Тест-системы для диагностики бруцеллеза животных в ра рск и рдск

Телефон горячей линии на время ЧМ по футболу +7 (495) 700-01-37

Бруцеллез считается актуальной болезнью для животноводства нашей страны и многих зарубежных стран. Человек также подвержен этому заболеванию. Учреждениями Россельхознадзора ежегодно осуществляется эпизоотологический мониторинг по всей территории Российской Федерации. По результатам мониторинга и плановых противоэпизоотических мероприятий выявляются животные с наличием антител к бруцеллам, также выделяются возбудители бруцеллеза из биологического и патологического материала. Наибольшее количество неблагополучных по бруцеллезу животных пунктов выявляется в Северо- Кавказском федеральном округе.

Бруцеллы существует в двух основных формах - гладкой S-форме и шероховатой R-форме. Они различаются между собой по антигенной структуре клеток и характеру метаболизма.

Главным антигенным отличием является отсутствие у R-вариантов полисахаридной цепи S-эндотоксина, в которой антигенными детерминантами, определяющими бруцеллезную специфичность, являются структуры альфа-2-маннопиранозы.

Средства и методы диагностики бруцеллеза, применяемые в Российской Федерации:

1. Набор компонентов для диагностики бруцеллеза животных в РА, РСК, РДСК (реакция агглютинации (РА), реакция связывания комплемента *(РСК);

2. Набор для серологической диагностики бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) (реакция непрямой гемагглютинации (РНГА);

3. Набор для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота иммуноферментным методом (непрямой иммуноферментный анализ (ИФА);

5. Набор компонентов для диагностики бруцеллеза животных в роз бенгал пробе (роз бенгал проба (РБП) (экспресс-тест);

6. Набор компонентов для диагностики бруцеллеза животных в кольцевой реакции с молоком (кольцевая реакция с молоком (КР);

7. Тест-система для диагностики

бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота, и северных оленей в РИД (реакция иммунодиффузии в агаровом геле с О-ПС –антигеном);

9. Бруцеллин ВИЭВ (аллергическое исследование)

Вакцины против бруцеллеза, выпускаемые и применяемые в Российской Федерации для иммунизации крупного рогатого скота:

Вакцина против бруцеллеза из слабоагглютиногенного штамма Бруцелла абортус № 82 живая сухая;
живая сухая вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных из штамма B.abortus 19;
вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота из штамма B.abortus 75/79-АВ живая сухая;
адъювант-вакцина из штамма B.abortus КВ 17/100 против бруцеллеза крупного рогатого скота.

Вакцины для иммунизации мелкого рогатого скота:

Вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных из штамма B.abortus 19 живая сухая;
вакцина против бруцеллеза овец и коз, и инфекционного эпидидимита баранов из штамма Brucella melitensis REV-1 живая сухая.

Разработанная и внедренная в нашей стране с учетом мирового опыта система мер борьбы с бруцеллезом, предусматривающая иммунизацию животных противобруцеллезными вакцинами, позволила значительно снизить количество неблагополучных пунктов, полностью оздоровить от бруцеллеза ряд регионов страны и снизить заболеваемость людей. Тем не менее, с учетом относительной иммуногенной эффективности всех известных на сегодняшний день в мире противобруцеллезных вакцин в случае абортов в хозяйствах, контакта животных с вирулентным возбудителем в большой инфицируемой дозе, не стоит рассчитывать на их успешное применение без соблюдения ветеринарно-санитарных правил при содержании животных. Опыт профилактики и борьбы с бруцеллезом показывает, что проблему бруцеллеза невозможно разрешить, ограничиваясь реализацией только специальных ветеринарных мероприятий.

Существует ряд проблем, затрудняющие искоренение бруцеллеза в Российской Федерации:

несанкционированное перемещения животных на территории страны;
торговля вакцинированными животными из субъектов неблагополучных по бруцеллезу, в субъекты благополучные, в которых вакцины не применяют;
не применение экономических санкций к субъектам неблагополучным по бруцеллезу;
отсутствие в большинстве субъектов России мясокомбинатов и боен, выполняющих убой больных бруцеллезом животных (что обусловливает несвоевременный убой больных животных);
неэффективное проведение организационно-хозяйственных мероприятий при бруцеллезе (без наложения ограничений, оздоровление неблагополучных по бруцеллезу хозяйств по правилам для инфицированных В.abortus, введение нетелей и ярок в стада и отары взрослых животных, концентрация поголовья в хозяйствах молочного направления, продолжительное применения способа оздоровления путем периодических исследований и вакцинации в стадах где реагировало на бруцеллез более 20 % животных);

Первостепенное значение для успешной борьбы с бруцеллезом имеет решение проблемы компенсации владельцам убытка, неизбежного при изъятии больных животных, в первую очередь, в условиях отгонного животноводства.

44-ФЗ, Электронный аукцион

ИНН 7720148807 КПП 772001001

Набор для выявления антител к вирусу ньюкаслской болезни в реакции торможения гемагглютинации

ОКПД 24.41.60.330 Препараты диагностические (реагенты) микробного и вирусного происхождения; наборы диагностические

Набор для диагностики анаплазмоза КРС в РДСК

Набор для выявления ДНК вируса АЧС методом ПЦР с электрофоретической детекцией, в полной комплектации. 50 опр.

Набор антигенов и сывороток для диагностики гриппа птиц в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) (ГП Н1-13

Набор компонентов для диагностики бруцеллеза животных в роз бенгал пробе (РБП)

Набор компонентов для диагностики бруцеллеза животных в РА, РСК, РДСК

Сыворотки групповые агглютинирующие лептоспирозные

Набор для диагностики бруцеллеза в РИД

Набор д\диагностики хламидиоза с\ж животных в РСК и РДСК

Набор для диагностики листериоза в РСК

Тест-система для обнаружения вируса болезни Ньюкасла в РВ (качественный), 100 проб

ОКПД 24.41.60.395 Тест-системы прочие

Антиген сапной для реакции связывания комплемента РСК

Сыворотка гемолитическая для реакции связывания комплемента

Набор для диагностики инфекционной анемии лошадей в реакции диффузной преципитации (РДП

Комплемент сухой для реакции связывания комплемента 400-500доз (Щ)

Антиген паратуберкулезный для РСК

Сыворотка паратуберкулезная для РСК

Набор для выделения ДНК из Биологического Материала, набор 50 реак

Набор диагностикумов парагриппа-3 КРС

Сыворотка сапная для реакции связывания комплемента 80 доз/фл

Тест-система для выявпения генома вируса Блютанга методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени

ОКПД 24.41.60.395 Тест-системы прочие

Антиген трипаносомный сухой для РСК

Антиген сапной цветной для пластинчатой реакции агглютинации РА

Набор для определения антител к вирусу гриппа птиц в РТГА

Набор для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота

Сыворотка трипаносомозная для РСК

Торговое (отличительное) название препарата

Заявитель (название юридического лица, или Ф.И.О. физического лица)

Производитель (название юридического лица, наименование страны производителя)

Номер регистрацион-ного удостоверения

для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота, овец, свиней, лошадей и собак

Иммуноферментная тест-система для диагностики лейкоза крупного рогатого скота

для диагностики лейкоза крупного рогатого скота

Иммуноферментная тест-система для диагностики бруцеллеза животных

для диагностики бруцеллеза животных

Туберкулин очищенный (ППД) для млекопитающих

для диагностики туберкулеза животных

Гемолизин – гемолитическая сыворотка для серологических реакций

для постановки серологических реакций

для диагностики лейкоза крупного рогатого скота

Svanova Biotech AB, Швеция

SVANOVIR® FMDV 3ABC - Ab

для диагностики ящура животных

Svanova Biotech AB, Швеция

для постановки серологической реакции

Диагностика иммуноферментная ID SCREEN BLUE TONGUE COMETITION

для диагностики блютанга

Компания ID VET Sorl, Франция

для диагностики ящура животных

Bionete, Южная Корея

Bionete Rabies Ab

для диагностики бешенства животных

Bionete, Южная Корея

RapiGEN AIV H5 Ag

для диагностики гриппа птиц

Bionete, Южная Корея

Выявление антигена вируса Influenza A

для диагностики гриппа A A методом ИФА

Компания ID VET, Франция

Выявление антител антинуклеопротеинов вируса Influenza A методом ИФА

для диагностики гриппа A A методом ИФА

Компания ID VET, Франция

Обнаружение антигенов вируса чумы КРС и вируса чумы МРС жвачных посредством ИФА с захватом антигена

для диагностики чумы КРС (ЧКРС), чумы МРС (ЧМЖ) (в рамках Соглашения о ЛИОМУ)

EMVT, Монпелье, Франция

Тест pen-side на раннее выявление антигена чумы КРС в мазке из глаз чумы КРС (RPV-Ag) SVANODIP тм

для диагностики чумы КРС (в рамках Соглашения о ЛИОМУ)

Svanova Biotech AB Uppsala Science park SE-751 83 Uppsala, Sweden

Определение ДНК вируса оспы овец в ПЦР режима реального времени (Capripox Virus Real Time DNA PCR Assy)

для диагностики оспы овец

Определение ПЦР в реальном времени для обнаружения РНК вируса чумы КРС с использованием прибора Roche LightCycler R

для диагностики чумы КРС (в рамках Соглашения о ЛИОМУ)

Компания Tetracore, США

Иммуноферментная тест-система для диагностики лептоспироза животных

для диагностики лептоспироза животных

Тест-набор для выявления вируса птичьего гриппа А в фекалиях птиц (CerTest Avian Flu Card Test)

для диагностики птичьего гриппа А

Иммуноферментная тест-система токсоплазмоза животных

для диагностики токсоплазмоза животных

ID VET г. Монтпелье, Франция

Тест-система RIDASCREEN метод иммуноферментного анализа антибактериальных препаратов

определение антибактериальных препаратов в продовольственном сырье и пищевых продуктах

R-Biopharm AG, Landwehrstrasse, Germany

RIDASCREEN иммуноферментная тест-система для определения экспресс -методом афлатоксина М₁

определение афлотоксина М₁ в молоке и молочных продуктах

R-Biopharm AG, Landwehrstrasse, Germany

Тест-система RIDASCREEN для экспресс определения микотоксинов

определение микотоксинов в зерне, кормах и компонентах для их производства

R-Biopharm AG, Landwehrstrasse, Germany

Тест-система иммуноферментная для диагностики инфекционной анемии лошадей

для диагностики инфекционной анемии лошадей

Тест-система иммуноферментная для диагностики гриппа птиц

для диагностики гриппа птиц

Набор препаратов для диагностики инфекционной анемии лошадей в реакции диффузной преципитации

выявление специфических преципитирующих антител к вирусу инфекционной анемии лошадей в сыворотках крови инфицированных животных

Иммуноферментная тест-система для диагностики туберкулеза животных

выявление антител к микроорганизмам рода микобактерии в сыворотке крови животных

Набор препаратов для серологической диагностики листериоза сельскохозяйственных животных в реакции связывания комплемента

выявление комплемента связывающих антител в сыворотке крови сельскохозяйственных животных

Тест-система (набор) для лабораторной диагностики и идентификации возбудителя болезни оспы овец методами реакции диффузной преципитации, реакции связывания комплемента и иммуноферментного анализа

для диагностики оспы овец

Тест-система (набор) для диагностики чумы плотоядных

для диагностики чумы плотоядных

Тест-система (набор) для лабораторной диагностики ящура методом полимеразной цепной реакции (стандартный вариант)

для диагностики ящура

Положительный контроль (специфические моноклональные антитела)

контроль иммуноферментной тест-системы при диагностике бруцеллеза животных

Периоксидазный коньюгат (антивидовые моноклональные антитела меченные пероксидазой хрена)

выявление противобруцеллезных антител в сыворотке крови животных в иммуноферментной тест-системе

Beta BSE EIA Test Kit губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота

обнаружение белка приона губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота

Antigen Rapid SIV Ag Test Kit (Тест-система для быстрого обнаружения антигена вируса свинного гриппа методом иммунохроматографии)

качественное и быстрое определение антигена вируса свинного гриппа в носовых выделениях, трахейном мазке или в тканях легких свиней методом иммунохроматографического анализа

BioNote, Inc 2-9, Seogu-dong, Hwaseong-si, Gyeonggi-do, Корея

Antigen Rapid TGE/PED Ag Test Kit (Тест-система для быстрого обнаружения антигена вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней и антигена вируса эпидемической диареи методом иммунохроматографии)

качественное и быстрое определение антигена вируса трансмиссивного гастроэнтерита и эпидемической диареи свиней в феккалиях методом иммунохроматографического анализа

BioNote, Inc 2-9, Seogu-dong, Hwaseong-si, Gyeonggi-do, Корея

Роз бенгал антиген для пластинчатой реакции агглютинации (роз бенгал проба-РБП) при диагностике бруцеллеза животных

для диагностики бруцеллеза животных

ID Screen R Paratuberculosis Indirect-screening test (ID Screen R - скрининг тест для диагностики паратуберкулеза непрямым методом иммуноферментного анализа

обнаружение антител против Mycobacterium avium subsp. Paratuberculosis

Company ID VET Sarl, Франция

S vanovir R EHV1/EHV4-AB Elisa Kit (набор для определения антител к вирусу ринопневмонии лошадей типов EHV1/EHV4 методом иммуноферментного анализа

обнаружение и дифференциация в сыворотке крови лошадей антител к вирусу ринопневмонии типов EHV1 и EHV4

Svanova Biotech AB, Швеция

Набор компонентов для РДСК при диагностике заболевания овец, вызываемого Brucella ovis (инфекционный эпидидимит баранов-ИЭБ)

обнаружение специфических антител к Brucella ovis в реакции длительного связывания комплемента

выявление ДНК возбудителя бруцеллеза

Туберкулин очищенный (ППД) для млекопитающих

для диагностики туберкулеза животных

для диагностики бруцеллеза животных

ТОО НПП «Антиген

выявление ДНК возбудителя паратуберкулеза

выявление ДНК возбудителя туберкулеза

выявление ДНК возбудителя кампилобактериоза

Тест-система для диагностики туберкулеза животных

для диагностики туберкулеза животных

ППД-туберкулин для млекопитающих, стандартный раствор

для диагностики туберкулеза животных

Единый антиген для РА, РСК, и РДСК при диагностике бруцеллеза сельскохозяйственных животных

Данный автореферат диссертации должен поступить в библиотеки в ближайшее время
Уведомить о поступлении

480 руб. | 150 грн. | 7,5 долл. ', MOUSEOFF, FGCOLOR, '#FFFFCC',BGCOLOR, '#393939');" onMouseOut="return nd();"> Диссертация - 480 руб., доставка 10 минут , круглосуточно, без выходных и праздников

240 руб. | 75 грн. | 3,75 долл. ', MOUSEOFF, FGCOLOR, '#FFFFCC',BGCOLOR, '#393939');" onMouseOut="return nd();"> Автореферат - 240 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Павлов Александр Александрович. Генная и серологическая диагностика бруцеллеза крупного рогатого скота : диссертация . кандидата биологических наук : 03.00.07.- Саратов, 2002.- 104 с.: ил. РГБ ОД, 61 03-3/472-0

Содержание к диссертации

Глава 1. Обзор литературы ч 11

1.1. Распространение бруцеллеза на территории РФ 11

1.2. Методы диагностики бруцеллеза сельскохозяйственных животных

1.2.1. Серологическая диагностика бруцеллеза 15

1.2.2. Аллергическая диагностика бруцеллеза 29

1.3. Полимеразная цепная реакция 31

Глава 2. Материалы и методы 43

2.1. Материал для исследования 43

2.2. Выявление ДНК бруцелл методом ПНР 44

2.3. Серологические методы 49

2.4. Статистические методы исследования 51

Глава 3. Применение тест-системы "Ген-Бру" для молекулярно биологической диагностики бруцеллеза животных 52

3.1. Оценка эффективности ПЦР при обследовании иммунизированного крупного рогатого скота и больных бруцеллезом животных 52

3.2. Использование ПЦР в комплексе с серологическими реакциями (РА, РСК) 60

Глава 4. Оценка информативности ПЦР-анализа при исследовании различных образцов диагностического материала 65

4.1. Выбор диагностического материала от животных для детекции бруцелл методом ПЦР 65

4.2. Изучение диагностической чувствительности ПЦР при исследовании сыворотки крови и цельной крови у больных и иммунизированных против бруцеллеза животных 71

Список использованной литературы

Серологическая диагностика бруцеллеза

Инвертированная ПЦР позволяет амлифицировать не только ДНК с известной последовательностью, но и фланкирующие ее области. Участок ДНК гидролизуется рестриктазой, разрывая нуклеиновую кислоту в точках правее и левее известной последовательности. Образуемый фрагмент ДНК замыкается в кольцо с помощью ДНК-лигазы и подвергается ПЦР. Праймеры, используемые в реакции, направлены 3 -концами наружу по отношению к известной последовательности, благодаря чему амлифицируются и фланкирующие участки ДНК. Инвертированная ПЦР применяется для изучения сайтов интеграции провирусов, мобильных элементов промоторных областей генов известных белков и т.п. [Вартапетян А.Б., 1991].

В некоторых случаях, чтобы предотвратить ложноотрицательный результат вследствие мутации последовательности ДНК, выбранной в качестве мишени амплификации, применяют мультипраймерную или множественную ПЦР, заключающуюся в одновременном применении нескольких праймеров, гомологичных разным участкам генома тестируемого микроорганизма. Праймеры подбираются таким образом, чтобы условия их амплификации были одинаковыми. Используя множественную ПЦР с соответствующими праймерами можно одновременно детектировать несколько различных возбудителей инфекционных заболеваний.

Для эффективного обнаружения внутриклеточных паразитов (вирусов, микроорганизмов рода Chlamidia, Micoplasma, Brucella и др.) применяют ПЦР-Іп situ. Особенность этой модификации заключается в том, что амплификация ДНК проводится непосредственно в клетке (гистологическом срезе или клеточном монослое). Учет реакции проводится гибридизацией с меченным ДНК-зондом.

Чтобы уменьшить риск контаминации в настоящее время все чаще применяют праймеры, иммобилизированные на полимерную основу. В таком варианте амплификация ДНК проходит в твердой фазе [Chevrier D. et al., 1993; Rasmussen S. et al., 1994].

С помощью ПЦР возможна не только быстрая и точная детекция микроорганизма, но и определение его количества. Для этого применяют конкурирующую ПЦР и Taq-man ПЦР.

Конкурирующая ПЦР основана на одновременной амплификации ДНК-мишени и контрольной ДНК с известным количеством копий. После проведения реакции количество продукта ПЦР определяют двумя способами. Самый простой (но менее точный) - визуальное сравнение интенсивности сигналов амплифицированной ДНК-матрицы и копий контрольной ДНК. Более точное определение возможно титрованием продукта амплификации и установлением наименьшего разведения образца ДНК, дающего положительный результат в ПЦР. [Ferre F., 1992; Picard С. et al., 1992; Clementi M. et al., 1993; Mirold D.D., Huss-Vanell K., 1994; Cross N. C, 1995].

Принцип метода Taq-man ПЦР заключается в использовании олигонуклеотидного зонда, содержащего 2 флуоресцентные метки и гомологичного последовательности ДНК-матрицы [Kalinina О. et al., 1997; Zang R. et al., 1997]. При этом одна из меток способна поглощать излучение второй. В процессе реакции Taq-полимераза гидролизует олигонуклеотидный зонд в направлении 5 — 3 и наблюдается смещение максимума флуоресценции. Измерение интенсивности флуоресценции позволяет определить количество ДНК-мишени, соответствующее начальной стадии ПЦР.

Генетические методы диагностики инфекционных болезней, основанные на амплификации нуклеиновых кислот, не ограничиваются , только ПЦР. Перспективными направлениями альтернативных методик I являются ЛЦР, ЦЗТ, NASBA-метод и др.

Выявление ДНК бруцелл методом ПНР

Материал для исследования от крупного рогатого скота: цитратная кровь и сыворотка крови здоровых (не иммунизированных против бруцеллеза и иммунизированных сухой живой вакциной из слабоагглютиногенного штамма Бруцелла абортус № 82) и больных бруцеллезом животных; молоко и соскобы со слизистой цервикального канала матки больных бруцеллезом коров. Материал для исследования от морских свинок: кровь и сыворотка крови инфицированных В. melitensis шт. 565 (доза 1000 м.к., подкожно) животных; кровь и сыворотка крови иммунизированных В. abortus шт. 82 (доза 1 млрд. м.к., подкожно) животных.

Кроме материала от животных в ПЦР исследовались препараты сухой живой вакцины против бруцеллеза из слабоагглютиногенного штамма Бруцелла абортус № 82 (производство Государственного Щелковского биокомбината, серия № 029, контроль № 98, изготовлена 28.05.99, годна до 28.05.2000).

Кровь от крупного рогатого скота получали пункцией яремной вены стерильными иглами Боброва в две пробирки по 10 мл. Первая пробирка содержала 1 мл 4 % раствора цитрата натрия. Кровь из второй пробирки использовалась для получения сыворотки крови.

Соскобы со слизистой внутренних половых органов коров отбирали стерильными ватно-марлевыми тампонами при помощи влагалищного зеркала Полянского. Далее тампоны тщательно прополаскивали в стерильном физиологическом растворе, который затем центрифугировали при 1500 об./мин. в течение 15 минут. Осадок исследовали в ПНР.

Сборные пробы молока в количестве 10 мл от каждой коровы получали путем сдаивания последних порций. Предварительно кожа сосков вымени протиралась чистой увлажненной марлей и обрабатывалась 70 спиртом.

Образцы противобруцеллезной вакцины из В. abortus шт. 82 исследовались в ГЩР в нативном состоянии (2x1010 м.к./мл) и в разведениях приготовленных на физиологическом растворе (0,14 М NaCl), с конечной концентрацией 1x106, 1х104, 1х102, їх 10і м.к./мл

В ПЦР исследовали образцы цитратной крови и сыворотки крови от инфицированного бруцеллами и иммунизированного сухой живой противобруцеллезной вакциной из шт. № 82 В. abortus крупного рогатого скота, а также клинически здорового неиммунизированного против бруцеллеза крупного рогатого скота. Кроме того, ПЦР-анализу подвергались образцы молока и соскобы со слизистой внутренних половых органов больных бруцеллезом коров; препараты сухой живой противобруцеллезной вакцины из слабоагглютиногенного шт. № 82 В. abortus. Также исследовали сыворотку крови и кровь от иммунизированных В. abortus шт. № 82 и инфицированных В. melitensis шт. 565 морских свинок.

ГЩР-смесь-1 (праймеры и нуклеотиды) - 50 мкл; ПЦР-смесь-2 (буфер и Taq-полимераза) - 11 мкл; воск для ПЦР - 15 мкл; ПКО (положительный контрольный образец) - 10 мкл. В каждую пробирку, включая положительный и отрицательный контроли, вносили по 15 мкл реакционной смеси и наслаивали на поверхность 30 мкл минерального масла. В соответствующие пробирки под масло вносили по 10 мкл ДІЖ В. abortus шт. № 19 и 9 мкл дистилированной воды. В пробирку для отрицательного контроля вносили 10 мкл дистилированной воды.

Использование ПЦР в комплексе с серологическими реакциями (РА, РСК)

С момента открытия бруцелл Брюсом (1887) и Бангом (1897) произведено колоссальное количество исследований в разных странах и изучен широкий перечень вопросов, относящихся к бруцеллезу животных. Однако и в наши дни эта хроническая инфекционная болезнь представляет большую проблему глобального масштаба и для органов здравоохранения и для ветеринарных специалистов.

В настоящее время бруцеллез сельскохозяйственных животных на территории РФ распространен почти повсеместно. Очаги бруцеллеза регистрируются на Крайнем Севере, в зоне промышленного оленеводства [Калиновский А.И. с соавт., 1997], в Нечерноземье, Сибире, Дальнем Востоке, Поволжье и юге России [Димов С.К., 1980; Желудков М.М. с соавт., 1997]. Спектр возбудителей энзоотии бруцеллеза, протекающих в данных регионах, представлен В. melitensis, В. abortus, В. suis, В. ovis и в отдельных случаях В. canis.

В последнее время наблюдается интенсивное развитие ДНК-технологий, объективными причинами которого стали революционные открытия в области молекулярной биологии и генной инженерии (Стент Г., 1974). Это обусловило возникновение нового направления в лабораторной методологии - генодиагностики инфекционных болезней. Принцип генетической диагностики заключается в определении различными способами специфичного для искомого микроорганизма участка нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК). Основными направлениями генодиагностики являются ДНК-зондирование и методы амплификации нуклеиновых кислот.

Наибольшее распространение из них получила полимеразная цепная реакция. Техника постановки ПЦР относительно доступна и вместе с тем обеспечивает достаточно высокие эффективность, специфичность и чувствительность анализа. Продолжительное время ПЦР оставалась прерогативой научно-исследовательских лабораторий и институтов. Применение этого метода в ветеринарной практике носило единичный характер [Шумилов К.В. с соавт., 1996]. В 1995 году ситуация коренным образом изменилась с выходом приказа МСХ и П № 350, направленного на интенсивное внедрение ПЦР в ветеринарию.

На данный момент полимеразная цепная реакция разработана для детекции у животных Mycobacterium spp., Chlamidia spp., Salmonella, Listeria monocytogenes, Y. enterocolitica, Micoplasma spp., Campilobacter jejuni, Lyssavirus и в том числе для обнаружения Brucella spp. Применение ПЦР позволило обеспечить эффективную детекцию бруцелл с чувствительностью ІхІОМхЮ3 м.к./мл в различном материале, независимо от степени диссоциации возбудителя, а также исключить ложноположительные результаты реакции в присутствии Y. enterocolitica 0:9, Е. coli 0:157 и других микроорганизмов, имеющих общие с бруцеллами антигенные детерминанты.

Изучение диагностической чувствительности ПЦР при исследовании сыворотки крови и цельной крови у больных и иммунизированных против бруцеллеза животных

Огромный интерес для ветеринарных специалистов представляют исследования направленные на решение проблемы дифференциации иммунизированных живыми противобруцеллезными вакцинами (из штамма № 82 и др.) животных от естественно инфицированных, так как применяемые в данный момент иммунобиологические методы в большинстве своем не дают такой информации. Ситуация несколько изменилась с внедрением в практику реакции иммунной диффузии (РИД) с О-ПС антигеном. Но эффективность этого метода к сожалению оказалась ниже таковой, чем у комплекса РА и РСК.

Для установления с помощью ПЦР возможных различий между инфекционным и иммунным процессами провели анализ крови и сыворотки крови на наличие ДНК бруцелл от зараженных B.melitensis шт. № 565 и привитых В.abortus шт. № 82 морских свинок. Материал исследовали на 25 сутки, с расчетом на то, что в эти сроки вероятнее всего наступит генерализованная инфекция (в первом случае) и явление бактериемии (в обоих случаях) [Здродовский П.Ф., 1948; Вершилова П.А. с соавт., 1974]. Сопоставление результатов ПЦР-анализа крови и сыворотки крови от двух групп животных показало, что, во-первых, исследование крови было предпочтительным при инфекционном процессе (87,5 % положительных проб), а при иммунной перестройке статистически достоверной разницы в вероятности обнаружения ДІЖ бруцелл в крови и сыворотки крови не установлено (21,4 % и 35,7 % соответственно). Во-вторых, частота обнаружения специфической ДНК в крови инфицированных животных оказалась в 4 раза выше, чем у иммунизированных морских свинок. Это может отражать интенсивность процесса взаимоотношений макро- и микроорганизма. Наиболее динамично, как правило, развивается процесс инфицирования организма.

Полученные таким образом данные могут быть использованы при интерпретации результатов ПЦР-анализа и разработке схемы дифференциации поствакцинального процесса от инфекции.

Читайте также:

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.

Наименование	Кол-во	Цена за ед.	Стоимость, ₽