Диметилпарафенилендиамина для диагностики гонококковой приготовление

Лабораторная диагностика гонореи проводится при помощи бактериоскопического и бактериологического анализа, реже используется серологический и иммуноферментный метод.

Гонорея – инфекционное заболевание, возбудителем которого является гонококк. Впервые гонококки были описаны немецким дерматовенерологом Альбертом Нейссером. Отсюда возбудители гонореи получили название Neisseria gonorrhoeae.

Морфология

Гонококки являются диплококками бобовидной формы и внешне напоминают кофейные зерна. Гонококки - грамотрицательные бактерии, при окрашивании по методу Грама они приобретают красный цвет. Под воздействием внешней среды (химических препаратов, лекарств) гонококки могут менять размеры и форму, становиться грамположительными. Способность гонококков менять свойства часто осложняет диагностику гонореи.

Гонококки хорошо размножаются в жидких питательных средах и на плотных средах с рH от 7,2 до7,4 единиц, содержащих нативный человеческий белок (асцитную жидкость, кровь, сыворотку крови). Культивирование гонококков происходит при температуре 37 градусов Цельсия в атмосфере, содержащей 3 – 5 % углекислого газа. При дальнейшем культивировании потребность в углекислом газе отпадает.

Во внешней среде гонококки малоустойчивы. На них пагубно влияет повышение и понижение температуры, высыхание, прямые солнечные лучи. Бактерии погибают при самых малых концентрациях дезинфицирующих средств. Но во влажной среде, например, в гное, на грязном белье они могут сохранять свою жизнеспособность до 24 часов.

Диагностика гонореи

Своевременная диагностика венерического заболевания позволяет остановить распространение инфекции по организму и безотлагательно начать лечение. В России порядок проведения диагностики гонореи регламентирован приказом Министерства здравоохранения РФ от 20.08.2003 № 415 и заключается в обязательном осуществлении бактериоскопического исследования с последующим бактериологическим подтверждением, которые помогают быстро определить наличие инфекции.

Отдел новых технологий ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера для проведения бактериоскопического исследования выпускает наборы реагентов для окраски по Граму в трёх разных вариантах.

1. В состав комплекта № 1 входит фуксин Циля, окрашивающий гонококки в розовый цвет.
2. В комплекте № 2 фуксин Циля заменен на водный раствор нейтрального красного, в результате чего грамотрицательные бактерии приобретают ярко-оранжевый цвет и хорошо видны на контрасте с фиолетовой окраской грамположительных бактерий.
3. Наибольшую контрастность получают при применении комплекта № 3, в котором используются в качестве красителей бриллиантовый зеленый и сафранин. Грамположительные микроорганизмы приобретают зеленый цвет, а грамотрицательные – красный.

Бактериоскопический метод имеет следующие недостатки:

1. необходима высокая концентрация бактерий в исследуемом материале, не менее 10 9 КОЕ/мл, в противном случае гонококки могут быть не выявлены;
2. при ошибках в технике окрашивания бактерии могут повести себя нетипичным образом и окраситься в другие цвета;
3. гонококки полиморфны – они могут менять размеры и окраску под воздействием различных препаратов.

Для эффективной диагностики гонореи бактериоскопический анализ дополняют бактериологическим анализом, при котором исследуемый материал высевают на питательные среды для получения чистых культур возбудителя.

Селективный компонент в виде комплекса антибиотиков подавляет рост посторонней микрофлоры. Благодаря селективному компоненту на питательной среде, выпускаемой Отделом новых технологий, образуются только колонии гонококков, которые очень легко визуально обнаружить.

Бактериологическое исследование завершают проведением бактериоскопии мазков, приготовленных из выросших колоний. Также для контроля морфологии возбудителя проводят тесты для обнаружения цитохромоксидазы (оксидазный тест) и бета-лактомазы – ферментов, продуцируемых гоноккоками.

Также мы предлагаем наборы реагентов для экспресс-определения бета-лактамазы, продуцируемой гонококками. Обнаружение в исследуемом материале бета-лактамазы свидетельствует о резистентности выделенных гонококков к пенициллинам, к цефалоспоринам.

Преимущества препаратов для диагностики гонореи, выпускаемых Отделом новых технологий ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера:

1. мы на протяжении многих лет проводим исследования в области диагностики заболевания;
2. мы выпускаем полный спектр препаратов для выявления гонококковой инфекции;
3. мы внесли качественные изменения в состав препаратов, чтобы уменьшить риск ошибки при диагностировании;
4. наши селективные питательные среды для диагностики гонореи не имеют аналогов в России и стоят дешевле зарубежных препаратов.

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Анисимова Е. Н., Винник Ю. Ю., Прохоренков Виктор Иванович, Катцына Г. И.

Получены данные о заболеваемости гонококковой инфекцией в Красноярском крае. За 2011 г. зарегистрировано 1642 заболевших гонорей. Заболеваемость среди взрослого населения составила 56,7 на 100 000 населения, среди подростков — 1,2 на 100 000 населения. Наибольшее количество заболевших регистрировали в возрасте 20—29 лет. Кроме этого, проведен сравнительный анализ методов лабораторной диагностики гонококковой инфекции , применяемых в Красноярском краевом кожно-венерологическом диспансере.

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Анисимова Е. Н., Винник Ю. Ю., Прохоренков Виктор Иванович, Катцына Г. И.

MODERN DIAGNOSIS OF GONOCOCCAL INFECTION AND INCIDENCE OF GONORRHEA IN THE KRASNOYARSK REGION

The incidence of gonococcal infection in the Krasnoyarsk region is discussed. A total of 1642 patients with gonorrhea were recorded over 2011. The incidence was 56.7 per 100 000 in the adult population and 1.2 per 100 000 in adolescents. The disease was the most incident in subjects aged 20-29 years. A comparative analysis of methods for laboratory diagnosis of gonococcal infection , used at the Krasnoyarsk Territorial Center for Skin and Sexually Transmitted Diseases, was carried out.

Буллезный дактилит у больного лепрой.

вой кисти отечно-гиперемированное пятно, размером до 3 см в диаметре. На этом фоне расположен поверхностный пузырь, заполненный серозным экссудатом, склонный к периферическому росту (см. рисунок).

Поставлены следующие диагнозы: лепра недифференциро-

ванного типа, стадия регресса; хроническая специфическая полиневропатия; хронический остеомиелит костей стоп; гангрена II—V пальцев правой кисти; трофические язвы нижних конечностей; пролежни на нижних конечностях; буллезный дактилит.

Проведено лечение: вскрытие пузыря, антибиотикотерапия, десенсибилизирующая терапия, адсорбенты, витамины; наружно — мази с содержанием антибиотиков.

Выписан с улучшением состояния, без признаков острого воспалительного процесса на коже. Настоящее наблюдение представляет собой интерес в виду редкости заболевания.

1. de Ceulaer K., van der Linden J.M., Cats A. "Sausage-like" toes (dactylitis) and HLA-B27. J. Rheumatol. Suppl. 1977; 4 (suppl. 3): 66—9.

2. SiegelD.M., Baum J. HLA-B27 associated dactylitis in children. J. Rheumatol. 1998; 15(6): 976—7.

3. Padula A., Giasi V., Olivieri I. Elderly onset isolated B27 associated dactylitis. Ann. Rheum. Dis. 2002; 61(8): 759—60.

4. Бадокин В.В. Псориатический артрит: клиника, диагностика, лечение: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. М.; 2003.

СИФИЛИС И УРОГЕНИТАЛЬНЫЕ ИНФЕКЦИИ

Диагностика гонококковой инфекции в Красноярском крае

Е.Н. Анисимова2, Ю.Ю. Винник1, В.И. Прохоренков1, Г.И. Катцына2

1Кафедра дерматовенерологии с курсом косметологии (зав. — проф. В.И. Прохоренков) ГБОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого; 2КГБУЗ Красноярский краевой кожно-венерологический диспансер №1 (главный врач Г.И. Катцына)

Получены данные о заболеваемости гонококковой инфекцией в Красноярском крае. За 2011 г. зарегистрировано 1642 заболевших гонорей. Заболеваемость среди взрослого населения составила 56,7 на 100 000 населения, среди подростков — 1,2 на 100 000 населения. Наибольшее количество заболевших регистрировали в возрасте 20—29 лет. Кроме этого, проведен сравнительный анализ методов лабораторной диагностики гонококковой инфекции, применяемых в Красноярском краевом кожно-венерологическом диспансере.

Ключевые слова: гонококковая инфекция, лабораторная диагностика гонореи

MODERN DIAGNOSIS OF GONOCOCCAL INFECTION AND INCIDENCE OF GONORRHEA IN THE KRASNOYARSK REGION

E.N.Anisimova, Yu.Yu.Vinnik, V.I.Prokhorenkov, G.I.Katsyna

The incidence of gonococcal infection in the Krasnoyarsk region is discussed. A total of1642 patients with gonorrhea were recorded over 2011. The incidence was 56.7 per 100 000 in the adult population and 1.2 per 100 000 in adolescents. The disease was the most incident in subjects aged 20-29 years. A comparative analysis of methods for laboratory diagnosis of gonococcal infection, used at the Krasnoyarsk Territorial Center for Skin and Sexually Transmitted Diseases, was carried out.

Key words: gonococcal infection, laboratory diagnosis of gonorrhea

В Российской Федерации гонорея остается социально зна- нием и неблагоприятным влиянием на репродуктивное здоро-чимой инфекцией, что обусловлено ее широким распростране- вье населения [1, 2].

Сведения об авторах:

Анисимова Е.Н. — канд. мед. наук, доцент; Винник Юрий Юрьевич — докторант, канд. мед. наук, доц. (vinnik33@mail.ru); Прохоренков Виктор Иванович — д-р мед. наук, проф., Катцына Г.И. — главный врач.

РОССИЙСКИЙ ЖУРНАЛ КОЖНЫХ И ВЕНЕРИЧЕСКИХ БОЛЕЗНЕЙ

Рис. 1. Уретральный мазок, окрашенный метиленовым синим (а) и по способу Грама (б).

Несмотря на наличие эффективных противогонококковых препаратов, гонорея остается трудно контролируемым заболеванием, чему во многом способствуют сложившаяся в России экономическая и демографическая ситуация (снижение социально-экономического уровня жизни населения, создание рынка интимных услуг, наличие неконтролируемых миграционных потоков населения).

Отчасти распространению инфекции способствует отсутствие возможностей применения современных методов выявления и типирования Neisseria gonorrhoeae (N. gonorrhoeae) [3].

В диагностике гонореи ведущими остаются бактериоско-пический и бактериологический методы, однако не всегда и не везде проводят культуральную диагностику гонореи, что создает дополнительные трудности в разработке системы контроля за распространением этой инфекции [4].

Цель работы — сравнительная оценка методов лабораторной диагностики гонореи по данным Красноярского края.

Материалы и методы

Исследования проводили среди пациентов Красноярского краевого кожно-венерологического диспансера №1 (КККВД №1). Материалом для прямых диагностических методов служили соскобы из уретры и цервикального канала.

Диагностику гонореи у мужчин и женщин осуществляли методом бактериоскопии с последующим культуральным исследованием и идентификацией возбудителя по биохимическим свойствам.

Для бактериоскопии препараты окрашивали метиленовым

Рис 2. Питательная среда для выделения гонококка. Основа и добавка.

Рис. 3. Тест-система BD Crystal для идентификации микроорганизмов.

синим и по способу Грама (рис. 1). Метод окрашивания по Гра -му не использовали при исследовании образцов, полученных из других анатомических участков (ректальных), поскольку достоверность получаемых при этом результатов невысока.

Для повышения вероятности идентификации гонококков забор биологического материала для бактериологического исследования проводили в одноразовые пластиковые контейнеры с полужидкой транспортной средой Amies и доставляли в бактериологический отдел лаборатории в течение 2 ч.

Первичную идентификацию нейссерий проводили путем визуальной оценки вида колоний, окраски материала из подозрительных колоний по Граму, проведения оксидазного теста.

Видовую идентификацию проводили при выделении оксида-зоположительных грамотрицательных диплококков, для окончательной диагностики N. gonorrhoeae.

Изучение ферментативной активности N. eisseria gonorrhoeae проводили на тест-панели BBL Crystal Identification Systems Neisseria/Haemophilus ID (N/HID), на крышке которой содержалось 29 высушенных биохимических и ферментативных субстратов и флюоресцентный контроль.

Считывание результатов проводили с помощью устройства для ручного считывания панелей BD Crystal Panel Viewer (рис. 3).

Результаты и обсуждение

В Красноярском крае за 2011 г. зарегистрированы 1642 заболевших гонорей. Заболеваемость среди взрослого населения составила 56,7 на 100 000 населения, среди подростков — 1,2 на 100 000 населения. Наибольшую долю (69%) заболеваемости регистрировали в возрасте 20—29 лет (рис. 4).

К врачу самостоятельно обратились 77,6% пациентов. Активно выявлено 22,4%, из них дерматовенерологами 14,8%, акушер-гинекологами 3,4%, урологами 2,4%, при проведении профилактических осмотров 1,4%.

Самостоятельно обратившихся подростков было несколько меньше, только 51,4%, а 48,6% были выявлены активно (рис. 5).

Среди подростков 77,1% составили учащиеся, из них более половины учащиеся ПТУ и техникумов (рис. 6) и 22,9% неработающие.

Среди пациентов преобладали мужчины (рис. 7). Больший процент мужчин среди обследуемых объясняется тем, что в силу анатомических особенностей (большая протяженность уретры и др.) выраженные болезненные ощущения вынуждают мужчин чаще обращаться за медицинской помощью. У женщин гонококковая инфекция чаще протекает более стерто.

Чувствительность и специфичность метода окрашивания по Граму при исследовании уретральных образцов на гонококки у больных мужского пола с клиническими признаками заболевания, составила около 95%. Чувствительность этого метода при исследовании цервикальных образцов, полученных от взрослых женщин, составила только 60%, а специфичность — около 90%. Чаще всего это связано с тем, что у женщин, особенно при хронической и вялотекущей формах гонореи, диагностика осложняется либо обилием сопутствующей микрофлоры, затрудняющей поиск гонококка, либо малым количеством возбудителя гонореи в патологическом материале. Кроме того, при микроскопии мазков нередко встречаются гонококки с измененными морфологическими и тинкториальными свойствами.

Широкое внедрение бактериологического метода обследования, позволило решить проблему диагностики сложных случаев гонореи. В КККВД №1 выросшую культуру исследовали макро- и микроскопически: изучали форму колоний, морфологические и тинкториаль-