Диагностикум латексный для серотипирования бактерий рода salmonella

Группа компаний "Униконс"

Продвижение и реализация пищевых добавок, антисептиков и другой продукции НПО Альтернатива.

"Бесплатные образцы"

Комплексные пищевые добавки "Униконс".

Для всех отраслей пищевой промышленности!

"Петритест"

Микробиологические экспресс-тесты. Первые результаты уже через 4 часа.

Вы здесь:
Библиотека технолога
ГОСТы, документы
ГОСТ 7702.2.0-2016 - ПРОДУКТЫ УБОЯ ПТИЦЫ, ПОЛУФАБРИКАТЫ ИЗ МЯСА ПТИЦЫ И ОБЪЕКТЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ СРЕДЫ. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям

Подготовка к микробиологическим исследованиям

11 Подготовка к микробиологическим исследованиям

11.1 Общие положения
Общие положения по подготовке к микробиологическим исследованиям - по ГОСТ ISO 7218.

11.2 Средства измерений, оборудование, материалы, реактивы, растворы и питательные среды
11.2.1 При подготовке к микробиологическим анализам применяют средства измерений, оборудование, материалы, реактивы, растворы и питательные среды по ГОСТ 7702.2.7, ГОСТ 7702.26, ГОСТ 31467, ГОСТ 31468. а также следующие.
Автоклав по ГОСТ ISO 7218.
Бутыли.
Весы лабораторные по ГОСТ ISO 7218, ГОСТ OIML R 76-1. Дозатор для розлива питательных сред и реактивов по ГОСТ ISO 7218.
Колбы по ГОСТ 25336.
Кружка по ГОСТ 9147.
Ламинарный шкаф класса биологической безопасности II.
Баня водяная.
Лампы бактерицидные (1,5-2,5 Вт на 1 м3 воздуха).
Лоток.
Лупа по ГОСТ 25706.
Магнитные мешалки с подогревом до 300 °С.
Материалы для упаковки посуды при стерилизации.
Петля бактериологическая.
Пинцеты медицинские по ГОСТ 21241.
Пипетки градуированные по ГОСТ 29227, ГОСТ 29228.
Пипетки Пастера.
Пробирки с поплавками (трубки Дархема).
Пробирки по ГОСТ 25336.
Пробирки агглютинационные.
Пипетки автоматические вместимостью 10, 2, 1 см3 по ГОСТ 29227.
Посуда одноразовая для микробиологических исследований.
Печь микроволновую для расплавления питательных сред по ГОСТ ISO 7218.
Прибор для подсчета колоний по ГОСТ ISO 7218.
рН-метр с точностью калибровки ± 0,1 ед. рН при температуре от 20 °С до 25 °С по ГОСТ ISO 7218.
Скальпели и ножи медицинские по ГОСТ 21240.
Спиртовка по ГОСТ 25336.
Стаканы по ГОСТ 25336.
Стекла предметные по ГОСТ 9284.
Стекла покровные по ГОСТ 6672.
Стерилизационный сушильный шкаф для температурного режима (180 ± 0,5) °С по ГОСТ ISO 7218.
Ступка по ГОСТ 9147.
Термометры жидкостные стеклянные с диапазоном температуры от 0 °С до 50 °С и от 50 °С до 100 °С по ГОСТ 28498.
Термостаты электрические для выращивания микроорганизмов с автоматическим терморегулято¬ром, обеспечивающие поддержание температуры от 20 °С до 55 °С по ГОСТ ISO 7218.
Фильтр Зейтца.
Флаконы из темного стекла с притертой пробкой.
Холодильник или холодильная камера по ГОСТ ISO 7218.
Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.
Чашки Петри стеклянные по ГОСТ 25336.
Бумага оберточная по ГОСТ 8273.
Бумага крепированная.
Крафт-бумага.
Пробки силиконовые, резиновые.
Пеналы для стерилизации лабораторной посуды.
Пакеты бумажные самоклеящиеся с индикаторами для паровой и воздушной стерилизации (для упаковывания изделий медицинского назначения перед стерилизацией).
Материал пластиковый без складок с индикаторами для паровой и воздушной стерилизации (для упаковывания изделий медицинского назначения перед стерилизацией).
Аппарат термосварочный ротационного или импульсного типа для запечатывания упаковок для стерилизации.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556.
Марля медицинская по ГОСТ 9412.
Агар микробиологический по ГОСТ 17206.
Агар сухой питательный.
Азид натрия (NaN3).
Аминопептид.
Ацетат свинца.
Бриллиантовый зеленый,
Бромтимоловый синий.
Бромкрезоловый пурпурный.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Вода питьевая.
Генциан фиолетовый.
Глицерин дистиллированный по ГОСТ 6824.
D-Глюкоза по ГОСТ 6038.
Дрожжевой диализат.
Дрожжевой экстракт.
Дрожжи хлебопекарные прессованные по ГОСТ 171. Желатин по ГОСТ 11293.
Железо (II) аммония сульфат (соль Мора) (NН4)2SO4 ∙ FеSO4 ∙ 6Н2О.
Железо (III) аммония сульфат.
Железо треххлористое 6-водное по ГОСТ 4147.
Железо (III) цитрат.
Железо (II) сернокислое 7-водное по ГОСТ 4148.
Желчь крупного рогатого скота натуральная или сухая.
Индикатор Андреде.
Йод по ГОСТ 4159.
Калия гидрат окиси технический по ГОСТ 9285.
Калий йодистый по ГОСТ 4232.
Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный по ГОСТ 2493.
Калий фосфорнокислый двузамещенный безводный.
Калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198.
Кальций углекислый по ГОСТ 4530.
Кислота карболовая кристаллическая (фенол).
Кислота розоловая ч. д. а.
Кислота соляная по ГОСТ 3118.
Кислота щавелевая по ГОСТ 22180.
Кристаллический фиолетовый.
Хлорид лития 6-водный.
Лактоза.
Магний хлористый 6-водный по ГОСТ 4209.
Малахитовый зеленый.
Мальтоза.
Маннит.
Масло вазелиновое медицинское по ГОСТ 3164.
Метиленовый синий (голубой).
Метиловый красный.
Карбамид (мочевина) по ГОСТ 6691.
Мясо – говядина охлажденная по ГОСТ 31797.
Мясной экстракт.
Натрия гидроокись, раствор молярной концентрацией 1,0 моль/дм3 (фиксанал).
Натрия гидроокись, раствор молярной концентрацией 0,1 моль/дм3 (фиксанал).
Натр едкий очищенный по ГОСТ 11078.
Натрий углекислый кислый по ГОСТ 4201.
Натрий кислый селенистокислый.
Натрий серноватистокислый (тиосульфат натрия, гипосульфит натрия) по ГОСТ 27068, ч.д.а.
Натрий углекислый (карбонат).
Натрий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 11773.
Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный по ГОСТ 245.
Натрий хлористый по ГОСТ 4233.
Натрия сульфит.
Пируват натрия.
Парадиметиламинобензальдегид.
Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805.
Плазма кроличья сухая.
Сахароза по ГОСТ 5833.
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.
Триптон.
Теллурит калия.
Толуол по ГОСТ 5789.
Фуксин кислый.
Феноловый красный.
Фуксин основной.
DL-фенилаланин.
L-фенилаланин.
DL-аминокислоты (лизин, орнитин, аргинин).
L-аминокислоты (лизин, орнитин, аргинин).
α-нафтол.
L-цистин.
Яйца куриные по ГОСТ 31654.
Желточная эмульсия.
Водный раствор метиленового синего (голубого) массовой концентрацией 0,1 %.
Раствор карболовый кристаллического фиолетового или генциан фиолетового.
Раствор карболовый фуксина Циля.
Раствор Люголя.
Раствор серноватистокислого натрия (тиосульфата, гипосульфита).
Раствор розоловой кислоты массовой концентрацией 5,0 %.
Раствор индикатора бромтимолового синего.
Раствор индикатора Андреде.
Раствор фенолового красного массовой концентрацией 1,6 %.
Раствор фенолового красного массовой концентрацией 0,4 %.
Раствор бриллиантового зеленого массовой концентрацией 0,001 %.
Раствор бриллиантового зеленого массовой концентрацией 0,5 %.
Раствор малахитового зеленого массовой концентрацией 1,0 %.
Раствор трифенилтетразолиума хлористого массовой концентрацией 0,4 %.
Раствор натрия кислого селенистокислого массовой концентрацией 10,0 %.
Раствор L-цистина.
Раствор мочевины массовой концентрацией 40,0 %.
Раствор мочевины массовой концентрацией 20,0 %.
Раствор метилового красного.
Раствор гидрата окиси калия массовой концентрацией 40.0 %.
Раствор щавелевой кислоты массовой концентрацией 12.0 %.
Раствор железа треххлористого 6-водного массовой концентрацией 8,0 %.
Реактив Эрлиха.
Реактив Ковача по ГОСТ 31659.
β-галактозидный реактив по ГОСТ 31659.
Реактивы для теста Григорсена по ГОСТ 31747.
Спирто-водный раствор фуксина Пфейфера.
Спиртовой раствор α-нафтола.
Физиологический раствор.
Физиологический фосфат-буферный раствор.
Бумага индикаторная для обнаружения индола.
Бумага индикаторная для определения сероводорода.
Красящие бумажки с кристаллическим фиолетовым или генциан фиолетовым для окраски по Граму.
Растворы и реактивы для окрашивания по Граму и для выявления спор – по ГОСТ 10444.1, ГОСТ 30425, ГОСТ ISO 7218.
Реактивы для реакции Фогес-Проскауера по ГОСТ 31659.
Калий гидрофосфатный безводный.
Диски с углеводами для тестов на ферментацию сахаров, по прилагаемой к ним инструкции.
Диски индикаторные бумажные для определения оксидазы.
Диск для биохимического подтверждения сальмонелл.
Диск для подтверждения St. aureus.
Сухие агглютинирующие адсорбированные поливалентные сальмонелезные О-сыворотки основных групп А, В, C, Д, Е и редких групп; Vi-, H-аглютинирующие сыворотки по прилагаемой к ним инструкции.
Системы биохимических микротестов по прилагаемой к ним инструкции. Биохимические микро¬тесты со специальной адаптированной базой данных ГОСТ 31468.
Водорода пероксид по ГОСТ 10929 массовой концентрацией 30 г/дм3.
Сухой или жидкий панкреатический гидролизат казеина.
Сусло-агар по ГОСТ 27543.
Среда Сабуро по ГОСТ 10444.12.
Голодный агар.
Агар желточно-солевой.
Агар яично-желточный азидный.
Агар Байрд-Паркера.
Агар с мочевиной (Кристенсена).
Агар трехсахарный по Олькеницкому.
Агар полужидкий.
Агар с феноловым красным и бриллиантовым зеленым.
Агар SPS.
Агар усиленный для клостридий.
Агар триптонно-сульфитный с неомицином.
Амино-пептидный бульон.
Бульон Хоттингера по ГОСТ 10444.1.
Бриллиантовый зеленый лактозный желчный бульон по ГОСТ 31747.
Желатиновая среда.
Среда железосульфитная.
Забуференная пептонная вода.
Забуференная пептонная вода готовая жидкая стерильная.
Забуференная пептонная вода сухая.
Мясная вода.
Солевой бульон.
Мясо-пептонный бульон с 1 % глюкозы.
Мясо-пептонный агар.
Мясо-пептонный агар с глюкозой.
Мясо-пептонный агар с глюкозой и дрожжевым экстрактом.
Пептонная вода.
Пептонно-солевой раствор.
Пептонно-буферная среда.
Питательная среда для выявления сальмонелл.
Селенитовая среда Лейфсона.
Среды Гисса с углеводами.
Среда Вильсон-Блера (агаризованная), измененная для анаэробов.
Среда Кларка для реакции Фогес-Проскауэра.
Агаризованная среда Байрд-Паркера по ГОСТ 31746.
Среда для расщепления фенилаланина.
Среды с аминокислотами (лизином, орнитином, аргинином).
Среда Китт-Тароцци.
Среда Кесслера (с лактозой).
Среда Кауфмана.
Среда Мюллера.
Селенитовая среда.
Селенитово-цистиновая среда.
Селенит-цистиновый накопительный бульон.
Магниевая или хлористомагниевая среда.
Среда Ресселя.
Среда из сухого питательного агара с глюкозой.
Среда с углеводом (маннитом или мальтозой) и феноловым красным.
Среда Хейфеца с лактозой.
Среда Раппапорта-Вассилиадиса с соей (RVS-бульон) по ГОСТ 31659.
Среда Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R 10).
Сахарный бульон.
Тетратионатный бульон Мюллера-Кауфмана по ГОСТ 31659.
Агаризованная среда с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном по ГОСТ 31746.
Готовая питательная среда с растворами теллурита калия, сульфамезатина и эмульсии яичного желтка по ГОСТ 31746.
ГРМ агар (сухой питательный агар для культивирования микроорганизмов на основе гидролизата рыбной муки) по ГОСТ 31746.
Модифицированная полужидкая среда по инструкции на этикетке.
Висмут-сульфитный агар по инструкции на этикетке.
Среда Плоскирева по инструкции на этикетке.
Среда Эндо.
Среда готовая на тест-пластине
Среда Левина по инструкции на этикетке.
Среда Клиглера по ГОСТ 31659.
Среда SIM для идентификации по инструкции на этикетке.
Среда для реакции Фогес-Проскауера по ГОСТ 31659.
Среда Олькеницкого.
Триптон-триптофановая среда по ГОСТ 31659.
L-лизиндекарбоксилазная среда по ГОСТ 31659.
ONPG-диски для определения ß-галакгозидазной активности по инструкции на этикетке.
Модифицированная полужидкая среда MSRV по инструкции на этикетке.
Бриллиантово-зеленый агар по инструкции на этикетке.
XLD-4 агар по инструкции на этикетке.
VP-среда по ГОСТ 31659.
Агар тройной сахарный по инструкции на этикетке.
Агар с цитратом железа (Симмонса) по инструкции на этикетке.
Агар Кристенсена с мочевиной по ГОСТ 31659.
Агар Байрд-Паркера по ГОСТ 31746.
Агар тройной сахарный с цитратом железа по инструкции на этикетке.
Агар лактозный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным по ГОСТ 31747.
Глюкозо-триптонный (агар) бульон по ГОСТ 10444.1.
Кристалл виолет нейтральный красный желчный лактозный агар (VRBL-arap).
Трехсахарный железистый агар (TSI-arap) по ГОСТ 31746.
Скошенный столбик агара с цитратом (Симмонса).
Скошенный столбик мясо-пептонного агара.
Селективная обогатительная среда (лаурил сульфат триптозный бульон) по ГОСТ 31747.
Селективная обогатительная среда (бульон Мак-Конки) по ГОСТ 31747.
Селективная добавка.
Система для культивирования анаэробных микроорганизмов и капнофильных бактерий
Диагностикум латексный для серотипирования бактерий рода Salmonella по документу, действующему на территории государства, принявшего стандарт.
Набор для подтверждения идентификации бактерий рода Salmonella с помощью латекс-теста по документу, действующему на территории государства, принявшего стандарт.
Тест-наборы для биохимической идентификации бактерий рода Salmonella.
Тест-штампы бактерий рода Salmonella, не относящихся к тифозной группе.

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Бровкина Анна Николаевна

Диагностические препараты, созданные на основе полимерных носителей , находят широкое применение в диагностике различных заболеваний с целью обнаружения малого количества антител или антигенов в различных субстратах. Благодаря своим физико-химическим свойствам, полимерные частицы являются удобными носителями при создании различных диагностических тест-систем в области иммуноанализа. К преимуществам реакции латекс-агглютинации можно отнести следующие моменты: простота и быстрота выполнения, отсутствие необходимости в сложной аппаратуре, воспроизводимость и точность, возможность получения больших партий стандартных и однородных полимерных суспензий

DEFINITION OF SALMONELLAS IN FOWL AND ON WORKING SURFACES POULTRY-FARMING AND POULTRY-FARM THE ENTERPRISES WITH THE HELP OF TESTS SYSTEMS ON THE BASIS OF LATEX AGGLUTINATION

The diagnostic preparations created on the basis of polymeric carriers, find wide application in diagnostics of various diseases with the purpose of detection of small quantity of antibodies or antigenes in various substrata. Due to the physical and chemical properties, polymeric particles are convenient carriers at creation of various diagnostic tests systems in area immunoassay. It is possible to attribute the following moments to advantages of reaction of latex agglutination : simplicity and speed of performance, absence of necessity for the complex equipment, reproducibility and accuracy, an opportunity of reception of the big parties of standard and homogeneous polymeric suspensions

ОПРЕДЕЛЕНИЕ САЛЬМОНЕЛЛ В МЯСЕ ПТИЦЫ И НА РАБОЧИХ ПОВЕРХНОСТЯХ ПТИЦЕВОДЧЕСКИХ И ПТИЦЕПЕРЕРАБАТЫВАЮЩИХ ПРЕДПРИЯТИЙ С ПОМОЩЬЮ ТЕСТ-СИСТЕМ НА ОСНОВЕ ЛАТЕКС-АГГЛЮТИНАЦИИ

Бровкина Анна Николаевна к.в.н., докторант

Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии РАСХН, Москва, Россия

Диагностические препараты, созданные на основе полимерных носителей, находят широкое применение в диагностике различных заболеваний с целью обнаружения малого количества антител или антигенов в различных субстратах. Благодаря своим физико-химическим свойствам, полимерные частицы являются удобными носителями при создании различных диагностических тест-систем в области иммуноанализа. К преимуществам реакции латекс-агглютинации можно отнести следующие моменты: простота и быстрота выполнения, отсутствие необходимости в сложной аппаратуре, воспроизводимость и точность, возможность получения больших партий стандартных и однородных полимерных суспензий

Ключевые слова: РЕАКЦИЯ ЛАТЕКС-АГГЛЮТИНАЦИИ, ПОЛИМЕРНЫЕ НОСИТЕЛИ, АНТИГЕНЫ, АНТИТЕЛА, ДИАГНОСТИКА

Проблему кишечных токсикоинфекций можно отнести к одной из актуальных и далеко еще не решенных в ветеринарной и медицинской практике. В борьбе с токсикоинфекциями животных и человека, важное значение имеет повышение эффективности ветеринарно-санитарных мероприятий, направленных на их предупреждение, а также объективный санитарно-бактериологический контроль качества продукции животного происхождения и кормов.

Одно из ведущих мест в структуре токсикоинфекций продолжает занимать сальмонеллез. Источником заражения людей и животных наиболее часто являются продукты и корма, контаминированные

DEFINITION OF SALMONELLAS IN FOWL AND ON WORKING SURFACES POULTRY-FARMING AND POULTRY-FARM THE ENTERPRISES WITH THE HELP OF TESTS -SYSTEMS ON THE BASIS OF LATEX -AGGLUTINATION

Brovkina Anna Nikolaevna Cand.Vet.Sci., competitor for doctor's degree

The state scientific institute the All-Russia scientific research institute of veterinary sanitary, hygiene and ecology, The Russian academy of agricultural sciences, Moscow, Russia

The diagnostic preparations created on the basis of polymeric carriers, find wide application in diagnostics of various diseases with the purpose of detection of small quantity of antibodies or antigenes in various substrata. Due to the physical and chemical properties, polymeric particles are convenient carriers at creation of various diagnostic tests - systems in area immunoassay. It is possible to attribute the following moments to advantages of reaction of latex - agglutination: simplicity and speed of performance, absence of necessity for the complex equipment, reproducibility and accuracy, an opportunity of reception of the big parties of standard and homogeneous polymeric suspensions

Keywords: REACTION OF LATEX -AGGLUTINATION, РOLYMERIC CARRIERS, ANTIGENES, ANTIBODIES, DIAGNOSTICS

возбудителями болезни, в связи с чем большую актуальность представляет вопрос совершенствования методов их индикации, которые могли бы обеспечить более достоверную лабораторную экспертизу различных материалов и быть доступными для широкой практики.

К числу таких методов относится реакция латекс-агглютинации (РЛА).

Диагностические препараты, созданные на основе полимерных носителей (ПН), находят широкое применение в диагностике различных заболеваний с целью обнаружения малого количества антител или антигенов в различных субстратах. Благодаря своим физико-химическим свойствам, полимерные частицы являются удобными носителями при создании различных диагностических тест-систем в области иммуноанализа. К преимуществам РЛА можно отнести следующие моменты: простота и быстрота выполнения, отсутствие необходимости в сложной аппаратуре, воспроизводимость и точность, возможность получения больших партий стандартных и однородных полимерных суспензий (ПС).

Принцип работы антительных (антигенных) латексных диагностикумов основан на иммунохимической реакции между антителами (антигенами), связанными с полимерным носителем, который выполняет исключительно индикаторную функцию, и антигенами (антителами) с образованием комплекса антиген-антитело. Появление таких комплексов в виде агглютинатов позволяет проводить учет реакции невооруженным глазом.

Основным этапом создания латексных диагностикумов является специфическая адсорбция антител (антигенов) на поверхность полимера. Эффективность адсорбции определяется влиянием различных факторов

среды, свойствами иммунологического компонента и физико-химическими особенностями ПН.

В ряде стран осуществляется коммерческий выпуск латексных диагностикумов. Известны диагностические препараты, созданные на основе инертных полимерных носителей для индикации в РЛА возбудителей синегнойной инфекции Анциферова Н.Г. с соавт., 1986, стрептококкоза (1), кандидоза (2), эшерихиоза (4), стафилококковой инфекции (5) и др. Относительно низкая стоимость анализа, простота и быстрота выполнения, точность результатов делают РЛА незаменимой в качестве экспресс-метода индикации микроорганизмов. Однако, вариант диагностических тест-систем, созданных на основе полимерных носителей, сенсибилизированных антителами, практически не используется из-за трудности иммобилизации иммуноглобулинов на поверхность носителей. Эффективность адсорбции антител на поверхность ПН и, следовательно, реакционная способность диагностикумов, определяется как свойствами антител, так и физико-химическими характеристиками поверхности частиц. Анализ данных литературы показывает, что сведения о характеристиках полимерных носителей практически отсутствуют, а способы сенсибилизации полимерной поверхности антителами не детализированы и противоречивы. Для создания специфичных и высокочувствительных тест-систем необходим подбор оптимальных условий и параметров процесса их изготовления (3). Диагностические препараты, созданные на основе ПН, могут быть широко применены в РЛА для выявления соответствующих антигенов в различных субстратах. В связи с этим, проблема разработки латексных диагностикумов не теряет своей актуальности и имеет большое практическое значение.

Нами разработан способ изготовления диагностических тест-систем на основе полимерных носителей для индикации бактерий рода Salmonella

в объектах внешней среды, пищевых продуктах и кормах с помощью реакции латекс-агглютинации.

Создание диагностических тест-систем на основе полимерных суспензий для постановки РЛА включает в себя несколько этапов:

- первый этап состоит в выборе природы полимерной суспензии, оптимального диаметра и коэффициента вариации размеров частиц.

- второй этап - в оценке агрегативной устойчивости полимерных суспензий в растворах солей низкой концентрации и их стабильности при хранении.

- третий этап - исследование иммобилизации белков на поверхности полимерных носителей с целью определения оптимальных условий проведения адсорбции и выбор метода связывания иммуноглобулинов с поверхностью ПМ, обеспечивающего высокую специфичность и чувствительность препарата, а также его стабильность при хранении.

- четвертый этап - определение специфичности и чувствительности полученных диагностических тест-систем при индикации гомологичных микроорганизмов в различных объектах.

путем аналогичной обработки ПС без стадии сенсибилизации специфическими антителами. В качестве консерванта полученных диагностических тест-систем использовали 1%-ный раствор мертиолята натрия. Проверку специфичности полученных препаратов проводили в РЛА с культурами микроорганизмов гетерологичных и гомологичных родов и видов. Положительные реакции наблюдали только с гологичными культурами. Перекрестных реакций с гетерологичными культурами при проверке специфичности диагностикумов выявлено не было.

В РЛА с разведениями чистых культур микроорганизмов

гомологичных видов в концентрации от 109 до 104 м.к./см3 оценивали чувствительность диагностических препаратов. Одновременно ставили необходимые контрольные реакции. Чувствительность диагностических препаратов составляла 106 м.к./см3 при отрицательных результатах контрольных реакций.

Срок хранения диагностикумов по показателю первоначальной активности составлял 6-7 месяцев.

диагностикумов проводили изучение возможности индикации бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах, объектах внешней среды и кормах.

Возможность индикации бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах, объектах внешней среды и кормах с помощью полученных

диагностических тест-систем на основе полистирольных полимерных носителей с карбоксильными функциональными группами определяли в РЛА как в опытах с искусственно контаминированными образцами, так и с нативным материалом. С этой целью были исследованы 50 смывов с инвентаря и оборудования птицефабрики (из них смывы №№1 - 10 были сделаны с инструмента на этапе нутровки; смывы №№11 - 20 - с

конвейера нутровки; смывы №№21 - 30 - с подвесок для птицы; смывы №№31 - 40 - с транспортера для тушек; смывы №№41 - 50 - с лотков (стол сортировки) , 50 проб помета птицы, 50 проб кормов для животных и 7 проб пищевых продуктов (мясо и мясопродукты, молочные продукты, яйца, крупы). Параллельно указанные образцы исследовали с помощью бактериологического метода. Результаты, полученные в РЛА, приведены в таблице 1.

Результаты РЛА, полученные при исследовании проб с объектов птицефабрики

№ объект исследования количество положительных реакций

поливалентн ый диагности- кум диагностику м к группе В диагностику м к группе Б

I. С МЫВЫ С ИНВЕНТАРЯ И ОБОРУДОВАНИЯ ПТИЦЕФАБРИКИ

1-10 смывы с инструмента на этапе нутровки 1 1

11-20 смывы с конвейера нутровки 5 1 3

21-30 Смывы с подвесок для птицы 1 1

31-40 смывы с транспор-тера для тушек 3 1 1

41-50 смывы с лотков (стол сортировки)

II. ПРОБЫ ПОМЕТА ПТИЦ (Ы

1-25 птичник № 1 4 - 3

26-35 птичник № 2 2 - 1

36-50 птичник № 3 2 1 1

III. ПРОБЫ КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ

1-30 пробы кормов для птицы 3 2

31-50 пробы кормов для непродуктивных животных - - -

Результаты бактериологических исследований полностью совпали с результатами РЛА. Кроме того, бактериологическим методом были

выявлены сальмонеллы, относящиеся группе С (S. infantis). Однако, вследствие отсутствия диагностикумов на основе ПМ к антигенам сальмонелл группы С, положительные реакции в указанных случаях наблюдали только с поливалентным диагностикумом.

Чувствительность метода оценивали в опытах с искусственно контаминированными образцами пищевых продуктов и кормов. Для этого в образцы мяса, колбас, сыра, яиц, корма массой 25-50 г вносили 17-18-часовые культуры сальмонелл (S. dublin, S. enteritidis, S. gallinarum-pullorum, S. typhimurium) в количестве 1000, 100 и 20 м.к. Искомые бактерии выявляли в РЛА со смешанными культурами, полученными в среде обогащения в результате 6, 8 и 16-часового инкубирования при 37°С.

Сальмонеллы в образцах, контаминированных бактериями в количестве 1000 м.к. на 25г, выявляли в РЛА спустя 6 часов инкубации. Пробы, содержащие первоначально 100 и 20 м.к., положительно реагировали с диагностикумами спустя 16 часов инкубирования.

Во всех случаях положительный результат РЛА соответствовал внесенной культуре микроорганизмов.

В процессе исследований была создана тест-система для индикации бактерий рода Salmonella, которая включала: антительный диагностикум на основе полимерных микросфер, физиологический раствор, предметные стекла и бактериологические петли.

Проведенные исследования на модельных системах с бактериями рода Salmonella, показали возможность использования разработанной тест-системы для индикации сальмонелл в объектах ветеринарносанитарного и экологического контроля.

При проведении мониторинговых исследований указанных объектов с помощью разработанной тест-системы только в отдельных

случаях были выявлены искомые микроорганизмы. Результаты анализа на основе РЛА коррелировали с микробиологическими методами.

Экспрессность, экономичность метода и тест-систем на основе РЛА дает основание для рекомендации данного подхода для индикации бактерий рода Salmonella.

Технология получения сальмонеллезных латексных диагностикумов может быть использована при создании латексных диагностикумов для индикации сальмонелл.

Список использованной литературы:

1. Ajello G.W., Bolan G.A., Hayes P.S. et al.,-Commercial Latex Agglutination Tests for Detection of Haеmophilus Influenzae Type B and Streptococcus Pneumonia Antigens in Patients with Bacteremic Pneumonia.// J. Clin. Microbiol.,-1987,-V.25,-N8,-pp. 1388-1391.

2. Hodfild S. G., Lane A. - A Novel Coloured Latex Test for the Detection and Identification of More Than One Antigen.// J. Immunol. Methods, - 1987, - V.97,- p. 153.

3. Jesudason M.V., Sridharan G., Mukundan S., John T.J. - VI-Specific Latex Agglutination for Early and Rapid Detection of Salmonella Serotype Typhi in Blood Cultures,- Diagnostic Microbiology and Infections Disease,- 1994, - Vol.18, - Iss.2, - pp. 75-78.

4. Sam W. C. - Latex Agglutination Assay for Detection of Cholera Toxin and Escherichia coli Heat-Labile Toxin.// J. Clin. Microbiol.,- 1992,- V.30,- N9,- pp.2518-2520.

5. Shumacher-Perdreau F., Peters G. - Commercial Latex Slide-Agglutination Test for Rapid Detection of Staphilococcus aureus.// Eur. J. Clin. Microbiol.,- 1987,- V.6, - N2, - pp. 215-216.

УТВЕРЖДАЮ
Главный врач ФГУЗ "Федеральный
центр гигиены и эпидемиологии",
Председатель Лабораторного совета
Федеральной службы по надзору
в сфере защиты прав потребителей
и благополучия человека
А.И.ВЕРЕЩАГИН
8 декабря 2006 г.
СЕРОТИПИРОВАНИЕ БАКТЕРИЙ РОДА SALMONELLA
МЕТОДОМ ЛАТЕКСНОЙ АГГЛЮТИНАЦИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
N 02.014-06
1. Разработаны ФГУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора при участии ООО "Стай-лаб".
2. Рекомендованы к утверждению Лабораторным советом Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (от 29 сентября 2006 г.).
3. Утверждены и введены в действие Председателем Лабораторного совета, Главным врачом ФГУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора А.И.Верещагиным 08.12.2006.
4. Введены впервые.
1. Область применения
Методические рекомендации предназначены для применения в лабораториях организаций, независимо от форм собственности, осуществляющих производственный контроль, а также в лабораториях иных организаций, аккредитованных на право проведения испытаний, исследований.
Методические рекомендации распространяются на методы серологической дифференциации бактерий рода Salmonella, выделенных из проб пищевых продуктов, смывов.
2. Общие положения
Сальмонеллы принадлежат к семейству Enterobacteriaceae, их биологические характеристики во многом сходны с прочими энтеробактериями. Энтеробактерии обнаруживаются в почве, в воде, на поверхности фруктов, овощей, в злаках и других объектах окружающей среды. Многие из этих микроорганизмов имеют эпидемиологическое значение в связи с их патогенностью для человека.
В настоящее время сальмонеллы признаны индикаторными микроорганизмами всей группы патогенных кишечных бактерий.
При использовании иммунохимических методов определения бактерий рода Salmonella могут быть существенно оптимизированы, а время исследования сокращено. Метод может быть пригоден для испытания чистых культур сальмонелл, а также для подтверждения культур, выделенных при положительном результате ИФА на тест-системе LOCATE(R) Salmonella.
3. Аппаратура, материалы, питательные среды и тест-системы
Термостат электрический с диапазоном измерения от 15 до ТУ 64-1-1382-83
65 град. С с допустимой погрешностью регулирования
температуры +/- 1 град. С
Стерилизатор паровой медицинский ГОСТ 19569
Шкаф сушильно-стерилизационный, обеспечивающий
поддержание заданного температурного режима в диапазоне
от 50 до 200 град. С с погрешностью +/- 2 град. С
Гомогенизатор бактериологический перистальтического типа
Masticator (или Stomacher) со стерильными
полиэтиленовыми пакетами
Ротатор с плоской поверхностью, частота вращения
150 об./мин.
Стандарт МакФарланда 0,5 единиц или денситометр для
бактериальных суспензий типа "Densi-La-metr" или
"Десимат"
Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 ТУ 16-535-84
Весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания ГОСТ 24104
200 г и допустимой погрешностью +/- 2 мг
Холодильник бытовой электрический ГОСТ 16317
Пипетки градуированные исполнения 1, 2 классов точности, ГОСТ 29227
вместимостью 1 куб. см, 10 куб. см
Пробирки бактериологические вместимостью не менее ГОСТ 25336
10 куб. см
Посуда широкогорлая ГОСТ 25336
Питательные среды:
Забуференный бульон для обогащения сальмонелл
Тетратионатный бульон
Селенитовый бульон
Висмут-сульфит агар
XLD-агар
Компоненты набора SPECTATE(R) Salmonella:
Латексный реагент 1 1 шт.
Латексный реагент 2 1 шт.
Положительный контроль 3 шт.
(термически дезактивированные сальмонеллы)
Карточки для постановки реакции агглютинации 15 шт.
Палочки-аппликаторы около 100 шт.
Разовые пипетки 50 шт.
Разовые пробирки 50 шт.
Стерильный физиологический раствор (0,9% NaCl) для
приготовления бактериальной суспензии
4. Описание и принцип действия
тест-системы SPECTATE(R) Salmonella
Тест-система SPECTATE(R) Salmonella предназначена для серологического анализа сальмонелл в культуральных бульонах и из выделенных чистых культур методом латексной агглютинации, позволяет быстро дифференцировать их принадлежность к основным серологическим группам.
В основе работы тест-системы SPECTATE(R) Salmonella лежит взаимодействие латексных частиц, покрытых специфическими антителами к сальмонеллам групп A, B, C, D, E, и антигенов сальмонелл, содержащихся в бульоне или суспензии, на специальных слайдах.
В комплект тест-системы SPECTATE(R) Salmonella входят два иммунореагента, представляющие собой смеси латексных суспензий красного, голубого и зеленого цветов. Каждая цветная латексная суспензия сенсибилизирована антителами к определенной группе сальмонелл. В ходе анализа цветные латексные частицы образуют агрегаты со специфическими антигенами сальмонелл, что сказывается в изменении вида и цвета растворов на слайде. Исследование с помощью тест-системы SPECTATE(R) Salmonella имеет продолжительность 4 минуты и используется в качестве дополнительного подтверждающего теста в комбинации с иммуноферментным методом анализа (например, с помощью тест-системы LOCATE(R) Salmonella), с методами классической микробиологии или с импедансным методом (например, с системами БАКТРАК, Мальтус и т.д.).
5. Сущность метода
Метод серотипирования бактерий рода Salmonella при исследовании микробной взвеси или обогащенного бульона основан на визуальном определении наличия агглютинации, цвет которой соответствует конкретной серологической группе бактерий.
6. Ход исследования чистой культуры
6.1. Внести 200 мкл стерильного физиологического раствора в пробирку из комплекта поставки.
6.2. С помощью аппликатора отобрать одну или две характерные колонии с чашки Петри таким образом, чтобы отобранные колонии закрыли плоский конец аппликатора.
6.3. Осторожно внести колонии в пробирку с физиологическим раствором, суспензировать колонии (суспензия должна соответствовать стандарту мутности 0,5 единиц по МакФарланду) и далее выполнять исследование при помощи метода латексной агглютинации.
Примечание:
В соответствии с действующими методическими документами рекомендуется отобрать для исследования, по крайней мере, не менее 5 колоний с чашки Петри.
6.4. Пример: использование метода латексной агглютинации агаровых и бульонных культур бактерий рода Salmonella в комплексе с классическими бактериальными методами и методом иммуноферментного анализа.
Таблица 1
ПРОВЕДЕНИЕ ЛАТЕКС-АГГЛЮТИНАЦИИ (SPECTATE(R) SALMONELLA)
В КОМБИНАЦИИ С СИСТЕМОЙ LOCATE(R) SALMONELLA
---------------------------T-------------------------------------¬
¦ Методология LOCATE(R) ¦ Рекомендуемое использование ¦
¦ ¦ латекс-агглютинации ¦
+--------------------------+-------------------------------------+
¦ Исследуемая проба ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦
¦ \/ ¦ ¦
¦ Предобогащение ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦
¦ \/ ¦ ¦
¦ Селективный бульон ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦
¦ \/ ¦ ¦
¦Модифицированный GN-бульон¦ ----> SPECTATE(R) ¦
¦ ¦ ¦ Salmonella ¦
¦ \/ ¦ ¦
¦Положительный результат на¦ ¦
¦ LOCATE(R) ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦
¦ \/ ¦ ¦
¦Селективные плотные среды ¦Подозрительные ----> SPECTATE(R) ¦
¦ ¦ колонии Salmonella ¦
L--------------------------+--------------------------------------
7. Исследование культуральной жидкости,
полученной при анализе импедансного метода
7.1. Отобрать 1 мл бульона с вероятным ростом бактерий из импедансной системы в соответствующую пробирку.
7.2. Перенести пробирку в кипящую водяную баню и оставить на 15 минут.
Примечание:
Исследуемые пробы нужно обязательно инкубировать в кипящей водяной бане для того, чтобы снизить нежелательное влияние компонентов бульона.
7.3. Охладить пробы и далее выполнять исследование на латексную агглютинацию.
Примечание:
Следует отметить, что интенсивно окрашенные бульоны, использующиеся в импедансных системах, при постановке реакции латексной агглютинации могут быть помехой для интерпретации результатов. В этих случаях рекомендуется выполнять дополнительную инокуляцию культуральной суспензии в питательный бульон с последующей инкубацией (24 часа) для увеличения количества бактерий до детектируемого уровня.
8. Порядок проведения испытания
8.1. Положить слайд на чистую горизонтальную поверхность. Убедиться, что слайд не перевернут, поверхность гладкая и ровная. Не касаться очерченных на слайде реакционных зон.
8.2. Ресуспензировать латексные и контрольные реагенты, встряхивая флаконы в течение 5-10 с. Нанести по 30 мкл реагента 1 в первую зону слайда и реагента 2 - в смежную зону.
8.3. С помощью разовой пипетки, держа ее под углом 45 град. , внести по 40 мкл исследуемой жидкости в каждую зону слайда.
8.4. С помощью разового аппликатора смешать капли на слайде и распределить равномерно по поверхности очерченной зоны. При исследовании одной пробы можно использовать один аппликатор для обеих зон.
8.5. Поместить карточку на платформу ротатора. Убедиться в том, что слайд расположен ровно и не соскользнет при включении ротатора. При необходимости, для фиксации слайда на платформе ротатора можно использовать двухстороннюю липкую ленту. Установить скорость вращения - 150 об./мин., включить ротатор. Через 4 мин. остановить ротатор и наблюдать агглютинацию на слайде.
Не использовать увеличительное стекло.
9. Учет и оценка результатов испытаний
9.1. Наблюдаемая цветная латексная агглютинация свидетельствует о наличии бактерий рода Salmonella в исследуемых пробах и позволяет идентифицировать их серологическую группу (или присутствие в пробе Vi-антигена). При положительной реакции цвет агглютинации красный, синий, зеленый.
9.2. При отрицательной реакции фон остается бесцветным или становится зелено-пурпурным, на что необходимо обращать внимание. Отрицательный результат определения свидетельствует о том, что исследуемые бактерии не принадлежат к определяемым серологическим группам бактерий рода Salmonella. При необходимости дальнейшей идентификации бактерий могут быть использованы традиционные микробиологические методы.
9.3. Неспецифические реакции с трудно интерпретируемым результатом агглютинации возможны при исследовании бульонов с высоким содержанием конкурирующих микроорганизмов. В таких случаях следует использовать классические процедуры идентификации с последующим выделением чистой культуры и повторной агглютинацией.
Учет результатов испытания в зависимости от цвета агглютинации представлен в таблице 2.
Таблица 2
-----------------------------------T-------------------------------------¬
¦ Комбинация реагентов реакции ¦ Цвет агглютинации ¦
+----------------T-----------------+ ¦
¦1 ¦2 ¦ ¦
+----------------+-----------------+-------------------------------------+
¦B ¦Vi ¦Красный ¦
+----------------+-----------------+-------------------------------------+
¦C ¦E или G ¦Синий ¦
+----------------+-----------------+-------------------------------------+
¦D ¦A ¦Зеленый ¦
+----------------+-----------------+-------------------------------------+
¦Без окраски ¦отрицательный ¦
+----------------------------------+-------------------------------------+
¦Зелено-пурпурный ¦отрицательный (неспецифический) ¦
L----------------------------------+--------------------------------------
Примечание:
1. На слайде может наблюдаться взвесь, появление которой связано не с агглютинацией, а со свойствами жидкостей, в которых при тестировании бактерии распределены неоднородно. Эти результаты не следует рассматривать как положительные, так как агглютинированные цветные латексные частицы можно легко отличить от взвесей на фоне красного, синего или зеленого цвета капли.
2. Если результат исследования показал присутствие Vi-антигена (красная агглютинация с иммунореагентом 2), исследуемую суспензию необходимо перенести в пробирку, поместить в кипящую водяную баню на 5 минут и провести испытание повторно с двумя иммунореагентами (в наборе). Данная процедура необходима для удаления внешней Vi-капсулы микроорганизма, что поможет установить серотип сальмонеллы при агглютинации.
Если Vi-антиген обнаруживается после кипячения пробы, выделенные культуры, подозрительные на род Salmonella, необходимо отправить для дальнейшей идентификации в учреждения Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
10. Требования к помещениям и технике безопасности
Работа по проведению серотипирования сальмонелл методом латексной агглютинации должна осуществляться в соответствии с требованиями СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами", ГОСТ Р 51446 "Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований".
11. Ограничения метода
11.1. Нижний предел обнаружения сальмонелл с помощью латексных
7
иммунореагентов SPECTATE(R) Salmonella составляет около 10 КОЕ/мл бульона
или микробной суспензии (при исследовании без выделения чистой культуры).
11.2. Тест-система SPECTATE(R) Salmonella позволяет дифференцировать 97% видов сальмонелл, за исключением таких видов, как S. typhi, S. pararyhi C.

Читайте также: