Гост 30519-97 продукты пищевые метод выявления бактерий рода salmonella гост

Для покупки документа sms доступом необходимо ознакомиться с условиями обслуживания

>" onclick="checkLength('search_input_doc', 'SearchInDoc($(\'#search_input_doc\').val(), \'bottom\');', 150); return false;" />

ВНИМАНИЕ! Услуга для абонентов NEO, Tele2 временно недоступна

ВНИМАНИЕ! Услуга для абонентов Beeline, NEO, Tele2 временно недоступна

Стоимость услуги - тенге с учетом комиссии.

ГОСТ 30519-97
(ГОСТ Р 50480-93)

Продукты пищевые
Метод выявления бактерий рода Salmonella

Food products. Method for detection of Salmonella

Взамен введен с 1 июля 2014 года ГОСТ 31659-2012

Корреспонденты на фрагмент
Поставить закладку
Посмотреть закладки
Добавить комментарий
Показать изменения
Судебные решения

1 Сущность метода

Метод выявления бактерий рода Salmonella основан на высеве определенного количества продукта в жидкую неселективную среду, инкубировании посевов, последующем выявлении в этих посевах бактерий, способных развиваться в жидких селективных средах, образующих типичные колонии на агаризованных дифференциально-диагностических средах, имеющих типичные для бактерий рода Salmonella биохимические и серологические характеристики.

Корреспонденты на фрагмент
Поставить закладку
Посмотреть закладки
Добавить комментарий
Показать изменения
Судебные решения

2 Отбор и подготовка проб

Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669 или по нормативно-технической документации на анализируемый продукт.

Корреспонденты на фрагмент
Поставить закладку
Посмотреть закладки
Добавить комментарий
Показать изменения
Судебные решения

3 Аппаратура, материалы, реактивы

Для проведения анализа применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1, а также указанные ниже:

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности (для взвешивания реактивов);

* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001.

весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 1 кг, 4-го класса точности (для взвешивания продукта);

микроскоп световой биологический с увеличением 900-1000;

стекла предметные по ГОСТ 9284;

стекла покровные по ГОСТ 6672;

термостат с диапазоном рабочих температур 28-55 °С, позволяющий поддерживать заданную температуру с допустимой погрешностью ±1 °С.

спирт изобутиловый по ГОСТ 9536;

желчь сухую или натуральную;

контрольный штамп* бактерий рода Salmonella, не относящихся к тифозной группе;

* Текст соответствует оригиналу.

магний хлористый по ГОСТ 4209;

мочевину по ГОСТ 6691;

сухие агглютинирующие адсорбированные поливалентные сальмонеллезные сыворотки основных групп А, В, С, Д, Е и редких групп;

Корреспонденты на фрагмент
Поставить закладку
Посмотреть закладки
Добавить комментарий
Показать изменения
Судебные решения

4 Подготовка к анализу

Корреспонденты на фрагмент
Поставить закладку
Посмотреть закладки
Добавить комментарий
Показать изменения
Судебные решения

4.1 Приготовление растворов и реактивов

Корреспонденты на фрагмент
Поставить закладку
Посмотреть закладки
Добавить комментарий
Показать изменения
Судебные решения

4.1.1 Раствор бриллиантового зеленого концентрации 5 г/дм: 0,5 г бриллиантового зеленого переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см

1. Разработаны: ГУ научно-исследовательский институт питания РАМН (В.А. Тутельян - руководитель, С.А. Шевелева, Н.Р. Ефимочкина, А.М. Григорьев, И.Б. Быкова, И.М. Нитяга); ГУ Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН (В.Г. Нестеренко); Центром госсанэпиднадзора в г. Москве (Н.Я. Салова, З.Г. Малышева); при участии Санкт-Петербургского ГУ "Центр контроля качества товаров (продукции), работ и услуг" (Н.И. Лебедева, Л.Б. Гамова, М.С. Колосова) и фирмы ООО "Ниармедик плюс" (С.В. Юров, Т.Б. Макарова, Д.О. Газдиев, А.Б. Швецов).

2. Утверждены и введены в действие 22 февраля 2005 г. Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко.

3. Введены взамен временных методических указаний МУК 4.2.1840-04 "Метод экспрессного выявления бактерий рода Salmonella и Listeria monocytogenes в пищевых продуктах и продовольственном сырье за 24 часа с использованием твердофазного гетерогенного гибридизационного ДНК-рРНК анализа", утвержденных 29.02.04.

Проведение контроля пищевых продуктов и продовольственного сырья традиционными методами микробиологического анализа на наличие патогенных микроорганизмов - малоизученных возбудителей новых и вновь возникших заболеваний (Listeria monocytogenes, антибиотикорезистентных сальмонелл, энтерогемморагических эшерихий) - связано с такими проблемами, как трудоемкость, длительность и недостаточная специфичность используемых методик.

Последнее обусловлено тем, что в качестве тестов идентификации, входящих в стандартизованные методы анализа, в настоящее время используют в основном характеристики метаболических свойств возбудителей, зачастую не позволяющие провести четкую дифференциацию патогенных представителей искомых родов и видов от непатогенных, имеющих одинаковое с патогенами фенотипическое выражение. Это снижает достоверность результатов анализа, осложняет оценку распространенности патогенов в пищевых продуктах и сырье и не гарантирует от необоснованных браковок продукции.

Наиболее достоверными в последние годы признаются методы генотипического анализа культур, выделенных на селективных питательных средах, основанные на выявлении кодируемых признаков патогенности или анализе последовательностей рибосомальной ДНК (16S, 26s pPHK). В связи с этим внедрение высокоспецифичных методов анализа и экспрессных диагностических тест-систем в официальные схемы санитарно-микробиологического контроля пищевых продуктов становится насущной необходимостью, которая позволит повысить эффективность работы и рационализировать ресурсы контрольных органов.

2.1. Настоящие методические указания устанавливают метод ускоренного выявления бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах и в смывах с поверхностей оборудования и инвентаря предприятий по производству пищевых продуктов, а также методы ускоренной (за 24 ч) идентификации культур, выделенных из указанных объектов и подозрительных на принадлежность к Listeria monocytogenes и бактериям рода Salmonella, на основе твердофазного гетерогенного гибридизационного ДНК-РНК анализа с хемилюминесцентным детектированием.

2.2. Методы могут применяться в качестве альтернативных классическим бактериологическим методам лабораторных исследований для целей экспрессного выявления бактерий рода Salmonella и/или подтверждения принадлежности выделенных микробиологическими методами культур к бактериям рода Salmonella и Listeria monocytogenes при контроле пищевых продуктов и состояния поверхностей предприятий по производству пищевых продуктов.

2.3. Предлагаемый метод ускоренного выявления бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах и на поверхности оборудования и инвентаря предусматривает определение наличия или отсутствия указанных микроорганизмов в определенной массе (объеме) продукта в соответствии с нормативами СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов", выраженными в альтернативной форме и основанными на существующей системе отбора образцов и оценки результатов анализа по двухклассной системе, или в определенном объеме смыва с поверхности.

2.4. При исследовании пищевых продуктов и состояния оборудования и инвентаря предприятий по производству пищевых продуктов на наличие патогенных микроорганизмов Listeria mоnocytogenes методами классического микробиологического анализа, метод гетерогенной твердофазной ДНК-РНК гибридизации может применяться для идентификации культур листерий после этапа их выделения на селективных дифференциально-диагностических средах.

2.5. Методические указания разработаны в соответствии с Федеральным законом от 02.01.00 N 29-ФЗ "О качестве и безопасности пищевых продуктов", Положением о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании, Положением о государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации.

2.6. Методические указания рекомендованы для применения в лабораториях учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор за производством, хранением и оборотом пищевых продуктов, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, при проведении гигиенической оценки и выдаче санитарно-эпидемиологических заключений, а также при проведении санитарно-эпидемиологических расследований заболеваний, имеющих пищевой путь передачи; в лабораториях других организаций, аккредитованных в установленном порядке на право проведения контроля безопасности пищевой продукции и продовольственного сырья; в организациях, независимо от форм собственности, осуществляющих производственный контроль продовольственного сырья и пищевых продуктов в процессе промышленного производства и выпуска продукции.

2.7. Настоящие методические указания устанавливают также метод ускоренного выявления бактерий Listeria monocytogenes в молоке и молочных продуктах на основе твердофазного гетерогенного гибридизационного ДНК-РНК анализа с хемилюминесцентным детектированием. Метод может применяться в качестве дополнительного к классическим бактериологическим методам лабораторных исследований для целей выявления бактерий Listeria monocytogenes при контроле пищевых продуктов.

(п. 2.7 введен Дополнением 1, утв. Роспотребнадзором 06.12.2010)

2.8. Метод ускоренного выявления бактерий Listeria monocytogenes в молоке и молочных продуктах предусматривает определение наличия или отсутствия указанных микроорганизмов в определенной массе (объеме) продукта в соответствии с нормативами СанПиН 2.3.2.1078-2001 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов", выраженными в альтернативной форме и основанными на существующей системе отбора образцов и оценки результатов анализа по двухклассной системе.

(п. 2.8 введен Дополнением 1, утв. Роспотребнадзором 06.12.2010)

3.1. Метод гетерогенного твердофазного гибридизационного анализа нуклеиновых кислот основан на принципе гибридизации участка бактериального генома с закрепленным на твердофазном носителе (стенке пробирки) комплементарным к определяемой последовательности ДНК олигонуклеотидным зондом, меченым флюоресцентным красителем, и последующей детекции гибридов по степени их хемилюминесценции в приборе-люминометре.

3.2. Метод может выполняться в формате коммерчески доступных тест-систем (наборов), прошедших регистрацию в РФ в установленном порядке, после процедуры их стандартизации относительно официально утвержденных методов анализа.

3.3. Метод ускоренного выявления бактерий рода Salmonella предусматривает высев определенных количеств исследуемых образцов (пищевых продуктов или смывной жидкости) в специальные неселективные и селективные питательные среды, инкубирование посевов для накопления микроорганизмов, обработку культуральной жидкости лизирующим буфером для денатурации бактериальной рибосомальной РНК, гибридизацию фрагментов денатурированной рРНК с комплементарным ей меченым зондом, входящим в набор "Люмипроб-24 Salmonella", хемилюминесцентным детектированием продуктов реакции.

При обнаружении положительных результатов присутствие бактерий рода Salmonella должно подтверждаться в соответствии с ГОСТ 30519-97 "Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella".

3.4. Метод ускоренной идентификации культур, выделенных из пищевых продуктов и с поверхности оборудования и инвентаря пищевых производств по ГОСТ 30519-97 "Продукты пищевые. Методы выявления бактерий рода Salmonella", ГОСТ Р 51921-2002 "Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes" или по МУК 4.2.1122-02 "Организация контроля и методы выявления бактерий Listeria monocytogenes в пищевых продуктах" и подозрительных на принадлежность к бактериям рода Salmonella и Listeria monocytogenes, предусматривает инкубирование культур для накопления микроорганизмов, обработку культуральной жидкости лизирующим буфером для денатурации бактериальной рибосомальной РНК, гибридизацию фрагментов денатурированной рРНК с комплементарным ей меченым зондом, входящим в состав наборов "Люмипроб-24 Salmonella" или "Люмипроб-24 Listeria monocytogenes", хемилюминесцентным детектированием продуктов реакции.

3.5. Мишенями в реакции ДНК-РНК гибридизации являются:

- для бактерий рода Salmonella - последовательность нуклеотидов в области ДНК, кодирующая продукцию рибосомальной РНК, строго специфичной для всех представителей рода Salmonella;

- для Listeria monocytogenes - последовательность ДНК, кодирующая продукцию токсического белка листериолизина-О - основного фактора патогенности возбудителя листериоза.

3.6. Метод выявления бактерий Listeria monocytogenes предусматривает высев определенных количеств исследуемых образцов молока и молочных продуктов в специальную селективную питательную среду, инкубирование посевов для накопления микроорганизмов, обработку культуральной жидкости лизирующим буфером, денатурацию бактериальной рибосомальной РНК, гибридизацию фрагментов денатурированной рРНК с комплементарным ей меченым зондом, входящим в набор "Люмипроб-24 Listeria monocytogenes", хемилюминесцентным детектированием продуктов реакции.

(п. 3.6 введен Дополнением 1, утв. Роспотребнадзором 06.12.2010)

3.7. При обнаружении положительных результатов присутствие бактерий Listeria monocytogenes должно подтверждаться в соответствии с методами ГОСТ Р 51921-2002 "Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes" или МУК 4.2.1122-02 "Организация контроля и методы выявления бактерий Listeria monocytogenes в пищевых продуктах".

(п. 3.7 введен Дополнением 1, утв. Роспотребнадзором 06.12.2010)

3.8. Мишенью в реакции ДНК-РНК гибридизации для Listeria monocytogenes является последовательность ДНК, кодирующая токсический белок листериолизин-О - основной фактор патогенности Listeria monocytogenes.

(п. 3.8 введен Дополнением 1, утв. Роспотребнадзором 06.12.2010)

УТВЕРЖДАЮ
Главный врач ФГУЗ "Федеральный
центр гигиены и эпидемиологии",
Председатель Лабораторного совета
Федеральной службы по надзору
в сфере защиты прав потребителей
и благополучия человека
А.И.ВЕРЕЩАГИН
8 декабря 2006 г.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ БАКТЕРИЙ РОДА SALMONELLA
МЕТОДОМ ТВЕРДОФАЗНОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА
МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
N 02.013-06
1. Разработаны: ФГУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора при участии ООО "Стай-лаб".
2. Рекомендованы к утверждению Лабораторным советом Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (от 29 сентября 2006 г.).
3. Утверждены и введены в действие Председателем Лабораторного совета, Главным врачом ФГУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора А.И. Верещагиным 08.12.2006.
4. Введены впервые.
1. Область применения
Методические рекомендации предназначены для применения в лабораториях организаций, независимо от форм собственности, осуществляющих производственный контроль, а также в лабораториях иных организаций, аккредитованных на право проведения испытаний, исследований.
Методические рекомендации могут быть использованы для целей определения бактерий рода Salmonella при скрининговых исследованиях пищевых продуктов и смывов.
2. Общие положения
Сальмонеллы принадлежат к семейству Enterobacteriaceae, их биологические характеристики во многом сходны с прочими энтеробактериями. Энтеробактерии обнаруживаются в почве, воде, на поверхности фруктов, овощей, в злаках и других объектах окружающей среды. Многие из этих микроорганизмов имеют эпидемиологическое значение в связи с их патогенностью для человека.
Определение сальмонелл традиционными методами бактериологии в пищевых продуктах занимает длительное время и сопряжено со значительными трудозатратами. Требуется несколько дней для культивирования, селективного выделения и идентификации сальмонелл с последующим подтверждением результатов серологическими и биохимическими методами.
При использовании иммунохимических технологий анализа, таких как твердофазный иммуноферментный анализ, процедуры определения сальмонелл могут быть существенно оптимизированы, а время исследования сокращено. Это актуально при поведении микробиологическими лабораториями производственного контроля пищевых продуктов, сырья и пр. при значительном объеме исследований.
3. Принцип метода твердофазного ИФА
Принципом иммунохимического определения бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах, смывах является твердофазный иммуноферментный анализ на полистироловых планшетах, покрытых моноклональными антителами к термостабильному антигену бактерий. Результатом проведения ИФА служит образование комплекса антиген-антитело при исследовании тестируемых образцов в сравнении с негативными и позитивными контролями. Использование твердой фазы позволяет надежно разделять компоненты реакции за счет иммобилизации одного из компонентов, не участвующих в реакции.
Для осуществления реакции данного типа используется тест-система LOCATE(R) Salmonella с высокоспецифичными моноклональными антителами к термостабильным "О"-антигенам и соматическим антигенам клеточной стенки бактерий рода Salmonella. Этим обеспечивается эффективное определение как подвижных, так и неподвижных штаммов бактерий. Тест-система LOCATE(R) Salmonella спроектирована в формате стрипованного 96-луночного ИФА-планшета, что позволяет выполнять исследования от 1 до 94 образцов одновременно как при визуальной, так и при автоматической оценке результата (с помощью ридера).
4. Аппаратура, материалы, питательные среды и тест-системы
----------------------------------------------------------T---------------¬
¦Термостат электрический с диапазоном измерения от 15 до ¦ТУ 64-1-1382-83¦
¦65 град. С с допустимой погрешностью регулирования ¦ ¦
¦температуры +/- 1 град. С ¦ ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Стерилизатор паровой медицинский ¦ГОСТ 19569 ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Шкаф сушильно-стерилизационный, обеспечивающий ¦ ¦
¦поддержание заданного температурного режима в диапазоне ¦ ¦
¦от 50 до 200 град. С с погрешностью +/- 2 град. С ¦ ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Гомогенизатор бактериологический перистальтического типа ¦ ¦
¦Masticator (или Stomacher) со стерильными ¦ ¦
¦полиэтиленовыми пакетами ¦ ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 ¦ТУ 16-535-84 ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания ¦ГОСТ 24104 ¦
¦200 г и допустимой погрешностью +/- 2 мг ¦ ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Холодильник бытовой электрический ¦ГОСТ 16317 ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Пипетки градуированные исполнения 1, 2 классов точности ¦ГОСТ 29227 ¦
¦вместимостью 1 куб. см, 10 куб. см ¦ ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Пробирки бактериологические вместимостью не менее ¦ГОСТ 25336 ¦
¦10 куб. см ¦ ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Посуда широкогорлая ¦ГОСТ 25336 ¦
+---------------------------------------------------------+---------------+
¦Питательные среды: ¦
¦Забуференный бульон для обогащения сальмонелл ¦
¦Тетратионатный бульон ¦
¦Селенитовый бульон ¦
¦Висмут-сульфит агар ¦
¦XLD-агар ¦
+---------------------------------------------------------T---------------+
¦Компоненты набора тест-системы LOCATE(R) Salmonella: ¦ ¦
¦Микротитровальный стрипованный планшет на 96 лунок, ¦1 шт. ¦
¦покрытых моноклональными антителами на сальмонеллы ¦ ¦
¦Коньюгат, в рабочем разведении ¦1 шт. ¦
¦Положительный контроль (термически дезактивированные ¦1 шт. ¦
¦бактерии рода Salmonella), 2 мл ¦ ¦
¦Отрицательный контроль (термически дезактивированные ¦1 шт. ¦
¦бактерии), 2 мл ¦ ¦
¦Концентрирующий моющий буфер, 25-кратный, 20 мл ¦2 шт. ¦
¦Субстрат, ТМБ, 15 мл ¦1 шт. ¦
¦Стоп-реагент, содержит 2% раствор серной кислоты, 15 мл ¦1 шт. ¦
¦Схема планировки планшета ¦1 шт. ¦
L---------------------------------------------------------+----------------
5. Отбор и подготовка проб к анализу

5.1. Отбор и подготовку проб продукции производят в соответствии с ГОСТ 26668-85 "Методы отбора проб для микробиологических анализов", ГОСТ 26669-85 "Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов", МУК 4.2.577-96 "Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов", ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218-96), а также в соответствии с действующими ГОСТ и НД на конкретные виды продуктов.
5.2. Масса или объем отбираемых проб должны быть достаточными для проведения исследования и превышать аналитический образец не менее чем в два раза.
5.3. От продукции в потребительской таре в мелкой фасовке пробы отбирают в количестве одной или нескольких единиц в зависимости от массы или объема потребительской тары так, чтобы количество было достаточным для проведения анализа.
5.4. От продукции в транспортной или потребительской таре больших размеров или без упаковки пробы отбирают из разных точек: с поверхности и с различной глубины.
5.5. Пробы для микробиологических анализов отбирают стерильным инструментом в стерильную посуду до взятия проб на физико-химические и органолептические исследования.
5.6. Замороженные продукты предварительно размораживают до температуры внутри продукта 0 - (-1) град. С (не менее 1 ч в термостате при температуре 37 град. С); продукты, содержащие жиры (сливочное масло, мороженое), нагревают до температуры 40-45 град. С и перемешивают.
5.7. Отобранные образцы перемешивают и измельчают или доводят до однородной консистенции по ГОСТ 26669-85; из измельченной суспензии составляют навеску необходимой массы (25 г).
5.8. При посевах высококислотных или щелочных (с рН 7,5) жидких и твердых продуктов для предотвращения изменения рН питательных сред на 0,5 и более рН продукта перед посевом доводят до 7,0 +/- 0,2 по ГОСТ 30519-97 "Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella".
5.9. Смывы отбирают с помощью стерильных увлажненных тампонов, сделанных из марли или ваты, с поверхности оборудования и инвентаря площадью 100 куб. см, используя трафарет. Трафарет фламбируют перед каждым употреблением.
6. Определение бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах
методом твердофазного иммуноферментного анализа
6.1. Предобогащение: внести 25 г подготовленной пробы в 225 мл бульона предобогащения. Перемешать образец в стомахере, блендере или с помощью другой техники, обеспечивающей достаточно хорошее перемешивание. Инкубировать в течение 18-24 ч при 37 град. С.
6.2. Селективное обогащение: после инкубации перенести по 0,1 мл предобогащенной пробы в 10 мл тетратионатного бульона и в 10 мл бульона Раппапорта-Вассилиадиса. Инкубировать бульоны в течение 18-24 ч при 42 +/- 0,5 град. С.
Примечание 1:
Взамен одного из селективных бульонов на второй день допускается использовать селенитовый бульон с режимом инкубации 37 +/- 0,5 град. С 24 часа.
6.3. После инкубации перенести по 1 мл культуральной жидкости из каждого бульона селективного обогащения в две пробирки с 10 мл модифицированного GN-бульона , каждую пробирку с GN-бульоном подписать. Инкубировать в течение 4-6 ч при 42 +/- 0,5 град. С.
--------------------------------
Модифицированный GN-бульон содержит 10 мкг/мл новобиоцина.
6.4. После инкубации перенести по 1 мл из каждой пробирки с GN-бульоном в одну стеклянную пробирку на 10 мл и проавтоклавировать при 121 град. С (допускается использовать кипящую водяную баню в течение 20 мин. для инактивации живых бактерий). Оставшиеся бульоны (не термообработанные) поместить в холодильник до конца исследования.
6.5. Охладить пробу до комнатной температуры. Тщательно перемешать бульон после охлаждения и использовать для ИФА.
7. Подготовка реагентов для ИФА
7.1. Для анализа используется иммуноферментная тест-система LOCATE(R) Salmonella производства R-Biopharm Rhone Ltd.
7.2. Приготовление рабочих разведений растворов, входящих в комплект тест-системы:
7.2.1. Подготовить моющий буфер в рабочем разведении: разбавить концентрат моющего буфера в 25 раз дистиллированной водой (смешать 20 мл буфера и 480 мл дистиллированной воды). Отметить дату приготовления на флаконе с буфером. Хранить буфер в холодильнике.
7.2.2. Рабочий раствор конъюгата: добавить 7 мл буфера для разбавления конъюгата во флакон с сублимированным конъюгатом. Отметить дату приготовления на крышке флакона (срок хранения 28 дней с момента приготовления).
7.2.3. Субстрат (ТМБ) поставляется в рабочем разведении.
7.2.4. Стоп-реагент поставляется в рабочем разведении.
7.2.5. Положительные и отрицательные контроли поставляются в рабочем разведении.
8. Проведение ИФА
8.1. Извлечь из пакета необходимое количество стрипов, разделить на необходимое количество лунок (по одной лунке на каждую пробу) и 2 лунки для контрольных растворов. Поместить лунки в планшетную рамку и зафиксировать. Немедленно упаковать оставшиеся лунки в пакет вместе с силикагелем.
8.2. Внести по 100 мкл растворов положительного и отрицательного контроля в соответствующие лунки. Внести по 100 мкл исследуемых термообработанных бульонов в соответствующие лунки. Обозначить положение каждой лунки на прилагаемой диаграмме. Инкубировать планшет при температуре 37 град. С в темноте 30 мин.
8.3. После инкубации с помощью автоматического вошера или многоканальной автоматической пипетки с переменным объемом внести в каждую лунку по 250 мкл моющего буфера. Повторить процедуру промывания еще 3 раза, после чего промыть лунки 1 раз дистиллированной водой. Перевернуть рамку и тщательно выбить капли дистиллированной воды путем постукивания рамки по столу, накрытой фильтровальной бумагой.
8.4. Внести по 100 мкл конъюгата в каждую лунку (при необходимости использования большого количества лунок использовать 8-канальную автоматическую пипетку). Инкубировать планшет при температуре 37 град. С 30 мин.
8.5. По окончании инкубации промыть лунки планшета, как описано в п. 8.3.
8.6. Внести по 100 мкл субстрата в каждую лунку (при необходимости исследования большого количества образцов использовать ванночку для реагентов и 8-канальную пипетку). Чтобы снять излишки субстрата с верхнего края лунок, необходимо промокнуть лунки фильтровальной бумагой. Немедленно поставить планшет в темноту, инкубировать его при температуре 37 град. С 30 мин.
8.7. Учет результатов:
- При визуальной интерпретации результатов: считывание результатов проводится сразу после инкубации. Стоп-реагент не добавляется.
- При автоматизированном учете результатов: по окончании инкубации добавить в каждую лунку по 100 мкл стоп-реагента. В течение 5-ти минут (не более) после добавления стоп-реагента измерить оптическую плотность в каждой лунке, используя фотометр планшетный (ридер) с длиной волны 450 нм.
9. Интерпретация результатов
9.1. Интерпретация результатов, полученных с помощью ридера:
9.1.1. При значении оптической плотности 0,3 и менее результат расценивается как отрицательный - в исследованной пробе пищевого продукта бактерии рода Salmonella

КОНСЕРВЫ

ГОСТ 23651-79 Консервированная молочная продукция. Упаковка и маркировка
ГОСТ 30305.2-95 Консервы молочные сгущенные и продукты молочные сухие. Методика выполнения измерения
ГОСТ 30305.3-95 Консервы молочные сгущенные и продукты молочные сухие. Титриметрические методики
ГОСТ Р 51452-99 Консервы молочные сгущенные. Гравиметрический метод определения массовой доли жира
ГОСТ 27709-88 Консервы молочные сгущенные. Метод измерения вязкости
ГОСТ 30305.1-95 Консервы молочные сгущенные. Методики выполнения измерений массовой доли влаги
ГОСТ 29246-91 Консервы молочные сухие. Методы определения влаги
ГОСТ 29248-91 Консервы молочные. Йодометрический метод определения сахара
ГОСТ 718-84 Консервы молочные. Какао со сгущенным молоком и сахаром. Технические условия
ГОСТ 719-85 Консервы молочные. Кофе натуральный со сгущенным молоком и сахаром. Технические условия
ГОСТ 29247-91 Консервы молочные. Методы определения жира
ГОСТ 29245-91 Консервы молочные. Методы определения физических и органолептических показателей
ГОСТ 4771-60 Консервы молочные. Молоко нежирное сгущенное с сахаром. Технические условия

ПРОДУКТЫ МОЛОЧНЫЕ

ГОСТ 30347-97 Продукты молочные. Метод определения Staphilococcus aureus
ГОСТ 25102-90 Продукты молочные. Методы определения спор мезофильных анаэробных бактерий
ГОСТ Р 51472-99 Продукты молочные сухие. Метод определения "количества белых пятен"
ГОСТ Р 51462-99 Продукты молочные сухие. Метод определения насыпной плотности
ГОСТ 30519-97 и Р 50480-93 Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella
ГОСТ 10444.12-88 Продукты пищевые. Метод определения дрожжей и плесневых грибов
ГОСТ 10444.11-89 Продукты пищевые. Методы определения молочнокислых микроорганизмов
ГОСТ 30305.4-95 Продукты молочные сухие. Методика выполнения измерений индекса растворимости
ГОСТ Р 51331-99 Продукты молочные. Общие технические условия
ГОСТ 3627-81 Продукты молочные . Методы определения хлористого натрия
ГОСТ 27930-88 Продукты молочные. Биоколомитрический метод определения общего количества бактерий
ГОСТ 22760-77 Продукты молочные. Гравиметрический метод определения жира
ГОСТ 23327-98 Продукты молочные. Метод измерения массовой доли общего азота по Кьельдалю и определение массовой доли белка
ГОСТ Р 51259-99 ДИН 10344-82 Продукты молочные. Метод определения лактозы и галактозы
ГОСТ 23452-79 Продукты молочные. Метод определения остаточных количеств хлорорганических пестицидов (Оборудование газовой хроматографии)
ГОСТ Р 51258-99 ДИН 10326-86 Продукты молочные. Метод определения сахарозы и глюкозы
ГОСТ 3629-47 Продукты молочные. Метод определения спирта
ГОСТ 9225-84 Продукты молочные. Методы микробиологического анализа
ГОСТ 3626-73 Продукты молочные. Методы определения влаги и сухого вещества
ГОСТ 5867-90 Продукты молочные. Методы определения жира
ГОСТ 3623-73 Продукты молочные. Методы определения пастеризации
ГОСТ 3625-84 Продукты молочные. Методы определения плотности
ГОСТ 3628-78 Продукты молочные. Методы определения сахара
ГОСТ 3622-68 Продукты молочные. Отбор проб и подготовка их к испытанию
ГОСТ 26809-86 Продукты молочные. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу
ГОСТ 3624-92 Продукты молочные. Титриметрические методы определения кислотности
ГОСТ 23651-79 Продукция молочная консервированная. Упаковка и маркировка

МОЛОКО, СЛИВКИ, ЙОГУРТЫ

ГОСТ 2903-78. Молоко цельное сгущенное с сахаром. Технические условия. Статус: Действует ГОСТ 4495-87 Молоко цельное сухое. Технические условия
ГОСТ 30004.2-93-2. Майонезы. Правила приемки и методы испытаний. Статус: Действует
ГОСТ 23621-79 Молоко коровье обезжиренное сухое, поставляемое на экспорт. Технические условия
ГОСТ 13277-79 Молоко коровье пастеризованное. Технические условия
ГОСТ 13928-84 Молоко и сливки заготовляемые. Правила приемки, методы отбора проб и подготовки их к анализу
ГОСТ 25228-82 Молоко и сливки. Метод определения термоустойчивости по алкогольной пробе
ГОСТ 10970-87 Молоко сухое обезжиренное. Технические условия
ГОСТ Р 51196-98 ИСО 8069-86 Молоко сухое. Метод определения молочной кислоты и лактатов
ГОСТ 13264-70 Молоко коровье. Требования при заготовках
ГОСТ 26781-85 Молоко. Метод измерения РН
ГОСТ 25101-82 Молоко. Метод определения точки замерзания
ГОСТ 28283-89 Молоко. Метод органолептической оценки запаха и вкуса
ГОСТ Р 51451-99 Молоко. Методика учета надоев коровьего молока
ГОСТ 24066-80 Молоко. Метод определения аммиака
ГОСТ 24067-80 Молоко. Метод определения перекиси водорода
ГОСТ 24065-80 Молоко. Метод определения соды
ГОСТ 25179-90 Молоко. Методы определения белка
ГОСТ 30562-97 ИСО 5764-87 Молоко. Определение точки замерзания. Термисторный криоскопический метод
ГОСТ 23454-79 Молоко. Методы определения ингибирующих веществ
ГОСТ 30637-99 Молоко. Методы определения раскисления
ГОСТ 23453- 90 Молоко. Методы определения количества соматических клеток
ГОСТ Р 51473-99 Молоко. Спектрометрический метод определения массовой доли общего фосфора
ГОСТ 8218-89 Молоко. Метод определения чистоты
ГОСТ Р 51451-99 Молоко. Методика учета надоев коровьего молока
ГОСТ Р 51600-2000 Молоко. Методы определения антибиотиков
ГОСТ 27930-88 Молоко. Биоколомитрический метод определения общего количества бактерий
ГОСТ 23327-98 Молоко. Метод измерения массовой доли общего азота по Кьельдалю и определения массовой
ГОСТ 30347-97 Молоко. Метод определения Staphilococcus aureus
ГОСТ Р 51259-99 ДИН 10344-82 Молоко. Метод определения лактозы и галактозы
ГОСТ 23452-79 Молоко. Метод определения остаточных количеств хлорорганических пестицидов
ГОСТ Р 51258-99 ДИН 10326-86 Молоко. Метод определения сахарозы и глюкозы
ГОСТ 26754-85 Молоко. Методы измерения температуры
ГОСТ 9225-84 Молоко. Методы микробиологического анализа
ГОСТ 3626-73 Молоко. Методы определения влаги и сухого вещества
ГОСТ 5867-90 Молоко. Методы определения жира Статус: Утратил силу на территории Российской Федерации в части разд. 4.
ГОСТ 3623-73 Молоко. Методы определения пастеризации
ГОСТ 3625-84 Молоко. Методы определения плотности
ГОСТ 25102-90 Молоко. Методы определения спор мезофильных анаэробных бактерий
ГОСТ 3622-68 Молоко. Отбор проб и подготовка их к испытанию
ГОСТ 26809-86 Молоко. Правила приемки ,методы отбора и подготовка проб к анализу
ГОСТ 3624-92 Молоко. Титриметрические методы определения кислотности
ГОСТ 23455-79 Препарат "Мастоприм". Технические условия
ГОСТ Р 51455-99 Йогурты. Потенциометрический метод определения титрируемой кислотности
ГОСТ Р 51331-99 Йогурты. Общие технические условия

ЖИРЫ, МАСЛА, СЫРЫ

ГОСТ Р 51453-99 Жир молочный. Метод определения перекисного числа в безводном жире
ГОСТ Р 51471- 99 Жир Молочный. Метод обнаружения растительных жиров газожидкостной хроматографией стеринов Статус: Действует
ГОСТ Р 51445-99 ИСО6320-95 Жиры и масла животные. Метод определения показателя преломления
ГОСТ 11812-66 Масла растительные. Методы определения влаги летучих веществ
ГОСТ Р 51456-99 Масло сливочное. Потенциометрический метод определения активной кислотности плазмы
ГОСТ 37-91 Масло коровье. Технические условия
ГОСТ 6822-67 Масло шоколадное. Технические условия
ГОСТ Р 51459-99 Сыр и сыр плавленый. Метод определения массовой доли лимонной кислоты
ГОСТ Р 51458-99 Сыр и сыр плавленый. Метод определения массовой доли общего фосфора
ГОСТ 11041-88 Сыр "Российский". Технические условия
ГОСТ Р 51460-99 Сыр. Метод определения массовых долей нитратов и нитритов
ГОСТ Р 51257-99 ДИН 10325-86 Сыры плавленые. Метод определения лимонной кислоты
ГОСТ 27568-87 Сыры сычужные твердые для экспорта. Технические условия
ГОСТ 7616-85 Сыры сычужные твердые. Технические условия
ГОСТ Р 51461-99 Сыры плавленые. Метод определения массовой доли добавленных цитратных эмульгаторов и регуляторов кислотности

КАЗЕИНЫ, КАЗЕИНАТЫ

ГОСТ 17626-81 Казеин технический. Технические условия
ГОСТ Р 51463-99 Казеины сычужные и казеинаты. Метод определения массовой доли золы
ГОСТ Р 51464-99 Казеины и казеинаты. Метод определения массовой доли влаги
ГОСТ Р 51470- 99 Казеины Казеинаты. Метод определения массовой доли белка
ГОСТ Р 51454-99 Казеины и казеинаты. Метод определения массовых долей нитратов и нитритов
ГОСТ Р 51465 - 99 Казеины и казеинаты. Метод определения содержание пригорелых частиц
ГОСТ Р51469-99 Казеины и Казеинаты. Фотометрический метод определения массовой доли лактозы
ГОСТ Р 51466-99 Казеины. Метод определения массовой доли "связанной золы"
ГОСТ Р 51468 -99 Казеины. Метод определения свободной кислотности

Читайте также: