Свойства возбудителя кишечного иерсиниоза

Кишечный иерсиниоз и псевдотуберкулез – две самостоятельные, имеющие много общих черт зоонозные инфекции с фекально-оральным механизмом передачи. Клинические проявления этих заболеваний полиморфны и включают симптомы поражения ЖКТ в некоторых случаях со склонностью к генерализации инфекции, развитием экзантемы, в отдельных случаях с последующими поражениями опорнодвигательного аппарата.

Возбудители данных заболеваний относятся к роду Yersinia, сем Enterobacteriaceae. Вид Y.enterocolitica в настоящее время насчитывает 6 биоваров и более 50 серогрупп, из которых 5 наиболее часто вызывают заболевания у человека. Вид Y.pseudotuberculosis включает 21 серотип, объединенный в 5 биоваров.

Несмотря на существенное снижение заболеваемости псевдотуберкулезом и кишечным иерсиниозом в последние годы, сохраняются территории с эндемично высокими показателями заболеваемости. Кроме того, эти заболевания продолжают представлять значительную проблему для лиц в отдельных изолированных коллективах (воинские части и др.).

Показания к обследованию

Пациенты с ОКИ при наличии эпидемиологических показаний (проживание на эндемичной территории, принадлежность к группе риска);
пациенты с особенностями клинической симптоматики ОКИ (сочетание ОКИ с катаральной симптоматикой, экзантемой, периферической лимфаденопатией, суставным синдромом) при отрицательных результатах выявления более распространенных патогенов.

Материал для исследований

Образцы фекалий – культуральные исследования, выявление АГ, ДНК;
сыворотка крови – обнаружение АТ.

Этиологическая лабораторная диагностика включает выделение чистой культуры с дальнейшей идентификацией возбудителя; обнаружение НК и АГ патогенов, выявление специфических АТ.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Наиболее информативным методом лабораторной диагностики кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза является культуральный в сочетании с адекватными методами видовой идентификации возбудителя. Обязательным этапом исследования при выявлении Y.enterocolitica является определение вирулентных свойств выделенного изолята. Антигенная характеристика изолята не может служить прямым доказательством наличия у него вирулентных свойств и его этиологической связи с картиной заболевания.

Выявление ДНК патогенов с использованием ПЦР применяется для скрининговой диагностики иерсиниоза и псевдотуберкулеза в острой фазе заболевания. Тест наиболее адаптирован для скрининговых исследований, что связано с его оперативностью и возможностью детектировать нежизнеспособные на фоне антибиотикотерапии формы микроорганизмов. Обязательным требованием к диагностическим тестам данной группы является возможность определять не только видовую принадлежность изолята, но и гены ключевых факторов вирулентности (для Y.еnterocolitica), а также отсутствие перекрестных реакций с близким в филогенетическом плане видом (в случае Y.pseudotuberculosis – Y.рestis).

Для выявления АТ применяют наборы реагентов с использованием ИФА (в РФ мало распространены), а также РА и РНГА. Выявление специфических АТ малоинформативно в первую неделю заболевания, но позволяют уточнять его этиологию в более поздние сроки при отрицательных результатах прямых методов выявления возбудителей.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Для применения прямых методов выявления Y.enterocolitica и Y.pseudotuberculosis следует использовать образцы фекалий, забранные у пациента в первые 3–5 дней заболевания до начала антибактериальной терапии. При проведении исследований в очагах групповой заболеваемости или решении других эпидемиологических задач целесообразно применение культурального исследования для изоляции штамма микроорганизма и возможностью его последующей характеристики по ферментативным и антигенным свойствам. Выявление ДНК возбудителей методом ПЦР оправдано при решении задач диагностики, обследовании пациентов на фоне антибиотикотерапии или в качестве скринингового этапа исследования.

Выявление АТ к указанным возбудителям целесообразно при неинформативности результатов прямых методов выявления патогенов. Рекомендовано выполнение исследования в образцах крови, взятых в динамике (конец первой недели и начало третьей недели заболевания). При интерпретации результатов таких исследований следует учитывать наличие у иерсиний АГ, вызывающих перекрестные реакции (возможность ложноположительных результатов).

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Факт обнаружения Y.enterocolitica или ее ДНК в фекалиях у пациентов с острыми диарейными заболеваниями недостаточен для установления иерсиниозной этиологии заболевания. Лабораторным подтверждением диагноза кишечного иерсиниоза служит выявление штаммов возбудителя, обладающих факторами вирулентности (или их генами). Выявление Y.pseudotuberculosis или ее ДНК методом ПЦР является достаточным для подтверждения диагноза псевдотуберкулеза.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

на тему: БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ЛИЗОГЕННОСТЬ БАКТЕРИЙ YERSINIA ENTEROCOLITICA

Амирова Лидия Ахмадовна

Грозный — 2014 г.

1. Обзор литературы

2. Материал и методы

3. Биологическая характеристика культур Yersinia enterocolitica

Сниженная резистентность организма госпитализированных больных ведет к тому, что в лечебных учреждениях возможно возникновение заболеваний, вызванных не только патогенными микроорганизмами, но и теми, которые в обычной жизни не представляют опасность.

А.Ф. Фролов и соавторы (1986) считают, что условно-патогенные это те микроорганизмы, для которых болезнь человека не является необходимым условием их существования в природе.

Кишечные инфекции, как и любые другие инфекционные заболевания, могут получить распространение в стационарах. Этому способствуют повышенная восприимчивость госпитализированных больных и условия тесного общения в больницах. К возбудителям внутрибольничных кишечных инфекций оказались причастными и представители рода Yersinia.

Род Yersinia включает 11 видов, из которых в патологии человека основное значение имеют 3 вида: возбудитель чумы Yersinia pestis и энтеропатогенные иерсинии, возбудитель псевдотуберкулеза Yersinia pseudotubercolosis и возбудитель кишечного иерсиниоза Yersinia enterocolitica.

Род назван в честь А. Иерсена, который в 1894 году совместно с С. Китасато открыл возбудителя чумы. Подразделение внутри рода на виды производится на основании биохимических свойств и подвижности (под ред А.А. Воробьева, 2004).

Кишечный иерсиниоз — острая инфекционная болезнь, характеризующаяся поражением толстой и тонкой кишки с явлением энтероколита и развитием мезентерального лимфаденита с возможным вовлечением в патологический процесс различных органов и систем. Возбудитель кишечного иерсиниоза — Yersinia enterocolitica (под редакц. В.В. Зверева, М.Н. Бойченко, 2012).

Острые кишечные инфекции (ОКИ) — это группа инфекционных заболеваний человека, вызываемых патогенными (шигеллы, сальмонеллы и др.) и условно-патогенными бактериями (протей, клебсиеллы, иерсинии, клостридии и др.), вирусами (рота-, астро-, калици-, группы Норфолка и др.) и простейшими (амеба хистолитика, криптоспоридии, балантидия коли и др.), характеризующихся поражением желудочно-кишечного тракта с развитием симптомов токсикоза и дегидратации (обезвоживания, эксикоза).

Острые кишечные инфекции (ОКИ) до настоящего времени занимали ведущее место в инфекционной патологии детского возраста, уступая по заболеваемости только гриппу и острым респираторным инфекциям.

По данным Всемирной Организации здравоохранения в нашей стране ежегодно фиксируется не менее 500 тыс. острых кишечных инфекций у детей. Главным защитным звеном желудочно-кишечного тракта, которое стоит на пути проникновения болезнетворных микробов, является кишечный слизистый барьер, одним из основных компонентов которого является секреторный иммуноглобулин А, выработка которого у детей снижена. Кроме того, у детей, в отличие от взрослых, слабее другие защитные системы желудочно-кишечного тракта: у них вырабатывается меньше соляной кислоты в желудке и меньше секреция поджелудочной железы, желчи, которые также препятствуют внедрению болезнетворных микробов.

У детей в отличие от взрослых чаще отмечаются тяжелые формы кишечных инфекций, так как у них быстрее наступает обезвоживание, в результате потери воды с рвотой и жидким стулом, а клетки детей, как известно, на 90% состоят из воды и солей. Следует отметить, что при возникновении любой инфекционной патологии, в том числе и кишечных инфекций, имеет значение не только количество и болезнетворность микробов, попавших в желудочно-кишечный тракт малыша, но и исходное состояние здоровья ребенка.

Цель нашей работы была изучить биохимические особенности и лизогенность у культур йерсиний выделенных в лечебных учреждениях Чеченской Республики.

1. Обзор литературы

Представители рода Yersinia прямые палочки, иногда приобретающие сферическую форму, диаметром 0,5-0,8 и длиной 1-3 мкм. Грамотрицательные. Неподвижные при 37 °С, но при температуре ниже 30 °С подвижные за счет перетрихиальных жгутиков; исключение составляют некоторые штаммы Yersinia ruckeri и вид Yersinia pestis, представители которого всегда неподвижные. Факультативные анаэробы. Хемоорганотрофы, обладающие и дыхательным и бродильными типами метаболизма. Оптимальная температура 28-30 °С. Катаболизируют D-галактозу и другие углеводы с образованием кислоты и небольшого количества газа или газ не образуют. Оксидазоотрицательные; каталазоположительные; по образованию индола виды различаются. Прорба с метиловым красным обычно положительная. Реакция Фогеса-Проскауэра отрицательная; на среде Симмонса с цитратом при 37 °С не растут, а при 25-28 °С результаты варьируют. По лизиндекарбоксилазе и аргининдигидролазе, как правило отрицательные; по карбоксилазе положительные, за исключением Yersinia pestis, Yersinia pseudotubercolosis и Yersinia rohdei. Сероводород не образуют. Мочевину обычно гидролизуют, за исключением Yersinia bercovieri, Yersinia pestis и Yersinia ruckeri. Небольшое число штаммов растет в присутствии KCN; малонат не используют. В

осстанавливают нитрат. Сбраживаемые всеми или большинством видов углеводы включают L-арабинозу, мальтозу, D-маннитол, D-маннозу, и трегалозу. Встречаются в разнообразных местах обитания, включая человека, животных особенно грызунов и птиц, почву, воду, молочные и другие пищевые продукты. Yersinia pestis — возбудитель чумы, болезни главным образом диких грызунов. Переносчиками Yersinia pestis, распространяющими возбудителей среди диких грызунов служат блохи, в которых бактерии размножаются, закупоривая пищевод и глотку. Блохи отрыгивают бактерий при очередном кровососании и при этом могут передавать возбудитель, если не находят другого хозяина человеку. В результате укуса инфекционных блох у человека развивается типичная бубонная форма чумы и может возникнуть вторичная пневмония. При воздушно-капельной передаче инфекции может распространяться первично легочная чума.

Иерсиниоз широко распространен во многих странах, в различных климатических зонах. Причиной заболевания являются полиморфные грамотрицательные палочки семейства Enterobacteriaceae — Yersinia enterocolitica и Yersinia pseudotuberculosis. Основной резервуар возбудителя — мелкие грызуны, свиньи и другие домашние и дикие животные. Они обсеменяют почву, воду, продукты. В организм человека иерсинии иерсинии попадают алиментарным, фекально-оральным путем, при внедрении бактерий непосредственно в кожу, иногда при переливании крови. Обладая наибольшей тропностью к органам, богатым лимфоидными элементами и фиксированными макрофагами (лимфатические узлы, печень селезенка), могут там длительно персиситировать, вызывая повторные волны заболевания или обусловливая переход процесса в хронический. Факторами передачи Y. еnterocolitica чаще всего бывают зараженные мясные продукты, молоко, овощи, вода; Y. pseudotuberculosis — овощные и молочные продукты, не прошедшие термическую обработку. Употребление воды из инфицированных открытых водоемов может явиться причиной заражения обеими инфекциями. Иерсинии способны длительно существовать при температуре +4-8 о С и размножаться в пищевых продуктах. Некоторые штаммы бактерий способны выдерживать температурные режимы пастеризации, но при кипячении все штаммы иерсиний погибают через несколько секунд. Они также чувствительны к действию обычных дезинфицирующих средств. Для иерсиниозов характерен сезонный подъем заболеваемости: в ноябре отмечается пик заражения Y. enterocolitica, в марте-мае — инфицирования Y. pseudotuberculosis. В некоторых регионах наблюдается два сезонных подъема заболеваемости — осенью и весной. Иерсиниозы встречаются преимущественно в виде спорадических случаев, но могут отмечаться и эпидемические вспышки. Заболеванию подвержены люди всех возрастов; мужчины предрасположены к нему несколько больше, чем женщины. Иерсиниоз характеризуется первичным поражением кишечника, склонностью к генерализованному течению и системным проявлением (Максимов О.Г. и др., 2006; Учайкин В.Ф., 2008).

Бактерии названы в честь французского бактериолога А. Иерсена, выделившего чистую культуру возбудителя чумы. Род Yersinia включает подвижные и неподвижные споронеобразующие палочки (иногда коккобациллы) размером 1-3х0,5-0,8 мкм. Окрашиваются они биполярно, что может служить дифференциальным признаком при выявлении Yersinia pestis. Дифференцирующий признак возбудителя чумы — отсутствие подвижности и наличие капсулы, остальные виды образуют лишь капсульное вещество. У человека Yersinia pestis вызывает чуму, Yersinia pseudotubercolosis и Yersinia enterocolitica — гастроэнтериты, брыжеечный лимфаденит, хроническую диарею и тяжелые септицемии (под редакц. В.И. Покровского, 2001).

Yersinia pestis — возбудитель чумы. Род Yersinia не относится к таксономической группе Enterobacteriaceae, но близок к ней по своему факультативно-анаэробному образу жизни и по типу брожения. Природным резервуаром этого возбудителя эпидемий служат дикие грызуны, главным образом крысы. Бактерии передаются человеку инфицированными блохами и другими эктопаразитами; в результате развивается бубонная или легочная чума. Быстрое размножение бактерий в организме и интенсивная выработка ими токсина могут приводить к скорой смерти (Шлегель Г., 1987).

Y. enterocolitica обладает способностью к сапрофитному существованию в природе: его популяция в воде, почве, растениях поддерживается свободноживущими инфузориями. Животные (крупный рогатый скот) заражаются иерсиниями, употребляя зараженную воду и корма. Источником инфекции для человека является вода, сельскохозяйственные животные и птицы, инфицированные растения, очень редко человек. Механизм заражения — фекально-оральный, пути заражения — пищевой (молоко, овощи, фрукты), водный (под редакц. В.В. Зверева и М.Н. Бойченко, 2012).

2.. Материал и методы

Бактерии. В работе использовано 50 штаммов, идентифицированных как Yersinia enterocolitica.

Большинство штаммов выделено из клинического материала в бактериологической лаборатории Клинической больницы скорой медицинской помощи г Грозный.

Выделенные из клинического материала штаммы протея наиболее часто обнаруживались в моче и в раневом отделяемом.

Питательные среды и условия культивирования.

Инкубация посевов осуществлялась в термостате при температуре 37 °С в течение 18-24 часов.

Методы изучения бактерий.

А) морфология бактерий изучалась методом световой микроскопии после окраски препаратов по методу Грама;

Б) идентификация выделенных культур и изучение их биохимических свойств проводилась с помощью систем индикаторных бумажных (СИБ) производства Горьковского НИИ эпидемиологии и микробиологии в соответствии с наставлением по применению и методическими рекомендациями по идентификации бактерий рода Yersinia.

Учитывая, что культуры Yersinia enterocolitica часто обладают антилизоцимной активностью, можно было предположить, что выделяемый бактериями антилизоцимный фактор может препятствовать проявлению лизиса у фагов, которые часто обладают лизоцимом, играющим роль в процессе взаимодействия фаг-клетка (Зуев В.А., 1969). Исходя из этого мы испытали на лизогенность культуры Yersinia enterocolitica на среде с добавлением лизоцима (5 мкг/мл). Были проделаны параллельно два опыта с лизоцимом и без него, в которых в качестве лизогенных испытаны 50 культур, а в качестве индикаторных 30.

3. Биологическая характеристика культур Yersinia enterocolitica

Изучение биохимических свойств культур Yersinia enterocolitica проводилась с помощью систем индикаторных бумажных (СИБ). Результаты проведенных нами исследований приведены в таблице 1.

Таблица 1. Биохимические свойства Yersinia enterocolitica

Лаборатория занимается совершенствованием микробиологической диагностики заболеваний, обусловленных иерсиниями, коринебактериями, бордетеллами и другими микроорганизмами, имеющими медицинское значение

Краева Людмила Александровна – заведующая лабораторией, д.м.н.,

член-корреспондент Петровской академии наук и искусств

телефоны: (812) 232-94-85, (812) 498-09-39, каб. 243

Воскресенская Екатерина Александровна – ведущий научный сотрудник, к.б.н.,

руководитель Российского Референс-центра по мониторингу иерсиниозов

Курова Наталия Николаевна – старший научный сотрудник, к.м.н.

Кокорина Галина Ивановна – старший научный сотрудник, к.м.н.

Богумильчик Елена Александровна – научный сотрудник, соискатель

Хамдулаева Галина Николаевна – младший научный сотрудник, аспирант

Кунилова Елена Сергеевна – младший научный сотрудник, аспирант

Сайнес Татьяна Валерьевна – младший научный сотрудник

Лаборатория медицинской бактериологии начала свою работу в 2016 г. на базе лаборатории бактериальных капельных инфекций, созданной в апреле 1993 г. в связи с возникшей масштабной эпидемией дифтерии.

Часть сотрудников, во главе с руководителем д.м.н. Галиной Яковлевной Ценевой, возглавлявшей лабораторию в течение 22 лет, выделились из состава лаборатории зооантропонозных инфекций. В это же время были начаты первые работы по изучению патогенных свойств иерсиний псевдотуберкулеза, кишечного иерсиниоза, клебсиелл, коринебактерий и бордетелл, моделированию инфекционных процессов, разработке и созданию новых средств диагностики. Многолетние исследования ученых лаборатории были направлены на получение современных представлений об основных биологических свойствах бактерий, о механизмах их взаимодействия с макроорганизмом, иммуногенезе, диагностике и профилактике заболеваний.

Изучение биологических свойств иерсиний различных видов, прежде всего возбудителей псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза, – традиционное направление научной деятельности лаборатории. Выполняются исследования штаммов Y. pseudotuberculosis, Y. enterocolitica и других представителей рода Yersinia молекулярно-генетическими методами. Сотрудниками лаборатории проведен анализ геномного полиморфизма штаммов Y. pseudotuberculosis различного географического распространения (IS-RFLP-типирование, риботипирование), выделенных из разных источников, определены различия генетических характеристик зарубежных и российских штаммов Y. pseudotuberculosis. Использование полученных сведений о структуре популяции Y. pseudotuberculosis в России перспективно в целях повышения эффективности контроля за циркуляцией возбудителя.

Получена молекулярно-генетическая характеристика штаммов Y. pseudotuberculosis по наличию основных генетических детерминант вирулентности плазмидной и хромосомной природы, определено клинико-диагностическое значение штаммов различных генотипов. Показана потенциальная способность представителей видов иерсиний, считающихся непатогенными (Y. enterocolitica биотипа 1А, Y. kristensenii), содержащих в составе хромосомы ген термостабильного энтеротоксина, вызывать патологический процесс. Для углубленного исследования иерсиний различных видов используется секвенирование.

Важной составляющей деятельности лаборатории являются диагностические исследования. Для повышения эффективности выявления иерсиниозов без типичных проявлений обоснованы показания к обследованию методами этиологической диагностики больных с поражениями суставов, больных с длительными абдоминальными болями, больных с симптомами острого аппендицита, острого панкреатита, обострения хронического панкреатита.

Разработана и запатентована тест-система для дифференциации видов и биотипов бактерий рода Yersinia, позволяющая корректно и полноценно осуществлять внутриродовую и внутривидовую дифференциацию бактерий рода Yersinia по биохимическим свойствам.

Применение метода MALDI TOF масс спектрометрии (в том числе с использованием созданной проектной библиотеки спектров штаммов вида Y. Kristensenii) позволило повысить качество идентификации близкородственных Y. enterocolitica представителей рода Yersinia. Научными сотрудниками лаборатории предложены методологические подходы к микробиологическому мониторингу циркуляции иерсиний на основе применения комплекса информативных молекулярных маркеров, диагностических препаратов и оригинальных тест-штаммов, изложенные в методических документах федерального уровня.

С 2008 г. на базе лаборатории приказом Роспотребнадзора создан Референс-центр (РЦ) по мониторнгу иерсиниозов. Его деятельность определяется несколькими направлениями:

- В целях совершенствования эпидемиологического надзора и профилактики псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза проводится организационно-методическая работа по разработке методических документов федерального, регионального уровней. Регулярно проводятся методические семинары для специалистов эпидемиологов и бактериологов по стандартизации методов мониторинговых исследований иерсиниозов.

- Практическая работа включает организацию и проведение контроля качества диагностики иерсиниозов, оказание консультативно-методической и практической помощи учреждениям Роспотребнадзора и здравоохранения, депонирование тест-штаммов иерсиний с типовыми видовыми биохимическими признаками, используемых при идентификации иерсиний и др.

Спустя 20 лет после эпидемии дифтерии в России, пик которой пришелся на 90-е гг. XX в., на фоне снизившейся заболеваемости все более утрачивается настороженность врачей-клиницистов в отношении этой инфекции. Однако циркуляция штаммов возбудителей дифтерии продолжается, особенно в закрытых учреждениях специального назначения. Миграционные процессы в Санкт-Петербурге и Ленинградской области очень активны, учету не подлежат большие группы необследованного населения с неизвестным прививочным анамнезом. Поэтому наряду со своевременным выявлением штаммов возбудителя дифтерии необходим постоянный контроль напряженности иммунитета к дифтерии, как среди местного населения города, так и среди приезжих.

На основе десятилетнего мониторинга индивидуального и коллективного противодифтерийного антитоксического иммунитета в крупных регионах СЗФО РФ научно обоснована определяющая роль высокоавидных антитоксических антител в защите от дифтерии у привитых. Разработаны новые методические подходы, критерии и способы оценки защищенности от дифтерии. На основе комплекса данных об уровнях антитоксических (в т.ч., высокоавидных) антител и прививочного статуса разработан способ прогнозирования заболеваемости контактных в очагах инфекции. Предложен алгоритм контроля индивидульного и коллективного иммунитета для определения сроков ревакцинации с учетом динамики антитоксических (в т.ч., высокоавидных) антител. Разработан простой и экономичный тест для измерения авидности противодифтерийных антитоксических антител на основе иммуноферментного анализа, позволяющий определять истинные протективные антитела.

Для ускоренного выявления токсигенных штаммов C. diphtheriae в лаборатории предложен способ определения потенциально токсигенных штаммов возбудителя дифтерии с помощью низкоинтенсивного лазерного излучения. С целью регистрации таких штаммов разработан диагностический набор и микроридер на основе микро- и нанотехнологий. Использование современных способов диагностики токсигенных штаммов и объективной оценки защищенности от дифтерии позволяют осуществлять мониторинг заболеваемости дифтерией и циркуляции штаммов C. diphtheriae в Северо-Западном регионе России.

Несмотря на проводимую более 50 лет массовую вакцинопрофилактику инфекции, серьезной проблемой здравоохранения остается коклюш. В лаборатории проводятся исследования штаммов Bordetella pertussis и B. parapertussis молекулярно-генетическими методами (электрофорез в пульсовом поле, секвенирование) для контроля изменчивости циркулирующей популяции возбудителя. Результаты исследований показали, что штаммы, циркулирующие в постэпидемический период (с 1998 г. по настоящее время) отличаются от штаммов, используемых при производстве вакцины (по ДНК-профилю и структуре генов S1-субъединицы коклюшного токсина, пертактина, фимбрий). Также для циркулирующих штаммов выявлена утрата части хромосомного материала – RD (Regions of Difference) 2 и 4.

Другая изучаемая лабораторией проблема – формирование поствакцинального противококлюшного иммунитета, его напряженность и длительность. Было установлено, что спектр антител зависит от типа вакцины: иммунизация цельноклеточными коклюшными вакцинами приводит преимущественно к выработке агглютинирующих антител; антитела к коклюшному токсину вырабатываются далеко не у всех детей и в небольшом количестве. При иммунизации бесклеточными вакцинами у детей вырабатываются антитела к антигенам, входящим в состав вакцины (в частности, к коклюшному токсину); при этом агглютинирующие антитела не выявляются. При обследовании детей и подростков в возрасте 3-17 лет было показано, что доля детей с высокими титрами антител значительно снижается к 6-7 годам, а затем снова возрастает, что свидетельствует об утрате иммунитета к школьному возрасту и высоком уровне заболеваемости (частично скрытой) у школьников.

В последние годы отмечается увеличение частоты выделения Moraxella catarrhalis при острых воспалительных процессах дыхательных путей, особенно при развитии осложнений после перенесенной вирусной инфекции. В структуре бактериальных осложнений гриппа M.catarrhalis составляет 22% от всей микробной флоры. Изучение генетических и фенотипических маркеров вирулентности позволило выявить высокую адгезивную активность штаммов: ген mcaP выявлен у 90% штаммов M.catarrhalis, выделенных от больных с осложнениями гриппозной инфекции и у всех лиц с тяжелым течением и осложнениями в виде пневмоний. В то же время 70% штаммов моракселл, выделенных при бактериальных осложнениях гриппа и ОРВИ, обладают высокой адгезивностью в фентотипических тестах. Поэтому был разработан алгоритм бактериологического исследования материала от больных с целью совершенствования тактики терапии острых воспалительных заболеваний респираторного тракта, обусловленных Moraxella catarrhalis.

Наибольшую трудность при работе с условно-патогенными бактериями представляет определение этиологической роли выделенных микроорганизмов. Возможность глубокого изучения патогенного потенциала бактерий позволяет своевременно выявлять вирулентные особи и определять их роль в развитии инфекционного процесса. В исследованиях проведено изучение наличия следующих генов вирулентности у штаммов S. epidermidis: гена icaA, который способствует образованию биопленок, гена sdrF, ответственного за прикрепление микроорганизмов к поверхности слизистого слоя и проникновение вглубь его, гена sepA, способствующего уклонению от действия макрофагов. У лиц, страдающих ринитами и синуситами, от 3 до 12 раз чаще выделялись штаммы S. epidermidis, имеющие указанные гены вирулентности. У лиц с воспалительными процессами в верхних дыхательных путях чаще обнаруживали стрептококки (S. oralis, S. anginosus, S. mitis) с наличием генов вирулентности (lmb, fap1, ply, lytA). Так, штаммы S. mitis, выделенные от больных имели в 3 раза больше генов вирулентности, чем штаммы, выделенные от здоровых лиц. С помощью фенотипического теста на клетках буккального эпителия подтверждено этиопатогенетическое значение гена вирулентности lmb у выделенных штаммов стрептококков. Сочетание генетических и фенотипических методов выявления патогенных свойств бактерий позволяет повысить достоверность лабораторных исследований и улучшить качество назначаемой терапии.

Актуальность листериозной инфекции обусловлена тяжелым течением, возможностью внутриутробного заражения плода от инфицированной беременной женщины, а также частым выделением этих микроорганизмов из продуктов питания, в том числе готовых к употреблению, и смывов с оборудования и инвентаря для их производства. Специфика Северо-Западного региона состоит в широком распространении не только L.monocytogenes, но и других видов Listeria. В стоящий момент изучаются причины наблюдаемого процесса как с эпидемиологической, так и микробиологической точек зрения.

При разработке экспрессных методов выявления бактерий необходимы знания о влиянии различных физико-химических факторов на биологические свойства микроорганизмов. В лаборатории выполнен ряд научно-исследовательских работ, посвященных изучению физических (лазерное излучение, электромагнитные поля) и химических факторов (коллоидное серебро, готовые и специально синтезированные химические субстанции жидкой и газообразной формы) на протекание биологических процессов в бактериальной клетке. Установлена высокая восприимчивость бактерий к внешнему воздействию, что может иметь большое прикладное значение в диагностике и терапии.

Читайте также: