Вакцина на основе стрептококков

Если рассматривать здоровье, как главную ценность для человека, то
почему бы деятельность технопарков не начать с реализации технологий
именно в этой области?

С позволения автора прилагаемой статьи - Плюснина В. И., публикуется
этот материал.

1. В настоящее время одной из самых перспективных противораковых вакцин
является вакцина академика РАН и РАМН иммунолога В. А. Черешнева, которая
является эффективной так же и при сердечно-сосудистых заболеваниях. Она
создана на основе стрептококков штамм Гуров, причем эти стрептококки не
являются антагонистами по отношению к организму человека - они всегда
жили в человеческих организмах, но исчезли с появлением антибиотиков.
Собственно говоря, именно из-за этого после войны стала резко
увеличиваться заболеваемость раком (например, в США в 15 раз!).
Черешнев разыскал штамм Гуров в довоенной коллекции микроорганизмов,
создал вакцину и ввел ее себе, что не только оздоровило его организм,
но и увеличило его работоспособность. Вот пример. Он одновременно
работает в трех городах (Пермь, Екатеринбург, Москва), являясь
руководителем трех НИИ (Институт экологии и генетики микроорганизмов
РАН, Института физиологии и иммунологии РАН, Средне-Уральского научного
центра РАМН). Кроме того, он руководит Уральским Отделением РАН и
является вице-президентом РАН. Весьма полезно было бы эту вакцину
привить всем членам Госдумы и СФ, что не только сделало бы их более
работоспособными, но и более здоровыми. На мой взгляд, именно Черешнев
является наилучшим кандидатом на пост президента РАН и его кандидатуру
можно рекомендовать Президенту РФ. По новому Уставу РАН, который принят
недавно, кандидатуру президента РАН выдвигает Общее Собрание РАН, а
утверждает Президент РФ. Но даже если Общее Собрание выдвинет другого
кандидата, все равно можно поставить Черешнева, так как в этом случае
врио президента РАН назначается из числа вице-президентов. Поскольку
Черешнев В. А. является депутатом Госдумы от "Справедливой России", то
именно его и целесообразно предлагать, что позволит увеличить
популярность "Справедливой России" среди ученых и вообще интеллигенции.
Я считаю, что будет неплохо, если его фамилия будет звучать в названии
его препарата и имеет смысл убедить его в этом по партийной линии.
Известна же мазь Вишневского, кружка Эйсмерха и т. д. Применительно к
проблемам лечения рака известен такой исторический факт - писатель
Антон Чехов в своем дневнике 1884 г. писал о случае самоизлечения от
рака женщины, случайно заболевшей рожей (возбудителем рожи являются
стрептококки). Именно на основе стрептококков создал свою вакцину
американский онколог Вильямс Колли, который с 1893 по 1917 год ею
вылечил 1000 больных раком, из которых умерло всего 6 человек (сейчас в
мире заболевает раком 10 млн. чел, а умирает 8,5 млн. чел). Причем
Колли имел право лечить только больных с 3-4 стадией. Погубило вакцину
то обстоятельство, что она была слишком дешевой - ее стоимость была
сравнима со стоимостью ее почтовой пересылки. То ли дело сейчас: по
словам главного онколога РФ стоимость 1 инъекции современного
противоракового препарата составляет более 1500 долл., а надо десятки
инъекций и по нескольку курсов. Причем никакой гарантии излечения не
дают. По этой причине официальная онкология всегда будет против вакцины
Черешнева.

2. Хочу упомянуть и о вакцине на основе трихинелл, созданную доктором
наук, профессором В. А. Бритовым. Бритов является специалистом мирового
уровня в области изучения трихинелл и он лучше кого-либо другого (во
всяком случае в России) знает свое дело, изучению которого он посвятил
более 50-ти лет. Достаточно сказать, что до него мировая медицина 150
лет знала о существовании только одного вида трихинелл, а ему удалось
доказать существование еще 3-х видов и по его методике потом были
открыты и другие виды. Бритов вводил себе вакцину 4 раза, а также ее
принимали без негативных последствий более 3 тысяч больных. Её
эффективность при лечении рака 1-2 стадии достигает 90-95 %. Эта
вакцина восстанавливает иммунитет, а ведь известно, что от 30 до 50 %
всех болезней обусловлены именно иммунодефицитом. Если каждому
россиянину сейчас дать выпить по 1-2 столовые ложки соленого раствора с
трихинеллами, то заболеваемость раком может в считанные годы снизиться
в 10 и более раз. Да и очень дешевая это будет вакцина, так как не
требуется организовывать никакого микробиологического производства. Об
этой вакцине можно почитать статью Савелия Кашницкого в "Московском
комсомольце" от 25 марта 2003 г.

3. Обе вакцины (Черешнева и Бритова) объединяет одно обстоятельство - у
них нет шансов быть утвержденными, причем не только из-за
противодействия консерваторов. Например, когда пенсионер Бритов
обратился по поводу проверки и утверждения его вакцины, то с него
затребовали 300 млн. руб. Поэтому даже если РОНЦ создаст свое
эффективное противораковое средство, то оно тоже не сможет утвердить
его, так как годовой бюджет РОНЦ тоже составляет 300 млн. руб. По этой
причине в России за последние 15 лет не было утверждено ни одного
собственного лекарственного препарата. Не только противоракового, но
вообще ни одного! То есть наша наука работает вхолостую, питая
зарубежную медицинскую фармакологию - в очереди за утверждением сидят
только зарубежные фирмы. Я вовсе не предлагаю сломать этот уже
сложившийся порядок - мое предложение в другом и реализация его
доступно именно Госдуме. Госдума должна целевым назначением
финансировать утверждение нужных народу лекарственных средств, причем
выделять деньги надо не на организацию или на Министерство
Здравоохранения, а именно отдельной строкой на утверждение конкретных
вакцин, лекарств и прочее. В данном случае это вакцины Черешнева и
Бритова, хотя могут быть назвать и другие препараты.

4. Еще одно достижение отечественной науки - это биорезонансная
диагностика и терапия (БРТ). Печать об этом не раз писала, тем не менее
вопрос надо поднимать снова и снова. Об этом можно почитать статьи в
"Парламентской газете" от 20 февраля 2002 г. или в "Союзной газете" от
22 марта 2004 г. В данном случае ничего добиваться не надо - Минздрав
давно утвердил метод БРТ, аппаратура производится, подготовлено тысячи
врачей по данному профилю. Но все это в основном используется военными
медиками или частнопрактикующими врачами, а до обычных поликлиник
аппаратура не доходит. А ведь это уникальное средство для диагностики и
терапии инфекционных заболеваний, которое способно перевести слова
политиков высшего ранга о необходимости борьбы с инфекционными
заболеваниями в практические дела. Вряд ли Минздрав будет проявлять
инициативы в этом направлении, поэтому должна сказать свое слово
законодательная власть. Если, конечно, она и в самом деле хочет
позаботиться о здоровье народа.

5. Само по себе все сказанное выше может стать весьма солидным
источником дохода для России - ведь можно приглашать в Россию и лечить
иностранцев. Причем практически ничего не потребуется создавать с нуля.
Вся бытовая и медицинская инфраструктура в России имеется в готовом
виде и на хорошем уровне - в наших санаториях и курортах. По некоторым
оценкам, лечение одного больного раком в США стоит до 300 тысяч
долларов. Если не жадничать и брать с них по 10-20 тыс. долларов за
профилактику и лечение, то они сами прилетят к нам, заодно оставляя
деньги в гостиницах и аэропортах. А организаторами притока иностранцев
могут быть туристические агентства, у которых есть переводчики и
организовано сопровождение на всем пути следования. Только надо дать им
в руки дополнительный рекламный аргумент. А перед этим надо отработать
технологию лечения и начать лечить своих граждан на курортах, снабдив
их сначала современными комплектами БРТ, а потом и выше упомянутыми
вакцинами (по мере их утверждения). Страна имеет возможность заработать
сотни миллиардов долларов, которые иностранцы сами привезут в страну.
За счет этих прилетевших денег россиян можно начать лечить бесплатно.

Следующим более-менее значимым препаратом на основе стрептококков, развивающий идеи Уильяма Коли стал японский препарат Пицибанил. Он был создан на основе непатогенного штамма Su бактерий Streptococcus pyogenes, (бета-гемолитический стрептококк группы A). Препарат проходил долгие доклинические и клинические испытания и, наконец, в 1975 году Министерство Здравоохранения Японии утвердило использование нового препарата — ОК-432 или Пицибанила.

Предпосылками к созданию этого препарата были исследования, проведённые японскими учёными начиная с 1961 года. Основные выводы, сделанные японскими группами исследователей, состояли в следующем. Живые бактерии Streptococcus pyogenes гораздо более эффективно вызывают регрессию различных видов злокачественных опухолей и предотвращают метастазы, чем убитые термической обработкой. Прямая противоопухолевая активность — это уникальное свойство Streptococcus pyogenes и у других грамм-позитивных и грамм-негативных бактерий такая активность не обнаружена. Высокая противораковая активность Streptococcus pyogenes не является результатом действия отдельных компонентов бактериальных клеток (клеточных стенок, ферментов и т. д.), а проявляется как суммарное либо синергетические действие всех компонентов. Отдельные компоненты Streptococcus pyogenes обладают более слабыми противоопухолевыми свойствами. Был выведен авирулентный (непатогенный) штамм Su Streptococcus pyogenes, который не отличался по своей противораковой активности от вирулентного материнского штамма.

Пицибанил представляет собой клетки бактерий Streptococcus pyogenes штамма Su убитых пенициллином. Однако, как уже указывалось в статье про вакцину Коли, мёртвые бактерии дают гораздо более слабый эффект, чем живые стрептококки. Но несмотря на это до настоящего времени Пицибанил с наибольшим успехом используется в лечении лимфангиомы. Так вероятность успешного лечения у детей лимфангиомы макрокистозного типа составляет до 100 %, однокистозного типа — 90,9 %, микрокистозного — 68 % и кавернозного — 10 %. Поэтому, при лечении лимфангиомы пицибанил предложен в качестве лекарства первой линии.

Также Пицибанил используется как адъювант при химиотерапии злокачественных образований. Пицибанил в комбинации с химиотерапией доказано продлевает среднюю продолжительность жизни пациентов с раком желудка (послеоперационные случаи) и пациентов с ранней стадией рака лёгких; уменьшает плевральные энффузии и асциты у пациентов с раком двенадцатиперстной кишки и раком лёгких; а также при раке шеи и головы, раке щитовидной железы, которые устойчивы к другим видам лекарств

Нужно отметить, что даже с учётом того, что используются убитые бактерии, препарат переносится очень тяжело. Побочными эффектами при лечении Пицибанилом могут быть: температура, болевые ощущения, отёк и покраснение, лейкоцитоз и тромбоцитоз.

Данная вакцина имеет сложный противоопухолевый механизм действия. Во-первых, действуя напрямую, угнетает синтез РНК и пролиферативную активность опухолевых клеток. Во-вторых, вакцина действует на опухоль опосредованно, запуская в организме каскады цитокинов. Среди них идентифицированы такие цитокины как интерлейкин-8, гранулоцитарный-колониестимулирующий фактор и гранулоцит-макрофаг-колониестимулирующий фактор, которые вызывают активацию гемопоэтических клеток красного костного мозга, что приводит к увеличению количества лейкоцитов и тромбоцитов. Этот же механизм ответственен за радиопротекторный эффект Пицибанила и стимуляцию регенерации печени. Группа цитокинов (интерлейкин-2, интерлейкин-12, интерлейкин-18, гамма-интерферон) действуют на клетки иммунной системы, ускоряя созревание дендритных клеток, увеличивая активность натуральных киллеров, количество Т-хэлперов-1 и макрофагов. Некоторые из цитокинов (фактор некроза опухоли, перфорин и гамма-интерферон) действуют непосредственно на опухолевые клетки, индуцируя апоптоз или угнетая их активность.

Полный текст:

Резюме. Фрагменты гена, кодирующие Nтерминальный и центральный участки С5а пептидазы стрептококка группы В (СГВ), были проклонированы с использованием экспрессионных векторов в E. coli M15. Соответствующие рекомбинантные полипептиды SCPB1a и SCPB3a с молекулярной массой 12,0±0,5 кДа и 11,0±0,5 кДа были экспрессированы и аффинно очищены. Оба полипептида индуцировали продукцию специфических антител при подкожной иммунизации мышей. Болеевыраженный иммунный ответ наблюдали на введение SCPB3a. В опытах in vitro (опсонофагоцитарный тест) и in vivo (модель генерализованной инфекции на мышах) были исследованы антимикробные свойства антиSCPB1a и антиSCPB3a антител. В работе было продемонстрировано, что Nтерминальная и центральная части молекулы С5а пептидазы содержат эпитопы, ответственные за формирование гуморального иммунитета с образованием антител класса G, эффективно опсонизирующих СГВ, а полученные рекомбинантные полипептиды SCPB1a и SCPB3a могут быть рекомендованы для дальнейшего использования при создании поликомпонентной вакцины против СГВ.

1. Грабовская К.Б., Леонтьева Г.Ф., Мерингова Л.Ф., Воробьева Е.И., Суворов А.Н., Тотолян А.А. Протективные свойства некоторых поверхностных рекомбинантных полипептидов стрептококков группы В // ЖМЭИ. – 2007. – № 5. – С. 44-51.

2. Дуплик Н.В., Королева И.В., Суворов А.Н. Клонирование, экспрессия и изучение иммунологических свойств рекомбинантного полипептида на основе С5а пептидазы стрептококков группы В // Медицинская иммунология. – 2009. – Т. 11. – С. 7-14.

3. Мерингова Л.Ф., Войцеховский Б.Л., Духин А.И., Крамская Т.А., Поляк Р.Я. Применение методов химической кинетики для оценки аффинитета циркулирующих свободных и связанных с антигеном антител (модель экспериментальный грипп) // Иммунология. – 1986. – № 6. – С. 48-51.

4. Суворов А.Н., Грабовская К.Б., Леонтьева Г.Ф., Мерингова Л.Ф., Королева И.В., Дуплик Н.В., Тотолян А.А. Рекомбинантные фрагменты консервативных белков стрептококков группы В как основа специфической вакцины // ЖМЕИ. – 2010. – № 2. – С. 44-50.

5. Baker C.J., Edwards M.S. Group B streptococcal conjugate vaccines // Arch. DisChild. – 2003. – Vol. 88. – P. 375-378.

6. Beckmann C., Waggoner J.D., Harris T.O., Tamura G.S. and Rubens C.E. Identification of Novel Adhesins from Group B Streptococci by Use of Phage Display Reveals that C5a Peptidase Mediates Fibronectin Binding // Infect. Immun. – 2002. – Vol. 70. – P. 2869-2876.

7. Bohnsack J.F., Chang J.K. and Hill H.R. Restricted ability of Group B Streptococcal C5a-asa to anactivate C5a prepared from different animal species // Immun. – 1993. – Vol. 61. – P.1421 –1426.

8. Cheng Q., Stafslien D., Purushothaman S.S., Cleary P. The group B streptococcal C5a peptidase is both a specific protease and an invasion // Infect. Immun. – 2002. – Vol. 70. – P. 2408-2413.

9. Chmourigina I.I., Suvorov A.N., Ferrieri P., Cleary P.P. Conservation of the C5a peptidase genes in group A and B streptococci // Infect. Immun. – 1996. – Vol. 67. – P. 2387-2390.

10. Doran K.S., Nizet V. Molecular pathogenesis of neonatal group B streptococcal infection: no longer in its infancy // Mol. Microbiol. – 2004. – Vol. 54. – P. 23-31.

11. Edwards M. S. and Baker C.J. Group B streptococcal infections // Infectious diseases of the fetus and the newborn infant / Ed. Remington J.S. and J.O. Klein. – The W.B. Saunders Co., Philadelphia, Pa. – 2001. – P. 1091-1156.

12. Edwards M.S., Baker C.J. Group B streptococcal infections in elderly adults // Clin. Infect. Dis. – 2005. – Vol. 41. – P. 839-847.

13. Heath P.T., Balfour G.F., Tighe H., Verlander N.Q., Lamagni T.L., Efstratiou A.; HPA GBS Working Group. Group B streptococcal disease in infants: a case control study. // Arch. Dis. – Child. – 2009. – Vol. 94. – P. 674-680.

14. Jackson L.A., Hilsdon R., Farley M.M., Harrison L.H., Reingold A.L., Plikaytis. B.D., Wenger. J.D., Schuchat. A. Risk factors for. group. B streptococcal disease in adults // Ann. Intern. Med. – 1995. – Vol. 123. – P. 415-420.

15. Larsson C., Stalhammar-Carlemalm M. and Lindahl G. Protection against experimental infection with group B streptococcus by immunization with a bivalent protein vaccine // Vaccine. – 1999. – Vol. 17. – P. 454-458.

16. Levent F., Baker C.J., Rench M.A., Edwards M.S. Early outcomes of group B streptococcal meningitis in the 21st century // Pediatr. Infect. Dis. J. – 2010.

17. Lowry O.H., Rosenbraugh N.J., Ferr A.L., Randall R.J. Protein measurement-with the folin phenol reagent // J. Mol. Biol. – 1957. – Vol. 193. – Р. 265-273.

18. Paoletti L.C., Wessels M.R., Rodewald A.K., Shroff A.A., Jennings H.J. and Kasper D.L. Neonatal mouse protection against infection with multiple group B streptococcal (GBS) serotypes by maternal immunization with a tetravalent GBS polysaccharidetetanus toxoid conjugate vaccine // Infect. Immun. – 1994. – Vol. 62. – P. 3236-3243.

19. Takahahsi S., Nagano Y., Nagano N., Hayashi O., Taguchi F., Okuwaki Y. Role of C5a-asanin group B streptococcal resistance to opsonophagocytic killing // Infect. Immun. – 1995. – Vol. 63. – P. 4764-4769.

20. Yang H.H., Samantha J. Mascuch, Lawrence C. Madoff and Lawrence C. Paoletti. Recombinant Group B Streptococcus AlphaLike Protein 3 Is an Effective Immunogen and Carrier Protein // Clin. Vaccine Immunol. – 2008. – Vol. 15. – P. 1035-1041.

Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.

Изобретение относится к микробиологии, производству медицинских и ветеринарных биологических препаратов, а в частности к способам получения из бактерий вида Streptococcus pyogenes препаратов, обладающих онкопротекторной, тромболитической, противовирусной и иммуномодулирующей активностью.

В научной литературе описаны противораковые и иммуномодулирующие свойства бактерий вида Streptococcus pyogenes. Так, известно, что липотейхоевые кислоты, липополисахариды и фрагменты ДНК Streptococcus pyogenes действует на рецепторы дендритных клеток, макрофагов и лимфоцитов, запуская выработку каскада цитокинов, которые приводят в конечном итоге к усилению неспецифического иммунитета в организме и повышению сопротивляемости вирусным инфекциям (Linnebacher М., Maletzki С., Klier U., Klar Е. Bacterial immunotherapy of gastrointestinal tumors [Text] / M. Linnebacher et al. // Langenbecks. Arch. Surg. - 2012. - Vol. 397. - P. 557-568.). Важный противораковый механизм препаратов на основе Streptococcus pyogenes связан с ускорением созревания дендритных клеток. Установлено, что активация дендритных клеток вызывается взаимодействием ТПР-9 с фрагментами ДНК Streptococcus pyogenes. При этом дендроциты начинают активно вырабатывать интерлейкин-12 и гамма-интерферон, увеличивают экспрессию антигенов (CD40, CD80, CD83, CD86), молекул клеточной адгезии (ICAM-1) и индуцируют появление цитотоксических лейкоцитов, в том числе Т-лимфоцитов с противоопухолевой активностью. Таким образом, компоненты клеток Streptococcus pyogenes, активируя дендритные клетки организма человека, стимулируют противораковый иммунитет (Hovden А.-О., Karlsen М., Jonsson R., Aarstad Н.J., Silke Appel Maturation of monocyte derived dendritic cells with OK432 boosts IL-12p70 secretion and conveys strong T-cell responses / A.-O. Hovden et al. // BMC Immunology. - 2011. - Vol. 12. - P. 2-5.).

Установлено прямое противораковое действие протеолитических ферментов Streptococcus pyogenes на 4 типа клеток карцином человека (Eslami-Nejad Z., Nematollahi-Mahani S.N., Saffari F., Mollaii H., Arabzadeh S. A. M. Cell death induction by Streptococcus pyogenes in four types of malignant cell lines / Z. Eslami-Nejad et al. // Med. J. of the Islamic Repub. of Iran. - 2010. - Vol. 23(4). - P. 207-217.).

Бактерии Streptococcus pyogenes вырабатывают гликопротеин SAGP, белок, который действуя на опухоль напрямую, угнетает митотическую активность опухолевых клеток и вызывает их апоптоз, а также оказывает иммуномодулирующее действие (Yoshida J., Takamura S., Nishio M. Characterization of a streptococcal antitumor glycoprotein (SAGP) [Text] / J. Yoshida et al. // Life Sciences. - 1998. - Vol. 62(12). - P. 1043-1053.).

Из патентной литературы известен способ получения иммуностимулирующего препарата Пицибанил (ОК-432), включающий выращивание бактерий Streptococcus pyogenes на питательной среде с последующей инактивацией с помощью процесса пастеризации, затем обработки пенициллином, лиофилизацией, удалением пенициллина и повторной лиофилизацией (US 4328218 А - Method for the treatment of cells of Streptococcus pyogenes).

Недостатком данного метода является вирулентность используемого штамма, которая требует сложного процесса инактивации и, как следствие, невозможность использования живого штамма. В то же время известно, что живые бактерии Streptococcus pyogenes гораздо более эффективно вызывают регрессию различных видов опухолей и предотвращают метастазы, чем убитые термической обработкой (Maletzki С., Linnebacher М., Kreikemeyer В., Emmrich J. Pancreatic cancer regression by intratumoural injection of live Streptococcus pyogenes in a syngeneic mouse model / C. Maletzki // Gut. - 2008. - Vol. 57. - P. 483-491.).

Недостатком данного способа является его технологическая непригодность для промышленного производства препарата, так как при производстве препарата высока доля ручного труда и отсутствует возможность автоматизации процесса, так как при помощи смыва с чашки Петри препарат можно получать лишь в небольших количествах.

К дополнительным недостаткам данного способа относится повышенная вероятность контаминации патогенной микрофлорой на этапах пересева и при смыве с чашек Петри физиологическим раствором, а также короткий срок жизнеспособности бактерий в физиологическом растворе (4-5 часов), что не позволяет приготовить живой лиофилизированный препарат. В то же время оптимальным методом сохранения живых бактерий Streptococcus pyogenes является лиофильная сушка. Но проведенные опыты по лиофильной сушке Streptococcus pyogenes в физиологическом растворе, даже в присутствии питательного бульона дают очень плохие результаты.

Полученный вышеописанным способом препарат может быть применен только по месту производства и не может транспортироваться на дальние расстояния.

Кроме того, продукты метаболизма бактерий Streptococcus pyogenes содержат важные для лечения компоненты: липотейхоевые кислоты, липополисахариды и фрагменты ДНК Streptococcus pyogenes, гликопротеин SAGP, фермент Стрептокиназу, гиалуроновую кислоту и другие. При описанном выше способе приготовления препарата эти важные и нужные вещества в организм не поступают. Они начнут продуцироваться только после того, как бактерии Streptococcus pyogenes начнут размножаться в организме. Эксперименты, проведенные на добровольцах, показывают, что при введении интрадермально одного и того же количества бактериальных клеток вместе с продуктами метаболизма вызывает тромболитический эффект в течение 20 минут после введения. А при введении очищенных от продуктов метаболизма бактериальных клеток, такой же эффект проявляется только через 5-6 часов. Таким образом, препарат, содержащий бактериальные клетки вместе с продуктами метаболизма, может использоваться для экстренной медицинской помощи в качестве тромболитика.

При таком способе производства возможно применение промышленных технологий автоматизации выращивания культуры и обеспечивается более высокая степень стерильности при производстве препарата, так как уменьшается доля ручного труда, уменьшается количество операций, и соответственно уменьшается вероятность контаминации патогенной микрофлорой. Также обеспечивается возможность продолжительного хранении и транспортировки препарата. Лиофильно высушенная культура бактерий, запаянная в ампулы, сохраняет жизнеспособность в течение длительного времени (до 10 лет). Ампулы с препаратом могут перевозиться любым видом транспорта на любые расстояния.

Пример 1. В бутыль объемом 0,5 литра с 400 мл питательного бульона с 2% глюкозы и 2% экстракта дрожжей добавляют 20 мл лошадиной сыворотки и вносят лиофилизированную культуру β-гемолитических стрептококков группы А штамма MPK-12. Бутыль с культурой помещают в термостат и инкубируют при 37°C в течение 24-36 часов. После образования в бутыли хлопьевидного осадка культуру проверяют на стерильность, добавляют защитную среду высушивания, разливают по ампулам и/или флаконам и проводят лиофильную сушку с последующей укупоркой.

Пример 2. В пробирку объемом 10 мл с 7 мл питательного бульона с 2% глюкозы вносят лиофилизированную культуру β-гемолитических стрептококков группы А штамма MPK-12. Пробирку с культурой помещают в термостат и инкубируют при 37°C 24-36 часов до образования хлопьевидного осадка. Затем проводят пересев культуры из пробирки в бутыль объемом 0,5 литра с 400 мл питательного бульона с 2% глюкозы, добавляют 20 мл крови человека и вносят лиофилизированную культуру β-гемолитических стрептококков группы А штамма MPK-12. Бутыль с культурой помещают в термостат и инкубируют при 37°C в течение 24-36 часов. После образования в бутыли хлопьевидного осадка культуру проверяют на стерильность, добавляют защитную среду высушивания, разливают по ампулам и/или флаконам и проводят лиофильную сушку с последующей укупоркой.

Опухолевые клетки часто избегают атаки со стороны иммунной системы организма, так как не распознаются ее как чужеродные. Чтобы преодолеть это препятствие, ученые предлагают заражать клетки опухоли бактериями. В недавнем эксперименте они модифицировали бактерию сальмонеллу, известную тем, что она вызывает тяжелые пищевые инфекции, и заставили ее заразить клетки опухолей человека, пересаженных лабораторным мышам. Это вызвало сильный иммунный ответ, что привело к уменьшению размера опухолей и, впервые за историю подобных экспериментов, к прекращению метастазирования. Если такой метод удастся воспроизвести в организме человека, это станет значительным шагом вперед в бактериальной терапии рака.

Эстафету подхватили в Японии, где исследовать действие стрептококков на опухоли начали в 1960-х годах. В середине 1970-х японцы создали препарат пицибанил (ОК-432) на основе специальным образом обработанных бактерий Streptococcus pyogenes. Он показал значительную эффективность в лечении лимфангиномы – доброкачественной опухоли стенок лимфатических сосудов, встречающейся у детей. Для терапии этой опухоли инъекции пицибанила применяется и сейчас.

Сам Коли объяснял действие свой вакцины тем, что токсины бактериальных клеток в некоторых случаях способны действовать избирательно, угнетая в первую очередь клетки опухолей. Современное объяснение заключается в том, что появление бактериальных антигенов активирует иммунный ответ организма. Поэтому целый ряд лабораторий во всем мире ищет наиболее эффективные пути использования бактерий для борьбы с раком.

Поскольку бактерии часто поселяются на некротических, бедных кислородом тканях, какие присутствуют и в большинстве крупных опухолей, ученым легко удается нацелить их на опухолевую ткань. Один подобный метод лечения уже был успешно испытан и получил в США одобрение от службы по контролю за пищевыми продуктами и лекарствами (FDA). В нем бактерии применяются для лечения рака мочевого пузыря. Еще несколько находятся в стадии разработки. Но даже самые эффективные из них пока не могли исключить повторного роста опухоли, а применяемые бактерии были опасны для организма пациента сами по себе. В нескольких случаях применение ослабленных сальмонелл не принесло весомых результатов.

В 2014 году группа исследователей из Университета Джонса Хопкинса рассказала о первых результатах применения ослабленного штамма почвенной бактерии и Clostridium novyi в борьбе с опухолями. В природе эта бактерия размножается в бедной кислородом среде, схожей по этому признаку с условиями в опухолевой ткани. Инъекции клостридий позволили вдвое увеличить продолжительность жизни крыс, которым была пересажена глиома головного мозга человека. В дальнейшем эксперименте приняли участие 16 собак с опухолями разных типов. У шести из них заражение бактериями вызвало уменьшение размеров опухолей, а у пяти – остановку их роста. Было даже проведено испытание на одном человеке – пациентке с тяжелой формой леймиосаркомы, опухоли гладких мышц брюшины, давшей многочисленные метастазы. Инъекция бактерий была сделана в метастатическую опухоль в плече. Опухоль быстро разрушилась, правда, не обошлось без побочных эффектов инфекции – сильного воспалительного процесса и образование абсцесса на месте проникновения бактерий. Пациентка умерла, но не из-за инфекции, а из-за метастазов леймиосаркомы в других частях организма.

Работы над методом терапии, о котором рассказывает недавняя статья в журнале Science Translational Medicine, начались еще в 2006 году, когда исследователи из Университета Чоннам в южнокорейском городе Кванджу выбирали новую бактерию на роль помощника в борьбе с раком. Одновременно они искали вакцину против бактерии Vibrio vulnificus, которая заражает морских моллюсков у корейского побережья. В ходе работы они заметили, что белок FlaB (флагеллин B), образующий трубочки жгутиков у этой бактерии, вызывает особенно сильную реакцию иммунных клеток. Тогда они взяли генетически модифицированную бактерию Salmonella typhimurium, которая уже не была способна вызывать заболевание у человека, и вооружили ее, вставив в ее геном ген, ответственный за белок FlaB.

В нынешнем исследовании эта группа ученых проверила взаимодействие модифицированной бактерии с опухолями. В первой серии экспериментов бактерии вводились двадцати мышам, которым были пересажены опухоли толстой кишки человека. Через три дня ученые обнаружили, что опухолевая ткань в кишечнике мышей заражена бактериями. По прошествии 120 дней опухоли исчезли у 11 из 20 мышей, которые оставались здоровыми в течение всего эксперимента. У контрольных мышей, которых заразили бактериями, не имеющими белка FlaB, в конце концов, развился рак толстой кишки.

Во втором эксперименте клетки метастазов человеческого рака толстой кишки были пересажены трем группам мышей. Восемь мышей после этого получили сальмонелл, наделенных белком FlaB, шесть были заражены бактериями без этого белка, а семь вовсе не получили никаких бактерий. Через 27 дней у мышей второй и третьей групп обнаружились десятки метастазов, тогда как среди восьми мышей, в организм которых попал белок FlaB, только у четырех появились вторичные опухоли, причем метастазирование было весьма ограниченным.

Сейчас корейские ученые продолжают совершенствовать свой метод, экспериментируя на животных. Они рассчитывают через несколько лет перейти к клиническим испытаниям на людях и создать эффективный и безопасный метод бактериальной терапии рака.