Сибирская язва материал для микробиологических исследований

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить свойства возбудителя и методы микробиологической диагностики.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходимы таблицы по морфологическим, культуральным свойствам возбудителя сибирской язвы и биопрепараты. Для приготовления препаратов-мазков суточная агаровая культура вакцинного штамма СТИ, реактивы для окрашивания их по Граму, микроскопы; Для приготовления препаратов-отпечатков – печень морской свинки, павшей от вакцины Ценковского, реактивы для окрашивания на капсулу; для постановки реакции преципитации – сибиреязвенный антиген и преципитирующие иммунные сыворотки, преципитационные пробирки в штативах, пастеровские пипетки.

При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:

1. Название возбудителя и его патогенность.

2. Морфологические и тинкториальные особенности возбудителя сибирской язвы.

3. Условия, необходимые для формирования капсул и спор, их биологическое значение.

4. Культуральные особенности возбудителя сибирской язвы.

5. Дифференциация возбудителя сибирской язвы от непатогенных антраксоподобных бактерий.

6. Схема бактериологической диагностики сибирской язвы.

7. Реакция преципитации на сибирскую язву.

8. Компоненты реакции преципитации и особенности ее постановки при сибирской язве.

9. Контроли реакции преципитации при сибирской язве, учет и оценка ее результатов.

10. Специфическая профилактика и терапия сибирской язвы.

1. Классификация возбудителя

2. Общая характеристика болезни

Сибирская язва – острая инфекционная болезнь, характеризующаяся септицемией, поражением кожи, (карбункулезная форма), кишечника, легких, миндалин (висцеральная форма).

3. Восприимчивые животные:

- наиболее восприимчивы крупный и мелкий рогатый скот, лошади, олени;

4. Патогенез и факторы вирулентности:

- основные пути заражения – алиментарный, аэрогенный, трансмиссивный;

- бациллы, попадая в кровь, вызывают септицемию, интоксикацию организма, потерю способности крови к свертыванию;

- образует экзотоксины: отечный, летальный, защитный (протективный);

- внутри инфицированного организма возбудитель образует капсулы.

Методы диагностики (рис. 103):

Рис. 103. Схема лабораторной диагностики сибирской язвы

А. Бактериологический метод:

1. Материал для исследования:

- при подозрении на сибирскую язву категорически запрещено вскрывать трупы;

- ухо павшего животного или толстые мазки крови;

- при вынужденном убое – паренхиматозные органы, отечная ткань.

а) методы окраски: по Граму, на капсулу (методы Ольта, Михина),

б) микрокартина: крупные палочки до 10 мкм, располагаются одиночно, попарно в виде коротких цепочек, обращенных друг к другу, прямые, резко обрубленные, свободные – слегка закругленные.

г) в почве и культуре образует споры (рис. 104);

д) в инфицированном организме вокруг палочек формируется капсула (рис. 105);

Рис. 104. Возбудитель сибирской язвы из чистой агаровой культуры. Спорообразование. Увеличение х900

Рис. 105. Возбудитель сибирской язвы из селезенки белой мыши. Окраска по Ольту на капсулы. Увеличение х900

а) посев на питательные среды: МПА, МПБ, МПЖ;

б) Особенности выделения возбудителей:

- оптимальная температура 37С,

- срок культивирования 18-20 ч,

в) культуральные свойства:

- на МПБ – прозрачный, на дне пробирки хлопьевидный осадок,

- на МПА – серо-белые колонии до 5 мм, край изрезанный – R-форма (рис. 106),

г) биохимические свойства:

- обладает умеренными сахаролитическими свойствами и протеолитической активностью, разжижает МПЖ;

- гемолиза на кровяном МПА не вызывает.

- заражают подкожно белых мышей, морских свинок.

Для идентификации возбудителя используют дополнительные методы:

- на гемолитические свойства,

- фаготипирование, реакцию иммунофлюоресценции (РИФ),

Рис. 106. Край колонии (R-форма) возбудителя сибирской язвы. Увеличение х10

Б. Серологический метод:

- реакцию преципитации (РП) используют для исследования кожевенно-мехового сырья, шерсти, мяса, загнившего исследуемого материала, для идентификации выделенных культур.

В. Аллергический метод:

- для выявления свежих случаев и ретроспективной диагностики предложен аллерген ВНИИВиМ (антраксин).

5. Биопрепараты для специфической профилактики:

- живая бескапсульная вакцина-штамм СТИ,

- живая бескапсульная вакцина из штамма 55.

6. Биопрепараты для специфической терапии

- гипериммунная противосибиреязвенная сыворотка,

Задания для самостоятельной работы

1. Изучить культуральные свойства вакцинных штаммов СТИ, Ланге, Ценковского на МПА, МПБ и кровяном агаре.

2. Приготовить препараты-мазки из суточной агаровой культуры вакцинного штамма СТИ, окрасить их по Граму и микроскопировать.

3. Приготовить препараты-отпечатки из печени морской свинки, павшей от вакцины Ценковского, окрасить на капсулу (по Ольту или Михину) и микроскопировать.

4. Провести постановку РП методом наслаивания и оценить ее результаты.