Презентация лабораторная диагностика вич инфекции презентация

Презентация была опубликована 7 лет назад пользователемwww.belmapo.by

Презентация на тему: " Лабораторная диагностика при ВИЧ-инфекции. презентация составлена на кафедре детских инфекционных болезней Государственного учреждения образования «Белорусская." — Транскрипт:

1 Лабораторная диагностика при ВИЧ-инфекции

3 Задачи лабораторной диагностики ВИЧ 1.Определить ВИЧ-статус (да/нет) 2.Исследования у ВИЧ-позитивного пациента: определить стадию ВИЧ-инфекции и прогноз течения, сформулировать показания к терапии, проводить контроль эффективности терапии

4 Строение ВИЧ: что же мы определяем лабораторно? две нити РНК(-) ферменты: p66 (RT) обратная транскриптаза (ревертаза) p11 (IN) интеграза p32 (P) протеаза структурные белки: р24 (CA) ядерный Ag (внутренняя оболочка) р17 (MA) матриксный Ag липидная оболочка (внешняя, формируется из оболочки клетки человека при выходе новых вирусов почкованием) с вкраплением белков клетки хозяина рецепторный комплекс: gp41 (TM) трансмембранный гликопротеин gp120 (SU) рецепторный гликопротеин антитела спектр антител к разным белкам ВИЧ

3-6 недель, до 6 мес)

opt момент старта АРТ пре- СПИД стадия на лечении старт АРТ

6 Как скоро после инфицирования ВИЧ сработают различные тесты? цит. по Р. Торстенссону, Шведский институт по контролю за инфекционными заболеваниями, 2005

7 Тесты для лабораторной диагностики при ВИЧ-инфекции 1.Тесты для диагностики: Скрининговые для определения антител: иммуноферментный анализ (ИФА), в т.ч. быстрые тесты Подтверждающие для определения антител : иммунный блотинг (ИБ); Методы амплификации НК: качественная ПЦР(ДНК-ПЦР) в культуре лимфоцитов крови 2.Тесты для слежения за течением: Методы амплификации НК: количественная ПЦР (РНК-ПЦР, вирусная нагрузка) в плазме Определение иммунного статуса: CD4

8 Кто подлежит обследованию на ВИЧ? доноры иностранцы из очагов: бывшие в половом контакте с ВИЧ+ лицом или в сходных условиях по риску заражения ВИЧ по клиническим показаниям (при наличии оппортунистических инфекций или ряда возможных признаков иммунодефицита) – как пациенты, так и аутопсийный материал получающие частые гемотрансфузии плацентарная кровь, поступающая на переработку дети от ВИЧ+ матерей или оформляющиеся в госучреждения пациенты с ИППП ПИН, МСМ, ЖСБ поступившие в следственный изолятор или приемник-распределитель медработники в случае профессионального контакта все изъявившие пройти обследование, в том числе анонимно Перечень контингентов, подлежащих обследованию на наличие антител к вирусу иммунодефицита человека. Приложение 8 к приказу МЗ РБ от тестирование на ВИЧ добровольное включение добровольное исключение по желанию (запросу) самого пациента предложение от врача с возможностью отказаться

9 Диагностический алгоритм обследования на ВИЧ-инфекцию диагноз исключён консультирование и оценка недавнего риска инфицирования ВИЧ диагноз подтвержден +/– ИФА 1 (скрининг) ИФА 2 (скрининг) ИБ (подтвержда- ющий тест) ++ ––– + – повторное обследование в ИФА/ИБ через месяцев или проведение ДНК ПЦР +

11 ИФА: принцип метода Ag/Ab сорбированные на твердой фазе (ПХВ планшеты на 96 лунок) определяемые Ab/Ag (исследуемая сыворотка) конъюгат фермента и Ab расщепление хромогена с образованием окрашенного комплекса

13 ИБ (western blot): принцип метода 1.ЭФ разделение белков ВИЧ-1 (стандартный реагент) по их молекулярной массе специфическое соединение белков ВИЧ с соответствующими отдельными антителами к ВИЧ из добавленной сыворотки 2.Инкубация с добавлением исследуемой сыворотки – специфическое соединение белков ВИЧ с соответствующими отдельными антителами к ВИЧ из добавленной сыворотки 3.Инкубация с добавлением меченных ферментом антител к человеческим Ig 4.Детекция окрашенных полос Э. Фаучи, К. Лэйн, Глава 308 ВИЧ-инфекция

14 ИБ: трактовка результатов Критерии положительного ИБ : CDC/APHL: сочетание 2 полос, соответствующих любым 2 из 3 антигенов ВИЧ – p24, gp41, gp120/gp160 (максимально чувствительный вариант) ВОЗ: сочетание 2 полос, соответствующих gp41 и gp120/gp160 1.Положительный ИБ к ВИЧ-1 2.Отрицательный ИБ (у здорового человека, иммунизированного белками внешней оболочки ВИЧ-1) 3.Сомнительный ИБ (у инфицированного ВИЧ-2) 4.Сомнительный ИБ (наличие антител, перекрестно реагирующих с p24 Ag) 5.Отрицательный ИБ Э. Фаучи, К. Лэйн, Глава 308 ВИЧ-инфекция

15 Быстрые тесты выявляют IgM Ab – то есть даже более чувствительны, чем ИФА 1-3 поколений для экстренного уточнения ВИЧ-статуса в медучреждениях (обследование беременных, поступивших рожать с неизвестным ВИЧ-статусом, и обследование биоматериала при профессиональных контактах) – методикой постановки должен владеть любой акушер дежурной бригады и врач приемного покоя для домашнего использования OraQuick® тестполоска каплю цельной капиллярной крови берут из пальца специальной петлей, переносят во флакон c буфером и перемешивают, там осуществляется реакция, и в окошке считывают результат чувствительность 99,6%, специфичность

17 Самостоятельный забор материала пациентом и отсылка его в лабораторию определение антител в транссудате слизистых полости рта (не в слюне) подержать между щекой и десной несколько минут, отослать в лабораторию и через 2 недели получить результат в лаборатории: ИФА + ИБ 99.97% из 3570 обследованных имели корректный результат определение антител в крови скарификатором проколоть палец и капнуть каплю крови на бумагу запомнить персональный номер данного теста и телефон, запечатать и отослать бумагу в лабораторию (заполненный конверт прилагается) и по телефону узнать результат теста в лаборатории: ИФА + ИБ цит. по A.M. Khalsa, Pacific AIDS Education and Training Center KECK School of Medicine, 2003

18 ПЦР: принцип метода обратная транскрипция РНК в кДНК амплификация выделенного ДНК выделение РНК/ ДНК ВИЧ детекция продукта амплификации (ЭФ, ГИФА, фотометрия при real- time ПЦР)

19 Качественная и количественная ПЦР что определяет материал для исследования клиническое использование качественная ДНК-ПЦР: наличие ДНК ВИЧ, интегрированного в геном клетки- мишени (лимфоцита) – резервуара инфекции культура лимфоцитов крови определение ВИЧ-статуса: - ВИЧ-экспонированные дети (есть антитела, но неясно чьи они); - в период серологического окна – после профессиональных контактов и при наличии клиники острого ретровирусного синдрома (когда у инфицированных ВИЧ антитела еще отсутствуют или субопределяемы) количественная (VL, вирусная нагрузка) РНК-ПЦР: наличие РНК свободных вирионов ВИЧ, находящихся в плазме плазма крови прогнозирование течения ВИЧ- инфекции у пациентов без терапии; контроль эффективности АРТ (стартовая VL и в динамике); выбор тактики родоразрешения у ВИЧ+ беременных

20 Условная градация уровней VL градация уровней VL, копий/мл методом RT-PCR методом bDNA порог определения (для детей > ) > высокая> 55 000 (для детей > 100 000) > 30 000 высокая> 80 000 - 100 000">

21 Трактовка значений VL Ограничения в трактовке: возможны естественные колебания VL в условиях полного благополучия транзиторное повышение уровня VL могут вызвать появление острого эпизода оппортунистической инфекции или вакцинация VL не является стандартным тестом для диагностики ВИЧ-инфекции Что делать? значимыми колебаниями VL следует считать более 3 раз (например, повышение с 20 тысяч до более чем 60 тысяч копий/мл); при сомнениях, выросла ли VL или осталась на прежнем уровне, следует повторить анализ забор крови на VL следует проводить не ранее чем через 2-4 недели после исчезновения симптомов острой инфекции (если невозможно – то все заборы проводить в примерно схожем клиническом состоянии пациента) или вакцинации результаты определения VL должны заново перепроверяться перед стартом или изменением АРВ терапии диагноз ВИЧ-инфекции, выставленный при обнаружении РНК ВИЧ в крови, должен быть подтвержден стандартными тестами – постановкой качественной ПЦР (определение ДНК ВИЧ) или постановкой ИБ (с повтором ИБ спустя 2-4 месяца после начального сомнительного или отрицательного теста)

23 Лабораторное обследование детей, рожденных ВИЧ+ матерями возраст частота выявления ДНК ПЦР у вертикально инфицированных ВИЧ детей частота выявления материнских anti-HIV у неинфицированных детей первые 48 часов17-38% дней50-93% 1-2 мес92-98% (1-е обязат. обслед-е) 4-6 мес (2-е обязат. обслед-е) 9 мес 12 мес 15 мес 18 мес0 целесообразность проведения подтверждающего ИБ для определения (материнских) Ab у экспонированных? исключение диагноза ВИЧ-инфекции снятие с дисп. учета ( 2 отр. ДНК ПЦР) ( 2 отр. ИФА) цит. по Ю.А. Фомину и соавт.

100 тысяч копий/мл VL при перинатальной ВИЧ-инфекции: при рождении обычно низкая ( 100 тысяч копий/мл), а затем в течение нескольких лет медленно снижается (в т" title="Особенности VL у детей в целом дети имеют более высокие уровни VL, высокой считается VL > 100 тысяч копий/мл VL при перинатальной ВИЧ-инфекции: при рождении обычно низкая ( 100 тысяч копий/мл), а затем в течение нескольких лет медленно снижается (в т" > 24 Особенности VL у детей в целом дети имеют более высокие уровни VL, высокой считается VL > 100 тысяч копий/мл VL при перинатальной ВИЧ-инфекции: при рождении обычно низкая ( 100 тысяч копий/мл), а затем в течение нескольких лет медленно снижается (в течение первых 2 лет в среднем на 0,6 lg в год, в течение следующих 4-5 лет в среднем на 0,3 lg в год) начальный эффект на АРТ оценивается как достигнутый при снижении VL более чем на 0,7 lg у детей до 2 лет и более чем на 0,5 lg у детей старше 2 лет цит. по Г.М.Цыгановой, ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, РФ 100 тысяч копий/мл VL при перинатальной ВИЧ-инфекции: при рождении обычно низкая ( 100 тысяч копий/мл), а затем в течение нескольких лет медленно снижается (в т"> 100 тысяч копий/мл VL при перинатальной ВИЧ-инфекции: при рождении обычно низкая ( 100 тысяч копий/мл), а затем в течение нескольких лет медленно снижается (в течение первых 2 лет в среднем на 0,6 lg в год, в течение следующих 4-5 лет в среднем на 0,3 lg в год) начальный эффект на АРТ оценивается как достигнутый при снижении VL более чем на 0,7 lg у детей до 2 лет и более чем на 0,5 lg у детей старше 2 лет цит. по Г.М.Цыгановой, ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, РФ"> 100 тысяч копий/мл VL при перинатальной ВИЧ-инфекции: при рождении обычно низкая ( 100 тысяч копий/мл), а затем в течение нескольких лет медленно снижается (в т" title="Особенности VL у детей в целом дети имеют более высокие уровни VL, высокой считается VL > 100 тысяч копий/мл VL при перинатальной ВИЧ-инфекции: при рождении обычно низкая ( 100 тысяч копий/мл), а затем в течение нескольких лет медленно снижается (в т">

25 Цитофлюориметрическое определение количества CD4-клеток в проточном цитометре клетки крови разделяются по их размеру (объему) добавленные меченные красителем моноклоновые антитела, соединяясь с комплементарными им CD4 рецепторами лимфоцитов/ моноцитов, вызывают изменение окраски рабочего раствора, что определяется фотометрически

5 лет лимфоциты, % 55-7845-7944-7238-64-, х 10*9/л 2,9-8,83,6-8,82,1-8,32,4-5,91,1-5,9 CD 3, % 60-8757-8453-8162-8066-76, х 10*9/л 2,0-6,52,2-6,51,4-" title="Субпопуляции Т-лимфоцитов у детей: диапазоны нормальных значений 5 дней –3 мес4-8 мес1-2 года2-5 лет>5 лет лимфоциты, % 55-7845-7944-7238-64-, х 10*9/л 2,9-8,83,6-8,82,1-8,32,4-5,91,1-5,9 CD 3, % 60-8757-8453-8162-8066-76, х 10*9/л 2,0-6,52,2-6,51,4-" > 27 Субпопуляции Т-лимфоцитов у детей: диапазоны нормальных значений 5 дней –3 мес4-8 мес1-2 года2-5 лет>5 лет лимфоциты, % , х 10*9/л 2,9-8,83,6-8,82,1-8,32,4-5,91,1-5,9 CD 3, % , х 10*9/л 2,0-6,52,2-6,51,4-5,41,6-4,20,7-4,2 CD 4, % , х 10*9/л 1,4-5,11,6-4,61,02-3,60,9-2,90,3-2,0 CD 8, % , х 10*9/л 0,6-2,40,7-2,50,5-2,20,6-1,90,3-1,8 B, % 12-22, х 10*9/л 0,2-1,6 CD 16, % 9-16, х 10*9/л 0,09-0,9 5 лет лимфоциты, % 55-7845-7944-7238-64-, х 10*9/л 2,9-8,83,6-8,82,1-8,32,4-5,91,1-5,9 CD 3, % 60-8757-8453-8162-8066-76, х 10*9/л 2,0-6,52,2-6,51,4-"> 5 лет лимфоциты, % 55-7845-7944-7238-64-, х 10*9/л 2,9-8,83,6-8,82,1-8,32,4-5,91,1-5,9 CD 3, % 60-8757-8453-8162-8066-76, х 10*9/л 2,0-6,52,2-6,51,4-5,41,6-4,20,7-4,2 CD 4, % 41-6436-6131-5435-5133-41, х 10*9/л 1,4-5,11,6-4,61,02-3,60,9-2,90,3-2,0 CD 8, % 16-3516-3416-3822-3827-35, х 10*9/л 0,6-2,40,7-2,50,5-2,20,6-1,90,3-1,8 B, % 12-22, х 10*9/л 0,2-1,6 CD 16, % 9-16, х 10*9/л 0,09-0,9"> 5 лет лимфоциты, % 55-7845-7944-7238-64-, х 10*9/л 2,9-8,83,6-8,82,1-8,32,4-5,91,1-5,9 CD 3, % 60-8757-8453-8162-8066-76, х 10*9/л 2,0-6,52,2-6,51,4-" title="Субпопуляции Т-лимфоцитов у детей: диапазоны нормальных значений 5 дней –3 мес4-8 мес1-2 года2-5 лет>5 лет лимфоциты, % 55-7845-7944-7238-64-, х 10*9/л 2,9-8,83,6-8,82,1-8,32,4-5,91,1-5,9 CD 3, % 60-8757-8453-8162-8066-76, х 10*9/л 2,0-6,52,2-6,51,4-">

28 Трактовка значений CD4 Ограничения в трактовке: весьма широкий диапазон нормальных значений CD4 на уровень CD4 влияет масса факторов: время суток при заборе, наличие острых заболеваний или вакцинации, вызывающих лейкопению лекарств (например, прием ИНФ-а для лечения ко-инфекции ВГ), стресс, курение, фазы менструального цикла и пр. CD4 в сыворотке не равно CD4 в организме (исследуемый нами сывороточный пул составляет не более 20% всех CD4) нет учета функциональной активности CD4 лимфоцитарные перекресты у детей затрудняют трактовку абсолютных значений CD4 Что делать? забор крови следует проводить в одно и то же время суток, не ранее чем через 1 неделю после исчезновения симптомов острой инфекции (если невозможно – то все заборы проводить в примерно схожем клиническом состоянии пациента) и не ранее чем через 1 неделю после вакцинации не делать заключений на основании единственного результата, а проводить повторное определение CD4 (через месяцев в зависимости от состояния пациента) с клинической интерпретацией при получении сходных результатов у детей первых 6 лет ориентироваться на % содержание CD4, а не на абсолютные значения

30 Забор и транспортировка материала исследование V крови антикоагулянт подготовка пробытранспортировка Количество CD4 лимфоцитов 3-5 млЭДТАперемешать (недопущение образования сгустка, но не разрушать клетки!) и закрыть до 4 часов (разрушение клеток! дольше - . ) при комнатной t о (не в холодильнике!) Качественное определение ВИЧ 1-2 млЭДТА (не гепарин!, не цитрат!) перемешать (недопущение образования сгустка, но не разрушать клетки!) и закрыть до 4 суток при +2+8 о С (не замораживать!) Вирусная нагрузка/ Лекарствен- ная резис- тентность 2-3 млЭДТА (не гепарин!, не цитрат!) перемешать и закрыть до 6 ч при +2+8 о С (РНКазы!) выделение плазмы – центрифугирование об/мин 20 мин до 1 суток при +2+8 о С, заморозка: -20 о С – 1 месяц -80 о С – 6 месяцев

31 Забор крови на CD4 и VL в процедурном кабинете ОЦП СПИД процедурный кабинет (забор крови) Ульяновская 3 (район стадиона Динамо), забор крови: Вт, Чт Врачу перед направлением пациента следует предварительно созваниваться с процедурным кабинетом – уточнять о наличии тест-систем и изменениях в графике работы Пациенту с собой иметь заполненное направление от врача лаборатория (консультации по поводу тестов) CD4, ВН и ДНК ВИЧ , любой из врачей-лаборантов резистентность

месяцев, в зависимости от состояния пациента) Качество лабораторных исследований напрямую зависит от соблюдения правил забора и транспортировки материала

Слайды и текст этой презентации

Лабораторная диагностика при ВИЧ-инфекции

Задачи лабораторной диагностики ВИЧ

Определить ВИЧ-статус (да/нет)

Исследования у ВИЧ-позитивного пациента:
определить стадию ВИЧ-инфекции и прогноз течения,
сформулировать показания к терапии,
проводить контроль эффективности терапии

Строение ВИЧ: что же мы определяем лабораторно?

Естественное течение ВИЧ-инфекции: клинико-лабораторные параллели

Как скоро после инфицирования ВИЧ сработают различные тесты?

цит. по Р. Торстенссону, Шведский институт по контролю за инфекционными заболеваниями, 2005

Тесты для лабораторной диагностики при ВИЧ-инфекции

Тесты для диагностики:
Скрининговые для определения антител: иммуноферментный анализ (ИФА), в т.ч. быстрые тесты
Подтверждающие для определения антител : иммунный блотинг (ИБ);
Методы амплификации НК: качественная ПЦР(ДНК-ПЦР) в культуре лимфоцитов крови

Тесты для слежения за течением:
Методы амплификации НК: количественная ПЦР (РНК-ПЦР, вирусная нагрузка) в плазме
Определение иммунного статуса: CD4

Кто подлежит обследованию на ВИЧ?

доноры
иностранцы
из очагов: бывшие в половом контакте с ВИЧ+ лицом или в сходных условиях по риску заражения ВИЧ
по клиническим показаниям (при наличии оппортунистических инфекций или ряда возможных признаков иммунодефицита) – как пациенты, так и аутопсийный материал
получающие частые гемотрансфузии
плацентарная кровь, поступающая на переработку
дети от ВИЧ+ матерей или оформляющиеся в госучреждения
пациенты с ИППП
ПИН, МСМ, ЖСБ
поступившие в следственный изолятор или приемник-распределитель
медработники в случае профессионального контакта
все изъявившие пройти обследование, в том числе анонимно

Перечень контингентов, подлежащих обследованию на наличие антител к вирусу иммунодефицита человека. Приложение 8 к приказу МЗ РБ от 16.12.1998 № 351

Диагностический алгоритм обследования на ВИЧ-инфекцию

Биологические жидкости, в которых можно определять антитела к ВИЧ

ИФА: принцип метода

Ag/Ab сорбированные на твердой фазе
(ПХВ планшеты на 96 лунок)

определяемые Ab/Ag
(исследуемая сыворотка)

конъюгат фермента и Ab

расщепление хромогена с образованием окрашенного комплекса

Поколения тестов для ИФА

* p24 Ag есть в период окна, а затем появляются и обнаруживаются только anti-p24 – то есть ИФА 4поколения помогает в донорстве и у детей с перинатальным контактом, но он не заменяет ИБ как конфирматорный тест

ИБ (western blot): принцип метода

ЭФ разделение белков ВИЧ-1 (стандартный реагент) по их молекулярной массе
Инкубация с добавлением исследуемой сыворотки – специфическое соединение белков ВИЧ с соответствующими отдельными антителами к ВИЧ из добавленной сыворотки
Инкубация с добавлением меченных ферментом антител к человеческим Ig
Детекция окрашенных полос

Э. Фаучи, К. Лэйн, Глава 308 ВИЧ-инфекция

ИБ: трактовка результатов

Критерии положительного ИБ :
CDC/APHL: сочетание 2 полос, соответствующих любым 2 из 3 антигенов ВИЧ – p24, gp41, gp120/gp160 (максимально чувствительный вариант)
ВОЗ: сочетание 2 полос, соответствующих gp41 и gp120/gp160

Положительный ИБ к ВИЧ-1
Отрицательный ИБ (у здорового человека, иммунизированного белками внешней оболочки ВИЧ-1)
Сомнительный ИБ (у инфицированного ВИЧ-2)
Сомнительный ИБ (наличие антител, перекрестно реагирующих с p24 Ag)
Отрицательный ИБ

Э. Фаучи, К. Лэйн, Глава 308 ВИЧ-инфекция

выявляют IgM Ab – то есть даже более чувствительны, чем ИФА 1-3 поколений
для экстренного уточнения ВИЧ-статуса в медучреждениях (обследование беременных, поступивших рожать с неизвестным ВИЧ-статусом, и обследование биоматериала при профессиональных контактах) – методикой постановки должен владеть любой акушер дежурной бригады и врач приемного покоя
для домашнего использования

OraQuick® тестполоска
каплю цельной капиллярной крови берут из пальца специальной петлей, переносят во флакон c буфером и перемешивают,
там осуществляется реакция, и в окошке считывают результат
чувствительность 99,6%, специфичность

цит. по A.M. Khalsa, Pacific AIDS Education and Training Center KECK School of Medicine, 2003

Снижение порога доступа к тестированию на ВИЧ

проблема: приблизить сервис к потребителю; решения:

Самостоятельный забор материала пациентом и отсылка его в лабораторию

определение антител в транссудате слизистых полости рта (не в слюне)
подержать между щекой и десной несколько минут, отослать в лабораторию и через 2 недели получить результат
в лаборатории: ИФА + ИБ
99.97% из 3570 обследованных имели корректный результат

определение антител в крови
скарификатором проколоть палец и капнуть каплю крови на бумагу
запомнить персональный номер данного теста и телефон, запечатать и отослать бумагу в лабораторию (заполненный конверт прилагается) и по телефону узнать результат теста
в лаборатории: ИФА + ИБ

цит. по A.M. Khalsa, Pacific AIDS Education and Training Center KECK School of Medicine, 2003

ПЦР: принцип метода

Качественная и количественная ПЦР

Условная градация уровней VL

Трактовка значений VL

Ограничения в трактовке:
возможны естественные колебания VL в условиях полного благополучия
транзиторное повышение уровня VL могут вызвать появление острого эпизода оппортунистической инфекции или вакцинация
VL не является стандартным тестом для диагностики ВИЧ-инфекции

Что делать?
значимыми колебаниями VL следует считать более 3 раз (например, повышение с 20 тысяч до более чем 60 тысяч копий/мл); при сомнениях, выросла ли VL или осталась на прежнем уровне, следует повторить анализ
забор крови на VL следует проводить не ранее чем через 2-4 недели после исчезновения симптомов острой инфекции (если невозможно – то все заборы проводить в примерно схожем клиническом состоянии пациента) или вакцинации
результаты определения VL должны заново перепроверяться перед стартом или изменением АРВ терапии
диагноз ВИЧ-инфекции, выставленный при обнаружении РНК ВИЧ в крови, должен быть подтвержден стандартными тестами – постановкой качественной ПЦР (определение ДНК ВИЧ) или постановкой ИБ (с повтором ИБ спустя 2-4 месяца после начального сомнительного или отрицательного теста)

VL на фоне АРТ: контроль эффективности лечения

Лабораторное обследование детей, рожденных ВИЧ+ матерями

исключение диагноза ВИЧ-инфекции ≠ снятие с дисп. учета
(≥ 2 отр. ДНК ПЦР) (≥ 2 отр. ИФА)

цит. по Ю.А. Фомину и соавт.

Особенности VL у детей

в целом дети имеют более высокие уровни VL, высокой считается VL > 100 тысяч копий/мл
VL при перинатальной ВИЧ-инфекции: при рождении обычно низкая ( 100 тысяч копий/мл), а затем в течение нескольких лет медленно снижается (в течение первых 2 лет в среднем на 0,6 lg в год, в течение следующих 4-5 лет в среднем на 0,3 lg в год)
начальный эффект на АРТ оценивается как достигнутый при снижении VL более чем на 0,7 lg у детей до 2 лет и более чем на 0,5 lg у детей старше 2 лет

цит. по Г.М.Цыгановой, ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, РФ

Цитофлюориметрическое определение количества CD4-клеток

в проточном цитометре клетки крови разделяются по их размеру (объему)
добавленные меченные красителем моноклоновые антитела, соединяясь с комплементарными им CD4 рецепторами лимфоцитов/ моноцитов, вызывают изменение окраски рабочего раствора, что определяется фотометрически

Зачем нужно определение CD4?

установление стадии (иммунологической категории) ВИЧ-инфекции
установление показаний для начала и отмены профилактического лечения оппортунистов
установление показаний для начала АРТ
слежение за иммунологическим ответом на АРТ (восстановление CD4 при лечении)

классификация иммуносупрессии по ВОЗ, 2006

Субпопуляции Т-лимфоцитов у детей: диапазоны нормальных значений

Трактовка значений CD4

Ограничения в трактовке:
весьма широкий диапазон нормальных значений CD4
на уровень CD4 влияет масса факторов: время суток при заборе, наличие острых заболеваний или вакцинации, вызывающих лейкопению лекарств (например, прием ИНФ-а для лечения ко-инфекции ВГ), стресс, курение, фазы менструального цикла и пр.
CD4 в сыворотке не равно CD4 в организме (исследуемый нами сывороточный пул составляет не более 20% всех CD4)
нет учета функциональной активности CD4
лимфоцитарные перекресты у детей затрудняют трактовку абсолютных значений CD4

Что делать?
забор крови следует проводить в одно и то же время суток, не ранее чем через 1 неделю после исчезновения симптомов острой инфекции (если невозможно – то все заборы проводить в примерно схожем клиническом состоянии пациента) и не ранее чем через 1 неделю после вакцинации
не делать заключений на основании единственного результата, а проводить повторное определение CD4 (через 1-3-6 месяцев в зависимости от состояния пациента) с клинической интерпретацией при получении сходных результатов
у детей первых 6 лет ориентироваться на % содержание CD4, а не на абсолютные значения

Лабораторные данные в формулировке показаний к АРТ

VL (вирусная нагрузка) –
это скорость, с которой движется поезд = прогноз

Забор и транспортировка материала

Забор крови на CD4 и VL в процедурном кабинете ОЦП СПИД

правильное клиническое решение

1-3-6 месяцев, в зависимости от состояния пациента)
Качество лабораторных исследований напрямую зависит от соблюдения правил забора и транспортировки материала

Электронный журнал Экстернат.РФ, cоциальная сеть для учителей, путеводитель по образовательным учреждениям, новости образования

• 
  
• 
  
• 
  

• Главная
  
• Публикации в журнале
  
• Воспитание здорового образа жизни
  
• Этиология, патогенез, клиника и диагностика ВИЧ-инфекции

Этиология, патогенез, клиника и диагностика ВИЧ-инфекции

Этиология, патогенез, клиника и диагностика ВИЧ-инфекции.

Лисина Екатерина Михайловна,

Педагог-психолог ГБОУ СКШ №7.

Этиология

Вирус иммунодефицита человека относится к семейству ретровирусов. Вирусная частица представляет собой ядро, окружённое оболочкой. Ядро содержит РНК и ферменты – обратную транскриптазу (ревертазу), интегразу, протеазу. При попадании ВИЧ в клетку, РНК под воздействием ревертазы превращается в ДНК, которая встраивается в ДНК клетки-хозяина, продуцируя новые вирусные частицы – копии РНК вируса, оставаясь в клетке пожизненно. Ядро окружено оболочкой, в составе которой имеется белок – гликопротеид gp120, обуславливающий прикрепление вируса к клеткам организма человека, имеющий рецептор – белок CD4.

Известны 2 типа вируса иммунодефицита - человека, имеющие некоторые антигенные различия – ВИЧ-1и ВИЧ-2. ВИЧ-2 встречается преимущественно в Западной Африке.

ВИЧ характеризуется высокой изменчивостью, в организме человека по мере прогрессирования инфекции происходит эволюция вируса от менее вирулентного к более вирулентному варианту.

Эпидемиология

Источником заражения является человек, инфицированный ВИЧ в стадии как бессимптомного вирусоносительства, так и развёрнутых клинических проявлений болезни. ВИЧ обнаружен во всех биологических субстратах человека (крови, спинномозговой жидкости, грудном молоке, в биоптатах различных тканей, слюне…).

Пути передачи инфекции – половой, перентеральный, вертикальный. Факторами риска могут быть органы и ткани доноров, используемые для трансплантации.

Патогенез

Проникнув в организм человека, вирус с помощью гликопротеида оболочки gp 120 фиксируется на мембране клеток, имеющих рецептор – белок CD4. Рецептор CD4 имеют, главным образом, Т-лимфоциты-хелперы (Т4), играющие центральную роль в иммунном ответе, а также клетки нервной системы (нейроглии), моноциты, макрофаги, эндотелий сосудов.… Затем вирус проникает в клетку, его РНК с помощью фермента ревертазы синтезирует ДНК, которая встраивается в генетический аппарат клетки, где может сохранятся в неактивном состоянии в виде провируса пожизненно. При активации провируса в заражённой клетке идёт интенсивное накопление новых вирусных частиц, что ведёт к разрушению клеток и поражению новых.

Характеризуя патогенез ВИЧ-инфекции, выделяют следующие стадии:

- Вирусная нагрузка – количество РНК ВИЧ в мл плазмы крови, отражает интенсивность вирусной репликации.

Первостепенное значение в патогенезе ВИЧ имеют макрофаги. Они обуславливают поражение всех органов и тканей и определяют особенности вторичных оппортунистических инфекций.

Клиника

Инкубационный период при ВИЧ составляет 2-3 недели, но может затягиваться до 3-8 месяцев, иногда больше. В след за ним у 30-50% инфицированных появляются симптомы острой ВИЧ-инфекции, которая сопровождается различными проявлениями (лихорадка, лимфаденопатия, эритематозно-макулопапулёзная сыпь на лице, туловище, иногда на конечностях, миалгия или артралгии, диарея, головная боль, тошнота, рвота, увеличение печени и селезёнки…).

Острая ВИЧ-инфекция нередко остаётся нераспознанной из-за сходства, её проявлений с симптомами гриппа и других распространённых инфекций. У части больных она протекает бессимптомно.

Острая ВИЧ-инфекция переходит в бессимптомную. Начинается следующий период – вирусоносительство, продолжающийся несколько лет (от 1 до 8 лет, иногда более), когда человек считает себя здоровым, ведёт обычный образ жизни, являясь источником инфекции.

После остро инфекции начинается стадия персистирующей генерализоанной лимфаденопатии, и в исключительных случаях болезнь сразу прогрессирует вплоть до стадии СПИДа.

Вслед за этими стадиями, общая продолжительность которых может варьироваться от 2-3 до 10-15 лет, начинается симптоматическая хроническая фаза ВИЧ-инфекции, которая характеризуется различными инфекциями вирусной, бактериальной, грибковой природы, которые пока ещё протекают довольно благоприятно и купируются обычными терапевтическими средствами. Возникают повторные заболевания верхних дыхательных путей – отит, синусит, трахеобронхит; поверхностные поражения кожи – локализованная кожно-слизистая форма рецидивирующего простого герпеса, рецидивирующий опоясывающий герпес, кандидоз слизистых оболочек, дерматомикозы, себорея.

Затем эти изменения становятся более глубокими, не реагируют на стандартные методы лечения, приобретая упорный, затяжной характер. Человек теряет в своей массе тела (более 10%), появляются лихорадка, ночные поты, диарея. На фоне нарастающей иммуносупрессии развиваются тяжёлые прогрессирующие болезни, которые не встречаются у человека с нормально функционирующей иммунной системой. Это СПИД-маркерные, СПИД-индикаторные болезни (по определению ВОЗ).

Диагностика

Основным методом лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции является обнаружение антител к вирусу с помощью иммуноферментного анализа.

При обследовании на ВИЧ необходимо учитывать эпиданамнез. Антитела к ВИЧ появляются у 90-95% инфицированных в течение 3-х месяцев после заражения, у 5-9% через 6 месяцев и у 0,5-1% - в более поздние сроки. В стадии СПИДа количество антител может снижаться вплоть до полного исчезновения.

Метод ИФА (иммуноферментный анализ) – скрининговая система выявления антител к ВИЧ. Этот анализ чувствителен ко всем белкам, близким к белкам ВИЧ. В случае положительного результата анализ в лаборатории проводится дважды (с той же сывороткой) и при получении хотя бы ещё одного положительного результата сыворотка направляется для постановки подтверждающего теста.

Для подтверждения специфичности результата, полученного ИФА, используется метод иммунного блотинга, принцип которого заключается в выявлении антител к определённым белкам вируса.

Диагноз ВИЧ-инфекции устанавливается на основании эпидемиологических, клинических, лабораторных данных, с указанием стадии, расшифровывая подробно вторичные заболевания (Рахманова А. Г. etal., 2005).

Список используемой литературы: