Бактериофаг сальмонеллезный применение для голубей

Бактериофаг сальмонеллезный групп A,B,C,D,E

Стерильный очищенный фильтрат фаголизатов наиболее распространенных сальмонелл (активность по Аппельману) гр. А - Salmonella paratyphi А; гр. В - S. paratyphi В. S. heiclelherg; гр. С - S. newport, S. choleraesuis, S. oranienburg, S. infantis, rp. D - S. dublin, S. enlerilidis; гр. E - S. anatum, S. newlands - не менее 10 -4 ; сальмонелл гр. В - S. typhimurium - не менее 10 -5 - до 1 мл.

Прозрачная жидкость желтого цвета различной интенсивности, возмо­жен зеленоватый оттенок.

Препарат вызывает специфический лизис сальмо­нелл серотипов: гр. А - S. paratyphi А; гр. В - S. paratyphi В, S. typhimurium, S. heidelberg; гр. С - S. newport, S. choleraesuis, S. oranienburg, S. infantis; rp. D - S. dublin, S. enleritidis: гр. E - S. anatum, S. newlands.

Лечение и профилактика заболеваний и бактерионо­сительства, вызванных сальмонеллами: гр. А - S. paratyphi А; гр. В - S. paratyphi В, S. typhimurium, S. heidelberg; гр. С - S. newport, S. choleraesuis, S. oranienburg, S. infantis; rp. D - S. dublin, S. enleritidis: гр. E - S. anatum, S. newlands.

Индивидуальная непереносимость, гиперчувствительпость к компонентам препарата.

Целесооб­разно применение препарата при наличии инфекций, вызванных фагочувствительными штаммами сальмонелл (по рекомендации врача).

Для лечения бактериофаг принимают 3 раза в день через рот за 1 час до приема пищи с первого дня заболевания в течение 7-10 суток. При заболевании, характеризую­щемся слабовыраженным колитическим синдромом, и в период реконвалесценции одно­временно с пероральным применением рекомендуется вводить препарат ректально, в виде клизм, вместо 1 приема через рот.

ДОЗА НА 1 ПРИЕМ (мл)

от 1 года до 3 лет

от 8 лет и старше

В профилактических целях препарат рекомендуется применять для предупреждения бактерионосительства, внутрибольничной инфекции, во время групповых заболеваний в организованных коллективах и семьях. Оптимальные схемы использования - ежедневный прием разовой дозы в зависимости от возраста. Продолжительность приема препарата определяется условиями эпидситуации.

Применение возможно в сочетании с другими лекарственными средствами, в том числе с антибиотиками.

Важным условием эффективной фаготерапии является предвари­тельное определение чувствительности возбудителя к бактериофагу и раннее применение препарата.

Не пригоден к применению препарат во флаконах с нарушенной целостностью или маркировкой, при истекшем сроке годности, при помутнении.

Вследствие содержания в препарате питательной среды, в которой могут развиваться бактерии из окружающей среды, вызывая помутнение препарата, необходимо при вскры­тии флакона соблюдать следующие правила:

тщательно мыть руки;

обработать колпачок спиртсодержащим раствором; сиять колпачок не открывая пробки;

не класть пробку внутренней поверхностью на стол или другие предметы;

не оставлять флакон открытым;

вскрытый флакон хранить только в холодильнике.

Перед использованием флакон с бактериофагом необходимо встряхнуть и просмот­реть. Препарат должен быть прозрачным и не содержать осадка.

Вскрытие флакона и извлечение необходимого объема препарата может проводиться стерильным шприцем путем прокола пробки. Препарат из вскрытого флакона при соблю­дении условий хранения, вышеперечисленных правил и отсутствии помутнения, может быть использован в течение всего срока годности.

При температуре от 2 до 8°С в защищенном от света и недоступном для детей месте.

При температуре от 2 до 8°С, допускается транспортирование при температуре от 9 до 25°С не более 1 мес.

Срок годности 2 года. Не применять по истечении срока годности препарата.

Отпускают без рецепта.

Узнать цены и купить Бактериофаг сальмонеллезный групп A,B,C,D,E в аптеках вашего города.

Воспользуйтесь сайтом для поиска или сервисом заказа лекарств в аптеку.

Скачать инструкцию
по применению

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Pimenov N. V.

Scientifically based and clinically validated new tools and methods to combat Salmonella infection in poultry, allowing to ensure the safety and health safety products eggs and poultry meat. The method of selective decontamination involves the use of bivalent bacteriophage that is based on highly selected phages Phagum Salmonella typhimurium and Phagum Salmonella enteritidis, as well as probiotic laktobifadola. The developed tools and methods of selective decontamination followed by immunization with inactivated vaccine associated "Virosalm" allows you to eliminate salmonella infection in poultry.

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Pimenov N. V.

SPECIFIC CONTROL OF SALMONELLA IN POULTRY

СПЕЦИФИЧЕСКАЯ БОРЬБА С САЛЬМОНЕЛЛОЙ В УСЛОВИЯХ ПТИЦЕВОДСТВА

Pimenov N.V., Doctor of Biological Sciences Пименов Н.В., доктор биологических наук

Moscow State Academy of Veterinary Medicine and Biotechnology named after K.I. Skryabin, Moscow, Russia

Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии

имени К.И.Скрябина, Москва, Россия

Salmonella; Salmonellosis birds; Selective decontamination; Bacteriophages; Vaccine. КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА

Сальмонелла; Сальмонеллез птиц; Селективная деконтаминация; Бактериофаги; Вакцина.

Бактерии рода Salmonella являются возбудителями опасной болезни, общей для птиц, животных и человека, - сальмонеллеза. По заключению экспертов Всемирной организации здравоохранения сальмонеллез, как зоонозная инфекция, не имеет себе равных по сложности эпизоотологии, эпидемиологии и трудностям борьбы с ним [12]. Хозяйства, сталкиваясь с сальмонеллой, несут большие потери из-за смертности молодняка, снижения продуктивности, качества продукции и наложения ограничительных мероприятий на выпуск продукции. Обсемененные сальмонеллами яйца и мясо птиц являются основными причинами пищевых токсикоинфекций у людей [2,4].

Сероварианты Salmonella enteritidis и Salmonella typhimurium являются доминирующими возбудителями у птиц разных видов, в т.ч. птиц промышленного содержания: кур (S.enteritidis 31,2-51,2%, S. typhimurium 9,5-28,2%; доля S. gallinarum-pullorum 21,0-38,4%, в основном приходится на эмбриональную смертность и

заболеваемость цыплят первой недели жизни), уток, гусей и других водоплавающих птиц typhimurium 97,7%, S. enteritidis 0,8%), перепелов, индеек, фазанов typhimurium 87,5%, S.enteritidis 3,8%) [3,6,9,11].

Эффективность проводимых мероприятий против сальмонеллеза птиц недостаточна. Не разработана эффективная система специфических мероприятий по борьбе с сальмонеллезом в условиях птицеводства разных направлений. Общесанитарные мероприятия и антибиотикообработки не позволяют избавить птицу от сальмонеллоносительства, не способны профилактировать и ликвидировать инфекцию, а предотвращают лишь массовое клиническое проявление заболевания [1,5,7].

Очевидно, что назрела необходимость переориентирования медикаментозных подходов при борьбе с сальмонелла-инфекцией, тем более на фоне вступления России в ВТО и ограничения широкого использования антибиотиков на производстве. Альтернативой применению химиотерапевтических препаратов может стать использование фагов. Высокоактивные бактериофаги - специфические агенты, способные лизировать сальмонелл и санировать сальмонеллезную обсемененность, бактерионосительство [6,7,8].

Целью работы являлась разработка средств и совершенствование системы противоэпизоотических мероприятий, направленных на борьбу с сальмонеллезом птиц.

Материалы и методы. В работе использованы 71 музейный штамм бактерий, 4 производственных штамма и 129 полевых изолятов сальмонелл, 42 бактериофага, диагностические сыворотки, питательные среды, реактивы, лабораторная посуда и оборудование, животные: белые мыши, кролики, голуби, куры и цыплята, утки, гуси и другие птицы, 3300 СПФ куриных эмбрионов. В ходе работы применяли эпизоотологические, бактериологические, серологические, статистические методы исследований, а также методы молекулярной диагностики, электронной микроскопии.

Для выделения бактериофагов использовали метод обогащения, описанный Адамсом, активность фагов определяли методами Аппельмана и Грациа, изучение морфологии вирионов фагов проводили по методике А.С. Тихоненко, определение способности бактериофагов к образованию литического фермента - по методу В.А. Зуева и В.В. Желтовой в модификации Л.Б. Борисова.

Из патологического материала от птиц разных хозяйств и направлений были выделены более 100 изолятов сальмонелл, из которых отобраны для исследований 39, соответствовавших требованиям к патогенности. Исследованиями на белых мышах выявили наиболее вирулентные и иммуногенные штаммы сальмонелл, что в дальнейшем подтвердили и на голубях (см. табл. 1).

Таблица 1 - Показатели LD50 и ImD50 производственных штаммов сальмонелл для белых

мышей и голубей

Величина LDso lmD5o

для бел. мышей, мкр. кл. для голубей, ТЫС. мкр. кл. для белых мышей, тыс. мкр. кл. для голубей, тыс. мкр. кл.

Способ иммунизации - - подкожно внутримышечно

Способ инфицирования подкожно внутримышечно подкожно внутримышечно

Э. 1урМтипит М-5в 1 647 1122 12,6 7943

Э. 1урМтипит М-2ф 1 4074 2089 7,9 12589

Э. 1урМтипит Д-1в 1 5495 2291 12,6 12589

Э. е^егШсПБ 25 Яв 14125 49545 20,0 50119

Штаммы S. typhimurium М-2ф t, S. typhimurium М-5в t, S. typhimurium Д-1в t, S. enteritidis 25 Яв e были депонированы в ФГУ ВГНКИ в качестве производственных и производственно-контрольных.

Для выделения бактериофагов к S. typhimurium были отобраны и исследованы по методу обогащения пробы пометных вод и фекалий из голубятен и птицеферм Московской области, Москвы, Тулы и Тульской области в общем количестве 116. Выделены 39 бактериофагов Phagum Salmonella typhimurium, 16 из которых по методу Аппельмана обладали активностью 10-8-10-10, еще 2 бактериофага - 10-5-10-7.

Отобранные фаги обладали широким спектром действия в отношении сальмонелл специфичного сероварианта, лизируя не менее 81 % полевых изолятов и музейных штаммов S. typhimurium, а преимущественно 90-100 % культур сальмонеллы тифимуриум (15 из 18 фагов).

Высокие результаты литической активности у исследованных бактериофагов отмечены и к другим серовариантам сальмонеллы, этиопатогенным для птиц: к S. enteritidis лизис культур на уровне 73-93 % отмечен у 16 фагов, еще 2 бактериофага -Ph. S. typhimurium №14 ПП и №17Ф2М лизировали все 15 тестовых культур. Лизис штаммов S. gallinarum-pullorum фагами отмечен на уровне 5-6 из 7 (71-85 %), S. dublin - преимущественно 3 из 4, S. newlands - 1-2 из 3. В то же время проведенные исследования не выявили ни одного случая литической активности у исследованных изолятов фагов к бактериям других родов семейства Enterobacteriaceae - Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Yersinia pseudotuberculesis, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis и к бактериям других семейств Pasteurella multocida, Bordetella bronchiseptica, Listeria monocytogenes, Streptococcus pyogenes, Staphilococcus aureus. Результаты данных исследований констатируют специфичность литического действия отобранных фагов вариантами вида Salmonella enterica.

При исследовании адсорбционных свойств фагов на депонированных штаммах сальмонелл, выявлены выраженные свойства адсорбции на клетках хозяев. При этом наибольшие показатели скорости адсорбции - (4,96±0,05)х10-9 см3мин-1 и количества адсорбировавшихся фаговых частиц - 91,7±0,25 %, отмечены у бактериофага РЬ|. S. typhimurium №8 МЕ, который также наиболее интенсивно формировал литический фермент.

При проведении опытов одиночного цикла развития фага Р^ S. typhimurium №5 ТЗ среднее число негативных колоний в разведении 1:40 составляло 30-32 на протяжении

Рисунок 1 - Бактериофаг S. typhimurium

Рисунок 2 - Лизис сальмонеллы фагами

22 минут, с 26 минуты отмечался выраженный рост, на 28 минуте появлялись негативные колонии в чашках, засеянных из разведения 1:100, и на 30 минуте проявляется полный лизис колоний в посевах из второго разведения (1:40). Таким образом, конец латентного периода начинает проявляться на 24-25 минутах и стабилизируется за 8 минут. Среднее число негативных колоний, полученных из разведения фага 1:100 - 132, т.е. по окончании лизиса бактерий количество фаговых частиц составило 13200 в 0,1 мл материала. Средний выход фага рассчитывали отношением количества выхода бактериофага к исходному количеству в латентный период. Для Ph. S. typhimurium №5 ТЗ он составил 426. Штаммы Ph. S. typhimurium №8 МЕ, Ph. S. typhimurium №9 ММ аналогично обладали выраженной интенсивностью формирования литического фермента, минимальным латентным периодом внутриклеточного развития, высокой урожайностью (206 и 185 соответственно), периодом стабилизации лизиса 6-8 минут, скоростью адсорбции 4,0-4,96 х 10-9 см3мин-1.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что данные штаммы могут быть использованы в качестве производственных. В связи с этим три наиболее активных штамма - Phagum Salmonella typhimurium №5 ТЗ, Phagum Salmonella typhimurium №8 МЕ, Phagum Salmonella typhimurium №9 ММ были депонированы в коллекции ФГУ ВГНКИ, еще 15 фагов паспортизированы в качестве резервных.

Для создания бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц были также использованы фаги к S. enteritidis, выделенные нами при исследовании по методу обогащения 52 проб сточных вод из цехов содержания молодняка и маточного поголовья птицефабрик и депонированные ранее в ФГУ ВГНКИ в качестве производственных [10].

Бивалентный бактериофаг против сальмонеллеза птиц готовили по схеме, представленной на рисунке 3. Исследования на активность бивалентного бактериофага осуществляли на белых мышах массой 14-16 г. Для этого формировали 3 опытные и 3 контрольные группы мышей по 10 голов.

В первых группах инфицирование перед фагообработкой проводили S. typhimurium М-2ф t в дозе 10 тыс. мкр. кл. (5 LD50), во вторых - S. enteritidis 25 Яв e в дозе 70 тыс. мкр. кл. (5 LD50), в третьих - обоими штаммами в дозах по 2,5 LD50. В опытных группах, где вслед за летальной дозой культуры возбудителя вводили бивалентный бактериофаг, сохранность составила 90-100%. При этом, по окончании периода наблюдения - 14 дней и бактериологическом исследовании всех мышей опытных групп, бактерий рода Salmonella не выделяли. В контрольных группах, инфицированных как монокультурами, так и (в третьей группе) смесью штаммов обоих серовариантов, гибель мышей была максимальной, составила 90-100 %. Аналогичные исследования провели с голубями и цыплятами.

Для эффективного оздоровления хозяйств от сальмонеллеза нами разработан метод селективной деконтаминации, основанный на санировании организма птиц разных видов с одновременным использованием препаратов бактериофагов против сальмонеллеза и пробиотика лактобифадол.

Лактобифадол содержит живые микробные клетки бифидобактерий вида Bifidobacterium adolescentis и живые микробные клетки лактобактерий Lactobacillus acidophilum. Штаммы отличаются выраженными антагонистическими свойствами к патогенным бактериям, имеют выраженные адгезивные свойства, устойчивы к широкому диапазону рН, устойчивы к желчи, фенолу, повышенной концентрации хлорида натрия, имеют выраженную кислотообразующую, антагонистическую, биохимическую и ферментативную активность, образуют органические кислоты, витамины, ферменты, повышающие продуктивность и конверсию корма у животных и птиц. Сочетание конкурентного действия на патогенную микрофлору лактобифадола со специфическим литическим действием бивалентного бактериофага обеспечивает выраженный лечебный и профилактический эффект против сальмонеллеза птиц.

Метод селективной деконтаминации был апробирован при пероральном применении птице Бактериофага тифимуриум и лактобифадола. Испытание метода в остром опыте проводили на 30 цыплятах 14-дневного возраста, для чего были созданы

3 группы по 10 голов - 2 опытные и контрольная. Птицу в группах кормили и содержали по принципу аналогов. Инфицирование цыплят проводили смесью из свежих культур штаммов S. typhimurium Д-1в t и S. typhimurium М-2ф t орально в дозе 2 млрд. мкр. кл.

Рисунок 3 - Схема изготовления бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц

За птицей наблюдали 15 дней, после чего проводили убой. Проведенные исследования показали, что в контрольной группе цыплят летальность составила 90 %. Павшие цыплята имели характерные клинические признаки и

патологоанатомические изменения. При бактериологическом исследовании у всех 10 цыплят контрольной группы была выделена S. typhimurium (см. табл. 3).

Таблица 2 - Эффективность применения Бактериофага тифимуриум и лактобифадола

в лабораторных условиях

Группа Кол-во гол. Пало, гол. Сохранность, % Кол-во цыплят, из которых выделена культура Э. іурМтигіит

Опытная 1 (Бактериофаг тифимуриум + лактобифадол) 10 0 100 0 0

Опытная 2 (энрофлоксацин) 10 3 70 2 20

Контрольная 10 9 10 10 100

Проблемой качества и безопасности пищевых продуктов, а именно яиц и мяса птиц, является сальмонелла-инфекция, которая приводит к заболеваемости птиц или носительству с обсеменением продуктов птицеводства. Традиционно проводимые мероприятия по профилактике сальмонеллеза при производстве продуктов птицеводства не ликвидируют сальмонеллоносительство и не обеспечивают санитарную безопасность продукции.

Нашей работой для лечения и профилактики сальмонеллеза птиц научно обоснованы и клинически подтверждены метод селективной деконтаминации и

последующая вакцинация, эффективность которых доказана полным оздоровлением неблагополучных по сальмонеллезу пунктов с формированием у птиц стойкого иммунитета.

Для ликвидации сальмонеллы в птицеводческих хозяйствах необходимо применение бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц, разработанного нами на основе высокоактивных штаммов Phagum Salmonella typhimurium и Phagum Salmonella enteritidis, специфических и активных в отношении вида Salmonella enterica, т.е. практически всех возбудителей сальмонеллеза птиц (S. enteritidis, S. typhimurium, S. gallinarum-pullorum и других менее значимых).

[1] Данилевская Н.В., Пименов Н.В. Проблема антибиотикорезистентности на примере лечения сальмонеллеза у домашних голубей // Российский ветеринарный журнал. - 2005. - № 4. - С. 21-24.

[2] Данилевская Н.В., Пименов Н.В. Новое в антибиотикотерапии: антибиотикорезистентность - угроза реальна // Новейшие разработки в ветеринарии. Клеточная терапия: Мат-лы совм. конф. - М.: ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, 2006. - С. 16-22.

[3] Дрогалина Н.А. Селекция бактериофагов и фагоустойчивых аттенуированных штаммов Salmonella typhimurium для производства лечебно-профилактического препарата против сальмонеллеза кур: автореф. дисс. канд. биол. наук; ФГУ ВГНКИ. - М., 2008. - 33 с.

[4] Куриленко А.Н., Пименов Н.В., Ленев С.В., Малахов Ю.Н., Яковлев С.С. Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза кур. -М.: МСХ/ МГАВМиБ, 2002. - 34 с.

[5] Ленев С.В. Мероприятия по профилактике сальмонеллеза птиц // II Междунар. вет. конгресс, VIII Междунар. вет. конгресс по птицеводству, г. Москва, 19-22 апреля 2012 г. - М, 2012. - С. 102-106.

[6] Ленёв С.В., Малахов Ю.А., Шорохов В.В. Сальмофаг - лечебнопрофилактический препарат // Мат-лы науч. конф., посвящ. 50-летию Краснодарской НИВС. - Краснодар, 1996. - Ч. 1. - С.26-30.

[7] Пименов Н.В. Перспективы применения бактериофагов в ветеринарии // Ветеринария и кормление. - 2009. - № 5. - С. 34-35.

[8] Пименов Н.В. Сальмонеллез птиц: перспективные направления в лечебнооздоровительных мероприятиях // Ветеринария и кормление. - 2010. - № 3. - С. 24-25.

[9] Пименов Н.В. Совершенствование системы противоэпизоотической борьбы с сальмонеллезом птиц // Ветеринарная медицина. - 2012. - № 3. - С. 38-40.

[10 ]Пименов Н.В., Ленев С.В., Куриленко А.Н. Протективная активность бивалентного сальмофага против сальмонеллеза энтеритидис и пуллороза-тифа кур // Сб. науч. трудов ВГНКИ. - М.: ФГУ ВГНКИ, 2003. - т. 64. - С. 178-182.

[11] Bole-Hribovsek V., Zorman-Rojs O., Zdovc L., Urbanicic A. Vcinkovitost preparata Enroxil 10% Krkav, terapiji piscancev eksperimentalno ocuzynih S. Enteritidis // Kongres microbiologov Slovenije z mednarodno udelezbo. Portoroz. - 1998. - S. 138141.

[12] World Health organization (WHO). Control of Salmonellosis: Part Played by Veterinary Science and Nutrition Hygiene. - 11-12 June 1991. - Geneva, Switzerland: WHO, 1991. - (WHO/CDD/SER/91.14) - P. 436-437.

Владельцы патента RU 2375075:

Предлагаемое изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности, к разработке способа лечения сальмонеллеза птиц. Сальмонеллез является одной из самых распространенных бактериальных болезней птиц и наносит значительный ущерб, складывающийся из потерь от гибели птицы, снижения продуктивности, отставания в росте и развитии, снижения оплодотворяемости яиц, потери спортивных, служебных и декоративных качеств.

Известно, что серовариант Salmonella typhimurium (S.typhimurium), относящийся к серогруппе В, - является доминирующим возбудителем сальмонеллеза у уток, гусей (80-90%), голубей (98%). S. typhimurium является также одним из основных возбудителей сальмонеллеза индюков, перепелов, лебедей, фазанов, кур, вызывает сальмонеллез у телят, поросят, других животных и пищевые токсикоинфекции человека [2, 3, 5, 6].

Существующие способы лечения сальмонеллеза птиц предусматривают проведение общих ветеринарно-санитарных мероприятий и ориентированы на широкое применение антимикробных препаратов [2].

Известные способы малоэффективны, так как у сальмонелл отмечается широкий спектр антибиотикоустойчивости, а требования к экологическому качеству продукции птицеводства накладывают ограничения на применение антибиотиков [7].

Существующие вакцины против S.typhimurium птиц не являются лечебными препаратами, не ликвидируют инфекцию полностью, так как не устраняют сальмонеллоносительства [2].

Особенно остро стоит проблема лечения при заражении высокопородной птицы, склонной как к иммунодефицитным состояниям, так и к появлению аллергий на фоне антибиотикотерапии. Проблемным является также иммунологически толерантный молодняк.

Известен также способ лечения сальмонеллеза - птиц с применением активных бактериофагов. Они специфичны, лизируют бактериальную клетку-возбудителя, обеспечивают бактерицидный эффект, в отличие от антибиотиков, не нарушают естественную микрофлору. Фаги могут быть применены с первых дней жизни, не вызывают побочных эффектов и осложнений, экологически безопасны, т.к. после лизиса бактерий-мишеней (сальмонелл) они элиминируются.

Используемые в животноводстве фаговые препараты против сальмонеллеза не могут быть высокоэффективны птице, так как основными компонентами содержат фаги S.dublin, S.enteritidis, S.choleraesuis и S.typhimurium; последний - в невысокой концентрации с ограниченным спектром литической активности.

В промышленном птицеводстве для лечения и профилактики сальмонеллеза кур применяют сальмофаги энтеритидис и пуллорум, но только при инфицировании S.enteritidis и S.gallinarum-pullomm. Эти препараты не эффективны или слабоэффективны при лечении сальмонеллеза, вызванного S.typhi-murium у птиц[1].

Известен также пробиотический препарат Лактобифадол, обладающий лечебно-профилактическим эффектом при сальмонеллезе, эшерихиозе и других желудочно-кишечных болезнях млекопитающих животных и птицы, вызываемых патогенными и условно-патогенными бактериями [4, 8].

В задачу наших исследований входила разработка эффективного способа лечения сальмонеллеза птиц, вызванного Salmonella typhimurium, при повышении экологической безопасности и безвредности применения.

Это достигается применением препарата Бактериофаг тифимуриум в комплексе с пробиотиком Лактобифадол. Предлагаемый способ отличается тем, что используют препарат Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза, содержащий суспензию высокоактивных штаммов бактериофагов Phagum Salmonella typhimurium №5 Т3-ДЕП с концентрацией 3,6×10 8 БОЕ/см 3 , Phagum Salmonella typhimurium №8 ME - ДЕП с концентрацией 1,0×10 7 БОЕ/см 3 , Phagum Salmonella typhimurium №9 MM-ДЕП - 1,4×10 8 БОЕ/см 3 , консервированный 1%-ным раствором хинозола в конечной концентрации в фаговом лизате - 0,01% орально индивидуально или групповым способом с питьевой нехлорированной водой в разведении 1:10-1:20 в дозе от 0,5 до 5 мл в зависимости от живой массы птицы каждые 12 часов первые 1-3 суток, затем - каждые 48 часов до выздоровления; одновременно применяют пробиотический препарат Лактобифадол с содержанием в 1 г 80 млн живых клеток бифидобактерий вида В.adolescentis и 1 млн лактобактерий вида L.acidophilum из расчета 0,4 г/кг массы в первые 10 суток лечения, далее 0,2 г/кг массы в течение 20 суток.

Бактериофаг тифимуриум специфичен к возбудителю S. typhimurium, содержит суспензию высокоактивных штаммов бактериофагов к Salmonella typhimurium Phagum Salmonella typhimurium №5 Т3-ДЕП с концентрацией 3,6×10 8 БОЕ/см 3 , Phagum Salmonella typhimurium №8 MЁ - ДЕП с концентрацией 1,0×10 7 БОЕ/см 3 , Phagum Salmonella typhimurium №9 MM-ДЕП - 1,4×10 БОЕ/см 3 , выделенных Пименовым Н.В. и Чирковой И.В.

1. Штамм бактериофага Salmonella typhimurium №8 MЁ предложен в качестве производственного для изготовления лечебно-профилактических препаратов, депонирован 16 октября 2007 г., регистрационный номер Phagum Salmonella typhimurium №8 MЁ-ДЕП.

2. Штамм бактериофага Salmonella typhimurium №5 ТЗ предложен в качестве производственного для изготовления лечебно-профилактических препаратов, депонирован 16 октября 2007 г., регистрационный номер Phagum Salmonella typhimurium №5 ТЗ-ДЕП.

3. Штамм бактериофага Salmonella typhimurium №9 MM предложен в качестве производственного для изготовления лечебно-профилактических препаратов, депонирован 16 октября 2007 г., регистрационный номер Phagum Salmonella typhimurium №9 ММ-ДЕП.

Препарат формируют путем смешивания указанных фагов в равных объемах в культуральной среде, консервированной хинозолом, 1%-ным раствором в конечной концентрации, в фаговом лизате - 0,01%.

Бактериофаг тифимуриум обладает лечебным и профилактическим эффектом, не дает осложнений при передозировке, санирует организм от сальмонеллоносительства, является перспективным компонентом комплексной системы профилактики сальмонеллезной инфекции.

Пробиотик Лактобифадол включает в 1 г 80 млн живых клеток бифидобактерий вида В.adolescentis и 1 млн лактобактерий L.acidophilum, которые характерны для микробиоценоза животных. Обладает свойствами синбиотика, штаммы устойчивы к широкому диапазону pH, желчи, имеют выраженную кислотообразующую, антагонистическую, ферментативную активность. Изготовлен методом контактно-сорбционной сушки биомассы, обеспечивающей максимальную сохранность биологических свойств микроорганизмов-доноров нормальной пристеночной микрофлоры.

Способ осуществляют следующим образом:

Больной птице после подтверждения диагноза вводят Бактериофаг тифимуриум: птице массой до 1 кг - 0,5 мл (голубям, перепелам, попугаям, канарейкам, цыплятам), птице массой 1-5 кг (фазанам, курам, уткам) - 1 мл, птице массой 5-10 кг (уткам, индоуткам, селезням, гусям, лебедям) - 3 мл, птице массой 10-20 кг (гусям, лебедям, индюкам) - 5 мл 1 раз в сутки. Молодняку голубей, перепелок - в дозе 0,25 мл. Препарат применяют перорально индивидуально или групповым способом с питьевой, кипяченой и остуженной до 25-30°С водой в разведении из расчета по объему 1:10-1:20 или из расчета разведения на 5-10 мл воды на 1 кг живой массы птицы. Не допускается для разведения хлорированная вода или обработанная и содержащая другие дезинфектанты. В течение трех часов до выпаивания препарата птицу выдерживают без поения.

При лечении сальмонеллеза, вызванного S.typhimurium длительность курса с применением бактериофага каждые 12 часов устанавливают индивидуально, исходя из тяжести эпизоотического процесса и используемых средств терапии. Основная схема применения: каждые 12 часов в первые 1-3 суток, затем - каждые 48 часов 2-3 введения.

Одновременно с бактериофагом с первых суток лечения больной птице назначают пробиотик Лактобифадол в лечебной дозе 0,4 г/кг массы ежедневно в течение 10 суток, далее 0,2 г/кг массы в течение 20 суток.

Применение бактериофагового препарата и Лактобифадола при необходиморсти можно сочетать с лечением эффективным антибиотиком.

Испытание эффективности препарата бактериофага тифимуриум и пробиотика Лактобифадола в остром опыте проводили на 30 цыплятах 14-дневного возраста в сентябре 2007 г. в виварии ФГОУ ВПО МГАВМиБ. Для этого были созданы три группы: две опытные (по 10 цыплят) и контрольная (10 цыплят), которых кормили и содержали по принципу аналогов.

Заражение цыплят всех групп проводили смесью из 2 изолятов S.typhimurium (с вирулентностью для белых мышей при подкожном инъецировании 4 тыс. микробных клеток) в одинаковом количестве каждого изолята орально в общей дозе 2 млн микробных клеток (дозу определяли, используя оптические стандарты мутности энтеробактерий).

После появления клинических признаков заболевания (потеря аппетита, одышка, угнетение, взъерошенность оперения, иногда - диарея) цыплятам первой опытной группы орально вводили Бактериофаг тифимуриум из расчета 0,5 мл при помощи автоматической пипетки-дозатора. Обработку проводили трижды с интервалом 12 часов, а затем с интервалом 48 часов еще 2 раза. За три часа до выпойки бактериофага тифимуриум цыплят выдерживали без поения. Суспензию Лактобифадола вводили ежедневно из расчета 0,4 г на 1 кг живой массы. Цыплятам второй опытной группы использовали стандартный метод лечения с использованием энрофлоксацина - энрофлон 10%-ный раствор в дозе 0,5 мл на 1 л воды 5 дней согласно временного наставления.

Цыплят контрольной группы бактериофагом тифимуриум не обрабатывали и инфицировали смесью культур S.typhimurium в тех же дозах, что и в опытных группах.

За птицей наблюдали 15 дней, после чего проводили убой. Бактериологическое исследование трупов павших и убитых цыплят проводили по схеме: посевы из паренхиматозных органов, крови сердца и красного костного мозга на МПА, МПБ, агар Эндо, висмут-сульфитный агар, окраска мазков-отпечатков и мазков растущих культур по Граму, реакция агглютинации с O-комплексными и О- и Н-агглютинирующими монорецепторными сальмонеллезными сыворотками. Результаты лабораторных испытаний представлены в таблице.

Эффективность применения Бактериофага тифимуриум и Лактобифадола в лабораторных условиях (n=10)
Группа	Всего, голов	Пало, голов	Сохранность, %	Цыплят, из органов которых выделена S typhimurium
голов	%
Опытная 1 (бактериофаг+Лактобифадол)	10	0	100	0	0
Опытная 2 (энрофлоксацин)	10	3	70	2	20
Контрольная	10	9	10	10	100

Проведенные исследования показали, что в контрольной группе летальность составила 90%. Все павшие цыплята имели характерные клинические признаки и патологоанатомические изменения: одышку, потерю аппетита, диарею, энтерит, ринит и др. При бактериологическом исследовании из печени с желчным пузырем, крови сердца, крови костного мозга, головного мозга, селезенки этих цыплят выделили S.typhimurium, обладающую характерными свойствами.

Применение с лечебной целью бактериофагового препарата в сочетании с пробиотиком Лактобифадол обеспечило выраженный лечебный эффект при непосредственном заражении вирулентными изолятами S.typhimurium в высоких дозах. Сохранность цыплят при таком способе лечения составила 100%, сроки выздоровления 3-5 дней, а сальмонеллоносительства на 15 сутки не было установлено.

Сочетанное применение Бактериофага тифимуриум и Лактобифадола более эффективно по сравнению с традиционной схемой лечения энрофлоксацином, так как в опытной группе 2 летальность составила 30%, а скрытое носительство 20%.

Пример 2. Терапевтическая эффективность Бактериофага тифимуриум и пробиотика Лактобифадол на голубятнях в Подольском и Домодедовском районах Московской области.

В сентябре 2006 года в двух голубятнях в п.Поливанове Подольского района Московской области (всего 175 голубей: пермские, гривуны, свердловские, синие) болезнь выявили при заболеваемости 14,3% и ежедневной гибели 3 голубей (1,7%). При этом вспышка была отмечена на фоне применения байтрила. Выделенная S.typhimurium обладала высокой чувствительностью к клафорану, средней - к ампициллину, низкой - к энрофлоксацину, ципрофлоксацину, доксициллину, резистентностью - к азитромицину, гентамицину, эритромицину, тетрациклину, мономицину, оксициллину, линкомицину. Проведенный курс терапии бактериофагом тифимуриум в дозе 0,5 мл на голубя при групповой выпойке с водой в разведении 1 к 20 трижды с интервалом 48 часов и дачей с кормом Лактобифадола в дозе 0,4 г/кг в течение 10 дней, далее в дозе 0,2 г/кг массы еще в течение месяца остановили развитие заболеваемости и гибели птицы. С 3-х суток после начала лечения состояние заболевших голубей улучшилось, появилась активность, восстановился аппетит. Консистенция помета постепенно нормализовалась, его цвет к 4-6 суткам стал светло-коричневым. Через 14 суток при бактериологическом исследовании смывов из клоаки больных и других голубей из исследуемых голубятен п.Поливанове (всего 47 проб - 27,3%) бактерии рода Salmonella не выделялись. При контрольных исследованиях в ПЦР через 30 дней - положительных результатов не было в 20 пробах крови из оздоровленных голубятен. В период наблюдения 6 месяцев рецидивов сальмонеллеза не отмечали.

Выпойку бактериофага тифимуриум в неблагополучной голубятне проводили согласно разработанной и использованной в лабораторном эксперименте схеме. Обработку проводили трижды с интервалом 12 часов, затем еще трижды с интервалом 48 часов. Лактобифадол давали в дозе 0,4 г/кг массы в течение первых 10 дней лечения, далее в -дозе 0,2 г/кг массы еще в течение 20 суток. Параллельно в голубятне провели дезинфекцию 4%-ным раствором хлорамина.

Случаи гибели голубей прекратились со вторых суток предложенного и примененного способа лечения. Фекалии в течении 3-4 дней приобрели естественную консистенцию и цвет, голуби начали активно потреблять корм (зерно, мука). Восстановление живой массы отмечалось к 20-30 дню после прекращения диареи. При бактериологических исследованиях смывов из клоаки от 50 голубей бактерий рода Salmonella не выделяли.

Заболеваемость уток, фазанов и других птиц сальмонеллезом наблюдали в частном передвижном зоопарке (вольеры в автофургонах, приписанных к государству Армения) в ноябре 2005 г. Взрослая птица имела матовое взъерошенное оперение, угнетение. У фазанов 4-5 месяцев отмечали периодически жидкий помет зеленого цвета, отставание в росте. Клиническая картина острого заболевания проявлялась преимущественно у молодых фазанов и характеризовалась повышением температуры тела до 42,5-43,0°С, угнетением, понижением аппетита, взъерощенностью оперения. Из 28 фазанов разных пород типичную клиническую картину заболевания отмечали у 6(21%). 2 фазана 3-месячного возраста пали. S.typhimurium выделяли из смывов клоаки всех фазанов. Диагноз был подтвержден бактериологическими исследованиями и методом молекулярной диагностики (ПЦР).

В вольерах содержались также утки, которые положительно реагировали в ПЦР на сальмонеллез. При бактериологическом исследовании у них из клоаки в 100% случаев выделена S.typhimurium. В 25-40-дневном возрасте среди утят отмечалась инфекция с развивитием унетения, анорексии, повышения температуры до 43,5-44°С, диареи и гибели (пали 5 утят из 8).

Выпойку Бактериофага тифимуриум против сальмонеллеза проводили групповым способом всей птице зоопарка из расчета: перепелам - по 0,5 мл препарата, фазанам, уткам - по 1 мл, селезням, павлинам - по 3 мл, гусям, лебедям - по 5 мл трижды д. с интервалом 12 часов, четвертую и пятую выпойки - через 48 часов. Препарат растворяли в воде из расчета 1:20. За три часа предварительно птицу оставляли без поения. Лактобифадол давали ежедневно всей птице в течение 10 дней в дозе 0,4 г/кг массы, далее в течение 20 дней в дозе 0,2 г/кг массы.

На 3 сутки после начала лечения состояние птицы улучшилось, температура нормализовалась, восстановился аппетит, помет оформился и приобрел серо-коричневую окраску. Гибель птицы больше не отмечали. При бактериологическом анализе смывов из клоаки у всех фазанов, уток, перепелов и павлинов зоопарка, проведенном через 15 суток, бактерий рода Salmonella не выделяли.

Проведенные исследования показали эффективность способа лечения сальмонеллеза птиц, вызванного S.typhimurium. Бактериофагом тифимуриум и пробиотиком Лактобифадол.

Такой способ лечения позволяет:

а) с помощью видоспецифичного бактериофагового препарата лизировать бактериальную клетку-возбудителя, обеспечивая без применения антибиотика бактерицидный эффект;

б) применять фаги с первых дней жизни, поскольку они элиминируются после лизиса бактерий-мишеней (сальмонелл), не вызывают побочных эффектов, аллергий и других осложнений;

в) добиваться неспецифического терапевтического эффекта за счет двух видов бактерий, входящих в пробиотический препарат Лактобифадол (лакто- и бифидобактерии), которые относятся к доминирующим по численности и физиологической значимости родам резидентной микрофлоры кишечника птицы. Они обладают выраженной антагонистической активностью в отношении гнилостной, патогенной и условно-патогенной микрофлоры, что обеспечено синтезом лизоцима, интерферонов, перекиси водорода, органических кислот, других антагонистических механизмов, включая конкурентную адгезию на слизистой кишечника и иммуномодулирующие эффекты;

г) получить более выраженный терапевтический эффект без последующего скрытого сальмонеллоносительства за счет специфического воздействия на возбудителя Бактериофага тифимуриум и неспецифического терапевтического действия пробиотика Лактобифадол, что обеспечивает эффективное воздействие на разные мишени патологического процесса, приводит к суммарному терапевтическому эффекту и подтверждается результатами лечения.

Предложенный способ найдет применение для оздоровления птицеводческих хозяйств, питомников, вольеров и голубятен, неблагополучных по сальмонеллезу, вызванному S.typhimurium, позволит резко сократить и ликвидировать сальмонеллез птиц, получать здоровый приплод, поголовье и улучшить качество мяса птицы.

1. Ганюшкин В.Л. Бактериофаги сальмонелл и их применение в ветеринарии. - Ульяновск, 1988. - 84 с.

3. Гусев В.В. Разработка технологии производства вакцины против сальмонеллеза голубей. Дис. на степ. канд. биол. наук. - Оболенск, 2005 г. - С.48-53).

4. Данилевская Н.В. Метод селективной деконтаминации и бактериотерапии с использованием пробиотического препарата лактобифадол при выращивании цыплят-бройлеров. / Данилевская Н.В., Субботин В.В. // Новое в эпизоотологии, диагностике и профилактике инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве. Матер. Межд. науч. - практ. конф. - СПб., 2004. - С.237-238.

5. Куриленко А.Н., Пименов Н.В., Ленев С.В. и др. Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза кур. - М. МГАВМиБ., 2002 г. - 35 с.

6. Осидзе Д.Ф. Биологические и химиотерапевтические средства профилактики и лечения заболеваний продуктивных животных. / Сб. ст. ВГНКИ., 1983. - 122 с.