Цитоплазматические включения подобные хламидийным

Трихомониаз как специфическое воспалительное заболевание женских половых органов. Диагностирование трихомониаза. Микроскопическое исследование нагивных препаратов. Бактериологическое исследование. Лабораторная диагностика хламидиоза. Формы хламидий.

Рубрика	Медицина
Вид	контрольная работа
Язык	русский
Дата добавления	19.01.2012
Размер файла	28,1 K

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

1. Лабораторная диагностика трихомониаза

Трихомониаз - заболевание, возникшее вследствие поражения различных отделов моче - половой системы влагалищной трихомонадой, которая у взрослых передается исключительно половым путем из-за небольшой резистентности к условиям внешней среды при высушивании гибнут мгновенно.

Трихомониаз относится к специфическим воспалительным заболеваниям женских половых органов (на его долю приходится 15-20% всех инфекционных вагинитов). Реже его выявляю у мужчин и исключительно редко у детей.

У женщин влагалищные трихомонады обнаруживаются в основном в вульве и вагине, реже в уретре, шейки матки. У мужчин поражаются уретра, простата, семенные пузырьки.

Трихомонады совершают активные поступательно-колебательные (толчкообразные) движения. Пеликула натянута на клетке неплотно, поэтому при передвижении контур простейшего как бы прогибается при столкновении препятствием.

Материал для исследования.

- у женщин исследуется отделяемое, соскобы влагалища (материал берется из заднего свода), реже уретры, сыворотка крови.

- у мужчин обычно исследуется отделяемое, соскобы уретры; первую (10-15 мл) порцию мочи, а также отделяемое препуциальной складки в капле физиологического раствора, сыворотка крови. В осадок мочи трихомонады попадают в результате смыва с влагалища у женин, а у мужчин - из уретры.

При диагностировании трихомониаза следует избегать проведения местных вагинальных или уретральных процедур перед взятием материала из уретры, влагалища. У женщин наиболее эффективно исследование материала взятого после менструации, у мужчин после 3 - 5 часового воздержания от мочеиспускания.

Методы лабораторной диагностики.

I.цитологический: 1) микроскопия нагивных препаратов

2) микроскопия окрашенных мазков

II.бактериологический (культуральный посев на влагалищную трихомонаду)

Микроскопическое исследование нагивных препаратов.

Свежие препараты желательно исследовать непосредственно после взятия материала. В живом состоянии трихомонады легко распознаются благодаря своим активным поступательно - колебательным движениям. Лучшие результаты дает просмотр нагивного препарата в микроскопе с темнопольным конденсатором, так как при этом обнаруживаются и единичные и слабоподвижные особи в скоплениях клеточных элементов за счет хорошо видимого движения жгутиков. При исследовании следует помнить о возможности обнаружения, особенно в моче, жгутиковых простейших семейства бодонидов. В отличии от трихомонад они обладают меньшими размерами, имеют 2 жгутика и совершают быстрое поступательное движение по прямой.

После потери подвижности трихомонады распознать нельзя.

Микроскопическое исследование окрашенных мазков.

Окрашенные мазки рекомендуется приготовлять наряду со свежими нагивными препаратами. Мазки окрашивают метиленовым синим 1%, по Романовскому - Гилуа, по Граму. Наиболее эффективным является метод Романовскому-Гилуа. В окрашенных мазках отделяемого встречаются клетки плоского эпителия, лейкоциты, разнообразная микрофлора и возможно трихомонады. Постоянные идентификационные морфологические признаки влагалищных трихомонад: характерное эксцентрично расположенное темнофиолетовое ядро, нежноячеистая голубая цитоплазма. На хорошо окрашенных мазках видны 4 жгутика и краевая нить ундулирующей мембраны, окрашенные в интенсивно красный цвет. Ядро трихомонад меньше ядер эпителиальных клеток.

В мазках, окрашенных метиленовым синим, трихомонады можно спутать с измененными эпителиальными клетками.

Микроскопия позволяет установить общее количество трихомонад и степень выраженности воспалительной реакции. Следует отметить, что не всегда при микроскопическом исследовании сразу удается выявить трихомонады. Поэтому брать материал для исследования повторно.

Культуральное исследование (посев на влагалищную трихомонаду отделяемого моче - половых органов) с использованием специальных сред позволяет выявить до 95% случаев трихомониаза, особенно в латентных случаях при хроническом течении инфекции. Посев позволяет определить сопутствующие неспецифические заболевания, видовую принадлежность, количество того или иного возбудителя и чувствительность к антибактериальным препаратам.

Определение иммуноглобулинов класса Q к Trichomonas vaginalis. Количественный иммуноферментный метод. Исследуется сыворотка.

Выявление ДНК Trichomonas vaginalis в режиме реального времени. Качественный метод. Чувствительность метода 95%. Исследуя соскоб уретры или влагалища.

Культуральное, ИФА, ПЦР исследования - самые точные и современные методы диагностики трихомониаза.

2. Лабораторная диагностика хламидиоза

Хламидиоз - инфекционное заболевание, передающееся половым путем, вызываемое Chlamydia trachomatis. Является одним из самых распространенных ЗППП. Хламидиоз очень часто протекает бессимптомно и нередко сопровождается осложнениями, приводящими к инвалидности при болезни Рейтера; бесплодию или внутриутробному инфицированию, обуславливая врожденную патологию плода и новорожденного.

Хламидии представляют большую группу облигатных внутриклеточных паразитов, очень близких к грамотрицательным бактериям. Их можно рассматривать как грамотрицательные бактерии, управляющие способность синтезировать АТФ, гуанозинтрифосфат (ГТФ) и ряд других ферментных систем, иными словами утратившие способность выработки метаболической энергии. Этот дефект обусловливает их внутриклеточный рост, благодаря которому они имеют доступ к богатым энергией промежуточным продуктам метаболизма клеток хозяина. В семействе Chlamydiaceae выделено два рода - Chlamydia и Chlamydophila.

Род Chlamydia включает три вида: Chlamydia trachomatis, Chlamydia muridarum и Chlamydia suis. Chlamydia trachomatis - исключительно паразит человека, вызывает трахому, урогенитальные заболевания, некоторые формы артрита, конъюнктивит и пневмонию новорожденных. Другие виды Chlamydia заболеваний у человека не вызывают.

Род Chlamydophila составляют шесть видов: Chlamydophila psittaci, Chlamydophila pneumoniae, Chlamydophila pecorum, Chlamydophila abortus, Chlamydophila caviae и Chlamydophila felis.

Chlamydophila pneumoniae - возбудитель заболеваний респираторного тракта у человека, вызывает преимущественно острые и хронические бронхиты и пневмонии.

Chlamydophila psittaci - от птиц могут передаваться человеку, вызывая пситтакоз.

Отмечены зоонозные инфекции, вызванные Chlamydophila felis, у людей, проявлявшиеся в виде конъюнктивита.

Chlamydophila caviae впервые выделена из конъюнктивы морской свинки.

Хорошо изучены 4 вида: 1. Chlamydia trachomatis

2. Chlamydophila pneumonia

3. Chlamydophila psittaci

4. Chlamydophila pecorum

Описаны 2 основные формы существования хламидий:

1) элементарные тела (ЭТ, внеклеточное существование, инфекционная форма)

2) ретикулярные тельца (РТ, вегетативная форма, внутриклеточное существование, предназначена для размножения)

1. цитологический (обнаружение хламидий в материале)

2. ПИФ (обнаружение хламидий в материале)

3. ИФА (А.обнаружение антител к хламидиям; Б.выявление Аг Chlamydia trachomatis)

4. ПЦР (ДНК - диагностика)

5. культуральный (посев на Chlamydia trachomatis)

1. Цитологический или микроскопический метод.

Хламидийная инфекция характеризуется поражением цилиндрического эпителия мочеполовой системы. Поэтому материалом для исследования является соскоб со слизистой шейки матки, цервикального канала на глубине

1,5 см у женщин; уретры на глубине

2,5 - 4 см у мужчин специальным стерильным зондом. Если есть отделяемое, оно убирается ватным тампоном, как и слизистая пробка из шейки матки. Перед взятием материала обследуемым не следует принимать антибиотики больше 2- х недель, мочиться в течении 1 - 2 часов.

Chlamydia trachomatis считается наиболее распространенным бактериальным патогеном, передаваемым половым путем. Исследования последних лет, проведенные в клиниках различных стран показали, что в 50-80% случаев нарушения репродуктивной функции человека вызваны смешанными инфекциями мочеполовых путей, среди которых главенствующее место занимают негонококковые урогенитальные инфекции, обусловленные Chlamydia trachomatis. Ежегодно в мире регистрируется около 90 миллионов новых случаев заболевания, в том числе в США - около 5 миллионов, Западно-Европейском регионе - 10 миллионов, в Германии - около 1 миллиона. Только в США ежегодно заболевает 4,5 млн. человек преимущественно моложе 25 лет. Хламидийные инфекции вызваны широким спектром заболеваний: от бессимптомных форм до тяжелых осложнений, включающих воспалительные заболевания органов малого таза (ВЗОМТ) и бесплодие. В последние годы в России также отмечен значительный рост заболеваемости урогенитальным хламидиозом. Это связано как с истинным увеличением числа заболевших, так и с совершенствованием методов диагностики. Хламидийная инфекция - одна из самых распространенных болезней из числа заболеваний, подлежащих уведомлению, более распространенная среди всего населения, чем гепатит В и С вместе взятые, а также она встречается в 10 раз чаще, чем любые другие болезни среди лиц 15-24 лет. Все сексуально активные подростки и молодые люди относятся к группе риска.

Согласно данным зарубежных и отечественных исследователей, основными факторами риска по урогенитальному хламидиозу являются возраст до 25 лет; раннее начало половой жизни; частая смена половых партнеров; другие заболевания, передаваемые половым путем в анамнезе, использование небарьерных методов контрацепции.
Хламидии часто встречаются в ассоциации с другими возбудителями, которые в значительной мере ухудшают течение заболевания. Внутриклеточные патогены существенно облегчают передачу вирусных инфекций и становятся кофактором прогрессирования СПИДа.

За последние несколько лет появились доказательства того, что имеется связь между инфекцией, вызванной хламидиями, и такими хроническими заболеваниями как бронхиальная астма, атеросклероз и артриты. Осуществление программ скрининга бессимптомных женщин приводит к тому, что регистрируемая распространенность урогенитальной хламидийной инфекции среди женщин оказывается выше, чем среди мужчин.

В настоящее время доказана роль хламидийной инфекции в развитии патологии в неонатологии и нарушении функционального состояния репродуктивной системы у девочек. Вероятность заражения хламидиозом детей составляет, по данным разных авторов, от 40 до 70%. Частота вызываемой хламидиями генитальной инфекции ежегодно возрастает, что увеличивает риск инфицирования новорожденных.

Распространению урогенитального хламидиоза в России способствуют ограни-ченная информированность медицинских работников об этой инфекции и отсутствие в большинстве медицинских учреждений возможности эффективной диагностики. Кроме того, по данным ВОЗ, в 35-50% случаев хламидийная инфекция маскируется другими диагнозами, что не позволяет вовремя применить адекватную терапию и остановить распространение инфекции.
Биологические особенности хламидий
Хламидии - это патогенные для человека микроорганизмы, являющиеся облигатными внутриклеточными паразитами, обладающие тропизмом к клеткам цилиндрического, а возможно, и переходного эпителия. Хламидии не входят в состав нормальной микрофлоры, и их обнаружение указывает на наличие инфекционного процесса. Хламидии имеют общий родоспецифический антиген и различаются своими видо- и типоспецифическими антигенами, определяющими специфическую активность в различных серологических реакциях.
Развитие молекулярной биологии позволило открыть новые микроорганизмы с характерным для хламидий циклом развития и привело к необходимости пересмотра их номенклатуры. Фундаментальные изменения произошли в классификации представителей порядка Chlamydiales. Все представители порядка Chlamydiales являются облигатными внутриклеточными бактериями, имеют две формы жизни (элементарные тельца - ЭТ и ретикулярные тельца - РТ), сходный двухфазный цикл развития, обладают склонностью к латентному существованию при персистенции и имеют 80% гомологии по последовательности 16S и 23S рРНК генов. В соответствии с этими критериями порядок Chlamydiales представлен уже не единственным семейством, как было до недавнего времени, а четырьмя: Chlamydiaceae, Parachlamydiaceae, Simkaniaceae, Waddliaceae. Наиболее радикальные изменения произошли в систематике семейства Chlamydiaceae, в котором в настоящее время выделено два рода - Chlamydia и Chlamydiaphila, причем они отличаются между собой и по фенотипическим признакам. Представители рода Chlamydia обладают сходными по структуре экстрахромосомными элементами, способны накапливать гликоген во включениях. Представители рода Chlamydiaphila, содержащий Chlamydia psittaci, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia pecorum, Chlamydia abortus, Chlamydia caviae, Chlamydia felis, не способны продуцировать гликоген, каждое элементарное тельце образует собственное включение, которых может быть много, и они более мелкие.

Род Chlamydia включает три вида: давно известный - Chlamydia trachomatis и два новых вида Chlamydia muridarum и Chlamydia suis. Согласно новой классификации, Chlamydia trachomatis является исключительно паразитом человека, вызывает трахому, урогенитальные заболевания, некоторые формы артрита, конъюнктивит и пневмонию новорожденных. Исходя из характеристики видов хламидий, становятся ясно, что они способны поражать как животных, так и человека, и достаточно часто зоонозные инфекции передаются человеку. Вид Chlamydia trachomatis объединяет микроорганизмы, вызывающие заболевания, главным образом у человека (антропонозные хламидиозы), т.е. патогенные для человека. Chlamydia trachomatis разделены на 3 биовара - возбудители гиперэндемической трахомы, возбудители спорадических заболеваний глаз (паратрахома, конъюнктивит с включениями у новорожденных и взрослых) и урогенитального хламидиоза (негонококковый уретрит, цервициты, сальпингиты, проктиты, простатиты, эпидедимиты, пневмонии новорожденных). Разные виды обладают различным по длительности циклом развития, различной чувствительностью к традиционным для лечения хламидийных инфекций препаратам.

8 из 15 серотипов Сh. trachomatis (D, E, F, G, H, I, J, К) вызывают проявления урогенитального хламидиоза. Эти возбудители содержат ДНК, РНК и бактериальную оболочку, в состав которой входит мурамовая кислота, отсутствующая у вирусов. В отличие от вирусов, содержащих одну нуклеиновую кислоту, у хламидий определяется две нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК) и независимый клетки хозяина синтез нуклеиновых кислот, они обладают чувствительностью к антибиотикам, в их составе содержатся ферменты, обеспечивающие синтез калиевой кислоты и т.д. В цикле развития хламидий имеются стадии, характерные для вирусов (начальный период развития) и стадии, присущие клеточным организмам - риккетсиям.
Хламидии имеют клеточную стенку, сходную со стенкой грамотрицательных бактерий (но не содержат мурамовую кислоту); размножаются бинарным делением; имеют рибосомы прокариотного типа; чувствительны ко многим антибиотикам. Однако хламидии не способны расти на неживых бактериологических средах. Облигатный характер внутриклеточного паразитизма хламидий определяется зависимостью микроорганизма от энергетических ресурсов клетки, хламидии не способны синтезировать АТФ. Антигенные свойства хламидий определяются липополисахаридами (ЛПС) и белками мембран. Основной белок наружной мембраны составляет около 60% всего белка. Белковые антигенные структуры определяют в видо- и родоспецифичность. ЛПС представляют родоспецифический антиген хламидий.

Среди структурных белков клеточной стенки особое внимание исследователей в последние годы привлекает термостабильный белок теплового шока (БТШ-60) из семейства 60 кД белков теплового шока, которому, по современным представлениям, принадлежит ведущая роль в патогенезе хронической персистирующей хламидийной инфекции.
В последнее время появляется все больше данных о возможности существования латентных или персистирующих форм хламидий как при моделировании (in vitro), так и в организме больного (in vivo). Эти формы могут не отличаться по клинической картине вызываемых заболеваний, но биологически представляют собой результат нарушения жизненного цикла хламидий на различных фазах. Латентные формы хламидий наблюдаются при ингибировании жизненного цикла на стадии ЭТ в тех случаях, когда нет возможности вступления в новый цикл развития (например, сохранение ЭТ при отсутствии чувствительных клеток-мишеней). Ингибированние перехода внутриклеточных РТ в ЭТ приводит к персистированию атипичных включений с делящимися РТ хламидий. При персистирующей хламидийной инфекции (ПХИ) на ультраструктурном уровне выявлены жизнеспособные хламидии с внутренними внеклеточными полимембранными образованиями, которые могут выполнять защитную функцию, предохраняя возбудителя от неблагоприятных внешних воздействий (химиотерапии и др.). Методами трансмиссионной электронной микроскопии в биологическом материале от больных установлено наличие мелких метацитоплазматических включений (МЦПВ), содержащих только атипичные РТ хламидии, свидетельствующие об их персистенции. Ингибирование перехода внутриклеточных РТ и ПВ приводит к персистированию атипичных включений с делящимися РТ хламидий. При моделировании персистенции in vitro показано, что персистирование хламидий может быть инициировано рядом факторов, таких, как действие антибиотиков, недостаток инградиентов питательной среды, действие цитокинов, например, интерферона. При этом отмечается изменение чувствительности хламидий к антибиотикам. Существование персистирующих форм затрудняет диагностику урогенитального хламидиоза и требует комплексного применения методов лабораторной диагностики с учетом давности заболевания и наличия симптоматики. Одновременно с персистирующими формами возбудителя идентифицируются хламидии, характеризующиеся нормальным циклом развития, что свидетельствует том, что при персистенции in vivo может сохраняться активность инфекционного процесса.

Внутриклеточные патогены обладают способностью блокировать механизмы иммунной защиты хозяина. Благодаря этому, клетки хозяина не только предохраняют бактерии от уничтожения, но и способствуют их росту. Находясь внутри фагосомы или в цитоплазме, внутриклеточные патогены используют для своего роста и размножения питательные вещества и продукты жизнедеятельности клетки-хозяина.

Поэтому для адекватной и успешной терапии большое значение имеет правильная диагностика хламидийной инфекции.

Урогенитальные хламидиозы в настоящее время являются широко распространенными заболеваниями и представляют собой реальную угрозу здоровью мужчин, женщин и детей.

В настоящее время с хламидиями связывают заболевания мочеполового аппарата, глаз, суставов, респираторные поражения и ряд системных проявлений. Научные исследования и многолетние клинические наблюдения показывают, что они могут обусловливать бесплодие, вызвать патологию беременности, болезни новорожденных и детей раннего возраста. Исследования последних лет доказали внутриутробное инфицирование хламидиями плода.

По данным литературы, хламидиозом поражено от 30 до 60% женщин и до 50% мужчин, страдающих воспалительными заболеваниями мочеполовых органов. Необходимо учитывать, что за медицинской помощью обращаются лишь пациенты с выраженными клиническими проявлениями хламидийной инфекции, и следует полагать, что число больных, включая хламидийное носительство, значительно больше. Хламидийная инфекция распространена также среди беременных, новорожденных и детей раннего возраста. В связи с увеличением количества больных урогенитальным хламидиозом возникает вопрос: является ли рост хламидийной инфекции результатом ее учащения или усиления внимания к этой проблеме и, следовательно, улучшения диагностики. В России хламидийной инфекцией страдает почти треть мужчин и женщин репродуктивного возраста. Необходимо учитывать, что хламидиоз зачастую протекает без выраженной симптоматики, трудно диагностируется, непросто излечивается и способен давать массу осложнений.

Причиной урогенитальных хламидиозов являются хламидии - грамотрицательные бактерии. Их делят на два вида - Chlamydia trachomatis, включающи родственные микроорганизмы, первично поражающие млекопитающих и птиц. Вместе они образуют род Chlamydia, представители которого обладают бактериоподобными морфологическими характеристиками и уникальным циклом развития. Хламидийная урогенитальная инфекция относится к группе возбудителей ПЛТ(пситтакоза-орнитоза-лимфогранулемы-трахомы). Возбудителем мочеполовых хламидиозов является Chlamydia trachomatis серотипов D-K.

Цервицит, уретрит, вагинит, эндометрит, сальпингит, перигепатит

Уретрит, эпидидимит, простатит

Конъюнктивит, артрит, болезнь Рейтера

Хламидии - облигатные внутриклеточные паразиты. Первоначально их относили к крупным вирусам. Хламидии обладают РНК, ДНК, имеют клеточную стенку и рибосомы, сходные с рибосомами грамотрицательных бактерий, их рост угнетают антибиотики. Размножаются только внутри клеток организма хозяина, обладая выраженным тропизмом к цилиндрическому эпителию слизистых желудочно-кишечного тракта, верхних дыхательных путей, урогенитального тракта.

• Длительный, чем при других половых инфекциях, латентный период между моментом инфицирования и появлением симптоматики

• Незаметное начало и бессимптомное течение заболевания, т. к. признаки воспаления развиваются медленно

• Необходимость проведения длительного курса лечения, захватывающего 7-8 циклов внутриклеточного размножения возбудителя.

Основными формами хламидий являются элементарные и ретикулярные тельца. Элементарные тельца, являющиеся инфекционными формами микроорганизма, ответственны за процесс прикрепления к клетке-мишени и проникновения в нее. Маленькие и плотные элементарные тельца имеют ригидную клеточную стенку, укрепленную прочными дисульфидными связями основного белка наружной мембраны (МОМР) и двумя богатыми цистеином белками: структурную целостность элементарных телец подтверждает их устойчивость к факторам окружающей среды, позволяющая выживать после лизиса клетки-хозяина и в период последующего перехода от клетки к клетке, а также от одного хозяина к другому. В противоположность этому, ретикулярные тельца - это метаболически активные формы микроорганизма, синтезирующие ДНК, РНК и белки. Элементарные и ретикулярные тельца, которые являются различными формами хламидий, эволюционно представляют собой результат адаптации к внеклеточной и внутриклеточной среде соответственно.

Химиотерапевтические препараты, обладающие антихламидийной активностью, способны не только ингибировать размножение и вызвать гибель хламидий. Некоторые из них, длительно используемые в серии последовательных пассажей в малых дозах, могут давать и противоположный эффект, индуцировать образование резистентных мутантов. Известно возникновение подобных мутантов, резистентных к пенициллину или тетрациклину,

Хламидиям свойственна высокая лабильность, проявляющаяся при воздействии многих физических и химических факторов. Эти микроорганизмы проявляют выраженную чувствительность к действию коротковолновых и длинноволновых ультрафиолетовых лучей и высокой температуре. Внеклеточные хламидии теряют инфекционность в течение 24-36 ч при 35-37 С°. Эта температура, соответствует их наибольшей метаболической активности в период размножения в клетке хозяина.

• Chlamydia trachomatis вызывает 60% случаев негонококковых уретритов

• Число бессимптомных случаев инфекции, вызываемых Chlamydia trachomatis, у молодых мужчин и женщин достигает от 5 до 20%.

• У 15-30%женщин с хламидийной инфекцией шейки матки развиваются воспалительные заболевания органов малого таза (ВЗОМТ).

• Chlamydia trachomatis является наиболее частой причиной эпидидимита у мужчин моложе 35 лет, что приводит к значительной заболеваемости и потере трудоспособности.

• выделение возбудителя в культуре клеток

• метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

• прямая или непрямая иммунофлуоресценция (ПИФ)

Обнаружение цитоплазматических включении хламидии в эпителиальных клетках препаратов, окрашенных по методу Романовского-Гимзы, является классическим методом диагностики. Цитоплазматические включения представляют собой компактные или рыхло расположенные зернистые массы, содержащие морфологические структуры возбудителя на разных этапах его размножения. Они часто определяются вблизи ядра, нередко смещают его к периферии клетки, имеют разнообразную форму, отличаясь от ядра и цитоплазмы. Мелкие, ранние включения, содержащие крупные тельца, имеют сине-фиолетовую окраску, крупные включения с преимущественно мелкими зрелыми структурами возбудителя -розово-красную. Метод имеет низкую чувствительность, позволяет диагностировать около 10% случаев хламидийной инфекции, да и то при достаточно высокой квалификации лаборанта и при большой трудоемкости.

Для серодиагностики используют методику – РСК (реакция связывания комплемента) и серодиагностику с родоспецифическим антигеном (общим для C. trachomatis и psittaci). Серологические методы просты в исполнении, однако, дают большой процент ложноположительных результатов, обусловленных перенесенной в прошлом хламидийной инфекцией. Для подтверждения хламидийной инфекции необходимо использовать дополнительные методы или проводить повторные серологические исследования для наблюдения за титром реакции. РСК позволяет определить только групповые антигены, малочувствительна и у больных хламидийными уретритами дает не более 15% положительных результатов. Серологические методы могут быть полезны при осложненных или хронических инфекциях, а также как методы скрининга больших групп населения с последующим отбором лиц для дальнейшего обследования.

Диагностика с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) основана на улавливании изменения цвета субстрата спектрофотометром. Достоинства ИФА заключается в простоте транспортировки и хранения полученных материалов, объективности оценки результатов, возможности автоматизации и одновременного исследования множества проб. Его недостатком является невозможность исключения ложноположительной реакции, сложность контроля за качеством исследований, меньшая чувствительность и специфичность метода, чем реакция прямой иммунофлюоресценции с моноклональными антителами.

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) и его варианты обнаруживают инфекцию по нескольким молекулам ДНК. Метод применяется при исследовании цервикальных, уретральных мазков, спермы, осадка мочи. Однако широкое внедрение ПЦР в качестве диагностического метода способно привести к гипердиагностике хламидиоза.

Иммунофлуоресцентный метод – прямая иммунофлуоресценция (ПИФ) с использованием моноклональных антител против основного белка наружной мембраны (МОМР) Chlamydia trachomatis – является в настоящее время во всем мире основным методом. С использованием ПИФ впервые стало возможным быстро и точно выявлять хламидийную инфекцию в исследуемом материале (30-50 минут). ПИФ включает использование меченных флуоресцеином моноканальных антител как к липополисахариду, так и к основному белку наружной мембраны (МОМР) хламидий. Фиксированный при помощи ацетона, на предметном стекле мазок обрабатывается флуоресцирующими антителами к хламидиям с одновременным созданием контраста синькой Эванса, отмывается в течение часа фосфатным буфером на магнитной мешалке. На препарат наносят каплю забуференного глицерина, накрывают покровным стеклом и микроскопируют в люминесцентном микроскопе, используя иммерсионный объектив. Положительный ответ дают при обнаружении не менее 5 элементарных телец или одного типичного цитоплазматического включения. Если в препарате клеток эпителия не обнаружено, следует считать, что материал был взят неправильно. Метод ПИФ высокочувствительный, специфичный, прост в исполнении. Недостатком метода является то, что само обнаружение наружной мембраны хламидий еще не является доказательством наличия жизнеспособного организма. Это следует учитывать при установлении излеченности от хламидиоза.

Хламидиоз - контагиозное, хронически протекающее инфекционное заболевание сельскохозяйственных животных, птиц и человека.

В пораженных клетках обнаруживают инфекционные элементарные частицы - округлые, диаметром 250-350 нм, которые образуются в конце внутриклеточного цикла развития хламидий. В начале инфекция в цитоплазме формируется матрикс, затем появляются крупные элементарные частицы, которые не имеют нуклеоида, их оболочка не сформирована; они не устойчивы во внешней среде, чувствительны in vitro к антибиотикам и неинфекционны. В конце инфекционного процесса появляются мелкие зрелые элементарные частицы, которые имеют ДНК - содержащий нуклеоид, плотную трехслойную оболочку; они устойчивы во внешней среде, нечувствительны in vitro к антибиотикам, обладают инфекционными свойствами. В зараженных клетках при световой микроскопии обнаруживают также цитоплазматические включения, они окрашиваются по Романовскому красно-фиолетовый цвет (незрелые) и в сине-фиолетовый (зрелые, содержащие элементарные частицы). Зрелые элементарные частицы окрашиваются акридином оранжевым в желто-зеленый и зеленый цвет, незрелые - в ярко-красный.

Цикл репродукции возбудителя в клетке характерен для вида Chlamydia nsittaci.

В первые 6 часов индукции зараженного хламидиями клеточного монослоя наблюдается адсорбция и фагоцитоз возбудителя клейкой по типу пиноцитоза. Спустя 12-18 часов, находясь в фагосоне (цитоплазматическом включении), элементарная частица разрыхляется и происходит накопление фибриллерно-гранулярного материала, из которого в последующем формируется вегетативные, а затем и зрелые элементарные частицы возбудителя, фагосомы значительно увеличиваются в размерах и содержат множество инициальных и элементарных частиц. В завершении репродукции происходит разрыв фагосомы, разрыв клетки, выход возбудителя в межклеточное пространство. Цикл завершается в течение 24-48 часов. Токсономический комитет выделил хламидии в порядок Chlamydiales, род Chlamydia, семейство Chlamydiaceae и в 1992 г. комиссией Международной ассоциации микробиологических обществ хламидии были классифицированы на 4 вида:

а) чувствительность хламидии к действию физических, химических факторов - по отношению к различным физическим факторам и химическим агентам хламидии проявляют значительную устойчивость. Они хорошо сохраняются при низких и высоких температурах: в вводе - до 16 суток, в снегу - до 29, пастеризованном молоке - 29 суток. При комнатной температуре сохраняются 24-36 ч., при 2-14 о С - до 15 дней. Выделяясь с фекалиями животных, остаются жизнеспособными (и на перьях птиц) в течении нескольких месяцев. В лиофилизированном состоянии выживают более 3-х лет. Инактивируются при нагревании до 80 о С через 30 минут, до 70 о С - через 45 минут, под действием ультрафиолетовых лучей через 30 секунд. Быстро хламидии инактивируются под действием 0,5%-ого раствора фенола, 0,1%-ого раствора формалина, 2%-ого раствора хлорамина, 1%-ого раствора соляной кислоты, 0,2%-ого раствора марганцево-кислого калия, 2%-ого раствора едкого натра.

В отличие от вирусов хламидии обладают чувствите6льностью к антибиотикам и сульфамиламидам. В число эффективно действующих против хламидий антибиотиков включены: тилозин, тетрациклин, доксициклин, окситетрациклин, хлортетрациклин, дибиомицин, дитетрациклин, омандомицин, карбомицин, новобиоцин, левомецитин, рафампицилин и др.

К антибиотикам, не влияющим в испытанных дозах на репродукцию хламидий отнесены: стрептомицин, ристоцитин, неомицин, колимицин, нистатин, микостатин, ванокомицин, грамицидин. Такое свойство этих антибиотиков позволяет использовать их для борьбы с сопутствующей микрофлорой при выделении и культивировании хламидий.

б) Антигенный состав хламидий - в настоящее время известны 3 типа основных антигенов хламидий: родоспецифический, группоспецифический и видоспецифический. Родоспецифический антиген, общий для Chl. trachomatis и Chl. psittoci является гликолипидом, в отличие от других грамотрицательных бактерий. Он термостабилен, выдерживает кипячение и автоклавирование (до 135 о С). Выявляется по средствам реакции связывания комплемента, непрямого связывания комплимента, агглютинации, гемогглютинации, преципитации в геле, иммунофецоресценции и внутрикожных тестов. Видоспецифический антиген представлен комплексом белков и имеет видовое отличие.

в) Токсичность - наличие токсинов в составе морфологических структур хламидий установили Raiks и Jonis (1944). Экспериментально доказали, что токсическое действие хламидий на животный организм характеризуется резкой дистрофией эндотелия сосудов, кровенаполнением мелких и крупных вен, тромбозом капилляров, массовыми некрозами паренхиматозных клеток печени, дистрофией эпителия извитых канальцев почек.

г) Химический состав хламидий - сложный. Оболочка примерно на 35% состоит из белков, при чем присутствует почти все белковые аминокислоты, кроме аргинина и гистидина. Фосфолипиды в виде лецитина и нейтральных жиров составляют 35-40% сухой массы хламидий. Углеводов в составе хламидий немного, богаты эти микроорганизмы гексозамином. Оболочка хламидий содержит мурановую кислоту. Хламидии обладают выраженной биохимической активностью, они содержат в своем составе ферменты, обеспечивающие синтез фолиевой кислоты.

Выделяют и культивируют хламидии на куриных эмбрионах, белых мышах, в культуре клеток.

2) Историческая справка:

История изучения хламидийных инфекций берет свое начало с конца ХIX века, когда была установлена взаимосвязь между своеобразно протекающей пневмонией человека и болезнями попугаев, завезенных из тропических стран. Роль попугаев в заражении и заболевании людей окончательно была установлена в 1892 году во время вспышки болезни у людей, имевших контакт с попугаями, завезенными из Буэнос-Айреса. Было предложено назвать это заболевание пситтакозом. Интерес к изучению пситтакоза возрос после его панацеи в 1929-1930 гг. В этот период выявили мелкие специфические базофильные тельца в тканях больных птиц. Была установлена связь между базофильными тельцами и болезнью. Haagin и Maurer выявили, что птицы, не принадлежащие к семейству попугаев, являются резервуаром инфекции и источником заражения человека возбудителем пситтакоза. Этот факт вызвал вторую волну научного интереса к этой группе микроорганизмов. Первое естественное заражение других млекопитающих, кроме человека, возбудителями пситтакоза было отмечено McNutt. Он показал, что эти возбудители вызывают энцефалит у крупного рогатого скота. За последние 4 десятилетия была определена этиологическая роль хламидий при многих спонтанных инфекциях разных видов домашних и диких животных. Выяснилось, что хламидии поражают человека и многие виды животных, вызывая разнообразные по патогенезу и клиническому течению болезни, например пневмонии, аборты, энтериты, менингоэнцефалиты, конъюнктивиты, полиартриты. При этом один и тот же возбудитель может вызывать как острое заболевание, так и латентную инфекцию с деятельным носительством.

В Советском Союзе болезнь впервые зарегистрировали: И.А. Курбанов, И.И. Терских, Х.З. Гаффаров, В.А. Николаев и др.

Хламидийный аборт КРС.

Синонимы: энзоотический аборт коров, эпизоотический аборт КРС, вирусный аборт коров неориккетсиозный аборт КРС - инфекционная болезнь, протекающая чаще хронически, клинически она характеризуется:

- у коров - хроническим бесплодием (удлинением сервис-периода и аритмией полового цикла), выкидышами, абортами, рождение мертвых, больных и латентно инфицированных телят;

- у молодняка раннего возраста - энтеритами, энцефалитами, артритами, бурситами, кератоконъюктивитами, бронхопневмониями, задержкой роста и развития на фоне иммунодефицита.

- у быков-производителей - артритами, бурситами, хроническими пневмониями, воспалением семенного канатика, может протекать бессимптомно. Во всех случаях хламидиоз у производителей сопровождается обсеменением эякулята хламидиями.

Эпизоотология: в выраженных хламидиями стадах наблюдается высокий процент абортов (10-40%) и преждевременных отелов или рождение слабых телят с различными патологическими изменениями. Установлено, что после аборта животные становятся иммунными и, если не было органических изменений в половых органах, способны воспроизводить полноценное потомство. Однако удои коров могут сильно снизиться. Процент абортов в неблагополучных стадах может доходить до 70, особенно среди первотелок и вновь введенных в неблагополучное стадо коров. Заболевание носит стационарный характер. Наибольшее число больных животных регистрируют зимой и летом.

Патогенез: у естественно инфицированных взрослых животных инфекция протекает в латентной форме, и она развивается с наступлением беременности. На определенной стадии беременности возбудитель локализуется и размножается в плацентарной ткани, вызывая плацентит и некрозы. Одновременно инфицируется и плод. Хламидии размножаются в паренхиматозных органах плода, вызывают отек подкожной соединительной ткани и в результате токсического действия могут вызвать его гибель.

Симптомы: заболевание характеризуется абортами на 7-8 месяце беременности, но бывают и на 4 месяце. Заболевание начинается внезапно, и коровы перед абортом не проявляют особых клинических признаков, повышается лишь температура тела до 40,5 о С. Иногда отмечают прогрессивное истощение животных. У значительной части абортировавших животных отделение последа задерживается, развиваются метриты, вагиниты и, наконец, может наступить бесплодие. Хламидийный аборт может протекать совместно с бактериальными или паразитарными болезнями. В этих случаях возможны явления общей септицемии и гибель ослабленных животных. Хламидиозная генитальная инфекция быков изучена недостаточно. Имеющиеся сообщения указывали, что заражение чаще происходит в молодом возрасте, носительство возбудителя сохраняется длительно.

Патологоанатомические изменения: они не являются патогномичными и обнаруживаются значительные изменения в плодных оболочках, на зародышевых долях хориона интенсивные кровенаполнения сосудов и обширные кровоизлияния; у основной массы котиледонов потеряна структура, цвет их изменен от грязно-красного до коричневого. При вскрытии плодов и трупов телят в грудной и брюшной полостях обнаруживают наличие соломенно-желтого экссудата с нитями фибрина. У новорожденных телят отек подкожной соединительной ткани подгрудка и брюшной стенки. Мозговые оболочки отечны, сосуды инъецированы, встречаются участки кровоизлияний. На перикарде фибринозные наложения. Сердечная мышца дряблая с точечными кровоизлияниями. В легких очаги катарального воспаления. Печень плотная, глинистого цвета с участками некроза.

Иммунитет - механизм иммунитета при хламидиозах еще полностью не раскрыт. Как и на любую инфекцию, микроорганизм отвечает регуляцией клеточного и гуморального иммунитета, однако есть особенности:

- постинфекционный иммунитет не вырабатывается;

- если заражение происходит в эмбриональном периоде, то после рождения у телят теряется способность в выработке к хламидиям антител так же, как и на собственный блок.

Эффективность клеточного иммунитета при хламидиозной инфекции гораздо выше, чем гуморального. Т-клетки ответственны за иммунитет и могут действовать путем:

При длительном течении хламидиозной инфекции происходит нарушение иммунногенной активности микроорганизма, что выражается резким снижением количества Т-лимфоцитов, В-лимфоцитов, а также нарушением трансформирования Т-лимфоцитов в бласты. Таким образом, такие расстройства в иммунной системе приводят к развитию синдрома иммунодефицита.

Диагностика.

Постановка диагноза на хламидиоз представляет определенную трудность в связи с многообразием форм проявления болезни и отсутствия патогномомичных, свойственных только для хламидиоза признаков. Нередки случаи, когда хламидиоз не диагностируется вообще или проходит под другими диагнозами. Диагноз хламидиоз ставится на основании анализа клинических, патологоанатомических, эпизоотических, вирусологических и серологических исследований.

I Клиническая и патологоанатомическая диагностика затруднительна, так как нет признаков свойственных только хламидиозу.

II Эпизоотический диагноз - прежде всего обращает внимание на нарушения воспроизводительной функции коров, нетелей (аритмия половых циклов, удлинение сервис-периода, хроническое бесплодие), затем определяется влияние сезонных факторов на обострение течения болезни, особенно в сезон массовых отелов и восприимчивость всех половозрастных групп скота.

III Цитологические исследования - проверяют отпечатки клинического и патологического материала. Применяется несколько видов окраски:

IV Серологические исследования - применяется метод РСК с групповым хламидиозным агентом. Парные пробы сывороток, взятые во время аборта и через 3 недели после него, как правило, показывают значительное повышение титров антител. Титры антител к группоспецифическому антигену у абортировавших коров достигают 1:64 - 1:128.

V Для окончательной постановки диагноза необходимо выделить возбудителя на 6-7 суточных куриных эмбрионах или белых мышах.

Дифференциальные признаки респираторных болезней.

Краткие клинико-эпизоотологические особенности болезни