Тест система для диагностики бруцеллеза в рбп
Телефон горячей линии на время ЧМ по футболу +7 (495) 700-01-37
Бруцеллез считается актуальной болезнью для животноводства нашей страны и многих зарубежных стран. Человек также подвержен этому заболеванию. Учреждениями Россельхознадзора ежегодно осуществляется эпизоотологический мониторинг по всей территории Российской Федерации. По результатам мониторинга и плановых противоэпизоотических мероприятий выявляются животные с наличием антител к бруцеллам, также выделяются возбудители бруцеллеза из биологического и патологического материала. Наибольшее количество неблагополучных по бруцеллезу животных пунктов выявляется в Северо- Кавказском федеральном округе.
Бруцеллы существует в двух основных формах - гладкой S-форме и шероховатой R-форме. Они различаются между собой по антигенной структуре клеток и характеру метаболизма.
Главным антигенным отличием является отсутствие у R-вариантов полисахаридной цепи S-эндотоксина, в которой антигенными детерминантами, определяющими бруцеллезную специфичность, являются структуры альфа-2-маннопиранозы.
Средства и методы диагностики бруцеллеза, применяемые в Российской Федерации:
1. Набор компонентов для диагностики бруцеллеза животных в РА, РСК, РДСК (реакция агглютинации (РА), реакция связывания комплемента *(РСК);
2. Набор для серологической диагностики бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) (реакция непрямой гемагглютинации (РНГА);
3. Набор для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота иммуноферментным методом (непрямой иммуноферментный анализ (ИФА);
5. Набор компонентов для диагностики бруцеллеза животных в роз бенгал пробе (роз бенгал проба (РБП) (экспресс-тест);
6. Набор компонентов для диагностики бруцеллеза животных в кольцевой реакции с молоком (кольцевая реакция с молоком (КР);
7. Тест-система для диагностики
бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота, и северных оленей в РИД (реакция иммунодиффузии в агаровом геле с О-ПС –антигеном);
9. Бруцеллин ВИЭВ (аллергическое исследование)
Вакцины против бруцеллеза, выпускаемые и применяемые в Российской Федерации для иммунизации крупного рогатого скота:
- Вакцина против бруцеллеза из слабоагглютиногенного штамма Бруцелла абортус № 82 живая сухая;
- живая сухая вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных из штамма B.abortus 19;
- вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота из штамма B.abortus 75/79-АВ живая сухая;
- адъювант-вакцина из штамма B.abortus КВ 17/100 против бруцеллеза крупного рогатого скота.
Вакцины для иммунизации мелкого рогатого скота:
- Вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных из штамма B.abortus 19 живая сухая;
- вакцина против бруцеллеза овец и коз, и инфекционного эпидидимита баранов из штамма Brucella melitensis REV-1 живая сухая.
Разработанная и внедренная в нашей стране с учетом мирового опыта система мер борьбы с бруцеллезом, предусматривающая иммунизацию животных противобруцеллезными вакцинами, позволила значительно снизить количество неблагополучных пунктов, полностью оздоровить от бруцеллеза ряд регионов страны и снизить заболеваемость людей. Тем не менее, с учетом относительной иммуногенной эффективности всех известных на сегодняшний день в мире противобруцеллезных вакцин в случае абортов в хозяйствах, контакта животных с вирулентным возбудителем в большой инфицируемой дозе, не стоит рассчитывать на их успешное применение без соблюдения ветеринарно-санитарных правил при содержании животных. Опыт профилактики и борьбы с бруцеллезом показывает, что проблему бруцеллеза невозможно разрешить, ограничиваясь реализацией только специальных ветеринарных мероприятий.
Существует ряд проблем, затрудняющие искоренение бруцеллеза в Российской Федерации:
- несанкционированное перемещения животных на территории страны;
- торговля вакцинированными животными из субъектов неблагополучных по бруцеллезу, в субъекты благополучные, в которых вакцины не применяют;
- не применение экономических санкций к субъектам неблагополучным по бруцеллезу;
- отсутствие в большинстве субъектов России мясокомбинатов и боен, выполняющих убой больных бруцеллезом животных (что обусловливает несвоевременный убой больных животных);
- неэффективное проведение организационно-хозяйственных мероприятий при бруцеллезе (без наложения ограничений, оздоровление неблагополучных по бруцеллезу хозяйств по правилам для инфицированных В.abortus, введение нетелей и ярок в стада и отары взрослых животных, концентрация поголовья в хозяйствах молочного направления, продолжительное применения способа оздоровления путем периодических исследований и вакцинации в стадах где реагировало на бруцеллез более 20 % животных);
Первостепенное значение для успешной борьбы с бруцеллезом имеет решение проблемы компенсации владельцам убытка, неизбежного при изъятии больных животных, в первую очередь, в условиях отгонного животноводства.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при производстве препаратов для диагностики бруцеллеза.
Известен способ получения бруцеллезного антигена для роз-бенгал пробы (РБП) из вакцинного штамма В. abortus, который включает производственное культивирование возбудителя в глубинных условиях на жидкой питательной среде, концентрирование, ультрафильтрацию, инактивацию антигена [RU 2361610 C1, 20.03.2008], однако для осуществления этого способа необходимо дорогостоящее специальное оборудование, инактивацию бакмассы проводят при температуре 70°С, которая является недостаточной для обезвреживания бруцелл.
Наиболее близким по техническому решению является способ получения бруцеллезного антигена для роз-бенгал пробы, включающий выращивание штамма В.abortus 19 на печеночно-мартеновском агаре, инактивацию смытой бактериальной массы при температуре 80°С, суспендирование в буферном разбавителе с рН 3,65, титрацию дозы красителя, стандартизацию антигена [см., например, Ветеринарные препараты. Справочник. М., Колос. стр.185-187].
Способ не позволяет получить диагностикум с достаточной активностью, т.к. в антигенной структуре штамма В. abortus 19 допускается содержание R-форм бруцелл, в этой связи штамм склонен к диссоциации, в результате понижается активность, снижается выход конечного продукта из-за выбраковки отдельных партий диагностикума.
Слабая окрашиваемость клеток бруцелл по этому способу также снижает активность антигена, не позволяет эффективно диагностировать больных бруцеллезом животных с наличием специфических агглютининов в сыворотке крови.
Техническим результатом изобретения является повышение активности бруцеллезного антигена для роз-бенгал пробы (РБП).
Технический результат достигается тем, что способ получения бруцеллезного антигена для роз-бенгал пробы (РБП) включает выращивание и смыв вакцинного штамма В. abortus, инактивацию бакмассы, проверку на стерильность, окрашивание микробных клеток бенгальской розовой, суспендирование микробной взвеси в буферном разбавителе, стандартизацию, при этом в качестве питательной среды используют твердые питательные среды для выращивания бруцелл, культивируют вакцинный штамм Brucella abortus 104M, инактивируют бакмассу при температуре 88±1°С 30 минут, центрифугируют бактериальную взвесь при 6-7 тыс об/мин 40 минут, осадок бруцелл ресуспендируют в 0,7% водном растворе бенгальская розовая в соотношении объемов 1:1, окрашивают микробные клетки при температуре 4°С в течение 48 часов.
Использование предлагаемого способа обеспечит получение активного, специфичного антигена для РБП, что повысит эффективность диагностики бруцеллеза животных.
Способ осуществляется следующим образом.
Бруцеллы вакцинного штамма В.abortus 104M выращивают трое суток, например, на картофельном агаре, смывают с питательной среды стерильным 0,5% фенолизированным физиологическим раствором, инактивируют при температуре 88±1°С в течение 30 минут, устанавливают стерильность путем посева на среды, элективные для анаэробов, аэробов, грибов, наблюдение ведут в течение 10 суток. Микробную взвесь центрифугируют при 6-7 тыс об/мин 40 минут, осадок в равных объемах 1:1 ресуспендируют в стерильном 0,7% водном растворе бенгальская розовая и окрашивают 48 часов при температуре 4°С. После окрашивания бактериальную массу ресуспендируют в буферном растворе, имеющем рН 3,65±0,05, состоящим из едкого натрия, фенолизированного физиологического раствора, молочной кислоты, доводят концентрацию бруцелл до 100-110 млрд м.к. в 1 мл.
Стандартизуют антиген путем его титрации в РБП со стандартным образцом сыворотки против Brucella abortus. При этом антиген, изготовленный по предлагаемому способу, имеет четкую реакцию с оценкой 4 креста с сывороткой в разведении 1:10, содержащей 100 ME, 1-2 креста с сывороткой в разведении 1:20 (50 ME), отрицательную реакцию с сывороткой в разведении 1:35 (28,5 ME), т.е. соответствует стандартности. Изготовленный антиген проверяют на стерильность, активность, специфичность.
Результаты изучения агглютинабельных свойств вакцинных штаммов В. abortus 104M и В.abortus 19 представлены в таблице 1.
Из данных таблицы 1 следует, что агглютинабельные свойства вакцинного штамма В.abortus 104M выше аналогичных свойств вакцинного штамма В. abortus 19.
Антиген из штамма В. abortus 104M агглютинировался обеими бруцеллезными сыворотками в разведении 1:2560 с оценкой 4 креста, тогда как антиген из штамма В abortus 19 агглютинировался с бруцеллезными гомологичными сыворотками с оценкой 4 креста в разведении 1:1280. Кроме того, характер агглютината отличался: у штамма В. abortus 104M он был более крупным в сравнении со штаммом В.abortus 19.
Результаты испытания активности и специфичности разных антигенов представлены в таблицах 2, 3.
Данные таблиц показывают, что предлагаемый способ позволяет получить антиген для роз-бенгал пробы, обладающий специфичностью, а также более высокой активностью в сравнении с аналогом.
Таким образом, изготовление бруцеллезного антигена для роз-бенгал пробы с использованием вакцинного штамма В. abortus 104M с высокими агглютинабельными свойствами и способа окрашивания микробных клеток бруцелл позволили получить диагностикум с высокой активностью и специфичностью.
Предлагаемый способ получения бруцеллезного антигена для роз-бенгал пробы отличается доступностью и может быть применен в условиях лабораторий и биопредприятий.
Участники и результаты
44-ФЗ, Электронный аукцион
ИНН 7810323620 КПП 781001001
| Наименование | Кол-во | Цена за ед. | Стоимость, ₽ |
|---|---|---|---|
