Трепонемные и нетрепонемные тесты на сифилис

Сифилис – это системное инфекционное заболевание, которое вызывает Трепонема паллидум (Treponema pallidum). Передается преимущественно половым путем, характеризуется поражением кожи, слизистых оболочек, нервной системы, внутренних органов и опорно-двигательного аппарата.

Клиническое течение сифилиса содержит ряд периодов: инкубационный, первичный, вторичный и третичный.

Сегодня мы поговорим о диагностике системного инфекционного заболевания сифилис. Клиническая картина этого заболевания не всегда визуализируется. А его течение имеет ряд осложнений, поражая нервную систему человека, внутренние органы и опорно-двигательный аппарат.

Диагностировать сифилис можно клинически и лабораторно.

В рамках клинической диагностики врач проводит внешний осмотр и опирается на ряд типичных клинических проявлений заболевания.

При подозрении на заболевание специалист обязан отправить пациента на лабораторную диагностику. Абсолютным доказательством наличия заболевания является обнаружение бледной трепонемы в образцах, полученных из очагов поражений.

Существует 2 вида лабораторных исследований. Первый – это выделение из биоматериала Трепонемы паллидум.

Второй – серологическая диагностика, когда выделяют антитела к возбудителю заболевания.

Среди прямых методов исследования наиболее часто используют темнопольную микроскопию и метод ПЦР.

Этот метод дает возможность определить возбудителя даже при очень небольшой его концентрации благодаря процессу амплификации.

Надо отметить, что серологический анализ назначается всем пациентам с подозрением на какое-либо инфекционное заболевание. Этот анализ в противоречивых ситуациях с постановкой диагноза поможет установить возбудителя заболевания. От результатов серологических исследований во многом зависит дальнейшая терапия, так как определение конкретного микроорганизма способствует назначению специфического лечения.

Методы серологической диагностики можно разделить на две большие группы –

нетрепонемные и трепонемные тесты.

К нетрепонемным тестам относятся:

Реакция микропреципитации (РМП) с плазмой и инактивированной сывороткой, а также ее аналоги:

В трепонемных тестах используется антиген трепонемного происхождения. Это может быть живая или убитая бледная трепонема, рекомбинантный антиген бледной трепонемы или сенсибилизированные бледной трепонемой эритроциты. Эти реакции отличаются высокой чувствительностью и специфичностью. К ним относятся:

ИФА (иммуноферментный анализ);

иммуноблоттинг (является модификацией ИФА);

метод ИХЛ (иммунохемилюминесценции);

РИФ (реакция иммунофлуоресценции, в том числе в модификациях РИФабс и РИФ200 РИБТ (РИТ) (реакция иммобилизации);

РПГА (реакция пассивной гемагглютинации бледных трепонем).

Нетрепонемные тесты имеют невысокую чувствительность (до 70–90% при ранних формах сифилиса и до 30% – при поздних). И могут давать ложноположительные результаты (3% и более).

Однако нетрепонемные тесты имеют ряд преимуществ:

техническая простота выполнения;

быстрота получения результатов.

У трепонемных тестов:

• чувствительность выше – до 100% в зависимости от вида теста и стадии сифилиса.

Но этот вид тестов не может быть использован для контроля эффективности терапии, т.к. антитрепонемные антитела длительно циркулируют в организме больного, перенесшего сифилитическую инфекцию.

Для скрининга беременных, доноров, ВИЧ-инфицированных используются комплексы нетрепонемного (РМП, РПР, VDRL) и трепонемного (РПГА, ИФА, ИБ, ИХЛ, ИХГ) тестов.

Для диагностики скрытых и поздних форм приобретенного сифилиса, при подозрении на поздний врожденный сифилис используют комплекс нетрепонемного теста в количественном варианте постановки и не менее двух трепонемных тестов.

Для обследования новорожденных с целью выявления врожденного сифилиса можно применить комплекс нетрепонемного теста (в количественном варианте постановки плюс сравнение титров с аналогичными у матери) и трепонемного теста.

Для лечения сифилиса применяют антибактериальные препараты, прежде всего пенициллины, цефалоспорины, макролиды, тетрациклины.

Переболевшего сифилисом пациента в обязательном порядке надо отправить на клинико-серологический контроль, период которого определяется индивидуально.

Мониторинг состояния переболевшего пациента – одна из составляющих целой системы терапии и наблюдений. О выборе и видах лечения сифилиса мы поговорим в отдельном выпуске практики.

Тест выявляет антитела против кардиолипина (липида, который входит в состав мембраны митохондрий и бактерий). Эти антитела присутствуют в крови у больных сифилисом.

Неспецифический антифосфолипидный (реагиновый) тест, современный аналог реакции Вассермана (RW).

Nontreponemal test, rapid plasma reagin test, syphilis screening test, STS.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Возбудителем сифилиса является Treponema pallidum (бледная трепонема), бактерия из семейства спирохет.

Сифилис – венерическое заболевание: наиболее часто он передается половым путем. Кроме того, возможно заражение через кровь (например, при совместном использовании шприцев, бритв и пр.), плода от матери или бытовым путем (очень редко).

В международной классификации болезней выделяют врождённый, ранний и поздний сифилис, а также неуточненные формы. В медицинской литературе используются понятия первичный, вторичный и третичный сифилис.

Инкубационный период начинается с момента заражения и длится до первых симптомов (твердого шанкра) в среднем 21 день (от 10 до 90 дней).

Первичный сифилис – стадия с возникновения твердого шанкра до появления сыпи. Твердый шанкр – это язвочка, которая может появляться в том месте, где возбудитель проник в организм (обычно на половых органах). Он не болит и исчезает (без лечения) через 2-6 недель. Также на этой же стадии иногда увеличиваются лимфоузлы. В первое время заболевший человек остается серонегативным (т. е. в его крови еще нет антител против сифилиса).

Вторичный сифилис. Примерно через 4-8 недель после появления шанкра проявляются новые симптомы: сыпь и общее недомогание, температура, головная боль и др. Возможны и более тяжелые проявления.

Затем признаки сифилиса исчезают и заболевание переходит в латентную фазу. При этом возбудитель все же не покидает организм, поэтому при ослаблении иммунитета могут возникать рецидивы болезни. Их симптомы совпадают с проявлениями вторичного сифилиса.

Бывает, что сифилис так и остается в латентной форме. Но в ряде случаев, если человек не лечится, с годами развивается третичный сифилис. При этом поражаются различные органы и ткани: нервная и сердечно-сосудистая система, кости, суставы и др.

Для диагностики сифилиса часто используют серологические тесты (основанные на выявлении антител). Все виды анализов можно разделить на две группы: трепонемные и нетрепонемные тесты. Анализ на сифилис RPR относится к нетрепонемным.

Трепонемные тесты выявляют антитела, направленные конкретно против самих бактерий T. Pallidum, например сифилис РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) или сифилис РИФ (реакция иммунофлуоресценции).

Посредством нетрепонемных тестов выявляют антитела против кардиолипина (липида, который входит в состав мембраны митохондрий и бактерий). Они появляются в организме человека со стадии первичного сифилиса (примерно через неделю после возникновения твердого шанкра). При нетрепонемных методах анализа на сифилис не различают тип антител (IgG, IgM или др.), а определяют суммарный ответ. К таким исследованиям относят микрореакции преципитации: RPR, VDRL и др.

При первичном и вторичном сифилисе чувствительность нетрепонемных тестов высокая (в случае RPR: 86 % при первичном, 100 % при вторичном), а чем выше чувствительность метода, тем больше вероятность, что тест выявит болезнь. Соответственно, если человек болен сифилисом, то результат теста со 100-процентной чувствительностью точно будет положительным.

Однако при использовании нетрепонемных тестов возможен и ложноположительный результат (выявление антител, несмотря на то что человек не болен сифилисом). Дело в том, что антитела против кардиолипина возникают не только при сифилисе, но и при некоторых других заболеваниях.

Поэтому при диагностике сифилиса нетрепонемный тест должен быть подтвержден с помощью более специфичного трепонемного.

У нетрепонемных тестов есть еще одна особенность. Антитела против кардиолипина появляются в острой фазе болезни. Поэтому, когда человек выздоравливает, их уровень снижается, так что по нему можно судить об успешности лечения.

Для чего используется исследование?

• Для первичной диагностики сифилиса.
• Чтобы оценить успешность лечения.

Когда назначается исследование?

• При скрининговом обследовании на сифилис. Обследоваться должны беременные женщины, доноры крови (и органов), представители некоторых профессий (врачи, работники сферы питания, люди, контактирующие с детьми, пациенты перед госпитализацией или хирургической операцией.
• При подозрении на сифилис (если у пациента есть симптомы сифилиса, генитальные язвы или другие половые инфекции, а также если его половой партнер болен сифилисом). В частности, когда ребенок родился от матери, больной сифилисом.
• После прохождения курса лечения от сифилиса.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

• Сифилиса нет. Однако нельзя полностью исключить и другие варианты.

• • Сифилис на ранней стадии. Если с момента заражения прошло меньше 3-5 недель, то антитела против кардиолипина еще не детектируются. Тест следует повторить через 10-14 дней.
  • Сифилис на поздней стадии. После стадии вторичного сифилиса количество кардиолипиновых антител снижается. Например, чувствительность метода VDLR при третичном сифилисе составляет 70 % (т. е. у 30 % больных результат будет отрицательным).
  • Ложноотрицательный результат (в редких случаях). Существует "эффект прозоны": если антител очень много (слишком высокий титр), то результат может оказаться отрицательным.

Окончательное решение о постановке диагноза зависит от результата других тестов (трепонемных).

• Сифилис.
• Ложноположительный результат. В этом случае титр антител обычно очень низкий.

Положительный результат должен быть подтвержден с помощью специфических трепонемных тестов.

Что означают результаты теста, который сдают повторно (после курса лечения)?

• Если результат стал отрицательным или титр снизился в 4 раза и более – лечение прошло успешно.

• Если титр не снизился – нужна консультация с врачом и дальнейшие исследования.

Что может влиять на результат?

Ложноположительные результаты могут быть:

• при аутоиммунных расстройствах (например, при системной красной волчанке, тиреоидите),
• при лепре, ВИЧ-инфекции, атипичной пневмонии, малярии и др.,
• у людей, употребляющих наркотики внутривенно,
• у пожилых.



Кто назначает исследование?

Врач общей практики, терапевт, инфекционист, венеролог.

Существует несколько стадий течения сифилиса, каждая из которых имеет свои симптомы и требует соответствующего лечения.

Чем проявляется болезнь?

Первичный период патологии - это общая интоксикация, высокая температура, головная боль, лимфаденопатия.

При сифилисе происходит формирование шанкра - специфического симптома болезни. Это безболезненное повреждение кожи, плотное на ощупь с ровным, опущенным дном. Он находится в том месте, где произошел контакт с носителем бактерии и заболевание проникло в организм. Повреждение проходит самостоятельно, через 1-1,5 месяца. После того, как шанкр появился и самостоятельно прошел, наступает вторичная стадия.Она сопровождается головной болью, высыпанием, гипертермией и недомоганием. Периоды обострений сменяются ремиссиями. Далее следует третья стадия, при которой поражения достигают внутренних органов и нервной системы.

Когда показан анализ на сифилис?

Необходимо подтвердить или исключить наличие патологии в таких случаях:

• случайные половые контакты;
• этап подготовки к оперативному лечению;
• планирование зачатия ребенка;
• появление симптомов сифилиса - для дифференциальной диагностики;
• профилактический осмотр;
• получение медицинской документации перед выходом на работу.

Виды диагностики сифилиса

Ниже представлены различные методы определения заболевания и их описание.

Данный вид диагностики основан на определении антител, которые организм пациента вырабатывает в ответ на липиды, которые являются участками оболочки трепонемы. Эти антитела могут появиться в организме через 1-2 недели после того, как на коже образовался шанкр, что соответствует 4-5 неделям после поступления микроорганизма во внутреннюю среду.

Метод является скрининговым, то есть экспресс-диагностикой, которая не требует особых затрат времени и денег. Это как первичное определение необходимости дальнейшей диагностики, а не подтверждение сифилиса.

Также, данные тесты используют для динамической диагностики в процессе лечения - чтобы подтвердить факт успешного лечения.

Нетрепонемные тесты часто дают ложноотрицательный результат. Метод не имеет высокую чувствительность на некоторых стадиях процесса. Также, могут наблюдаться ложноположительные реакции, поэтому такая диагностика в любом случае требует дообследования.

Методика основана на том же принципе, что и предыдущая. Отличие заключается в том, антиген в данном случае - трепонема. Для анализа берется инактивированный возбудитель, очищенный или ультраозвученный. Методика более затратная и длительная в применении. Есть модификации: иммунофлюоресценция, агглютинация, иммуноферментная реакция, иммуноблоттинг.

Данный вид исследований более точный, чем предыдущая группа тестов. Они используются для подтверждения диагноза, но среди них также есть те, которые дают ложный результат.

Иммуноферментные анализы основаны на создании комплекса из антигенов и антител. Носитель сифилиса при этом находится на специфическом носителе, а на них наносится сыворотка крови. Если антитела в сыворотке есть - формируется комплекс. Используется методика специальной маркировки, благодаря которой количество антител определяется по цвету реактива.

Метод иммунофлюоресценции основан на свойстве возбудителя светиться при наличии антител в препарате крови.

Метод иммуноблоттинга имеет высокую точность диагностики, это один из наиболее современных трепонемных тестов. Его используют для исключения или подтверждения диагноза. Можно определить не только сам факт наличия, но и вид антител, что важно для определения стадии процесса. Методику применяют при бессимптомном течении и она показывает реальные результаты. Для контроля состояния в динамике методика не применяется - её используют для подтверждения диагноза.

Данный вид диагностики применяется в широких целях. С его помощью можно проводить профилактические обследования, постановка диагноза на разных стадиях, определение факта выздоровления, динамическое наблюдение и контроль терапии. Особенность серологических методик - изучение иммунных изменений и характера антител.

Метод основан на антигенном строении возбудителя.

Есть антигены протеиновой природы, они общие для нескольких видов трепонем. Соответственно, против них формируются групповые антитела, а также отдельные - специфические. Антитела против протеиновых антигенов появляются на ранних стадиях: в конце инкубационного периода и в течении 6-7 дней после образования шанкра.

Антитела к полисахаридным антигенам не так информативны и важны в диагностике, поэтому мало учитываются при постановке диагноза.

Есть и третья группа антигенов - липидная. Их можно определить на 5-6 неделе болезни. Как видим, разные антитела позволяют примерно определить стадию процесса и подходят для диагностики на разных сроках.

Первыми вырабатываются антитела группы M, они соответствуют острой стадии процесса. В разгар инфекционного процесса меняется тип антител с М на G. Есть также антитела А, которых вырабатывается не так много. В зависимости от стадии процесса вырабатываются те или иные антитела, которые важны в проностическом плане.

Есть специфические и неспецифические антитела - их называют реагины и противотрепонемные, соответственно. Именно по причине наличия реагинов случается ложная реакция на сифилис. Также различают антитела, специфичные для отдельных видов и групп возбудителя. Есть реакции, разные по специфичности и чувствительности. Их используют комплексно и несколько раз. Есть реакции липидные, связывания комплемента и осадочные.

Есть экспресс-реакции для массового определения сифилиса. Их проводят в стационарах и амбулаториях, однако не используют для контроля процесса и перед беременностью. Есть микрореакции, которые проводят на стекле - тест высокочувствительный и быстрый. Метод быстрый, эффективный, требуется небольшой объем крови - несколько капель. Также применяется гемагглютинация, которая имеет высокую чувствительность на разных стадиях, при леченных и нелеченных случаях.

Стандартная серологическая реакция, разработанная еще в 1906 году. Первая реакция в истории диагностики сифилиса, которая используется и в наше время. Представляет собой определение связывания комплемента. Есть модификации с противолипидными и трепонемнымианитгенами.

Реакция нечувствительна в самом начале заболевания, а также в третичной стадии. Есть остальные сомнительные моменты насчет ее достоверности в зависимости от стадии и наличия лечения. Осадочные реакции проводятся по тому же методу, но при других концентрациях.

Что такое ложноположительные реакции? Это позитивная реакция у тех, кто не болел и не болеет в момент обследования. Определить, что реакция ложная можно по тому, что в крови обнаруживаются реагины, но при этом отсутствуют иммобилизины. Ложной реакция может быть при инфекционной патологии, воспалениях разной природы, обменных нарушениях, отравлениях, беременности, онкопатологии. Проблема также может крыться в технических недостатках проведения реакций.

Данный анализ построен на принципе использования флюоресцирующих маркеров, которые проявляются при формировании комплексов антиген-антитело. К лабораторному материалу добавляют среду с содержанием антигенных штаммов. Если в организме есть инфекция, сыворотка содержит антитела. Они формируют иммунные комплексы и это проявляется в виде реакции.

Подготовка к анализу стандартная - ограничение еды и употребления жидкости за 12 часов до сдачи. Реакция проводится в 2 фазы. Положительной считается при наличии флуоресцирующих комплексов.

Реакция иммунного прилипания

Методика основана на реакции между возбудителем заболевания и сывороткой крови пациента. Если у человека есть сифилис, тканевые рецепторы трепонем адсорбируются на поверхности эритроцитов. Образуется характерная взвесь, которую легко определить при постановке реакции. Метод умеренно сложный, так как необходимо придерживаться количественных расчетов и временных рамок постановки анализа. При некачественном осуществлении анализа, могут формироваться недостоверные результаты.

Реакция иммобилизации бледных трепонем

Реакция относится к серологическим методам. Основана на свойстве сыворотки пациента с патологией тормозить движение возбудителя сифилиса. У здорового человека сыворотка не обладает такими свойствами. Можно применять для различия результатов у тех, кто сдал анализы и получил ложноположительные результаты. Открывает возможность диагностики скрытой формы заболевания. Имеет широкое применение в современном мире. Положительным тест считается при обездвиживании трепонем.

Реакция иммунофлюоресценцией адсорбцией бледных трепонем

Это модификация реакции иммунофлюоресценции, при которой используется сыворотка и капиллярная кровь. Сопровождается прикреплением трепонем к поверхности клеток, что подтверждает положительный результат и говорит о наличии заболевания.

Основа метода заключается в свойстве скопления конгломератов из эритроцитов, на поверхности которых накапливаются антитела к трепонеме. Постановка происходит только в присутствии выработанных антител, то есть, у тех пациентов, кто является носителем возбудителя и в чьем организме произошла иммунная реакция на него. Анализ довольно чувствителен и обладает высокой точностью. Широко применяется в современной диагностике сифилиса, а также для контроля течения болезни. Подготовка - ограничение приема пищи за 12 часов до процедуры, отказ от курения и алкоголя, крепкого чая и кофе. Если наблюдается агглютинация, результат считается положительным.

Наиболее часто используется при диагностике заболевания. Задача анализа - определить наличие иммунных комплексов, которые состоят из антител и антигенов. Применяется твердый носитель, на котором в лабораторных условиях собраны антигены сифилиса. Эти реактивы стандартные и используются при данной методике. Если в сыворотке есть антитела, которые образуются при болезни, реакция образуется и ее можно определить под микроскопом. Модификация реакции использование специфических ферментов, которые ускоряют реакцию и делают результаты более явными.

Полимеразная цепная реакция

Современная методика, которая построена на обнаружении элементов нуклеиновой кислоты микобактерии. Отдельные цепи генетического материала возбудителя можно программировать и создавать проекцию ДНК возбудителя. Относится к генетико-молекулярным исследованиям. Особой подготовки не требуется. Для анализа берется кровь из вены, которая транспортируется в лабораторию с соблюдением соответствующих правил. Процедура проходит в условиях асептики и антисептики.

Разнообразие лабораторных методов диагностики сифилиса позволяет выбрать вариант, наиболее соответствующий особенностям конкретного пациента, а также целям диагностики. Единственное, что объединяет эти методы - необходимость качественных реактивов, современных условий лаборатории и хорошей подготовки сотрудников учреждения.

Лаборатория АО "СЗЦДМ" предлагает услуги, обеспечивающие комплексное и преемственное лабораторное обследование пациента

Диагностика В медицинских центрах АО "СЗЦДМ" проводят качественные диагностические исследования всего организма

Лечение Наши медицинские центры ориентированы на обслуживание пациентов в амбулаторном режиме и объединены единым подходом к обследованию и лечению пациентов.

Реабилитация Реабилитация - это действия, направленные на всестороннюю помощь больному человеку или инвалиду для достижения им максимально возможной полноценности, в том числе и социальной или экономической.

Выезд на дом Внимание! Действует акция "Выезд на дом - 0 рублей"

Профосмотры АО "СЗЦДМ" проводит профилактические осмотры работников, которые включают в себя - комплексы лечебных и профилактических мероприятий, проводимых для выявления отклонений в состоянии здоровья, профилактики развития и распространения заболеваний.

RPR (Rapid Plasma Reagins) - тест бы­ст­рых плаз­мен­ных реа­ги­нов и его ав­то­ма­ти­зи­ро­ван­ная мо­ди­фи­ка­ция - ав­то­ма­ти­зи­ро­ван­ный реа­ги­но­вый тест (ART, Automated Reagin Test). Эти тес­ты мо­гут счи­ты­вать­ся ви­зу­аль­но из-за на­ли­чия ок­ра­шен­ных ве­ществ в при­го­тов­лен­ном ан­ти­ге­не. Тест RPR был раз­ра­бо­тан для по­ле­вых ус­ло­вий и сей­час это наи­бо­лее рас­про­стра­нен­ный не­тре­по­нем­ный тест. Он про­во­дит­ся на пла­сти­ко­вых план­шет­ках с впе­ча­тан­ны­ми кру­жоч­ка­ми. При по­ста­нов­ке ко­ли­че­ст­вен­ной или ка­че­ст­вен­ной мо­ди­фи­ка­ций ре­ак­ции стан­дарт­ные ко­ли­че­ст­ва не­раз­ве­ден­ной сы­во­рот­ки или ее се­рий­ных раз­ве­де­ний сме­ши­ва­ют­ся с ан­ти­ге­ном, со­дер­жа­ни­ем час­ти­цы уг­ля. План­ше­ту с ан­ти­ге­ном и сы­во­рот­кой вра­ща­ют при 1000 об/мин в те­че­ние 8 мин. Ан­ти­ген не при­кре­п­ля­ет­ся к этим час­ти­цам, но при на­ли­чии в сы­во­рот­ке ан­ти­кар­дио­ли­пи­но­вых ан­ти­тел про­ис­хо­дит флок­ку­ля­ция ком­плек­сов ан­ти­ген-ан­ти­те­ло, час­ти­цы уг­ля как бы по­па­да­ют в ло­вуш­ку в об­ра­зо­вав­шую­ся сеть и коа­гу­ли­ру­ют. Ре­зуль­та­ты тес­та чи­та­ют­ся во влаж­ном мес­те при яр­ком тес­те не­мед­лен­но по­сле про­ве­де­ния ре­ак­ции. В тес­те ис­поль­зу­ет­ся не­про­гре­тая сы­во­рот­ка.

TRUST (Toluidin Red Unheated Serum Test)- тест с то­луи­ди­но­вым крас­ным и не­про­гре­той сы­во­рот­кой. В дан­ном тес­те стан­дарт­ные час­ти­цы азо­кра­си­те­ля то­луи­ди­но­во­го крас­но­го до­бав­ля­ют­ся к ос­нов­но­му ста­би­ли­зи­ро­ван­но­му ан­ти­ге­ну, при­чем ви­зуа­ли­за­ция вы­ра­же­на луч­ше, чем при до­бав­ле­нии час­тиц уг­ля в RPR. В на­стоя­щее вре­мя тест TRUST ши­ро­ко не ис­поль­зу­ет­ся.

Не­тре­по­нем­ные тес­ты с мик­ро­ско­пи­че­ским счи­ты­ва­ни­ем ре­зуль­та­тов ре­ак­ции

VDRL (по на­зва­нию ла­бо­ра­то­рии-раз­ра­бот­чи­ка - Venereal Disease Research Laboratory). В дан­ном тес­те све­же­при­го­тов­лен­ный ан­ти­ген и инак­ти­ви­ро­ван­ная сы­во­рот­ка сме­ши­ва­ют­ся в стек­лян­ной лун­ке ме­ха­ни­че­ским вра­ще­ни­ем. Ес­ли в сы­во­рот­ке при­сут­ст­ву­ют ан­ти­те­ла к кар­дио­ли­пи­но­во­му ан­ти­ге­ну, об­ра­зу­ют­ся аг­ре­га­ты в ви­де ко­рот­ких стерж­не­вид­ных струк­тур, вы­яв­ляе­мые мик­ро­ско­пи­че­ски. Ис­поль­зу­ет­ся ко­ли­че­ст­вен­ная мо­ди­фи­ка­ция VDRL до раз­ве­де­ний сы­во­рот­ки 1:64. VDRL яв­ля­ет­ся един­ст­вен­ным тес­том, ре­ко­мен­дуе­мым для ис­сле­до­ва­ния спин­но­моз­го­вой жид­ко­сти.

USR (Unheated Serum Reagins) - тест оп­ре­де­ле­ния ак­тив­ных реа­ги­нов плаз­мы. Ан­ти­ген дан­но­го тес­та не­мно­го до­ро­же ан­ти­ге­на VDRL, од­на­ко, он ста­би­ли­зи­ро­ван до­бав­ле­ни­ем хо­ли­на хло­ри­да и ЭД­ТА и не ну­ж­да­ет­ся в еже­днев­ном при­го­тов­ле­нии.

К не­тре­по­нем­ным тес­там от­но­сит­ся так­же ме­тод не­пря­мо­го ИФА с кар­дио­ли­пи­но­вым ан­ти­ге­ном. В оте­че­ст­вен­ной прак­ти­ке в ка­че­ст­ве от­бо­роч­ных не­тре­по­нем­ных тес­тов при­ме­ня­ют­ся мик­ро­ре­ак­ция с плаз­мой и инак­ти­ви­ро­ван­ной сы­во­рот­кой (МР) и ре­ак­ция свя­зы­ва­ния ком­пле­мен­та с кар­дио­ли­пи­но­вым ан­ти­ге­ном (РСК).

Ха­рак­те­ри­сти­ка всех не­тре­по­нем­ных тес­тов, ис­поль­зуе­мых в на­стоя­щее вре­мя, по­хо­жа. Все они от­но­си­тель­но не­тру­до­ем­ки и про­сты в ис­пол­не­нии. Чув­ст­ви­тель­ность всех тес­тов при­мер­но та­кая, как при по­ста­нов­ке VDRL (око­ло 70% - при пер­вич­ном си­фи­ли­се и 100% - при вто­рич­ном). Не­тре­по­нем­ные тес­ты ме­нее чув­ст­ви­тель­ны при пер­вич­ном и ла­тент­ном си­фи­ли­се. Ан­ти­те­ла, оп­ре­де­ляе­мые не­тре­по­нем­ны­ми тес­та­ми, обыч­но по­яв­ля­ют­ся че­рез 1-4 не­де­ли по­сле фор­ми­ро­ва­ния шан­кра (при­мер­но че­рез 1-1,5 ме­ся­ца по­сле ин­фи­ци­ро­ва­ния). У боль­шин­ст­ва боль­ных не­тре­по­нем­ные ре­ак­ции ста­но­вят­ся прак­ти­че­ски от­ри­ца­тель­ны­ми в те­че­ние пер­во­го го­да по­сле ле­че­ния пер­вич­но­го си­фи­ли­са.

Тре­по­нем­ные тес­ты. Тре­по­нем­ные тес­ты при­ме­ня­ют­ся для под­твер­жде­ния ре­зуль­та­тов от­бо­роч­ных ре­ак­ций, а так­же в тех слу­ча­ях, ко­гда скри­ни­рую­щие тес­ты да­ют от­ри­ца­тель­ные ре­зуль­та­ты, а кли­ни­че­ские дан­ные по­зво­ля­ют пред­по­ла­гать на­ли­чие си­фи­ли­ти­че­ской ин­фек­ции. При­мер­но у 85% боль­ных по­сле пол­но­цен­но­го ле­че­ния си­фи­ли­са тре­по­нем­ные тес­ты ос­та­ют­ся по­ло­жи­тель­ны­ми в те­че­ние не­сколь­ких лет, а у не­ко­то­рых - в те­че­ние всей жиз­ни, вслед­ст­вие че­го эти тес­ты не ре­ко­мен­ду­ют­ся ис­поль­зо­вать при кон­тро­ле из­ле­чен­но­сти.

В оте­че­ст­вен­ной пра­к­ти­ке для ди­аг­но­сти­ки си­фи­ли­са при­ме­ня­ют ком­п­лекс се­ро­ло­ги­че­с­ких ре­ак­ций, вклю­ча­ю­щий: стан­дарт­ные се­ро­ло­ги­че­с­кие ре­ак­ции - ре­ак­ции свя­зы­ва­ния ком­п­ле­мен­та - (ре­ак­ция Вас­сер­ма­на), ре­ак­ция с кар­ди­о­ли­пи­но­вым ан­ти­ге­ном; ре­ак­ция с тре­по­нем­ным ан­ти­ге­ном; групповые трепонемные реакции - реакция иммунофлюоресценции (РИФ); реакция иммунного прилипания (РИП); видоспецифические протеиновые трепонемные реакции: РИТ (ре­ак­ция им­мо­би­ли­за­ции блед­ных тре­по­нем); РИФ-абс и её варианты (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS); реакция пассивной гемагглюцинации бледных трепонем (РПГА).

Ком­п­лекс се­ро­ло­ги­че­с­ких ре­ак­ций (КСР) по­з­во­ля­ет вы­явить зна­чи­тель­ное чи­с­ло боль­ных си­фи­ли­сом на раз­ных ста­ди­ях за­бо­ле­ва­ния. Ре­ак­ция Вас­серма­на ос­но­ва­на на фе­но­ме­не свя­зы­ва­ния ком­п­ле­мен­та. В по­ста­нов­ке ре­ак­ции ис­поль­зу­ют как спе­ци­фи­че­с­кие ан­ти­ге­ны из блед­ных тре­по­нем, так и не­спе­ци­фи­че­с­кие ан­ти­ге­ны (кар­ди­о­ли­пи­но­вый - экс­тракт из мыш­цы бычь­е­го серд­ца). Сте­пень по­зи­тив­но­сти ре­ак­ции Вас­сер­ма­на оце­ни­ва­ют чи­с­лом плю­сов: ++++ (ре­з­ко по­ло­жи­тель­ная); +++ (по­ло­жи­тель­ная); ++ (сла­бо­по­ло­жи­тель­ная); + (со­м­ни­тель­ная); - (от­ри­ца­тель­ная).

Ре­ак­ция Вас­сер­ма­на обя­за­тель­но при­ме­ня­ет­ся в ком­п­ле­к­се с дву­мя оса­до­ч­ны­ми ре­ак­ци­я­ми (Ка­на и Закс-Ви­теб­ско­го). Им­му­но­ло­ги­че­с­кая сущ­ность этих ре­ак­ций не от­ли­ча­ет­ся от РВ, но для них го­то­вят бо­лее кон­цен­т­ри­ро­ван­ные ан­ти­ге­ны, ко­то­рые при вза­и­мо­дей­ст­вии с ре­а­ги­на­ми сы­во­рот­ки да­ют ви­ди­мый оса­док, оце­ни­ва­е­мый ка­че­ст­вен­но (++++, +++, ++, +, -).

Ди­аг­нозпер­ви­ч­но­го се­ро­не­га­тив­но­го си­фи­ли­са ста­вят толь­ко при от­ри­ца­тель­ных стан­дарт­ных се­ро­ло­ги­че­с­ких ре­ак­ци­ях. Ре­ак­ция Вас­сер­ма­на (РВ) ста­но­вит­ся по­ло­жи­тель­ной у 100% боль­ных во вто­ри­ч­ном се­ро­по­зи­тив­ном пе­ри­о­де си­фи­ли­са. При тре­ти­ч­ном ак­тив­ном си­фи­ли­се КСР по­ло­жи­тель­ны у 65-70% па­ци­ен­тов. При позд­них фор­мах си­фи­ли­са вну­т­рен­них ор­га­нов и нер­в­ной си­с­те­мы КСР по­ло­жи­тель­ны у 50-80% боль­ных. У боль­ных ран­ним вро­ж­дён­ным си­фи­ли­сом се­ро­ло­ги­че­с­кие ре­ак­ции по­ло­жи­тель­ны поч­ти в 100% слу­ча­ев. При позд­нем вро­ж­дён­ном си­фи­ли­се КСР по­ло­жи­тель­ны в 75-80% слу­ча­ев.

К спе­ци­фи­че­с­ким се­ро­ло­ги­че­с­ким ре­ак­ци­ям от­но­сит­ся ре­ак­ция им­му­ноф­лю­о­рес­цен­ции (РИФ). Прин­цип РИФ ос­но­ван на вы­яв­ле­нии флю­о­рес­ци­ру­ю­щих ан­ти­тел, так как ме­че­ные флю­о­ро­хро­мом ан­ти­те­ла не те­ря­ют спо­соб­но­сти со­еди­нять­ся с со­от­вет­ст­ву­ю­щим ан­ти­ге­ном, и тем са­мым обу­сло­в­ли­ва­ют све­че­ние пре­па­ра­тов в си­не-фи­о­ле­то­вых лу­чах ртут­но-квар­це­вой лам­пы. От­ли­чи­тель­ной чер­той РИФ, по срав­не­нию со стан­дарт­ны­ми се­ро­ло­ги­че­с­ки­ми ре­ак­ци­я­ми, яв­ля­ет­ся бо­лее вы­со­кая чув­ст­ви­тель­ность(РИФ бы­ва­ет по­ло­жи­тель­ной уже в пер­ви­ч­ном се­ро­не­га­тив­ном пе­ри­о­де си­фи­ли­са) при вы­со­кой спе­ци­фи­ч­но­сти. Отмечена ценность РИФ при выявлении больных со скрытыми и поздними формами сифилиса при отрицательных результатах РИТ. Ре­ак­ция ста­вит­ся в не­сколь­ких мо­ди­фи­ка­ци­ях и наи­бо­лее цен­ной яв­ля­ет­ся РИФ-200, ос­нов­ным на­зна­че­ни­ем ко­то­рой счи­та­ет­ся не ран­няя се­ро­ди­аг­но­сти­ка си­фи­ли­са, а рас­по­з­на­ва­ние не­спе­ци­фи­че­с­ких ре­зуль­та­тов КСР и се­ро­ди­аг­но­сти­ка скры­то­го си­фи­ли­са. Од­на­ко РИФ-200 не об­ла­да­ет аб­со­лют­ной спе­ци­фи­ч­но­стью, по­э­то­му во­п­рос о на­ли­чии или от­сут­ст­вии за­бо­ле­ва­ния дол­жен ре­шать­ся на со­во­куп­но­сти кли­ни­че­с­ких и дру­гих се­ро­ло­ги­че­с­ких дан­ных. РИФ при вто­ри­ч­ном си­фи­ли­се по­ло­жи­тель­на в 100% слу­ча­ев. При тре­ти­ч­ном ак­тив­ном си­фи­ли­се РИФ по­ло­жи­тель­на у 92-100% па­ци­ен­тов. При позд­них фор­мах си­фи­ли­са вну­т­рен­них ор­га­нов и ней­ро­си­фи­ли­са РИФ по­ло­жи­тель­на у 94-100% боль­ных. У боль­ных ран­ним и позд­ним вро­ж­дён­ным си­фи­ли­сом РИФ по­ло­жи­тель­на в 100% слу­ча­ев. РИФ очень ме­д­лен­но не­га­ти­ви­ру­ет­ся в про­цес­се про­ти­во­си­фи­ли­ти­че­с­кой те­ра­пии. Вслед­ст­вие это­го, она не­при­год­на для кон­т­ро­ля за хо­дом ле­че­ния.

РИП (ре­ак­ция им­мун­но­го при­ли­па­ния) ос­но­ва­на на том, что ви­ру­лент­ные тка­не­вые тре­по­не­мы, сен­си­би­ли­зи­ро­ван­ные сы­во­рот­кой боль­но­го си­фи­ли­сом, в при­сут­ст­вии ком­п­ле­мен­та и эри­т­ро­ци­тов при­ли­па­ют к по­верх­но­сти эри­т­ро­ци­тов и при цен­т­ри­фу­ги­ро­ва­нии ув­ле­ка­ют­ся с ни­ми в оса­док, ис­че­зая из на­до­са­до­ч­ной жид­ко­сти. Оцен­ка ре­зуль­та­тов ре­ак­ции им­мун­но­го при­ли­па­ния блед­ных тре­по­нем сле­ду­ю­щая: 0-20% - отрицательная; 21-30% - сомнительная; 31-50% - слабоположительная; 51-100% - положительная.

По спе­ци­фи­ч­но­сти и чув­ст­ви­тель­но­сти РИП бли­з­ка к РИТ и РИФ. РИП при­ме­ня­ет­ся в сле­ду­ю­щих слу­ча­ях: ко­г­да на ос­но­ва­нии дан­ных анам­не­за, кли­ни­ки и ре­зуль­та­тов КСР и дру­гих ис­сле­до­ва­ний не уда­ёт­ся под­твер­дить ди­аг­ноз за­бо­ле­ва­ния; при диф­фе­рен­ци­ро­ва­нии не­спе­ци­фи­че­с­ких ре­зуль­та­тов КСР; при кон­т­роль­ном на­блю­де­нии по­с­ле окон­ча­ния ле­че­ния.

РИТ (ре­ак­ция им­мо­би­ли­за­ции блед­ных тре­по­нем) яв­ля­ет­ся ди­аг­но­сти­че­с­ки цен­ной и при­зна­на са­мым спе­ци­фи­ч­ным те­с­том на си­фи­лис. Од­на­ко её при­ме­не­ние ог­ра­ни­чи­ва­ет­ся из-за до­ро­го­виз­ны ис­сле­до­ва­ний и сло­ж­но­сти про­ве­де­ния ре­ак­ции. По­ста­нов­ка РИТ име­ет осо­бое зна­че­ние при ди­аг­но­сти­ке скры­то­го си­фи­ли­са, рас­по­з­на­ва­нии по­ра­же­ний вну­т­рен­них ор­га­нов и нер­в­ной си­с­те­мы, при об­сле­до­ва­ни­ях бе­ре­мен­ных с по­до­з­ре­ни­ем на си­фи­лис. Сущ­ность ре­ак­ции за­клю­ча­ет­ся в по­те­ре под­ви­ж­но­сти блед­ны­ми тре­по­не­ма­ми в при­сут­ст­вии им­мо­би­ли­зи­нов ис­пы­ту­е­мой сы­во­рот­ки и ак­тив­но­го ком­п­ле­мен­та. Им­мо­би­ли­зи­ны по­я­в­ля­ют­ся в сы­во­рот­ке кро­ви боль­ных позд­нее, чем дру­гие ан­ти­те­ла, и РИТ ста­но­вит­ся по­ло­жи­тель­ной поз­же стан­дарт­ных се­ро­ре­ак­ций и РИФ.

Оцен­ка ре­зуль­та­тов ре­ак­ции про­во­дит­ся по про­цен­ту им­мо­би­ли­за­ции блед­ных тре­по­нем: до 20% - от­ри­ца­тель­ная; 21-30% - со­м­ни­тель­ная; 31-50% - сла­бо­по­ло­жи­тель­ная; 51-100% - по­ло­жи­тель­ная.

В пер­ви­ч­ном пе­ри­о­де си­фи­ли­са РИТ у боль­шин­ст­ва боль­ных от­ри­ца­тель­ная или сла­бо­по­ло­жи­тель­ная. При вто­ри­ч­ном све­жем си­фи­ли­се РИТ да­ёт по­ло­жи­тель­ный ре­зуль­тат бо­лее чем у по­ло­ви­ны боль­ных, од­на­ко про­цент им­мо­би­ли­за­ции тре­по­нем не­вы­со­кий (40-60%). Во вто­ри­ч­ном ре­ци­див­ном пе­ри­о­де си­фи­ли­са РИТ бы­ва­ет по­ло­жи­тель­ной у 85-90% боль­ных при вы­ра­жен­ной сте­пе­ни им­мо­би­ли­за­ции (80-100%). При тре­ти­ч­ном си­фи­ли­се, при спе­ци­фи­че­с­ких по­ра­же­ни­ях вну­т­рен­них ор­га­нов, нер­в­ной си­с­те­мы, ко­г­да РВ ча­с­то от­ри­ца­тель­ная, РИТ да­ёт по­ло­жи­тель­ные ре­зуль­та­ты в 98-100% на­блю­де­ний (с вы­со­ким про­цен­том им­мо­би­ли­за­ции). В свя­зи с ме­д­лен­ной не­га­ти­ва­ци­ей в про­цес­се про­ти­во­си­фи­ли­ти­че­с­кой те­ра­пии, РИТ не­при­год­на для кон­т­ро­ля за хо­дом ле­че­ния. При ран­нем вро­ж­дён­ном си­фи­ли­се РИТ по­ло­жи­тель­на у 90-98% де­тей, при позд­нем вро­ж­дён­ном си­фи­ли­се - поч­ти у 100% боль­ных. Ди­аг­ноз скры­то­го се­ро­по­зи­тив­но­го си­фи­ли­са ста­вит­ся толь­ко по по­ло­жи­тель­ным се­ро­ре­ак­ци­ям кро­ви с обя­за­тель­ным под­твер­жде­ни­ем их РИТ.

Ре­ак­ция им­му­ноф­лю­о­рес­цен­ции-аб­сорб­ции с блед­ной тре­по­не­мой (FTA-ABS) ста­но­вит­ся по­ло­жи­тель­ной при­мер­но в на­ча­ле 3-й не­де­ли по­с­ле за­ра­же­ния, а у не­ле­чен­ных боль­ных она по­ло­жи­тель­на поч­ти в 100% слу­ча­ев. Глав­ные до­с­то­ин­ст­ва ре­ак­ции - вы­со­кая спе­ци­фи­ч­ность и чув­ст­ви­тель­ность. По­ло­жи­тель­ная FTA-ABS мо­жет иметь ре­ша­ю­щее зна­че­ние для ди­аг­но­сти­ки со­м­ни­тель­ных слу­ча­ев, осо­бен­но при по­ло­жи­тель­ных ре­ак­ци­ях VDRL, вы­яв­лен­ных при скри­нин­ге.

По­с­ле за­ра­же­ния си­фи­ли­сом уже на 2-й не­де­ле вы­ра­ба­ты­ва­ют­ся тре­по­не­мо­с­пе­ци­фи­че­с­кие IgM, ко­то­рые в про­цес­се те­ра­пии и по­с­ле её окон­ча­ния вы­ра­ба­ты­ва­ют­ся всё мень­ше, и в те­че­ние 2 лет пе­ре­ста­ют оп­ре­де­лять­ся. Для си­фи­ли­до­ло­гов пред­ста­в­ля­ет ин­те­рес ди­на­ми­ка этих ан­ти­тел по­с­ле ле­че­ния. По­э­то­му для су­ж­де­ния об эф­фе­к­тив­но­сти ле­че­ния пред­ло­жен­ы те­с­ты, на­пра­в­лен­ные на оп­ре­де­ле­ние спе­ци­фи­че­с­ких IgM. С по­мо­щью ме­то­ди­ки РИФ с мо­но­спе­ци­фи­че­с­ким конъ­ю­га­том про­тив IgM ста­ло воз­мо­ж­ным вы­яв­лять тре­по­не­мо­с­пе­ци­фи­че­с­кие IgM-ан­ти­те­ла (IgM-FTA-ABS). Од­на­ко при иден­ти­фи­ка­ции ан­ти­тел IgM к блед­ным тре­по­не­мам ре­ак­ци­ей FTA-ABS с ис­поль­зо­ва­ни­ем конъ­ю­га­та ан­ти-IgM в ка­че­ст­ве ре­а­ген­та вы­яв­ля­лись ло­ж­но­по­ло­жи­тель­ные и ло­ж­но­о­т­ри­ца­тель­ные ре­зуль­та­ты. Ре­ак­ция 19S IgM-FTA-ABS в этом от­но­ше­нии яв­ля­ет­ся наи­бо­лее то­ч­ным и спе­ци­фи­ч­ным ме­то­дом. Од­на­ко тру­до­ём­кость и до­ро­го­виз­на те­с­та ог­ра­ни­чи­ва­ют её при­ме­не­ние.

Микрогемагглютинация - T. pallidum - ге­маг­г­лю­ти­на­ци­он­ный тест для оп­ре­де­ле­ния спе­ци­фи­че­с­ких ан­ти­тел к Treponema pallidum (микро-РПГА). В РПГА ис­поль­зу­ют­ся ан­ти­ге­ны из тре­по­нем, по­э­то­му он наи­бо­лее спе­ци­фи­чен. Чув­ст­ви­тель­ность и спе­ци­фи­ч­ность эк­ви­ва­лент­на РИФ-абс. РПГА по­з­во­ля­ет оп­ре­де­лить на­ли­чие ан­ти­тел в об­раз­цах, не ре­а­ги­ру­ю­щих в ре­а­ги­но­вых те­с­тах. По­зи­тив­ный об­ра­зец, вы­яв­лен­ный при скри­нин­ге, мо­ж­но ко­ли­че­ст­вен­но оце­нить при ис­поль­зо­ва­нии ре­а­ген­тов TPHA-nosticon.