетения, отказа от корма, появления артритов и т.д. При проведении бактериологического исследования фекалий и содержимого внутрисуставных абсцессов от заболевших голубей выделяли S. typhimurium - всего от 6 птиц. При этом два голубя были вынужденно убиты. При бактериологическом исследовании из печени, селезенки, красного костного мозга выделена S. typhimurium от обоих голубей.

Остальных клинически здоровых голубей с 25-дневного возраста вакцинировали. Больных и подозрительных в заболевании голубей лечили антибиотиками, предварительно подтитрованными к выделеному от птиц изоляту S. typhimurium, в течение 10 дней. Всего вакцинировано 140 птиц.

В результате проведенной работы на ферме в течение 9 месяцев наблюдения среди птиц родительского стада не было выявлено голубей с поражением суставов и другими признаками, характерными для сальмонеллеза. Кроме того, необходимо отметить, что период наблюдения приходился на сезон размножения птиц. Полученные от предварительно вакцинированных родителей голубята, были привиты тем же препаратом в дозе 0,5 см 3 в возрасте 25-30 дней. Случаев заболевания сальмонеллезом среди привитого молодняка голубей также не было выявлено.

Из представленных данных видно, что проведенная вакцинация голубей вакциной инактивированной полиэтиленгликолевой позволила обеспечить 100% сохранность птицы родительского стада и молодняка в неблагополучной по сальмонеллезу голубятне.

Применение вакцины позволит повысить сохранность птицы, предотвращая заболеваемость голубей сальмонеллезом. Кроме того, вакцинация голубей будет способствовать нераспространению опасного зооантропоноза - сальмонеллеза среди птиц, животных и человека.

1. Вакцина инактивированная против сальмонеллеза голубей, включающая антигены сальмонелл, отличающаяся тем, что содержит в качестве антигенов инактивированные 0,3%-ным формалином и осажденные полиэтигленгликолем высокоиммуногенные штаммы Salmonella typhimurium М-5в t-ДЕП, Salmonella typhimurium Д-1в t-ДЕП и Salmonella enteritidis 25 Яв е-ДЕП с итоговой концентрацией каждого 2 млрд. мкр. кл. в 1 см 3 препарата.

2. Способ применения вакцины инактивированной против сальмонеллеза голубей по п.1, отличающийся тем, что вакцину вводят внутримышечно в толщу грудной мышцы в дозе 0,5 см 3 с 25-30-дневного возраста дважды с интервалом 35-40 дней.