Устройство для экспресс-диагностики хеликобактериоза что это
В ходе обследования может быть использован следующий биоматериал:
- биоптат любого отдела желудка;
- биоптат луковицы двенадцатиперстной кишки.
Чувствительность тест-системы ХЕЛПИЛ ® составляет 97%, специфичность 98%.
Тест-система полностью готова к применению, не требует приготовления или инкубирования.
После обследования биоптат пригоден для других исследований, например, гистологического или бактериологического, как рекомендовано "Стандартами диагностики и лечения органов пищеварения".
— один индикаторный диск диаметром 6 мм, зафиксированный на подложке и защищенный пластиковым язычком. Размеры Бланка специально рассчитывались таким образом, чтобы во время обследования врачу было удобно в перчатках быстро снять пластиковый язычок и поместить биоптат на индикаторный диск. |
— десять индикаторных дисков диаметром 6 мм, зафиксированные на подложке и закрытые прозрачными язычками. После проведения тестирования можно отделить использованный сегмент от подложки по линии перфорации и утилизировать его отдельно.
|
Тест-система ХЕЛПИЛ ® не требует приготовления или инкубирования. Обследование проводится при комнатной температуре.
1. Снимите язычок с индикаторного диска. Примеры изменения цвета |
|
Часто задаваемые вопросы |
Каковы условия хранения тест-системы ХЕЛПИЛ ® ? — Индикаторный диск изготовлен таким образом, что тест-система не нуждается в особой среде для хранения или специальной упаковке (как требуется, например, для жидких уреазных тестов). Условия хранения тест-системы ХЕЛПИЛ ® — в сухом месте, не на солнечном свете, не около отопительных приборов. Критично присутствие в воздухе паров аммиака. Хранится ли тест-система ХЕЛПИЛ ® при отрицательных температурах, например во время авиадоставки? Можно ли хранить тест-систему ХЕЛПИЛ ® без язычка, защищающего индикаторный диск? Я поместил биоптат на поверхность индикаторного диска и вернулся посмотреть на результат минут через 15. Цвет индикаторного диска не изменился. Значит ли это что у данного биоптата нет уреазной активности и пациент HP-отрицательный? Что означает голубое окрашивание?
480 руб. | 150 грн. | 7,5 долл. ', MOUSEOFF, FGCOLOR, '#FFFFCC',BGCOLOR, '#393939');" onMouseOut="return nd();"> Диссертация - 480 руб., доставка 10 минут , круглосуточно, без выходных и праздников Автореферат - бесплатно , доставка 10 минут , круглосуточно, без выходных и праздников Дмитриенко Марина Александровна. Диагностика инфекции Helicobacter pylori по уреазной активности : Дис. . канд. техн. наук : 03.00.23 : Санкт-Петербург, 2003 180 c. РГБ ОД, 61:04-5/670-9 Содержание к диссертации Глава 1. Обзор и обсуждение литературы 10 1.1. Helicobacter pylori, история открытия, свойства микроорганизма, эпидемиология инфекции и ассоциированность ее с другими заболеваниями 10 1.2. Хеликобактериоз и методы его диагностики 21 1.3. Уреаза, ее свойства и методы исследования 34 1.4. Методы определения уреазной активности 37 1.5. Уреазная система Helicobacter pylori 41 Глава 2. Объекты и методы исследования . 54 Глава 3. Процесс определения Helicobacter pylori по урезаной активности 3.1. Кинетика ферментативного гидролиза карбамида 66 3.2. Кинетика диффузионных процессов 77 3.3.Обнаружение продуктов реакции гидролиза. Линейно- колористический метод индикации веществ 85 3.4. Формулирование требований к разрабатываемым тест-системам. 92 Глава 4. Разработка способа определения уреазной активности in vitro 95 4.1. Определение рН биоптата 96 4.2. Оптимизация индикаторной системы 98 4.3. ХЕЛПИЛ-тест 101 4.4. Проверка ХЕЛПИЛ-теста 108 Глава 5. Способы определения уреазной активности in vivo 114 5.1. ХЕЛИК-тест как метод определения уреазной активности in vivo 114 5.2. Пассивные дозиметры для определения аммиака 123 5.3. Индикаторные трубки как детектор содержания аммиака 121 5.4. Диагностика хеликобактериоза с помощью электрохимического сенсора 127 5.5. Повышение чувствительности ХЕЛИК-теста 129 Глава 6. Оценка возможности применения ХЕЛПИЛ- и ХЕЛИК-теста для диагностики хеликобактериоза в медицинской лечебной и исследовательской практике 133 6.1. Применение ХЕЛПИЛ- и ХЕЛИК-тестов в медицине 133 6.2. Схема диагностики инфекции Helicobacter pylori 135 Библиографический список использованной литературы 143 Введение к работе Бактерия Helicobacter pylori обитает на слизистой оболочке желудка человека и других млекопитающих и вызывает заболевание, названное хеликобактериозом. Инфекция H.pylori является одной из наиболее распространенных на Земле; ею инфицировано около половины человечества, в разных странах от 20 до 95% населения. В России уровень инфицирования составляет 70-80%. Присутствие микроорганизмов на слизистой оболочке желудка (СОЖ) вызывает постепенное изменение слизистой и приводит к таким заболеваниям желудочно-кишечного тракта, как хронический гастрит, гастродуоденит, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, рак желудка и др. Мнение большинства врачей-исследователей сейчас однозначно — бактерия H.pylori оказывает патогенное влияние на организм человека, следовательно, эту инфекцию необходимо своевременно обнаруживать и лечить, не допуская развития тяжелой патологии. Таким образом, разработка методов определения инфекции Н pylori является весьма актуальной задачей. Более того, требуются новые диагностические технологии, позволяющие быстро и достоверно определить хеликобактериоз у пациента. Существующие методы определения H.pylori (бактериологические, морфологические, биохимические, иммунологические, молекулярные) настолько громоздки, что не могут быть использованы для массовой серийной диагностики. Необходимо разработать высокочувствительный и специфичный метод обнаружения бактерии H.pylori, а также реализовать этот метод в удобных и недорогих тестах для широкого применения в медицинской практике. Детектирование хеликобактериоза может проводиться по продуктам реакции уреазного гидролиза карбамида - специфической реакции, которая обеспечивает бактерии возможность выживания в агрессивной кислой среде желудка. Данный метод определения инфекции H.pylori по уреазной активности является косвенным, но позволяет достичь весьма высоких показателей чувствительности и специфичности. Разработка специфичного, чувствительного, экспрессного и удобного метода определения уреазной активности (УА) биологического материала in vitro и совершенствование метода определения УА in vivo. Для достижения этой цели предстояло решить следующие задачи: определить закономерности физико-химических процессов, происходящих при определении УА in vivo и in vitro; выявить лимитирующие стадии этих процессов и оптимизировать определение УА; - разработать способы определения инфекции H.pylori по УА in vivo и разработать технологию изготовления экспресс-тестов для определения УА биологического материала in vitro; - оценить диагностическую эффективность новых тестов и Научная новизна работы - Впервые определение инфекции H.pylori по ее уреазной активности при прохождении процесса in vivo и in vitro и определены пути совершенствования биохимического метода определения бактерии; исследованы процессы переноса субстрата карбамида к уреазе бактерии, обитающей на поверхности СОЖ, а также продуктов ферментативного гидролиза из зоны реакции; впервые разработана физико-химическая индикационная система на плоском волокнистом носителе для определения уреазной активности биологического материала, в т.ч. биоптатов СОЖ; на основании выявленных особенностей механизма процесса усовершенствован метод определения уреазной активности in vivo; показана применимость разработанного метода для диагностики инфекции H.pylori, проведено сопоставление его специфичности и чувствительности с аналогичными характеристиками применяемых в медицинской практике методов; разработана комплексная схема диагностики хеликобактериоза, включающая инвазивные и неинвазивные методики. Разработан новый метод определения уреазной активности биологических объектов; на основе предложенного метода разработан ХЕЛПИЛ-тест - экспресс-тест для оценки уреазной активности биологического материала in vitro. Разработана рецептура и технология производства ХЕЛПИЛ-теста, определены его специфичность и чувствительность. Модифицирована методика неинвазивного определения хеликобактериоза (ХЕЛИК-тест) с помощью индикаторных трубок в качестве детекторов, в результате повышена чувствительность определения и уменьшено время обследования. Разработан новый способ определения хеликобактериоза с помощью электрохимического сенсора и устройство для этого способа определения. Разработан комплекс методик диагностики H.pylori, включающий инвазивное и неинвазивное определение хеликобактериоза. ХЕЛПИЛ- и ХЕЛИК-тесты прошли клинические испытания и рекомендованы Министерством Здравоохранения России к серийному производству и практическому применению в медицинских учреждениях России. Основные результаты были представлены в постерном докладе на XVI Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (25 - 29 мая 1998 года, Санкт-Петербург), постерном сообщении на 22 м Международном Симпозиуме по Хроматографии ISC-98 (13 - 18 сентября 1998 года, Рим), в докладе на III Международном симпозиуме «Диагностика и лечение заболеваний, ассоциированных с Helicobacter pylori (7 апреля 2000 года, Москва), докладе на VIII Восьмой Российской гастроэнтерологической неделе (18-21 ноября 2002 года, Москва), постерном сообщении на 15 м Европейском Конгрессе по клинической химии и лабораторной медицине EUROMEDLAB-2003 (1-5 июня 2003 года, Барселона). Разработанные тесты проверены в научно-исследовательских медицинских и лечебных учреждениях города Санкт-Петербурга и других городов России, в т.ч. в Санкт-Петербургской Педиатрической Академии, Санкт-Петербургской Медицинской Академии Последипломного образования, Санкт-Петербургском Медицинском Университете, Военно-Медицинской Академии (г.Санкт-Петербург), " Научно-Исследовательском институте Скорой помощи (г.Санкт-Петербург). Представлены отзывы и акты апробации тестов для диагностики хеликобактериоза. Проект "Аналитический комплекс для диагностики хеликобактериоза" занял первое место в городском конкурсе научных работ "Внедрение-97", проводимом под эгидой Союза Ученых Санкт-Петербурга. Разработаны Методические рекомендации по методикам определения уреазной активности и диагностики хеликобактериоза. Объем и структура работы Диссертационная работа изложена на 161 странице машинописного текста, содержит 25 рисунков и 15 таблиц. Работа состоит из введения, 6 глав, выводов, благодарностей, приложений (протокол проверки, отзывы, акт технических испытаний, протоколы клинических испытаний, выписка из протокола комиссии МЗ РФ) и библиографии (178 наименований). Helicobacter pylori, история открытия, свойства микроорганизма, эпидемиология инфекции и ассоциированность ее с другими заболеваниямиИз таблицы 1 видно, как менялись представления исследователей, как довольно долго накапливались разрозненные факты, приведшие затем к появлению инфекционной гипотезы этиологии и патогенеза некоторых гастритов и язвенной болезни. Затем гипотеза была подтверждена научным экспериментом - самозаражением Барри Маршалла, продемонстрировавшим справедливость постулатов Генле-Коха применительно к инфекции [104, 127]. Сегодня известно, что бактерии H.pylori являются главной причиной гастрита у людей, и это заключение легло в основу разработки классификации гастритов, получившей название "Сиднейская система". Гастриты являются важным фактором риска в развитии язвенной болезни 12-перстной кишки и рака желудка [35, 120, 135]. Свойства Helicobacter pylori Таким образом, сегодня известно, что Helicobacter pylori — это микроорганизмы преимущественно S-образной формы длиной 2,5 — 4 мкм, шириной 0,5 мкм. На одном полюсе — 4-5-7 жгутиков длиной 5-10 мкм, которые обеспечивают бактерии возможность активно передвигаться Ш (Рисунки 1 и 2 [99]). Жгутики покрыты чехлами, достигающими толщиной 30 нм и заканчиваются колбовидными утолщениями. Вегетативные спиралевидные формы HP, имеющие жгутики, могут трансформироваться в овоидные и кокковые формы (Рисунок 3). Это происходит чаще в более старых культурах или в неблагоприятных условиях [32]. Объекты и методы исследованияОпределение рН биоптата слизистой оболочки антрального отдела желудка проводилось методом, разработанным Е.А.Корниенко и В.Е.Милейко [43]. Тест для измерения рН биоптата был изготовлен нами на твердом пористом гигроскопичном носителе, аналогичном использованному в ХЕЛПИЛ-тесте (см. Главу 4). Тест для исследования рН содержал индикатор бромтимоловый синий, но не содержал мочевины. Нами была подготовлена эталонная шкала изменения цвета тест-билета в диапазоне рН от 6,2 до 8, 0 (рис.2). Для этого были приготовлены фосфатные буферные растворы (система 1/15 М КН2РО4 и Na2HP04 2H20) с интервалом по величине рН в 0,2 единицы. По 0,01 мл каждого из растворов наносилось на тест-билет, получавшийся при этом цвет тест-билета воспроизводился с помощью смешивавшихся желтой и синей гуашевых красок. Проверка точности воспроизведения цвета проводилась путем сравнения цвета тест-билета с цветом эталона на шкале при помощи их сканирования (сканер Mustek 1200) и оценки цвета компьютерной программой Adobe Photoshop 6.0. Объем биоптата — 1-3 мм . Температура при проведении исследования 25±5С. Для проведения исследования биоптат СОЖ помещался на тест-билет. Через 3 минуты биоптат удалялся с тест-билета. Цвет теста оценивался визуально путем сравнения с эталонной шкалой (рис. 2) или путем сканирования тест-билета и определения цвета с помощью компьютерной программы. При этом биоптат может быть исследован другими методами, например, гистологическим или микробиологическим. Методика определения уреазной активности биологического материала Определение уреазной активности биоптата проводилось нами с помощью ХЕЛПИЛ-теста (см. главу 4), разработка которого и являлась целью данной работы. Апробацию тестов для определения уреазной активности in vitro, а также их клинические испытания проводили на пробах биологического материала (чаще всего биоптатов СОЖ), отбираемых в ходе У одного взрослого пациента бралось 1-5 образцов, у детей — 1-3, чаще - 1 образец. Пробы брались у пациентов натощак, на пустой желудок. Объем отбираемого биоптата— 1-3 мм . Температура при проведении исследования 25±5С. Для оценки уреазной активности биоптат СОЖ (или другой биологический материал) помещался на ХЕЛПИЛ-тест. Затем регистрировалось время появления и интенсивность окраски синего пятна на желтом фоне тест-билета, а также размер изменившего цвет пятна. При этом биоптат удалялся с поверхности ХЕЛПИЛ-теста и при необходимости направлялся на дальнейшее обследование. Если время появления синего пятна меньше одной минуты, то это свидетельствует о высокой УА биоптата (НР++); если 1-3 минуты, то это свидетельствует о наличии у данного биоптата уреазной активности (НР+); если в течение 3 минут тест не изменил своего цвета, то это свидетельствует об отсутствии УА у данного образца (НР-). Кинетика ферментативного гидролиза карбамидаРеакция ферментативного гидролиза карбамида, несомненно, является самой важной стадией биохимического определения HP. Изучение механизма этого процесса позволяет понять его сущность, оптимизировать условия протекания и тем самым улучшить характеристики метода анализа. Рассмотрим коротко основные положения кинетики ферментативного катализа. Основные положения биокатализа были сформулированы еще в начале прошлого, XX века в работах Брауна и Анри и позднее были развиты Михаэлисом и Ментен, а также Бриггсом и Холденом [53]. Согласно их представлениям, механизм каталитического действия ферментов состоит в общем случае в образовании между ферментом и субстратом промежуточных соединений, претерпевающих в ходе реакции последовательные превращения вплоть до образования конечных продуктов и регенерации фермента. Действительно, в простейшем случае описание кинетики ферментативной реакции укладывается в рамки так называемой двухстадийной схемы: P - конечный продукт, kit к.!і к2 — соответствующие константы скорости. Для сравнения кинетических свойств традиционно применяются величины Кт и Vmax : В действительности механизм ферментативных реакций оказывается много сложнее и неодинаков у разных ферментов. Поэтому величины Кт и Vmax могут не иметь реального физического содержания. Традиция характеризовать кинетические свойства с их помощью многократно критиковалась, делались попытки заменить Кт и Vmax величинами, имеющими более конкретный физический смысл (например, константами элементарных стадий или составными константами), но до сих пор эти попытки не увенчались успехом. Биохимики повсеместно используют величины Кт и Vmax , тем более что они позволяют сравнивать кинетические свойства ферментов вне зависимости от степени изученности стадий процессов. На кинетику фермент-субстратного взаимодействия оказывают влияние такие факторы, как температура, рН среды, присутствие в реакционной среде эффекторов, т.е. веществ, ускоряющих или замедляющих ход реакции. Рассматривая механизм гидролитических реакций, необходимо учитывать, что в действительности реакции ферментативного гидролиза являются двухсубстратными, в качестве второго субстрата выступает вода [21]. При этом реакция протекает при большом постоянном ее избытке, и в силу этого имеет кажущийся односубстратный характер. Тем не менее механизм реакции определяют все участвующие в ней компоненты, и детальное рассмотрение необходимо проводить с учетом двух субстратов. Анализ механизмов двухсубстратных реакций, в частности, исследование зависимостей скорости реакции от концентрации обоих субстратов позволяет дискриминировать механизмы и получить определенную информацию о возможной последовательности стадий. Участников событий в случае с ферментативной реакции с двумя субстратами три: активный центр фермента Е, субстрат Si и субстрат S2. Возможны два принципиально различных сценария развития событий: Экспресс-диагностика хеликобактер в клинике "Парацельс", Сергиев ПосадЕсли Вас беспокоят боли в животе, изжога, тошнота, быстрое насыщение после еды, отрыжка, то основной причиной этих жалоб может оказаться инфекция Хеликобактер пилори — главный возбудитель хронических гастритов и язв желудка.
Своевременное выявление данной бактерии и эффективное лечение позволяют предотвратить болезни и их осложнения. Сегодня мы предлагаем Вам современную инфекции хеликобактериоза дыхательным методом. Что такое ?— это неинвазивная дыхательная диагностика инфекции хеликобактер пилори (Helicobacter pylori). Применим в практике , терапевтов, педиатров и семейных врачей. Дыхательный тест ХЕЛИК предназначен для первичной диагностики хеликобактер пилори, а также для контроля хода антихеликобактерной терапии и проверки эффективности уже проведенной терапии.
Хеликобактер пилори способствует развитию:
* % случаев развития заболеваний, связанных с Helicobacter Pylori Кому нужно обследоваться на хеликобактер?Обследование необходимо, если вы заметили у себя один из перечисленных ниже симптомов:
Дополнительный повод для диагностики хеликобактер пилори — это перенесенные заболевания тракта (хронического гастрита, гастродуоденита, язвенной болезни желудка и кишки, перенесенной операции по поводу рака желудка), а также наследственная предрасположенность (наличие бактерии или заболеваний ЖКТ у членов семьи). Кто может быть инфицирован хеликобактер?До 80% населения России инфицировано Helicobacter pylori. Обследование проводят специалисты, имеющие большой опыт работы в области диагностики и лечения хеликобактериоза. Записаться на приём можно каждый день, без выходных с 7.00 до 21.00, выбрав удобный для Вас способ: Записаться по телефону: Оставить заявку (мы перезвоним в ближайшее время) Самостоятельно через Личный кабинет С заботой о Вашем здоровье, Медицинский центр “Парацельс” Что такое хеликобактер пилори?Helicobacter pylori – это бактерия, которая паразитирует на слизистой оболочке желудка человека. Эти бактерии способны продуцировать и высвобождать большое количество ферментов и токсинов, которые способствуют повреждению клеток слизистой оболочки, что может приводить к развитию воспалительных и язвенных заболеваний желудка и двенадцатиперстной кишки. При этом известно, что почти 60% населения земного шара инфицированы Helicobacter pylori. Следовательно, далеко не каждый инфицированный человек заболевает язвенной болезнью, однако среди заболевших у большинства выявляется данная инфекция. В настоящее время доказано, что наличие инфекции Helicobacter pylori при воспалительных заболеваниях желудка и двенадцатиперстной кишки является показанием к назначению антибактериальной терапии. Helicobacter pylori обитает только в желудке человека. Заражение происходит при контакте с инфицированным человеком. Передача инфекции может происходить орально-оральным путем при поцелуях или использовании одной посуды, а также через предметы гигиены. Как правило, все члены семьи бывают инфицированы одним штаммом Helicobacter pylori, что доказывает контактно-бытовой путь передачи. Симптомы заболеванияВо многих случаях инфекция может протекать бессимптомно. Выявление Helicobacter pylori в отсутствие воспалительных заболеваний желудка или кишечника не является показанием к назначению антибактериальной терапии. При развитии на фоне инфекции Helicobacter pylori воспалительных заболеваний (язва желудка или двенадцатиперстной кишки, эрозивный гастрит, гастродуоденит) клиническая картина будет соответствовать заболеванию. ДиагностикаДиагностика инфекции Нelicobacter pylori возможна при использовании целого ряда методов, которые позволяют выявить сам микроорганизм, признаки его жизнедеятельности или иммунологический ответ организма на инфекцию (антитела в сыворотке крови). Как правило, пациента направляют на исследование при обнаружении активного воспалительного процесса в желудке или двенадцатперстной кишке.
ЛечениеДиагностикой и лечением этой инфекции занимается врач-гастроэнтеролог. В нашем центре используется новый аппарат: Тест-система ХЕЛИК с индикаторной трубкой — это одноразовое устройство (индикаторная трубка) и компрессор. Тест-система позволяет проводить неинвазивную специфическую экспресс-диагностику инфекции Helicobacter pylori по составу выдыхаемого воздуха. Тест-система ХЕЛИК с индикаторной трубкой предназначена для первичной диагностики инфекции Helicobacter pylori, а также для контроля хода антихеликобактерной терапии и проверки эффективности уже проведенной терапии. Чувствительность тест-системы ХЕЛИК с индикаторной трубкой составляет 95%, а специфичность 97%. Принцип действия тест-системы ХЕЛИК основан на биохимическом методе определения инфицированности бактерией Helicobacter pylori по ее уреазной активности, т.е. по способности быстро гидролизовать карбамид. Пациент принимает раствор карбамида нормального изотопного состава, и образующийся в ходе гидролиза газ поступает в воздух ротовой полости. Индикаторная композиция в трубке, соединенной с компрессором, изменяет свой цвет, если этот газ появляется в воздухе ротовой полости. Аналицируя эту информацию, врач делает вывод об инфицированности пациента. Продолжительность обследования составляет 15 минут. Читайте также:
Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.
Copyright © Иммунитет и инфекции
|