Иммуноблоттинг при вич сроки готовности

Ранняя диагностика заболеваний – залог успешного лечения. Ставшее крылатым выражение, особенно актуально для ВИЧ-инфекции. Ведь заболевание неизлечимо полностью, и только своевременная диагностика позволяет взять течение болезни под контроль и выбрать тактику лечения, чтобы жить полноценной жизнью.

Ранний срок диагностики ВИЧ – со 2 недели от предположительного заражения.

Важность клинической диагностики ВИЧ

В понимании многих людей ВИЧ-инфицированный человек выглядит болезненно, изнеможенно. Он кашляет, чихает, чешется, стонет, у него все болит… На самом деле это не так! Проблема в том, что после инфицирования ВИЧ и в последующий инкубационный период симптомы полностью отсутствуют. Затем наступает острая фаза, на протяжении которой присутствуют симптомы, напоминающие ОРВИ или грипп. Но и они вскоре проходят, и наступает, так называемый, латентный период – продолжительный промежуток времени, когда ВИЧ-инфекция себя ничем не выдает. С момента инфицирования и до стадии пред-СПИДа может пройти порядка 10 лет, в течение которых, ни сам пациент, ни его окружение, даже и не подозревают о болезни. А когда она уже на полную мощность заявляет о себе, контролировать ее очень трудно. Сложно противостоять осложнениям ВИЧ, поддерживать практически разрушенную иммунную систему человека.

Очень важно понимать, что, хотя и есть группы риска – гомосексуалисты, наркозависимые и девушки легкого поведения – в основной массе, пациенты с ВИЧ-инфекцией – это обычные люди. Они учатся, ходят на работу, посещают общественные места, знакомятся в интернете – в общем, живут как все. К сожалению, но от ВИЧ никто не застрахован. Незащищенный половой контакт в порыве страсти, заветное тату без соблюдения стерильности, маникюр за полцены у начинающего мастера, уличная драка – все эти и множество других житейских ситуаций могут обернуться инфицированием ВИЧ.

Не ошибается лишь тот, кто не живет! Мы не можем знать все наперед, не можем исправить уже совершенных ошибок, но мы можем предпринять простые шаги для исправления их последствий – обратиться в ближайший кожно-венерологический диспансер, в местную клинику или специализированный СПИД-центр для сдачи анализов и ранней диагностики ВИЧ.

Благоприятные сроки для диагностики ВИЧ

Факт возможного инфицирования и плохое самочувствие без видимых причин – два веских основания для обращения к специалистам. Но отрицательный результат тестирования на антитела не всегда означает, что человек не инфицирован, так как существует период “серонегативного окна” (время между заражением и появлением антител), который составляет около трех месяцев. Поэтому лучше повторить их спустя 3 месяца с момента возможного инфицирования. Если же ответ опять будет отрицательным, но ваша тревога не проходит, и вы уверены в заражении ВИЧ, тогда лабораторную диагностику необходимо повторить спустя 6 месяцев после факта заражения.

Что касается плохого самочувствия, то поводом провериться на ВИЧ может быть сочетание следующих симптомов:

увеличение лимфатических узлов на шее, в паху, в области подмышек;
лихорадка;
мышечные или головные боли;
молочница и грибковые поражения, в том числе кандидоз полости рта;
воспаление слизистой носа, рта или глотки;
ночная потливость;
ломота в суставах;
длительная диарея;
тошнота, рвота;
резкое снижение массы тела;
высыпания на коже.

Важно понимать, что с момента, когда проявляются первые признаки ВИЧ-инфекции и до момента, когда заболевание переходит в латентную стадию, проходит очень мало времени – около 3-6 недель с факта инфицирования. Нельзя упускать из вида этот промежуток времени! Поскольку последующие 8-10 лет вы будет жить, нормально себя чувствовать и даже не подозревать о том, что больны ВИЧ-инфекцией. Драгоценное время будет упущено.

Современные методы диагностики ВИЧ

В настоящее время в диагностике ВИЧ используется двухуровневый подход – косвенные и прямые тесты. Косвенные тесты позволяют обнаружить в крови пациента специфические антитела к ВИЧ, а прямые тесты помогают выявить собственно сам ВИЧ и определить степень вирусной нагрузки на организм. В России стандартная диагностика ВИЧ включает следующие методы лабораторных исследований:

ИФА (иммуноферментный анализ).
Иммуноблот (иммунный блоттинг).

Также могут быть применены следующие методики:

Экспресс-тест ИХА (иммунохроматография).
ПЦР (полимеразная цепная реакция).

Диагностические принципы лабораторных исследований и степень их достоверности приведены в нижеследующей таблице.

Сегодня предстоит узнать все, что таит в себе анализ на ВИЧ. Сроки готовности, процедура проведения, а также места для его сдачи - все эти составляющие волнуют многих граждан. Не лишним будет понять, в каких ситуациях такой анализ следует сдавать обязательно. Ведь в России существует ряд процедур, которые требуют от гражданина подтверждения состояния здоровья. Кроме того, для максимального результата придется правильно подготовиться к процессу. Обо всем этом каждый человек должен знать заранее. Иначе анализ может не дать должного результата.

Определение болезни

Для начала нужно понять, о каком заболевании идет речь. Может быть, сдача анализа вовсе не обязательна? Если болезнь не слишком опасна и не заразна, то каждый имеет право отказаться от данного исследования.

На самом деле ВИЧ-инфекция является для человека крайне опасной. Характеризуется заболевание инфекцией, которая воздействует на иммунную систему организма, разрушая ее. Как правило, ВИЧ - это благоприятная среда для развития СПИДа. Именно поэтому важно понимать, насколько заболевание опасно. СПИДом называется последняя стадия указанной болезни. Это приобретенный и развившийся иммунодефицит.

Когда нужен тест?

Многие интересуются, когда сдавать анализ на ВИЧ. На самом деле гражданин имеет право самостоятельно обратиться в те или иные учреждения. То есть по собственному желанию. Тем не менее существует ряд ситуаций, при которых наличие справки об отсутствии ВИЧ-инфекции требуется обязательно.

Среди них можно выделить:

планирование беременности;
прием на работу;
наступление беременности (в том числе случайной);
подготовка к госпитализации/операции;
снижение веса, причем резкое и стремительное;
лихорадка, которая возникла без причин и не может объясняться наличием иных болезней;
длительная диарея;
частые случайные половые контакты;
наличие инфекций, передающихся половым путем;
переливание крови (после процесса);
рождение (тест на ВИЧ делается сразу же).

Соответственно, довольно часто именно этот анализ назначается. Ничего особенного или опасного в нем нет. Зачастую граждане сами соглашаются на проведение подобного исследования, беспокоясь о своем здоровье. Но о чем еще требуется знать пациентам?

Куда обращаться?

Например, куда обращаться для того, чтобы получить названную услугу. На данный момент вариантов развития событий очень много. Все зависит от возраста пациента и его предпочтений.

Тест на ВИЧ делают:

в родильных домах;
больницах;
поликлиниках (взрослых и детских);
частных клиниках;
приватных лабораториях;
прочих медицинских учреждениях.

Куда именно обращаться? Точных рекомендаций нет. Каждый гражданин сам решает, каким образом и где именно сдать анализ на ВИЧ. Сроки готовности зачастую зависят не только от системы проведения исследования, но и от места обращения. Как показывает практика, в государственных учреждениях результатов теста приходится ждать дольше. Кроме того, в частных медицинских центрах, клиниках и лабораториях иногда предлагают больший спектр диагностики заболевания. Поэтому необходимо учитывать, что анализ на ВИЧ-инфекцию можно сдать несколькими способами.

Признаки для обращения

Перед тем как узнать о методах диагностики заболевания, рекомендуется понять, при каких признаках стоит обращаться в больницу для того, чтобы сделать тест. О ситуациях, при которых на ВИЧ проверяться обязательно, уже было сказано. Но довольно часто в обычной жизни появляется ряд симптомов, которые заставляют человека задуматься над собственным состоянием здоровья.

Какие случаи этого требуют? Кровь на ВИЧ-инфекцию необходимо сдавать, если у гражданина наблюдаются следующие явления:

увеличение нескольких лимфатических узлов, причем быстро и сразу;
непрекращающаяся диарея, которая уже долгое время беспокоит человека;
признаки ОРВИ или ОРЗ, не поддающиеся лечению;
постоянная ночная потливость;
резкое похудение;
постоянная лихорадка.

Это тревожные моменты, при которых необходимо в целях собственной безопасности сделать анализ на ВИЧ. Сроки готовности и методы диагностики будут представлены далее.

ПЦР-диагностика

Первый и наиболее распространенный вариант теста - это ПЦР-диагностика. Она используется очень часто для определения любых заболеваний. Как показывает практика, является крайне информативным исследованием, если речь идет о взятии мокроты на анализ (например, при гепатите или туберкулезе).

Тем не менее зачастую ПЦР-диагностика - это когда берут кровь на ВИЧ-инфекцию. При этом следует учитывать, что существует несколько типов данного заболевания. ПЦР-анализ обнаруживает с высокой точностью только наличие инфекции. Но вот тип ее он не определяет. Поэтому далеко не всегда люди соглашаются на данное исследование.

Иммуноблоттинг

Какой еще есть анализ на ВИЧ? Сроки готовности будут озвучены далее. Сначала стоит разобраться с методами диагностики заболевания. Помимо уже упомянутого теста, большой популярностью пользуется иммуноблоттинг. Это своеобразное иммуноферментное исследование.

Оно помогает по крови определить антитела к тем или иным инфекциям. А точнее, к их белкам. Обычно такая диагностика используется после ПЦР для подтверждения результата. Она помогает определить конкретный тип ВИЧ-инфекции, которая проникла в организм человека и пользуется большим спросом у населения.

На иммунологию

Следующий анализ, который позволяет определить наличие ВИЧ у человека, - это исследование, позволяющее проверить состояние иммунитета человека.

Дело в том, что ВИЧ снижает концентрацию CD-4 клеток. Ими называются полезные бактерии, которые позволяют организму бороться с тем или иным заболеванием. Как можно понять, что человек болен ВИЧ?

Результаты теста "на иммунологию" предельно просто понять. В норме у человека в организме находится от 500 до 1 500 CD-4 клеток. Если данный показатель ниже 500, то ВИЧ имеет место, но инфекция появилась относительно недавно. Результаты, которые указывают на наличие менее 200 клеток CD-4 - это тревожный знак. Значит, заболевание уже долгое время находится в организме.

Экспресс

Иногда можно срочно сдать анализ на ВИЧ. Сроки готовности экспресс-диагностики составляют порядка 5 минут. Речь идет о не совсем точном, но все же результативном исследовании. Используется в России крайне редко.

Что подразумевается под данным анализом? Самый обычный экспресс-тест. Имеет вид специальной полоски, на которую требуется капнуть кровью. Через 5-10 минут посмотреть на результат. Он может быть или положительным, или отрицательным. Действие данного типа диагностики можно сравнить с тестом на беременность.

Подобное исследование на ВИЧ не пользуется большим спросом. Это из-за того, что высока вероятность погрешностей и неточных результатов. Кроме того, тип инфекции такой тест не помогает определить.

Наряду с ПЦР-диагностикой довольно часто назначается анализ ИФА. Он, как и иммуноблоттинг, позволяет определить наличие антител к белкам ВИЧ-инфекции. Обычно подобный анализ не позволяет поставить окончательный диагноз. Он не отличается своей точностью.

Медики указывают на то, что очень часто ИФА дает ложно-положительный результат. Это явление вызвано молекулярной структурой антител. У большинства инфекций она схожа со структурой антител к ВИЧ. Поэтому можно получить положительный результат исследования крови, но при этом реальная картина будет говорить об обратном. В таком случае анализ повторяют или назначают иной способ диагностики.

Сроки готовности

Срок проведения анализов крови на ВИЧ разный. Точно сказать, сколько именно придется ждать результатов, нельзя. Ведь ответ будет зависеть от многих факторов. Среди них зачастую выделяют следующие:

тип учреждения;
загруженность лаборатории;
выбранный вариант диагностики.

Уже было сказано, что в государственных больницах результатов ждать придется дольше, чем в частных центрах. Именно поэтому многие отдают предпочтение вторым. Обычно они позволяют в кратчайшие сроки получить максимально точный результат исследования.

В государственной клинике в среднем на анализы ВИЧ/гепатит сроки готовности устанавливаются в пределах 4-5 дней. Причем, как показывает практика, этот интервал действителен для любого типа исследования. Ведь экспресс-тесты в государственных учреждениях РФ не предусматриваются.

А вот срок изготовления анализов крови на ВИЧ в частных клиниках зачастую составляет 2-3 дня. Но на практике данный показатель уменьшается до суток. То есть уже на следующий день в некоторых частных клиниках будет готов результат анализа на ВИЧ. Если же имеет место экспресс-тест, то, как уже было сказано, можно получить тот или иной ответ уже через 5-10 минут. Тем не менее, несмотря на скорость получения результата, не рекомендуется пользоваться подобным типом исследования.

Подготовка

Теперь понятно, через сколько готовы анализы на ВИЧ. Немаловажным моментом является подготовка к сдаче теста. Дело в том, что при несоблюдении определенных правил можно получить неточный результат. И это независимо от выбранной методики диагностики.

Какие советы и рекомендации дают врачи? Во-первых, за несколько дней до сдачи анализа рекомендуется наладить рацион питания. Исключить аллергены, а также жирную пищу. Во-вторых, лучше всего сдавать анализ на ВИЧ натощак, с самого утра. Ни пить, ни есть не рекомендуется. Желательно, чтобы период голодовки составлял 8 часов. Тогда можно надеяться на максимально точный результат.

Откуда берут кровь на анализ? Существует 2 варианта - из пальца и вены. Наиболее точный результат дает венозная кровь. Берется она из вены, которая находится у локтевого сгиба. Процедура практически полностью безболезненна. Кровь из пальца, как говорят современные медики, не дает нужного результата.

Пожалуй, это все особенности, о которых должен знать пациент. На данный момент в России анализ на ВИЧ можно сдавать анонимно. Это право есть у каждого гражданина. Также в медицинских учреждениях сейчас перед проведением диагностики необходимо подписать отдельное согласие на взятие анализа. Без этого у человека не будут брать кровь на ВИЧ.

В среднем стоимость диагностики составляет от 300 до 2 500 и более рублей. Все зависит от клиники, а также от метода исследования крови. Данную информацию лучше уточнять в индивидуальном порядке. Срок выполнения анализов ВИЧ тоже может зависеть от стоимости процедуры.

Иммуноблоттинг – диагностическое мероприятие, проводимое в лабораторных условиях, по результатам которого выявляют антитела к возбудителям различных заболеваний. Одним из таковых выступает вирус иммунодефицита человека. Сразу стоит отметить, что такое исследование, как иммуноблоттинг на ВИЧ – это дополнительное мероприятие, которое назначают для подтверждения положительного результата ИФА.

В каких случаях назначается анализ

Вирус иммунодефицита человека – медленно прогрессирующая инфекция. Со времени проникновения в организм патогенов и до проявления первой симптоматики часто проходит достаточно продолжительное время, которое может достигать нескольких лет.

На начальном этапе развития клинические проявления могут отсутствовать. Повышение общей температуры, недомогание, боль в горле, характерные ВИЧ-инфекции симптомы, человек путает с банальной простудой, а ведь инфекция продолжает прогрессировать. Поэтому специалисты ВИЧ-центров рекомендуют пройти комплексную диагностику в таких случаях:

если случился незащищенный половой акт с новым партнером;
если одноразовый медицинский шприц или иглу использовали повторно;
если недавно была нанесена татуировка или проведен пирсинг;
если обнаружена другая инфекция, путь передачи которой – половой (например, сифилис, бактериальный вагиноз, гонорея);
если произошел контакт с инфицированным человеком.

Иммуноблот на ВИЧ проводится с использованием сыворотки или плазмы крови. Исследование на одном стрипе требует 1,5-2 мл крови или 15-25 мкл сыворотки.

Диагностическое мероприятие позволяет выявить антитела не только к вирусу иммунодефицита человека, но и к другим патогенам. В ходе исследования используют специальные наборы, характерные для различных заболеваний, например:

ВПГ1 и ВПГ2 IgM/IgG (для выявления герпесвирусной инфекции);
TORCH-профиль IgM (для выявления токсоплазмоза, краснухи, цитомегаловирусной инфекции, ВПГ 1 и ВПГ 2);
ВЭБ IgMTIgG (для выявления вирусной инфекции Эпштейн-Барр);
ВГС IgG (для выявления вирусного гепатита типа С).

Результат иммуноблоттинга может быть положительным (когда обнаружены антитела) и отрицательным (когда антитела в биологическом материале отсутствуют), а также неопределенным, ложноположительным и ложноотрицательным.

Где можно провериться на заражение вирусом, и что делать дальше

Каждая поликлиника, частная лаборатория, больница, клиника специализируется на подобном диагностическом мероприятии. Пройти тест можно в центре тестирования ВИЧ. Некоторые частные клиники предлагают услуги по консультированию и тестированию вируса СПИДа и ВИЧ на дому.

Рекомендуется провести один тест спустя 6 недель после предполагаемого заражения и спустя 12 недель. Пройти диагностику разрешается и в более поздний срок: на результат это не влияет.

ВАЖНО! После получения результатов исследования нужно обратиться к лечащему врачу для назначения соответствующей терапии.

Если результаты иммуноблота положительные, это еще не значит, что в организме развивается ВИЧ-инфекция. Для подтверждения диагноза назначают иные исследования, например, непрямую иммунофлюоросценцию.

Хоть метод иммуноблота и обладает высокой чувствительностью, однако, за счет определения иммуноглобулинов класса G возможен ложноположительный результат в первые 3 недели после инфицирования. В таком случае проводится тест повторно спустя определенное время.

Все причины получения ложноположительного результата неизвестны. Наиболее распространенными источниками выступают период беременности и недавнее введение вакцины иммунопрепарата. Если по истечении определенного времени после воздействия подобных факторов иммуноблот на ВИЧ все так же положительный, это означает, что человек инфицирован.

Иммуноблот может давать отрицательный результат, что сигнализирует об отсутствии в организме антител к ВИЧ-инфекции и, как следствие, – о полном здоровье.

Как проводится анализ

Иммуноблот позволяет идентифицировать антитела путем исследования крови и применения гель-электрофореза.

В первую очередь проводится разрушение бактериальных клеток или вирионов ультразвуком, после чего путем электрофореза – разделение всех антигенов вируса или бактериальных клеток. В итоге получается коммерческий реагент, помещаемый на специальную нитроцеллюлозную пленку.

Во время постановки иммуноблоттинга на материал с известным антигеном наносят и исследуемую сыворотку. После того, как провели инкубацию и отмывание несвязавшихся антител, начинают иммуноферментный анализ, наносят на сыворотку иммуноглобулины, которую помечают ферментом, и хромогенный субстрат, меняющий цвет при контакте с ферментом.

Если имеются антитела, на носителе образуются пятна.

Для проведения иммуноблоттинга на ВИЧ используется забор крови

Линейный блот на ВИЧ – непрямое иммунологическое исследование, методом которого получают качественный показатель аутоантител класса IgG.

В ходе иммунологического исследования используют вирусное вещество ВИЧ-формата или антигены. В лабораторных условиях соединяют белки ВИЧ и отдельные антитела, которые были получены из сыворотки крови. Далее проводится инкубация путем добавления меченых антител и человеческого иммуноглобулина.

В организме ребенка до 9 месяцев, рожденного от инфицированной женщины, присутствуют антитела к ВИЧ матери, что становится причиной получения ложноположительного результата ИФА. По этой причине предпочтение отдают вирусологическим тестам – количественному анализу РНК и ДНК ПЦР. Более чувствителен культуральный метод диагностики инфекции.

ВАЖНО! Показаниями к проведению диагностических мероприятий по выявлению ВИЧ-инфекции у новорожденных выступают: рождение от инфицированной женщины, получение сомнительного результата ранее осуществимого анализа.

Так как ВИЧ-инфекция, развивающаяся у беременной женщины, может передаться будущему ребенку, требуется ранняя диагностика на вирус иммунодефицита.

В первую очередь проводится иммуноферментный анализ, применяемый в качестве скрининга. Диагностическое мероприятие помогает обнаружить в сыворотке крови антитела к инфекции. Несмотря на точные результаты анализа в период беременности, требуется повторное проведение исследования.

Разновидность ИФА – иммунный блоттинг, который часто используют в период беременности. По результатам диагностики можно выявить антитела к определенным антигенам, которые распределены по молекулярному весу методом электрофореза.

Как правильно пройти тест

Иммунный блоттинг на ВИЧ требует специальной подготовки, как и другие методы диагностики заболевания. Если провести некоторые исследования и получить результаты определенных показателей можно на протяжении всего дня (например, ответ на аллерген), то сдавать кровь на иммунологический анализ нужно только в утреннее время.

В предыдущий день перед диагностикой рекомендуется окончить повышенные физические нагрузки. Биологический материал сдают на голодный желудок. Как правило – это кровь с вены, которую в некоторых случаях забирают в несколько пробирок.

Расшифровка результатов

Расшифровку результатов иммуноблотта проводит лабораторный работник. Если обнаружили 2 из 3 протеинов ВИЧ-1 или ВИЧ-2, это указывает на присутствие в организме соответствующей инфекции. Исследование проводится для подтверждения положительного иммуноферментного анализа. Поэтому реакция проверяется и на такие протеины, как gp120/160, gp41 в сочетании с р24. Последние – это часть трех генов СПИДа – gag pol and env.

Схематическое отображение результатов иммуноблоттинга на ВИЧ

Первичная диагностика предполагает исследование белков р25, gp110/120 и gp160, указывающих на раннюю стадию развития заболевания. При положительном результате, который дал второй серологический иммуноферментный анализ, проводится иммуноблот. Если и последний дал положительный результат, диагноз ВИЧ подтверждают.

Вероятность положительного результата зависит от периода, который прошел от момента инфицирования до проведения диагностики:

спустя 28 дней – 60-65%;
спустя 42 дня – 80%;
спустя 56 дней – 90%;
спустя 84 дня – 95%.

Ложноположительный результат возможен, если забор биологического материала для дальнейшей диагностики проводился в период беременности, при нарушении гормонального фона, продолжительном подавлении иммунной функции определенными препаратами, которые принимает человек.

Критерии оценки анализа

Результаты анализа ИФА и иммуноблоттинга должны соответствовать следующим критериям:

блот исследуемого биологического материала совпадает с блотом образца сравнения;
молекулярная масса основного выявленного компонента соответствует требованиям спецификации.

Результаты полученные в специализированной лаборатории будут наиболее точными

Выявляемая примесь и ее содержание должны отвечать требованиям свидетельства на стандартный образец.

Неинтерпретируемые результаты

В некоторых случаях иммуноблоттинг на ВИЧ и СПИД не соответствует отрицательному и положительному результату, причем врач не может определить истинную причину сомнительных сведений. Часто причиной неправильной интерпретации выступает инфицирование, вызванное другим серотипом.

Для устранения сомнений ПЦР и ИФА проводятся в динамике. При отсутствии характерной заболеванию симптоматики на протяжении полугода и факторов риска говорят о полном здоровье. На этом этапе диагностические мероприятия оканчивают.

Сомнительный результат также можно получить при развитии в организме иного инфекционного заболевания, ракового новообразования, аллергической реакции.

Важно! При сомнительном результате человек не может быть донором крови и другого биологического материала.

Типичные ошибки при диагностике ВИЧ инфекции

Забор биологического материала, доставка и оформление материалов, используемых при проведении лабораторной диагностики, должны соответствовать следующим правилам:

Сопроводительная документация оформляется с указанием наименования тест-системы, ее срока годности и серии.
Полностью указаны паспортные данные обследуемого, дата, место забора биологического материала.
Сыворотка хранится не дольше установленного срока, для исследования берется допустимый объем биоптатат – не меньше 2-5 мл.
Номер на флаконе соответствует указанному номеру в направлении.
Забор биологического материала происходит по установленным правилам, а именно, из локтевой вены. В составе исследуемой крови не должно быть сгустков.

Для забора материала используется сухая пробирка. У новорожденных часто берут пуповинную кровь, указывая о таком факте в направлении.

Типичная ошибка врачей – хранение полученного материала дольше 12 часов при комнатной температуре и дольше 1 дня при температуре 4-8 градусов выше по Цельсию. За счет наступающего гемолиза искажаются результаты диагностического мероприятия.

Итак, к типичным ошибкам во время проведения диагностики ВИЧ-инфекции относят:

неправильный забор биологического материала;
неправильное хранение биоптата;
неправильная транспортировка диагностических систем;
длительное хранение тест-системы.

На результат влияет даже качество воды, используемой для промывания тары, в которую помещают биологический материал.

Иммуноблоттинг на ВИЧ – это один из методов диагностики инфекции иммунодефицита. Подчеркнем – один из методов. Да, это высокоточный метод, но в большинстве случаев он применяется как “истина в последней инстанции”.

Диагностические процедуры чаще всего начинаются с ИФА. В случае сомнений в результатах может быть назначена процедура иммунного блоттинга. В любом случае иммуноблоттинг входит в диагностическую цепочку диагностики ВИЧ.

Метод сложный и дорогостоящий. По этой причине его применение обосновано в условиях неопределенности – то ли ставить диагноз, то ли он ложный.

Иммуноблоттинг – что это

Иммуноблоттинг – это методика лабораторных исследований сыворотки крови, позволяющая выявить наличие в крови специфических белковых соединений (антител).

Название метода происходит от английского Blot (пятно). В нашей медицине принят термин “блоттинг”. Поскольку метод относится к сложной теме из молекулярной биологии, подробно его рассматривать не будем. Остановимся только на моментах, которые необходимы для понимания диагностической цепочки.

Справочно. Основным в иммуноблоттинге является выделение необходимых белков из сыворотки крови, нанесение их на носитель с последующим анализом. Чтобы выделенные белки увидеть, их, например, окрашивают в какой-либо цвет (отсюда и пятно).

Метод диагностики иммуноблоттинг применяется для определения различных заболеваний. В диагностике ВИЧ он проявил себя эффективно.

Для проведения иммунного блоттинга используют электрофорез исследуемых белковых структур в полиакриламидном геле. После того, как произойдет разделение изучаемых антигенов по молекулярному весу, полученный материал переносят на нитроцеллюлозные или PVDF мембраны.

На мембране остается спектр белков, характерный для исследуемого заболевания. После этого на мембрану наносят сыворотку крови пациента. В случае, если сыворотка содержит необходимые антитела, происходит реакция связывания типа антиген-антитело.

Связывание происходит строго по соответствующим полоскам антигенов на мембране. За счет этого становится возможна визуализация образовавшихся комплексов антиген-антитело.

При положительном анализе иммунного блоттинга появляются видимые полосы на определенных участках мембраны.

Также многие современные методики исследования иммуноблоттинга проводятся при помощи ИФА (иммуноферментный анализ) или иммуноокрашивания.

Для каждого конкретного исследования применяют специфичные к исследуемому белку антитела. За счет этого иммунный блоттинг относится к высокоточным исследованиям с низким уровнем погрешности.

Справочно. Иммуноблоттинг на ВИЧ используется для выявления в крови антител к вирусу иммунодефицита человека.

В некоторых лабораториях вместо классического иммуноблоттинга применяют линейную методику, относящуюся к непрямым иммунологическим исследованиям, позволяющим провести качественную оценку наличия аутоантител класса IgG.

ИФА и иммуноблоттинг на ВИЧ

Иммуноферментный анализ (ИФА) относится к лабораторным иммунологическим методам качественной или количественной диагностики в анализе крови специфических соединений (низкомолекулярные соединения, макромолекулы, вирусы).

В основе иммуноферментного анализа лежит реакция антиген-антитело.

При выявлении в анализе указанного комплекса (антиген-антитело) его отмечают с помощью специального фермента.

Иммуноферментный анализ достаточно прост в использовании и отличается высокой точностью. В связи с этим, при диагностике инфекции его применяют в первую очередь.

Однако, согласно протоколам диагностики, такой серьезный диагноз на основании результатов одного ИФА не выставляется. Для подтверждения требуется обязательное проведение иммуноблоттинга на ВИЧ.

Справочно. Это связано с тем, что иммунный блоттинг отличается максимальной точностью. При получении нескольких положительных результатов иммуноблоттинга вероятность диагностической ошибки сводится к нулю.

Следует отметить, что в отличие от ИФА, иммунный блоттинг относится к сложным и весьма дорогостоящим методикам диагностики, поэтому он применяется только после получения 2 положительных анализов ИФА.

В отличие от ИФА, иммунный блоттинг не дает ложноположительных результатов при наличии у пациента антител к Эпштейн-Барр вирусу, ревматоидному фактору, главным комплексам гистосовместимости HLA, при беременности.

В каких случаях назначается анализ

Анализ на ВИЧ назначается:

при выявлении у пациента генитального герпеса, гонореи, сифилиса и других заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП);
после незащищенного полового контакта с непроверенным партнером;
после нанесения татуировок или татуажа, выполнения пирсинга или проведения инъекционных косметологических процедур в нелицензированных заведениях;
после контактов с кровью инфицированного человека;
после использования игл, бритв, лезвий или хирургических инструментов, загрязненных биологическим материалом ВИЧ-инфицированного пациента;
при плановом обследовании перед получением гражданства, вида на жительство, при прохождении комиссии в военкомате, при прохождении профилактического осмотра перед поступлением в медицинский университет, при плановых профосмотрах (военные, хирурги);
при планировании беременности;
во время вынашивания ребенка;
при выявлении у пациента симптомов ВИЧ инфекции.

Симптомы ВИЧ на первых стадиях не специфичны. Заболевание может проявляться слабостью, постоянной сонливостью, вялостью, периодической лихорадкой, мышечными и суставными болями, хроническими тонзиллитами, увеличением лимфатических узлов, сыпью неясной этиологии.

В редких случаях возможны постоянные головные боли, частая потеря сознания, снижение памяти, развитие энцефалопатии.

Прогрессирует инфекция медленно, поэтому подобная неспецифическая симптоматика может наблюдаться на протяжении от 3 до 7 (и более) лет.

В дальнейшем симптомы проявляются в виде оппортунистических инфекций (сопутствующие инфекционные заболевания, развивающиеся на фоне снижения иммунитета из-за прогрессирующего ВИЧ).

Максимальная эффективность лечения достигается на стадии неспецифических проявлений. Поэтому, при наличии факторов риска заражения (инъекционная наркомания, частые незащищенные половые контакты с непроверенными половыми партнерами и т.д.) требуется регулярно проверяться на ВИЧ.

Иммуноблоттинг на ВИЧ – где сдать

Анализ на иммуноблоттинг можно пройти в центре СПИДа или частных лабораториях. По желанию пациента обследование может быть проведено анонимно.

Антитела к вирусу иммунодефицита человека появляются в крови зараженного человека уже через 2 недели после заражения.

Однако, для получения максимально точных результатов следует провести 2-3 теста на ВИЧ инфекцию. Чаще всего проводят обследование на 6 и 12 неделе после предполагаемого заражения.

Может быть проведено экстренное обследование (при возможности назначения ранней постконтактной профилактики).

Вероятность выявления положительного иммуноблоттинга на ВИЧ во многом зависит от времени, прошедшего от момента заражения.

Справочно. Через месяц после заражения анализ положителен у 60% пациентов, спустя 45 дней – у 80%, через 3 месяца антитела выявляются практически у 100% инфицированных.

В связи с этим, перед обследованием на ВИЧ требуется проконсультироваться с врачом СПИД-центра. Консультации проводятся анонимно. Специалист расскажет о том, как может передаваться вирус, как предохраняться от заражения, рассчитает срок, когда лучше пройти обследование и сколько раз необходимо сделать анализ.

Также по показаниям может быть назначена ранняя профилактика.

В СПИД-центре после анализа проводится послетестовая консультация. При выявлении положительного иммуноблоттинга врач назначает дополнительные обследования, на основании результатов которых пациенту подбирается комплексная антиретровирусная терапия.

Как проводится анализ на ВИЧ

Справочно. Согласно официальным протоколам диагностики ВИЧ-инфекции, в первую очередь проводится скрининговое исследование при помощи методики ИФА. Дальнейшая диагностика зависит от результатов первого исследования.

Если ИФА не выявил антител к ВИЧ и вирусных антигенов, обследуемому выдается отрицательный результат. Дальнейшее обследование не выполняется.

Исключение могут составлять случаи, при которых пациент не уверен в точных сроках предполагаемого инфицирования. Для уточнения может быть рекомендовано повторное прохождение теста через 6-12 недель (для исключения ложноотрицательных результатов).

При получении сомнительных или положительных результатов пациент получает направление на дальнейшее обследование в СПИД-центре. После этого проводится еще 1-2 анализа методом ИФА.

При получении двух положительных или сомнительных результатов проводится иммуноблоттинг на ВИЧ инфекцию.

Читайте также: