Принципы определения каталазной и плазмокоагулазной активности стафилококков
Владельцы патента RU 2332461:
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологической лабораторной диагностике инфекционных заболеваний. Способ предусматривает внесение 12-часовой культуры стафилококка в плазму, разведенную изотоническим раствором хлорида натрия. Полученную микробную взвесь инкубируют при температуре 37°С в течение 5 часов. Регистрируют электрическое сопротивление микробной взвеси с 3-го до 5-го часа инкубирования. Причем при показателях сопротивления раствора 64-84 кОм делают заключение о патогенности стафилококка по наличию плазмокоагулирующей активности. Изобретение позволяет сократить сроки проведения исследований и повысить точность анализа.
Изобретение относится к области медицины, а именно к микробиологической лабораторной диагностике инфекционных заболеваний.
Плазмокоагулирующая активность является одним из основных признаков патогенности стафилококков (Staphylococcus aureus). До настоящего времени в периодической и патентной литературе не описано объективных методов регистрации плазмокоагулирующей активности бактерий, позволяющих с помощью приборов зарегистрировать коагуляцию плазмы микроорганизмами.
В микробиологической практике способность бактерий вызывать коагуляцию плазмы определяют визуально в течение 18 часов культивирования бактерий (Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М., Медицина. - 1978. - С.167). Данный способ выявления фермента плазмокоагулазы у патогенных стафилококков выбран в качестве прототипа. Способ заключается в следующем: в две пробирки наливают по 0,5 мл плазмы, разбавленной 1:5 изотоническим раствором хлорида натрия, затем в каждую пробирку вносят по 1 петле 18-20-часовой культуры стафилококка. Одну пробирку (опытную) засевают исследуемой культурой бактерий, вторую (первый контроль) - заведомо патогенным, плазмокоагулирующим штаммом стафилококка. Засеянные пробирки выдерживают в течение 3 ч. Если за указанное время коагуляции плазмы в опытной пробирке не происходит, пробирки оставляют при комнатной температуре еще на 18 ч. Если и через это время свертывания плазмы не произойдет, исследуемая культура является коагулазоотрицательной. Одновременно в термостат ставят несколько пробирок с плазмой (второй контроль), в которые не вносят бактерии. Если в одной из пробирок второго контроля наступает коагуляция плазмы, обусловленная микробным загрязнением, результат опыта не учитывают.
Одним из существенных недостатков прототипа является субъективное определение изменения вязкости раствора в опытной пробирке по сравнению с контрольными. Окончательный учет наличия плазмокоагулирующей активности бактерий проводят через 18 часов, и в течение этого времени сотрудник лаборатории периодически (через каждые 10-20 мин) просматривает пробирки с посевами исследуемых культур для выявления плазмокоагулирующей активности бактерий. Если сотрудник лаборатории вовремя не просмотрел пробирки (в момент коагуляции плазмы), то процесс идет в обратном направлении, то есть из желеобразного состояния раствор приобретает жидкую консистенцию. В данном случае лаборатория может дать ложноотрицательный результат лабораторного исследования на наличие фермента плазмокоагулазы.
Задачей настоящего изобретения является разработка нового, объективного, экономичного экспресс-способа определения плазмокоагулирующей активности стафилококков.
Технический результат - простой, не требующий больших материальных затрат определения патогенных стафилококков по плазмокоагулирующей активности, позволяющий сократить сроки проведения исследований, повысить точность проведения лабораторного анализа и создающий возможность автоматизации в процессе регистрации плазмокоагулирующей активности стафилококка, основанный на определении показателей электрического сопротивления микробной взвеси в растворе плазмы. Использован известный способ определения электрического сопротивления растворов по новому назначению, а именно для выявления патогенных стафилококков по плазмокоагулирующей активности.
Технический результат достигается тем, что способ определения патогенных стафилококков по плазмокоагулирующей активности предусматривает внесение 12-часовой культуры стафилококка в плазму, разведенную изотоническим раствором хлорида натрия, инкубирование микробной взвеси при температуре 37°С в течение 5 часов, регистрацию электрического сопротивления микробной взвеси с 3-го до 5-го часа инкубирования, причем при показателях сопротивления раствора 64-84 кОм делают заключение о патогенности стафилококка по наличию плазмокоагулирующей активности.
Сущность изобретения достигается тем, что использован объективный способ регистрации плазмокоагулирующей активности бактерий по показателям электрического сопротивления раствора, позволяющий автоматизировать процесс выявления патогенных штаммов стафилококков (S.aureus) по плазмокоагулирующей активности, в результате этого освобождается от работы сотрудник лаборатории, регистрирующий плазмокоагулирующую активность бактерий, экономится расход питательных сред и создается возможность объективно с высокой точностью за 5 часов проводить значительно большее количество лабораторных анализов по определению плазмокоагулирующей активности микробных взвесей.
Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.
Используют 12-ти часовую культуру стафилококка. Микробную взвесь в количестве 0,1 мл, содержащую 10 7 КОЕ/мл, вносят в пробирку с 0,3 мл плазмы, разбавленной 1:5 изотоническим раствором хлорида натрия. В пробирки с микробной взвесью вводят стальные электроды, соединенные с пишущим устройством, регистрирующим электрическое сопротивление раствора в пределе 2000 кОм. Микробную взвесь инкубируют при 37°С в течение 5 часов. При показаниях электрического сопротивления раствора от 64 до 84 кОм за период с 3-го до 5-го часа инкубирования микробной взвеси делают заключение о патогенности стафилококка по наличию плазмокоагулирующей активности.
Предложенный способ определения патогенных стафилококков (S. aureus) по плазмокоагулирующей активности (по сравнению с прототипом) позволяет экономить расход питательных сред, сокращает время проведения лабораторных исследований, дает объективные результаты исследований и создает возможность автоматизировать процесс определения плазмокоагулирующей активности микробной взвеси.
Примеры конкретного выполнения предлагаемого способа
Для определения плазмокоагулирующей активности с помощью предложенного способа взята 12-часовая культура стафилококка, выделенного от больного. Концентрацию микробной взвеси готовили по стандартной методике (МУК 4.2.1890-04). Использовали стандарт 0,5 по МакФарланду. Микробную взвесь в количестве 0,1 мл, содержащую 10 7 КОЕ/мл, внесли в пробирку с 0,3 мл плазмы, разбавленной 1:5 изотоническим раствором хлорида натрия. В пробирку с микробной взвесью поместили два стальных электрода, соединили их с пишущим устройством, регистрирующим сопротивление раствора в пределе 2000 кОм. Микробную взвесь инкубировали при 37°С в течение 5 часов. Через 3 часа 15 мин визуально установлена коагуляция плазмы. Одновременно зарегистрированы показания самопишущего устройства, регистрирующего электрическое сопротивление раствора. Показания регистрирующего устройства - 64 кОм. Выделенную культуру бактерий отнесли к плазмокоагулирующей.
Для определения плазмокоагулирующей активности с помощью предложенного способа взята 12-часовая культура выделенного стафилококка. Концентрацию микробной взвеси определяли по МакФарланду, используя стандарт 0,5. Микробную взвесь в количестве 0,1 мл, содержащую 10 7 КОЕ/мл, внесли в пробирку с 0,3 мл плазмы, разбавленной 1:5 изотоническим раствором хлорида натрия. В пробирку с микробной взвесью поместили два стальных электрода и определяли электрическое сопротивление раствора в пределе 2000 кОм, используя цифровой мультиметр М-832. Микробную взвесь инкубировали при 37°С в течение 5 часов. Через 3 часа 50 мин визуально установлена коагуляция плазмы. Одновременно зарегистрированы показания электрического сопротивления раствора 74 кОм. Выделенную культуру бактерий отнесли к плазмокоагулирующей.
Для определения плазмокоагулирующей активности с помощью предложенного способа взята 12-часовая культура выделенного стафилококка. Концентрацию микробной взвеси определяли по МакФарланду, используя стандарт 0,5. Микробную взвесь в количестве 0,1 мл, содержащую 10 7 КОЕ/мл, внесли в пробирку с 0,3 мл плазмы, разбавленной 1:5 изотоническим раствором хлорида натрия. В пробирку с микробной взвесью поместили два стальных электрода, соединили их с пишущим устройством, регистрирующим сопротивление раствора в пределе 2000 кОм. Взвесь бактерий инкубировали при 37°С в течение 5 часов. Через 3 часа 40 мин визуально установлена в растворе коагуляция плазмы. Одновременно зарегистрированы показания самопишущего устройства, регистрирующего электрическое сопротивление раствора, которое составило 84 кОм. Выделенную культуру бактерий отнесли к плазмокоагулирующей.
Предложенный способ определения патогенных стафилококков по плазмокоагулирующей активности не требует больших материальных затрат, легко воспроизводим, сокращает сроки проведения исследований, создает возможность автоматизировать процесс выявления патогенных стафилококков по плазмокоагулирующей активности и дает объективные данные лабораторных исследований, позволяющих выявлять патогенные штаммы стафилококков по плазмокоагулирующую активности с точностью 100%.
Способ определения патогенных стафилококков по плазмокоагулирующей активности, предусматривающий внесение 12-часовой культуры стафилококка в плазму, разведенную изотоническим раствором хлорида натрия, инкубирование микробной взвеси при температуре 37°С в течение 5 ч, регистрацию электрического сопротивления микробной взвеси с 3-го до 5-го часа инкубирования, причем при показателях сопротивления раствора 64-84 кОм делают заключение о патогенности стафилококка по наличию плазмокоагулирующей активности.
Основными источниками обсеменения стафилококками пищевых продуктов являются люди и животные с гнойно-воспалительными процессами (абсцессы, фурункулы, гнойные раны и др.), а также носители этих микроорганизмов. Перенос стафилококков от людей на пищевые продукты может происходить воздушно-капельным путем, при непосредственном контакте людей с продуктами, оборудованием, в процессе убоя скота и разделки туш.
Чаще всего причиной стафилококковых токсикозов является употребление молока, мяса и мясных изделий, кондитерских изделий с заварным кремом и др., контаминированных патогенными стафилококками. Органолептические свойства продуктов, в которых размножаются стафилококки и накапливаются энтеротоксины, не изменяются [2].
Энтеротоксигенные стафилококки размножаются в пищевых продуктах даже при содержании в них около 40% влаги. Они могут развиваться в продуктах, содержащих от 7% до 12% хлорида натрия. Сахар угнетает развитие стафилококков при концентрациях 30–40%. Некоторые микроорганизмы (В. сеreus, дрожжи из рода Саndidа и др.) оказывают на стафилококки стимулирующий эффект (они усиливают образование энтеротоксина).
Энтеротоксин стафилококков обладает высокой термоустойчивостью. Инактивирование (разрушение) токсина происходит только через 2,5–3 часа кипячения. При автоклавировании (120°С) токсин разрушается через 20 мин. При благоприятных температурных условиях энтеропатогенные стафилококки быстро размножаются в продуктах и продуцируют токсин. Пищевые токсикозы, вызванные энтеропатогенными стафилококками, протекают в форме острого гастроэнтерита, сопровождающегося рвотой, реже диареей, головной болью. Инкубационный период очень короткий – от 30 мин до 6 ч. Длится заболевание один, реже – два, три дня [1].
Выявление и определение количества этих микроорганизмов в пищевых продуктах проводят в соответствии с ГОСТ 31746-2012. Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества коагулазоположительных стафилококков и Staphylococcus aureus.
Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты, кроме молока и молочных продуктов, и устанавливает методы выявления и определения количества коагулазоположительных стафилококков и Staphylococcus aureus посевом: в жидкую селективную среду (с предварительным обогащением) и на (в) агаризованные селективно-диагностические среды [4].
Метод определения наиболее вероятного числа (НВЧ) коагулазоположительных стафилококков и S. aureus посевом в жидкую селективную среду предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта менее 150 или в 1 см 
жидкого продукта менее 15 колониеобразующих единиц (КОЕ) коагулазоположительных стафилококков и S. aureus.
Метод определения количества коагулазоположительных стафилококков и S. aureus посевом на агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта более 1500 или в 1 см
жидкого продукта более 150 КОЕ коагулазоположительных стафилококков и S. aureus [4].
Метод выявления и метод НВЧ - определение количества коагулазоположительных стафилококков и S. aureus посевом с предварительным обогащением основаны на высеве навески продукта и (или) разведений навески продукта в жидкую селективную среду, инкубировании посевов, пересеве культуральной жидкости на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды, подтверждении по биохимическим признакам принадлежности выделенных типичных и (или) атипичных колоний к коагулазоположительным стафилококкам и S. aureus.
При пересеве на агаризованную среду с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном выросшие типичные колонии без подтверждения по биохимическим признакам относят к коагулазоположительным стафилококкам.
Определенное количество жидкого продукта или определенное количество исходной суспензии при использовании продукта другой консистенции вносят в жидкую селективную питательную среду [6].
Перед посевом анаэробные условия в среде создают кипячением при (100±1) °С в течение 15 мин, наслоением агара или парафина в каждую пробирку после посева, а также с помощью альтернативной процедуры - инкубирования пробирок в емкости или инкубаторе в анаэробных условиях.
Пробирки с посевами инкубируют при температуре 37 °С в течение 24-48 ч. Предположительное присутствие коагулазоположительных стафилококков на Жиолитти-Кантони бульоне определяется по редукции теллурита калия, а на глюкозном или солевом бульоне - по помутнению среды [3].
Поверхность одной из агаризованных селективно-диагностических сред (Байрд-Паркер агара, молочно-солевого, яично-желточно-азидного, яично-желточно-солевого агара, агара с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном), инокулируют из предположительно положительных пробирок после 24 ч и все оставшееся пробирки после 48 ч.
Чашки Петри с посевами инкубируют при температуре 37°С в течение 24-48 ч. Предположительное присутствие коагулазоположительных стафилококков определяется по редукции теллурита калия и яично-желточной реакции (лецитиназной активности) [7].
На агаре с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном после инкубирования присутствие коагулазоположительных стафилококков определяется по типичным колониям, показавшим специфичную реакцию (бычий фибриноген/кроличья плазма).
Подтверждение принадлежности типичных и (или) атипичных колоний к коагулазоположительным стафилококкам проводят по изучению отношения выявленных микроорганизмов к окраске по Граму, определению присутствия у них каталазы и коагулазы.
Подтверждение принадлежности коагулазоположительных стафилококков к S. aureus проводят по определению образования ацетоина, определению ферментации в аэробных условиях мальтозы и, при необходимости, определению термостабильной нуклеазы и гемолитической активности. Результаты выявления коагулазоположительных стафилококков и S. aureus выражают: "обнаружены" или "не обнаружены"[5].
Метод НВЧ - определение количества коагулазоположительных стафилококков и S. aureus. Навески продукта и (или) серию разведений навески продукта вносят в жидкую селективную питательную среду. Наиболее вероятное число коагулазоположительных стафилококков и S. aureus в 1 см или в 1 г продукта определяют для подтвержденных посевов, пользуясь НВЧ-таблицей по ГОСТ 26670.
Методы определения количества коагулазоположительных стафилококков и S. aureus посевом на (в) агаризованные селективно-диагностические среды основаны на высеве навески продукта и/или разведения навески продукта на (в) агаризованную селективно-диагностическую среду, инкубировании посевов, подсчете типичных и (или) атипичных колоний, подтверждении по биохимическим признакам принадлежности выделенных колоний к коагулазоположительным стафилококкам и S. aureus [4].
Проводят посев определенного количества жидкого продукта или определенное количество исходной суспензии при использовании продукта другой консистенции на (в) агаризованную селективно-диагностическую питательную среду на две параллельные чашки Петри. Аналогично проводят посев десятикратных разведений испытуемого продукта. Посевы в чашках Петри инкубируют при температуре 37 °С в течение 24-48 ч.
Количество коагулазоположительных стафилококков в 1 см
или 1 г продукта определяют по числу типичных и/или атипичных колоний, выросших на чашках Петри, принадлежность которых к коагулазоположительным стафилококкам подтверждена путем определения отношения микроорганизмов из этих колоний к окраске по Граму, наличия у них каталазы и коагулазы [3,4].
При посеве в (на) агаризованную среду с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном определяют только типичные колонии и без подтверждения по биохимическим признакам их относят к коагулазоположительным стафилококкам.
Количество S. aureus в 1 см
или 1 г продукта определяют исходя из количества коагулазоположительных стафилококков, принадлежность которых к S. aureus подтверждена по образованию ацетоина, определению ферментации в аэробных условиях мальтозы и, при необходимости, определению термостабильной нуклеазы и гемолитической активности.
При выявлении коагулазоположительных стафилококков в определенной навеске исследуемого продукта или его эквивалентном разведении с предварительным обогащением эту навеску или разведение вносят в одну из питательных сред [6,7].
Перед использованием Жиолитти-Кантони бульон прогревают кипячением при (100±1) °С в течение 15 мин для удаления воздуха. Охлаждают до 44 °С - 47 °С и с соблюдением правил асептики прибавляют раствор теллурита калия.
В 10 см модифицированного Жиолитти-Кантони бульона нормальной концентрации или сред вносят 1 см
жидкого продукта или 1 см исходной суспензии (т.е. 0,1 г или 0,1 см продукта). После посева навески продукта и (или) его разведений на поверхность Жиолитти-Кантони бульона осторожно наслаивают слой стерильного голодного агара или слой стерильного парафина и охлажденных до температуры 44 °С - 47 °С, дают полученному слою агара или парафина застыть и герметично закрывают.
Соотношение между количеством высеваемого продукта или его разведением и питательной средой нормальной концентрации 1:10. При использовании среды двойной концентрации соотношение между количеством высеваемого продукта или его разведением и питательной средой 1:1 [3].
Если при последующем подтверждении принадлежности коагулазоположительных стафилококков к S. aureus не определяют наличие термостабильной нуклеазы и гемолитической активности, то допускается проводить посев в Жиолитти-Кантони бульон без прогрева перед посевом и без наслаивания голодного агара или парафина после посева.
Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±2) ч. Если появилось почернение или черный осадок в Жиолитти-Кантони бульоне или помутнение в солевом или сахарном бульоне, то проводят подтверждение принадлежности выросших микроорганизмов к коагулазоположительным стафилококкам. Если почернения, черного осадка или помутнения нет, то посевы инкубируют еще (24±2) ч [2].
Для получения изолированных колоний стерильной петлей делают пересевы культур из каждого посева на поверхность чашки Петри с одной из агаризованных селективно-диагностических сред: Байрд-Паркер агара, Байрд-Паркер агара с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном, молочно-солевого агара, яично-желточно-азидного агара или яично-желточно-солевого агара. Пересевы проводят также из пробирок, в которых нет видимых признаков роста.
Чашки Петри с пересевами инкубируют в термостате при температуре (37±1) °С в течение (24±2) ч или (48±2) ч. После 24 ч инкубирования чашек Петри по отмечают на дне чашек присутствие типичных и атипичных для коагулазоположительных стафилококков колоний [1].
На Байрд-Паркер агаре после инкубирования в течение 24 ч коагулазоположительные стафилококки образуют типичные колонии черного или серого цвета, блестящие и выпуклые, окруженные прозрачной зоной, диаметр колоний около 1,0-1,5 мм и до 1,5-2,5 мм после инкубирования в течение 48 ч. После инкубирования в течение 24 ч непосредственно около колонии в прозрачной зоне может появиться опалесцирующее кольцо, окружающее колонию.
Принадлежность выявленных коагулазоположительных стафилококков к S. aureus проводят по определению их способности образовывать ацетоин и ферментировать мальтозу в аэробных условиях [5].
Определение образования ацетоина (реакция Фогес-Проскауера). Культуру высевают в пробирки со средой Кларка. Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение 48 ч. После инкубирования посевов к 1 см
отобранной культуральной жидкости прибавляют 0,6 см
раствора - нафтола и 0,2 см
раствора гидроокиси калия. Появление розового окрашивания через 15-60 мин указывает на положительную реакцию. S. aureus образует ацетоин.
Определение ферментации мальтозы в аэробных условиях. Способность ферментации мальтозы в аэробных условиях определяют с целью дифференциации S. aureus от других коагулазоположительных видов S. intermedius и S. hyicus. Для определения ферментации мальтозы в аэробных условиях культуры, подлежащие исследованию, высевают уколом петлей в среду Гисса с мальтозой. Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение 48 ч. При ферментации мальтозы в аэробных условиях с образованием кислоты цвет среды Гисса изменяется. S. aureus ферментирует мальтозу в аэробных условиях [4].
Оценка результатов подтверждения принадлежности коагулазоположительных стафилококков к S. aureus. Если коагулазоположительные стафилококки образуют ацетоин и сбраживают мальтозу в аэробных условиях, то считают, что выявленные коагулазоположительные стафилококки относятся к S. aureus. Для биохимической идентификации допускается использование тест-систем промышленного производства, зарегистрированных на территории государства, принявшего стандарт.
Оценка результатов посевов в жидкие среды. При определении НВЧ коагулазоположительных стафилококков или S. aureus или при их выявлении в определенной навеске продукта посевы считают положительными (то есть коагулазоположительные стафилококки или S. aureus выявлены в испытуемой навеске продукта), если при последующем пересеве на агаризованные селективно-диагностические среды и подтверждении типичных и (или) атипичных колоний, выросших на этих средах, хотя бы в одной колонии будут обнаружены коагулазоположительные стафилококки или S. aureus [6].
Результаты выявления коагулазоположительных стафилококков или S. aureus записывают: обнаружены (не обнаружены) в 1 г (см3) продукта; масса или объем продукта, в котором выявляли коагулазоположительные стафилококки или S. aureus.
экзаменационных вопросов по микробиологии, вирусологии и иммунологии
13.Окраска по Циль-Нильсону. Назначение, основная краска, протрава,
обесцвечивающий фактор, дополнительная краска, механизм.
14.Окраска по способу Ожешко Назначение. Основные этапы. Механизм.
15.Особенности строения актиномицетов. Общие признаки с бактериями и
грибами. Патогенные представители.
16.Особенности строения спирохет, их классификация. Общие признаки с
бактериями и простейшими. Патогенные представители.
17.Особенности строения риккетсий. Общие признаки с бактериями и вирусами, патогенные представители.
18.Особенности строения хламидий. Общие признаки с бактериями и вирусами,
19.Морфология и структура микоплазм, патогенные представители.
20.Морфология простейших, их классификация. Патогенные представители.
21.Ферменты бактерий. Экзо - и эндоферменты. Конститутивные и
индуцибельные ферменты. Примеры.
Е. coli и S.tiphi.
23. Методы изучения протеолитической активности бактерий (реакции на индол, сероводород и др.)
24.Принципы определения каталазной и плазмокоагулазной активности
25.Питание бактерий. Механизмы транспорта питательных веществ в
26.Классификация бактерий по типам питания и источникам энергии.
27.Основные типы биологического окисления субстрата бактериями. Аэробы,
факультативные анаэробы, мйкроаэрофилы, анаэробы.
28.Рост и размножение бактерий. Фазы размножение бактерий.
29.Механические способы создайия анаэробных условий.
30.Физические способы создания анаэробных условий.
31.Химические и биологические способы создания анаэробных условий.
32.Питательные среды для культивирования бактерий. Требования,
предъявляемые к ним. Их классификация.
33.Основные питательные среды. Состав, назначение.
34.Элективные питательные среды. Состав, назначение. Примеры.
35.Дифференциально-диагностические среды. Состав, назначение. Примеры.
36.Методы выделения чистых культур аэробов (механические и биологические).
Колония, чистая культура.
37.Метод Дригальского, назначение, этапы: I ΙΙ , III, IV.
38.Выделение чистой культуры анаэробов (I, II, III, IV, V этапы).
39.Методы культивирования микоплазм, риккетсий, хламидий и вирусов.
40.Современные принципы классификации и номенклатура вирусов.
41.Понятие о вирионе и вирусе, определение. Морфология и структура вирионов.
42.Репродукция вирусов. Стадии взаимодействия вируса с клеткой хозяина.
43.Особенности репродукции ДНК- и РНК- вирусов.
44.Типы взаимодействия вирусов с клеткой: продуктивный, абортивный,
45.Классификация клеточных культур, применяемых в вирусологии.
46.Методы заражения куриного эмбриона. Цель. Этапы.
47.Индикация вирусов по цитопатическому действию, по бляшкообразованию и
48.Реакции гемагглютинации и гемадсорбции. Назначение. Механизм.
49.Бактериофаги. Морфология и структурные особенности.
50.Фазы взаимодействия фага с бактериальной клеткой.
51.Вирулентные и умеренные фаги. Профаги. Лизогения. Фаговая конверсия.
52.Индикация и титрование фагов (по Грациа и Аппельману).
53.Фаготипирование St. aureus. Цель. Принцип.
54.Реакция фаголизиса (идентификация возбудителя дизентерии).
55.Организация генетического аппарата у бактерий и вирусов. Генотип. Фенотип.
Факторы и формы изменчивости.
56.Мутации у бактерий. Классификация по происхождению и характеру
изменений в первичной структуре ДНК.
57.Классификация мутаций бактерий по фенотипическим последствиям.
58. Механизмы передачи генетической информации - трансформация,
59.Плазмиды бактерий. Их функции (регуляторная и кодирующая).
60. R-плазмиды, функции, строение. Пути передачи. Механизм множественной
61.Подвижные генетические элементы: транспозоны и Is- последовательности.
62.Особенности R- и S-диссоциации как частное проявление генотипической
изменчивости.Ее практическое значение.
63.Цели и задачи генной инженерии. Принципы получения рекомбинантных
молекул (векторы, рестриктазы).
64.Полимерная цепная реакция (ПЦР). Принципы, достоинства.
65.Микрофлора почвы. Санитарно-показательные микроорганизмы.
66.Микрофлора воздуха. Санитарно-показательные микроорганизмы.
67.Микрофлора воды. Санитарно-показательные микроорганизмы.
68.Понятие о микробном числе воды, воздуха, почвы. Коли-титр и коли-индекс
69.Микрофлора человека, классификация (аутохтонная, аллохтонная и заносная).
70.Роль нормальной микрофлоры организма человека в нормальных
физиологических процессах и патологии.
71.Дисбактериоз. Факторы, влияющие на его формирование. Классификация по
этиологии, по степени компенсации. Клинические формы.
72.Эубиотики. Природа, механизм действия. Бактериоцины. Практическое
73.Микрофлора кишечника. Бактериологическая диагностика дисбактериоза
74.Стерилизация горячим воздухом и паром, аппаратура.
75.Лучевая и механическая стерилизации.
76.Дезинфекция в микробиологической лаборатории: рук, рабочего места,
выделений больного, предметных и покровных стекол.
77.Действие на микроорганизмы биологических факторов. Симбиотические
взаимоотношения (метабиоз, комменсализм, мутуализм, сателлитизм,
78.Действие на микроорганизм биологических факторов. Антагонистические
взаимоотношения (антибиоз, конкуренция, хищничество, паразитизм)
79. Антибиотики. Классификация по происхождению, спектру действия. Примеры.
80.Антибиотики. Классификация по механизму действия. Примеры.
81.Противовирусные препараты, механизм действия.
82.Методы определения антибиотикочувствительности бактерий.
83.Механизмы лекарственной устойчивости бактерий (первичные, приобретенные, хромосомные, внехромосомные), г-гены.
Раздел 2.Инфекция и иммунитет.
Понятие об инфекции и инфекционном процессе. Факторы, участвующие в формировании инфекционного процесса.
Патогенность и вирулентность микроорганизмов. Факторы вирулентности.
Эндо- и экзотоксины бактерий, их свойства и получение. Единицы измерения силы токсинов.
Экзотоксины, классификация по механизму действия.
Методы выявления факторов вирулентности (токсигенность, α-, β-, γ-, энтеро -и тиолзависимых гемолизинов и др.)
Источники и пути передачи инфекционных болезней.
Динамика и периоды развития инфекционного заболевания.
Формы инфекций - экзогенная и эндогенная, очаговая и генерализованная, моно- и смешанная, вторичная инфекция, реинфекция, суперинфекция.
Понятие о раневых, респираторных, кишечных, кожно-венерических, антропо- и зоонозных инфекциях. Примеры.
10.Цели, способы и этапы биологического метода диагностики.
11 .Инфекционные свойства вирусов. Особенности вирусных инфекций.
12.Формы вирусных инфекций: продуктивная и персистирующая. Формы
персистенции (латентная, хроническая, медленная).
13.Понятие об иммунитете. Классификация форм иммунитета.
14.Механические неспецифические факторы резистентности человека.
15.Клеточные неспецифические факторы иммунитета: клеточная ареактивность,
нормальная микрофлора, естественные киллеры, воспаление.
16.Фагоцитоз и фагоциты. Характеристика стадий фагоцитоза. Завершенный и
17.Гуморальные факторы неспецифической резистентности: пропердиновая
18.Система комплемента, пути активации
19.Т-лимфоциты. Субпопуляции Т-клеток: Т-хелперы (1,2), Т-супрессоры, Т-
киллеры, Т-эффекторы. Рецепторы, функции.
20.В-лимфоциты, субпопуляции их. Рецепторы, функции.
21.А-клетки. Рецепторы, функции.
Антигены главного комплекса гистосовместимости I и II классов.
Взаимодействие клеток в иммунном ответе. Иммунный ответ на тимусзависимые антигены.
Взаимодействие клеток в иммунном ответе. Иммунный ответ на тимуснезависимые антигены.
Антигены, гаптены. Антигенность, иммуногенность и специфичность. Антигенные детерминанты.
26.Антигенная структура бактериальной клетки. Виды специфичности микробных антигенов: родовая, групповая, видовая, типовая.
27.Тимусзависимые, тимуснезависимые, корпускулярные и растворимые антигены
микробов. Протективные антигены. Суперантигены.
28.Антигены вирусов. Примеры.
29.Иммуноглобулины, структура, активные центры. Неполные антитела.
30.Иммуноглобулины G, Структурные и функциональные особенности.
31.Иммуноглобулины М. Структурные и функциональные особенности.
32.Иммуноглобулины Е и D. Функциональные особенности.
33.Иммуноглобулины класса А. Секреторные иммуноглобулины. Структурные и
34. Динамика антителообразования. Первичный и вторичный ответ.
35.Защитная роль антител в приобретенном иммунитете.
36.Особенности гуморального антибактериального иммунитета.
Антибактериальные антитела. Способы усиления фагоцитоза бактерий.
37. Особенности антитоксического иммунитета. Антитоксины. Способы
нейтрализации экзотоксинов антитоксинами.
38.Особенности клеточного антибактериального иммунитета. Нестерильный
иммунитет, гиперчувствительность замедленного типа при туберкулезе,
39.Особенности местного иммунитета. Бактериостатические и бактерицидные
факторы кожи, слизистых оболочек.
40.Особенности неспецифических факторов противовирусного иммунитета
(вирусные ингибиторы, температура тела, интерфероны, фагоцитоз,
естественные киллерные клетки и др.).
41.Особенности гуморального противовирусного иммунитета. Активация Т-
хелперов. Вируснейтрализующие антитела.
42.Особенности клеточного противовирусного иммунитета. Киллерные клетки.
Апоптоз. Т-эффекторы. Активация Т-хелперов.
43.Аллергия. Классификация и стадии аллергических реакций.
44.Анафилактический тип аллергических реакций. Механизм развития, стадии. 45.Цитотоксические реакции. Механизм развития.
46.Реакции иммунных комплексов. Механизм развития
47.Гиперчувствительность замедленного типа. Механизм развития.
48.Инфекционная аллергия. Аллергические пробы, их сущность. Микробные
диагностические аллергены. (Реакция Манту и др.).
49. Реакция преципитации по Асколи. Назначение, компоненты, механизм.
50. Радиоиммунные методы, механизм. Компоненты, применение.
51. РИФ компоненты, механизм метода.
52. Лизины. Реакция иммунного лизиса. Применение реакции гемолиза.
53. Комплемент, его свойства. Титрование компонента, титр и рабочая доза комплемента.
54. Реакция связывания комплемента Вассермана. Компоненты, механизм, назначение.
55. ИФА. Компоненты, назначение.
56. Перечислите компонентов и способов их получения для опсонофагоцитарной реакции. Механизм.
57. Перечислите компонентов и способов их получения для РН на мышах с целью установления экзотоксина. Механизм.
58. Перечислите компонентов и способов их получения для реакции флоккуляции с целью определения активности противодифтерийной антитоксической сыворотки. 1 МЕ (определение).
59. Назовите компонентов и РТГА. Механизм.
60. Перечислите компонентов и способов их получения. Реакция иммобилизации Т- лимфоцитов.
61. Назовите компонентов и способов их пассивной гемагглютинации (РПГА). Механизм.
62. Методы оценки гуморального иммунитета. Принципы определения В- лимфоцитов (EAC- розеткообразование) и метода радиальной иммунодиффузии по Манчини.
63. Методы оценки клеточного иммунитета. Принципы определения Т- лимфоцитов (Е- розеткообразование).
64.Медицинские биологические препараты, их классификация, применение.
65. Вакцины корпускулярные аттенуированные (из живых ослабленных микробов), принципы получения, примеры.
66. Вакцины корпускулярные инактевированные (из убитых микробов), принцип получения, примеры.
67. Вакцины химические. Принцип их получения, примеры.
68. Вакцины- анатоксины, принцип получения. Единицы силы измерения анатоксина, примеры.
69. Иммунные лечебно- профилактические сыворотки. Принцип их получения, применение.
70. Лечебно- профилактические гамма- глобулины. Классификация. Принцип получения. Примеры.
Раздел 3. Частная медицинская микробиология.
Методы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний.
Стафилококки. Таксономия. Свойства. Характеристика токсинов и ферментов.. Вызываемые заболевания.
Стрептококки. Таксономия. Свойства. Характеристика токсинов и ферментов. Вызываемые заболевания.
Роль стрептококков при скарлатине. Иммунитет.
Пневмококки, таксономия. Серологические группы и свойства. Вызываемые заболевания. Принципы лабораторной диагностики.
Менингококки, таксономия. Серологические группы и свойства. Вызываемые заболевания. Принципы лабораторной диагностики, специфическая профилактика.
Гонококки. Таксономия. Вызываемые заболевания. Лабораторная диагностика острой гонореи.
Возбудители газовой анаэробной инфекции. Таксономия. Морфология. Факторы патогенности. Основные методы лабораторной диагностики, специфическая профилактика и лечение.
Клостридии столбняка. Таксономия. Морфология, характеристика токсинов. Нисходящий столбняк. Цель бактериологического исследования.
10. Клостридии ботулизма. Таксономия. Свойства. Характеристика токсинов, отличие от экзотоксинов возбудителей других пищевых инфекций. Основные методы лабораторной диагностики, специфическая терапия и профилактика.
11. Синегнойная палочка. Таксономия. Свойства. Вызываемые заболевания. Роль во внутрибольничных инфекциях. Принципы лабораторной диагностики.
12. Условно-патогенные грамотрицательные бактерии — возбудители гнойно-воспалительных процессов (Протей, клебсиеллы, чудесная палочка и др.), таксономия. Общая характеристика энтеробактерий. Принципы лабораторной диагностики.
13. Эшерихии. Таксономия. Патогенные варианты. Вызываемые заболевания. Дифференциально-диагностические среды.
14. Шигеллы. Таксономия. Свойства и классификация. Принципы лабораторной диагностики, профилактика.
15. Возбудители брюшного тифа и паратифов. Таксономия. Фазы патогенеза и клинические периоды.
16. Сальмонеллы, антигенная структура, классификация по Кауффмана-Уайта. Принципы лабораторной диагностики брюшного тифа и паратифов. Элективные и дифференциально-диагностические среды.
17. Лабораторная диагностика брюшнотифозного бактерионосительства.
18. Сальмонеллы—возбудители пищевых токсикоинфекций. Серологическая классификация сальмонелл. Принципы лабораторной диагностики, специфическое лечение.
19. Возбудитель кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза. Таксономия.
Морфология. Культуральные особенности. Вызываемые заболевания. Принципы лабораторной диагностики.
20.Возбудитель чумы, таксономия. Отличительные признаки от возбудителя
псевдотуберкулеза. Факторы патогенности. Принципы лабораторной
диагностики, специфическая профилактика и терапия чумы.
21.Возбудитель холеры, таксономия, факторы патогенности, культуральные
особенности. Принципы лабораторной диагностики.
22.Отличительные признаки холеры от холероподобных вибрионов. Специфическая профилактика холеры.
23.Кампилобактерии. Таксономия. Морфология. Культуральные особенности.
Вызываемые заболевания. Принципы лабораторной диагностики.
24.Возбудитель туляремии, таксономия. Характеристика, факторы патогенности.
Основной метод лабораторной диагностики и специфическая профилактика.
25.Бруцеллы. Таксономия. Морфология, культуральные особенности. Факторы
патогенности. Принципы лабораторной диагностики.
26.Критерии дифференцирования видов бруцелл. Особенности иммунитета при
бруцеллезе. Специфическая профилактика и лечение.
27.Возбудитель сибирской язвы. Таксономия. Факторы патогенности.
Отличительные признаки возбудителя сибирской язвы от антракоидов.
Специфическая терапия и профилактика.
28.Возбудитель дифтерии. Таксономия, морфология, факторы патогенности,
характеристика токсина. Биовары. Отличительные признаки и диагностика дифтерии.
29.Возбудитель коклюша. Таксономия. Дифференциации возбудителя коклюша,
паракоклюша и бронхосептикоза. Специфическая профилактика и лечение.
30. Возбудители туберкулеза. Таксономия, морфология, культуральные
особенности. Иммунитет и его особенности, принципы лабораторной
31.Легионеллы. Таксономия, морфология. Культуральные особенности.
Клинические формы. Принципы лабораторной диагностики.
32.Возбудитель сифилиса. Таксономия, свойства. Особенности иммунитета,
методы лабораторной диагностики.
33.Возбудители возвратных тифов. Таксономия. Дифференциация. Принципы
лабораторной диагностики с учетом периода заболевания. Болезнь Лайма.
34.Лептоспиры. Таксономия. Свойства. Культуральные особенности. Принципы
лабораторной диагностики, специфическая профилактика и лечение
35.Хламидии. Таксокомия. Свойства. Вызываемые заболевания. Принципы
36.Возбудители сыпных тифов и болезни Брилля. Таксономия, дифференциация.
Принципы лабораторной диагностики, специфическая профилактика
эпидемического сыпного тифа.
37.Калицивирусы. Вирус гепатита Е. Характеристика. Принципы лабораторной
диагностики. Специфическая профилактика.
38.Гепаднавирусы. Вирус гепатита В. Свойства, антигены. Принципы
лабораторной диагностики. Специфическая профилактика.
39.Флавивирус. Вирус гепатита С. Свойства. Принципы лабораторной
40.Вирус гепатита Э. Характеристики. Принципы лабораторной диагностики.
41.0нкогенные вирусы. Классификация.
42.Вирусогенетическая теория возникновения злокачественных новообразований
Л.А. Зильбера. Провирусы. Механизм онкогенеза, вызываемого ретровирусами.
Понятие об онкогене.
43.Ретровирусы Вирус иммунодефицита человека, его свойства. Патогенез, принципы
44.Вирус натуральной оспы. Патогенез. Диагностика. Профилактика. лабораторной диагностики.
Читайте также:
