Питательная среда для выделения возбудителя сибирской язвы сухая
| Наименование товаров | Фасовка | |
| Товар основной /микробиология/ | ||
| Оболенск ФБУН ГНЦ ПМБ | ||
| FT- агар (Набор реагентов для бактериологических исследова-ний "Питательный агар для культивирования и выде-ления туляремийного микроба сухая" (FT-агар) комп.:0,25+ добавка 0,045) | Набор | |
| Набор питательных сред для ускоренного определения чувствительности микобактерий туберкулеза к пиразинамиду (PZA-тест) | Набор | |
| SS-агар. Набор реагентов для бактериологических исследований "Питательная среда для выделения сальмонелл и ши-гелл сухая" (SS-агар)" (Оболенск) | 0,25 кг | |
| ТCBS - агар. Набор реагентов для бактериологических исследова-ний "Питательная среда для выделения и культивиро-вания возбудителя холеры и других энтеропатогенных вибрионов сухая" ( ТCBS - агар) (Оболенск) | 0,25 кг | |
| Агар МакКонки (0,25) (Об) | 0,25 кг | |
| Среда типа АГВ (Оболенск) (Питат. среда для опред. атибиотикочувствит. микроорганизмов, сухая) | 0,25 кг | |
| Бифидум- среда (Оболенск) (Питат. среда для культив. и выдел. бифидобактерий) | 0,25 кг | |
| Бордетелагар (Оболенск) (Питат. среда для выделения и культивирования коклюшного микроба, сухая) | 0,25 кг | |
| Бруцеллагар (Питательная среда для выделения бру-целл сухая) (Оболенск) | ||
| Бруцеллагар Набор реагентов для бактериологических исследова-ний "Питательный агар для культивирования и выде-ления возбудителя бруцеллеза сухой" (Оболенск) | Набор | |
| Бульон МакКонки (Оболенск) | 0,25 кг | |
| Висмут-сульфит -агар (Оболенск) Набор реагентов для бактериологических исследований "Питательная среда для выделения сальмонелл сухая" (Висмут-сульфит-ГРМ-агар) | 0,25 кг | |
| Питательная среда для культивирования и выделения гемофильной палочки, готовая к применению ( Гемофилус агар) (Оболенск) | Набор | |
| Среда Гисса-ГРМ с глюкозой /Оболенск/для идентификации энтеробактерий сухая | 0,25 кг | |
| Среда Гисса-ГРМ с лактозой (Оболенск) (Питат. среда для идентиф. энтеробактерий, сухая) | 0,25 кг | |
| Среда Гисса-ГРМ с мальтозой (Оболенск) (Питат. среда для идентиф. энтеробактерий, сухая) | 0,25 кг | |
| Среда Гисса-ГРМ с маннитом (Оболенск)(Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая) | 0,25 кг | |
| Среда Гисса-ГРМ с сахарозой (Оболенск) (Питат. среда для идентиф. энтеробактерий, сухая) | 0,25 кг | |
| Иерсиниозная среда(Оболенск) (питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза) | 0,25 кг | |
| Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации спор возбудителя сибирской язвы (ИХ тест B.anthracis) НДС 10 % | Набор | |
| Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации спор возбудителя сибирской язвы (ИХ тест B.anthracis) НДС 10 % | Набор | |
| Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации возбудителя чу-мы (ИХ тест Y.pestis) НДС 10 % | Набор | |
| Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации возбудителя чу-мы (ИХ тест Y.pestis) НДС 10 % | Набор | |
| Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации возбудителя туляремии ( ИХ тест F.tularensis) НДС 10 % | Набор | |
| Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации возбудителя туляремии ( ИХ тест F.tularensis) НДС 10 % | Набор | |
| Среда Кесслера-ГРМ (Оболенск) (Питат. среда для обнаружения бактерий кишечной палочки, сухая) | 0,25 кг | |
| Агар Клиглера-ГРМ (Оболенск) (Питат. среда для идентиф. энтеробактерий, сухая) | 0,25 кг | |
| SDS-бульон (Оболенск) (Питат. среда для выделения и индентиф. энтеробактерий, сухая) | 0,25 кг | |
| Коринебакагар (Оболенск) (Питат. среда для выделения коринебактерий) | 0,25 кг | |
| Коринетоксагар (Питат. среда д\опр. токсиоген. диф.микробов)(Оболенск) | 0,25 кг | |
| XLD-агар (Оболенск) (Питательная среда для выд.дифференции патологенных энтеробактерий) | 0,25 кг | |
| Лактобакагар (Оболенск) (Питат. среда для выдел. и культив. лактобацилл, сухая) | 0,25 кг | |
| Набор реагентов для быстрой идентификации возбудителя легионеллеза. (Тест полоска Legionella pneumophilla 1) | Набор | |
| Набор реагентов для быстрой идентификации Listeria.monocytoqenes в реакции латекс-агглютинации жидкий (Латексная тест-система Listeria.monocytoqenes) | Набор | |
| Среда Левина-ГРМ (Оболенск) (Питат. среда с эозин-метиленовым синим , сухая) | 0,25 кг | |
| Железо-глюкозо-лактозный агар с мочевиной (Олькеницкого) (Оболенск) (Питат. среда для идентиф. энтеробактерий , сухая) | 0,25 кг | |
| Питательный агар для выделения листерий (ПАЛ -0,25,Селективная добавка для выделения листерий- 5фл. | Набор | |
| Питательный агар для выделения и культивирования листерий ПАЛ (Оболенск) | 0,25 кг | |
| Питательный Бульон для выделения листерий (ПБЛ -0,25,Селективная добавка для выделения листерий- 5фл. | Набор | |
| Питательный бульон для выделения и культивирования листерий ПБЛ (Оболенск) 0,25 | 0,25 кг | |
| Пептон основной сухой (Оболенск) | 0,25 кг | |
| Пизу среда (Оболенск) (Питат. среда для идентиф. коринебактерий по тесту расщепления цистина, сухая) | 0,25 кг | |
| Питательный ГРМ-агар (Оболенск) (Питат. агар для культив. микроорганизма, сухой) | 0,25 кг | |
| Питательный ГРМ-бульон (Оболенск) Набор реагентов для бактериологических исследований " Питательный бульон для культивирования микроор-ганизмов сухой" (ГРМ-бульон)" | 0,25 кг | |
| Агар Плоскирев - ГРМ (Оболенск) (Питат. среда для выдел. шигелл и сальмонелл, сухая) | 0,25 кг | |
| RVS-бульон /Оболенск/(Питательный бульон для накопления сальмонелл по Раппапорту-Вассилиадису) | 0,25 кг | |
| Ресселя ГРМ-среда (Оболенск) (Питат. среда для первичной идент. энтеробактерий, сухая) | 0,25 кг | |
| Сабуро мальтоза агар (Оболенск) | 0,25 кг | |
| Сабуро среда (среда №2) (Оболенск) (Для выращивания грибов) | 0,25 кг | |
| Сибиреязвенная среда (Оболенск) (набор) 0,25среды+6 флаконов сел.доб | Набор | |
| Набор реагентов для бактериологических исследований "Питательная среда для выделения возбудителя сибирской язвы сухая" НДС 10 % | 0,25 кг | |
| Питат среда №14 ГРМ (Оболенск) (цитратный агар Симмонса) | 0,25 кг | |
| Сорбитол E.coli 0157:Н7 агар (Питательная среда для выделения и дифференциации E.сoli O 157: H7 и других энтеробактерий по признаку ферментации сорбита сухая)(Оболенск) | 0,25 кг | |
| Питат. среда № 1(для выращивания бактерий) (Оболенск) | 0,25 кг | |
| Питательная среда № 10 ГРМ (Оболенск)(для идентификации Staphylococcus aureus ) | 0,25 кг | |
| Питательная среда № 11 ГРМ (Оболенск)(лактозный бульон - среда для предварительного накопления бактерий се-мейства Enterobacteriaceae) (лактозный бульон) | 0,25 кг | |
| Питат. среда № 13 (Оболенск) (Трехсахарный агар с солями железа для выяв. серовод. и опред. фермент. лактозы, глюк., сахар.) | 0,25 кг | |
| Питат.среда №15 ГРМ (Оболенск) (для определения индола) | 0,25 кг | |
| Питат.среда №3 ГРМ (Оболенск) (для обогащения энтеробактерий) | 0,25 кг | |
| Питательная среда № 6 ГРМ (Оболенск)(для определения фер-ментации глюкозы (Оболенск) | 0,25 кг | |
| Питат. среда № 7 ГРМ (Оболенск) (для опред. нитритов в нитраты) | 0,25 кг | |
| Питат.среда №8 ГРМ (д\опред. синегнойной палочки и стафилококков) (Оболенск) | 0,25 кг | |
| Питат.среда №9 ГРМ (Оболенск) (для выявления пигмента пиоцианина) | 0,25 кг | |
| Среда Эйкмана с глюкозой (Оболенск) | 0,25 кг | |
| Среда Эйкмана с лактозой (Оболенск) | 0,25 кг | |
| Стафилококкагар (Оболенск) (Питат. среда для выделения стафилококков, сухая) | 0,25 кг | |
| Сульфитный агар Модификация № 1 Оболенск(Питательная среда для выявления сульфитредуцирующих клостридий | 0,25 кг | |
| Сульфитный агар Модификация № 2 Оболенск (Питательная среда для выявления сульфитредуцирующих клостридий | 0,25 кг | |
| Сульфитный агар Модификация № 3 Оболенск (Питательная среда для выявления сульфитредуцирующих клостридий | 0,25 кг | |
| ТБ тест-набор (набор питательных сред для ускоренного определения лекарственной чувствительности и первичной идентификации микобактерий туберкулеза) Оболенск | Набор | |
| Набор реагентов для быстрой идентификации возбуди-теля легионеллеза "Тест-полоска Leqionella pneumo-philla 1" / 10 полосок в пластиковой пробирке | Набор | |
| Набор реагентов для быстрой идентификации листерий "Тест-полоска Listеria spp." 10 полосок в пластиковой пробирке | Набор | |
| Набор реагентов для быстрой идентификации возбуди-теля холеры О1 группы "Тест-полоска V.cholerae O1" / 10 полосок в пластиковой пробирке / | Набор | |
| Набор реагентов для выявления специфич.ДНК-маркеров Escherichia coli О 157:Н7 методом полимеразной цепной реакции "Тест-система ТЭК-О157" | Набор | |
| Тиогликолевая среда (Оболенск) Набор реагентов для бактериологических исследований "Питательная среда для контроля стерильности сухая" (Тиогликолевая среда)" | 0,25 кг | |
| Набор реагентов для бактериологических исследований "Питательная среда для культивирования и выделения туляремийного микроба, готовая к применению" НДС 10 % | 0,25 кг | |
| ЧПС (Питательная среда для культивирования чумного микроба) (Оболенск) | 0,25 кг | |
| Шоколадный агар (Оболенск)Набор реагентов для бактериологических исследований "Питательная среда для выделения возбудителей гной-ных бактериальных менингитов, готовая к примене-нию" (Шоколадный агар) | Набор | |
| Щелочной агар (Оболенск) (Питат. среда для выделения и культивор. холерного вибриона, сухая) | 0,25 кг | |
| Агар Эндо-ГРМ (среда №4) (Оболенск)(Питательная среда для выделения энтеробактерий сухая) | 0,25 кг | |
| Энтерококкагар (Оболенск) (Питат. среда для выделения энтерококков, сухая) | 0,25 кг | |
Выпускает высококачественные питательные среды для санитарной и клинической микробиологии, для контроля микробной загрязненности лекарственных средств, а также среды для диагностики дифтерии, холеры, туляремии, сибирской язвы, иерсиниозов, дисбактериозов, листериоза, гемофильной палочки, кампилобактериоза. Разработки защищены патентами.
Изобретение относится, в частности, к микробиологии, может быть использовано в медицине и ветеринарии для выявления возбудителя сибирской язвы и его дифференциации при исследованиях объектов внешней среды и инфицированных материалов. Изобретение может найти практическое применение в учреждениях Минздрава, Минобороны, МЧС России, занимающихся вопросами лабораторной диагностики сибирской язвы.
Наличие природных очагов сибирской язвы, ведущее к возникновению спорадических и массовых вспышек сибирской язвы среди сельскохозяйственных животных, приводящих к заболеваниям людей, обуславливает необходимость разработки методов выделения и идентификации возбудителя сибирской язвы. Для выделения сибиреязвенного микроба из объектов внешней среды существуют различные питательные среды, но лишь немногие из них позволяют проводить его дифференциацию от близкородственных сапрофитов и практически отсутствуют среды для одновременного выделения и разделения капсульных и бескапсульных штаммов В. anthracis.
Известна диагностическая питательная среда для идентификации возбудителя сибирской язвы сухая, авторы Дармов И.В., Лазыкин А.Г., Строчков Ю.И. и др. - патент на изобретение №2289622. - 2004.
Для дифференциации капсулообразующих и бескапсульных штаммов В. anthracis авторы предложили агаризованную питательную среду на основе ферментативного гидролизата казеина с добавками фенолфталеинфосфата натрия и натрия двууглекислого. Среда позволяет проводить как межвидовую дифференциацию бактерий, так и внутривидовую капсулообразующих и бескапсульных штаммов сибиреязвенного микроба. Однако среда не дает возможности идентификации токсинпродуцирующих штаммов В. anthracis.
Известна плотная питательная среда для сочетанного определения продукции экзотоксина и капсулы (СОПЭК), разработанная в СтавНИПЧИ, которая позволяет выявлять культуры, обладающие капсулообразующей способностью и продуцирующие экзотоксин. Еременко Е.И. Биологические и популяционные аспекты патогенности Bacillus anthracis: Дисс. … док. мед. наук. - Саратов (Ставрополь), 1997. - 275 с. Через 48 ч культивирования в атмосфере CO2 продуцирующие капсулу культуры формируют на питательной среде колонии в SM-форме - округлые, гладкие, блестящие, со слизистым капсульным веществом на поверхности. В мазках из колоний обнаруживаются цепочки капсульных палочек. Не продуцирующие капсулу культуры растут в R-форме в виде шероховатых с волокнистым краем матовых сухих колоний.
Токсинообразование определяют по образованию вокруг колоний концентрических ореолов иммунопреципитации в виде мутно-белых тонких колец. Не продуцирующие токсин колонии лишены таких ореолов.
Недостатком указанной среды является сложный состав, включающий 18 аминокислот, соли, агарозу, бикарбонат натрия и иммуноглобулин противосибиреязвенный лошадиный жидкий (коммерческий). Кроме того, длительность получения результатов затягивается до 5 суток культивирования.
Наиболее близкой к предлагаемому изобретению является питательная среда для выделения и дифференциации возбудителя сибирской язвы по способности утилизировать D-сорбит. Патент на изобретение №2125610 Говорунова В.А., Мацаренко Г.В., Маринин Л.И., Степанов А.В. Плотная питательная среда для выявления возбудителя сибирской язвы.
По характеру роста и изменению окраски среды вокруг колоний можно дифференцировать вирулентные и авирулентные штаммы возбудителя сибирской язвы от близкородственных споровых сапрофитов.
Однако капсуло- и токсинообразование на данной среде не выявляются и срок культивирования составляет 36 ч.
Техническим результатом предлагаемой среды является повышение ее дифференцирующих свойств и способность сибиреязвенного микроорганизма продуцировать капсулу и экзотоксин на данной среде.
Технический результат достигается тем, что плотная питательная среда для одновременного капсуло- и токсинообразования содержит питательную основу, агар-агар, ускорители роста - L-аланин и инозин, натрий двууглекислый, натрия хлорид, сыворотку крупного рогатого скота, D-сорбит, бромтимоловый синий. Для ингибирования роста сопутствующей микрофлоры в среду вводится полимиксина сульфат.
Высев исследуемых штаммов (вирулентных, аттенуированных штаммов В. anthracis и близкородственных бактерий) проводят на предлагаемой питательной среде и культивируют при температуре 36±1°С в атмосфере CO2 с последующим учетом образования капсулы через 24-30 ч роста культур.
Для определения образования токсина рядом с колонией выросшей культуры возбудителя сибирской язвы или близкородственных бактерий делают лунки, которые заполняют преципитирующей сибиреязвенной сывороткой или противосибиреязвенным иммуноглобулином. Токсинопродуцирующие культуры образуют линии преципитации. Учет образования токсина проводят через 24 ч.
Таким образом, время для учета капсуло- и токсинообразования на предлагаемой среде составляет 2-2,5 суток.
Возможность осуществления заявляемого изобретения иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Приготовление питательной среды.
В качестве основы берут агаровую питательную среду по Луриа-Бертани. Для приготовления агаровой среды в 1 л дистиллированной воды размешивают 10,0 г пептона (сухого питательного бульона), 5,0 г дрожжевого экстракта, 10,0 г натрия хлорида, 8,9 г L-аланина, 5,36 г инозина и 15,0 г агар-агара. Подогревают до полного растворения частиц. Среду разливают во флаконы (колбы) по 200 мл и стерилизуют автоклавированием при 1,0 атм (120°С) в течение 20 минут. Готовую среду хранят при температуре +2…8°С.
Готовят дополнительные ингредиенты:
- 20 г D-сорбита вносят в 80 мл стерильной дистиллированной воды, размешивают и кипятят 1-2 минуты.
- 1,6 г бромтимолового синего растворяют в 98,4 мл этилового спирта.
- инактивируют сыворотку крупного рогатого скота прогреванием при 56°С в течение 30 минут.
- 10% раствор натрия двууглекислого.
Перед применением агаризованную питательную среду расплавляют на водяной бане, охлаждают до температуры 45-50°С и на 200 мл добавляют 20 мл раствора D-сорбита (конечная концентрация 2%), 0,36 мл бромтимолового синего (0,003%), 20 мл инактивированной сыворотки крупного рогатого скота (20%), 10 мл 10% раствора натрия двууглекислого (1%) и 20000 Ед. полимиксина сульфат. Готовая питательная среда имеет синий с зеленоватым оттенком цвет (рН 7,2-7,4).
Пример 2. Использование питательной среды для дифференциации капсулообразующих штаммов В. anthracis и близкородственных сапрофитов (В. cereus).
На питательную среду в чашках Петри высевают исследуемую пробу или культуру (В. anthracis штаммы - И-363, 81-1, 47, СТИ-1, 34F2, 52/33, 71/12 и В. cereus штаммы - 95, 160, 127, 1408, в концентрации 1×10 3 /см 3 ) и распределяют по поверхности среды шпателем с целью получения отдельных изолированных колоний. Чашки помещают в эксикатор вместимостью 5 дм 3 , в котором создают атмосферу CO2. Можно использовать CO2 инкубатор с содержанием углекислоты 10-25%. Через 24 ч культивирования при температуре 36±1°С визуально учитывают результаты по характеру роста микроорганизмов. Колонии капсулообразующих штаммов В. anthracis выпуклые, блестящие, гладкие, округлой формы, слизистой консистенции (SM-форма). В окрашенных по Ребигеру мазках из слизистых колоний палочки, окруженные слоем капсульного вещества. Колонии не образующих капсулу штаммов В. anthracis и штаммов В. cereus белесоватые, плоские, шероховатые, матовые (R-формы). В мазках, окрашенных по Ребигеру - цепочки бескапсульных палочек.
Пример 3. Выявление продукции экзотоксина.
Рядом с колониями выросшей культуры микроорганизмов (В. anthracis штаммы - И-363, 81-1, 47, СТИ-1, 34F2, 52/33, 71/12 и В. cereus штаммы - 95, 160, 127, 1408) на расстоянии 5-7 мм делают луночки, которые заполняют преципитирующей сибиреязвенной сывороткой (ФГУП Орловская биофабрика) или противосибиреязвенным иммуноглобулином. Чашки оставляют при комнатной температуре на 24 ч. При просмотре выявляют сформированные контурированные 1-3 линии преципитации со стороны роста токсинопродуцирующих культур В. anthracis. Линии преципитации отсутствуют со стороны роста не продуцирующих токсин культур В. anthracis, а также культур В. cereus.
Таким образом, предлагаемая питательная среда позволяет выявлять типичные сибиреязвенные штаммы и дифференцировать их от близкородственных микроорганизмов по продукции капсулы и экзотоксина. Кроме того, на питательной среде можно проводить внутривидовую дифференциацию сибиреязвенных штаммов по капсуло- и токсинообразованию. Предлагаемую питательную среду испытали при выделении микроорганизмов из инфицированной почвы и трупов животных. Эксперименты показывают не только возможность выделения сибиреязвенного микроба из контаминированных посторонней микрофлорой проб, но и одновременную межштаммовую и межвидовую дифференциацию возбудителя сибирской язвы.
Владельцы патента RU 2289622:
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для бактериологической диагностики возбудителя сибирской язвы из объектов внешней среды и инфекционного материала. Среда содержит в качестве питательной основы ферментативный гидролизат казеина, натрий хлористый, калий хлористый, натрий фосфорнокислый 12-водный, агар-агар, полимиксина сульфат, фенолфталеинфосфат натрия, натрий углекислый кислый в заданном соотношении. Изобретение позволяет повысить дифференцирующие свойства питательной среды в отношении Bacillus anthracis. 5 табл.
Изобретение относится к медицине, в частности к клинической и ветеринарной микробиологии, наиболее эффективно может быть использовано для бактериологической диагностики возбудителя сибирской язвы из объектов внешней среды и инфицированного материала и может найти практическое применение в санитарно-эпидемиологических и научно-исследовательских учреждениях Минздрава, Минобороны, МЧС России, занимающихся вопросами лабораторной диагностики возбудителя сибирской язвы.
Сохранение природных очагов сибирской язвы, а следовательно, наличие высокой опасности возникновения болезни обуславливает необходимость совершенствования методов обнаружения и идентификации возбудителя сибирской язвы. Для идентификации и изучения свойств возбудителя необходимым этапом является выделение его чистой культуры на питательной среде (Черкасский Б.Л. Эпидемиология и профилактика сибирской язвы. - М,, 2002., Груз Е.В. Изучение и рационализация некоторых лабораторных методов индикации и идентификации В.anthracis. Автореф. дисс.канд. мед, наук. - Одесса, 1965).
К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известной питательной среды, относится то, что эта среда не позволяет выделять чистую культуру, оценивать морфологию колоний, проводить дифференциацию сибиреязвенного микроба от близкородственных сапрофитов, а также разделять капсульные (вирулентные) и бескапсульные (авирулентные) штаммы В.anthracis.
Известна плотная питательная среда, содержащая питательную основу, бромтимоловый синий, агар-агар и D-сорбит (RU, патент, 2125610 С1, кл. 6 С 12 Q 1/02, 1999).
К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известной питательной среды, относится то, что эта среда сложна в приготовлении, имеет ограниченные сроки годности (не хранится, используется непосредственно по приготовлению), не содержит ингибиторов посторонней микрофлоры, не обладает способностью выявлять капсулу у В.anthracis.
| Пептон Д или ферментолизат | 12,0±2,0 |
| Агар-агар | 10,0 |
| Натрия хлорид | 6,0 |
| Натрия карбонат | 0,7 |
| Триметоприм | 0,05 |
| Полимиксина М сульфат | 0,05 |
Фенолфталеинфосфата натрия содержится в среде в виде 10%-ного раствора в аммиачном буфере.
К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известной питательной среды, принятой за прототип, относится то, что состав данной среды не обеспечивает возможности выявления капсульных изолятов В.anthracis и не дифференцирует вирулентные и авирулентные штаммы возбудителя.
Технический результат - повышение дифференцирующих свойств питательной среды в отношении В.anthracis.
Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что диагностическая питательная среда для идентификации возбудителя сибирской язвы сухая, содержащая питательную основу, минеральные вещества, агар-агар, фенолфталеинфосфат натрия и ингибитор роста сопутствующей микрофлоры - полимиксина сульфат, дополнительно содержит натрий углекислый кислый, а в качестве питательной основы - ферментативный гидролизат казеина, в качестве источника минеральных веществ - натрий хлористый, калий хлористый, натрий фосфорнокислый 12-водный, при следующем количественном содержании компонентов, г:
| Ферментативный гидролизат казеина | 34,00 |
| Натрий хлористый | 5,00 |
| Калий хлористый | 0,20 |
| Натрий фосфорнокислый 12-водный | 1,00 |
| Агар-агар | 20,00 |
| Полимиксина сульфат | 0,05 |
| Фенолфталеинфосфат натрия | 2,00 |
| Натрий углекислый кислый | 4,00 |
Только при вышеперечисленных составе и концентрациях компонентов диагностической питательной среды достигается указанный технический результат.
Наличие причинно-следственной связи между совокупностью существенных признаков заявляемого объекта и достигаемым техническим результатом показано в таблице 1.
Изобретение позволяет повысить дифференцирующие свойства питательной среды в отношении В.anthracis за счет возможности проведения дифференциации капсулообразующих (вирулентных) и бескапсульных (авирулентных) форм возбудителя сибирской язвы.
Использование в составе заявляемой среды натрия углекислого кислого не ухудшает ее качества по селективным и элективным свойствам.
Возможность применения диагностической питательной среды для дифференциации капсульных (вирулентных) и бескапсульных (авирулентных) форм возбудителя сибирской язвы в пробах из объектов внешней среды и инфицирующего материала подтверждена нами экспериментальным путем и неизвестна из доступных источников информации.
Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующими примерами
Пример 1. Приготовление диагностической питательной среды
Диагностическая питательная среда для идентификации возбудителя сибирской язвы сухая представляет собой набор, состоящий из основного компонента (флакон №1), содержащего питательную основу, натрий хлористый, калий хлористый, натрий фосфорнокислый 12-водный, агар-агар, фенолфталеинфосфат натрия, полимиксина сульфат и специфических добавок, представляющих собой 10% водный раствор аммиака (флакон №2) и натрий углекислый кислый (флакон №3).
Плотную диагностическую питательную среду готовят из сухой следующим образом.
Содержимое флакона №1 с основным компонентом размешивают в 0,8 дм 3 дистиллированной воды, оставляют для набухания на 30. 40 мин и затем кипятят в течение 5. 10 мин до полного расплавления агара, фильтруют. Доводят объем среды до 1 дм 3 дистиллированной водой. Значение рН-среды после смешения компонентов должно составлять 7,2±0,2. Стерилизуют автоклавированием при 120. 125°С в течение (30±1) мин. Среду делят на две равные части по объему. Содержимое флакона №2 (натрий углекислый кислый) непосредственно вносят в колбу с 0,5 дм 3 охлажденной до температуры (80. 90)°С диагностической питательной средой и перемешивают до его полного растворения. Охлажденную до температуры 45. 50°С среду разливают асептически по 15. 20 см 3 в стерильные чашки Петри с открытыми крышками, которые после застывания среды закрывают.
Для бактериологического контроля диагностической питательной среды, предназначенной для идентификации возбудителя сибирской язвы используют тест-штаммы В.anthracis СТИ-1, В. cereus 8, Pr.vulgaris 19, Е.coli 18 и В.anthracis Ч-7, полученные из ГИСК им Л.А.Тарасевича.
Пример 2. Использование диагностической питательной среды для выращивания В.anthracis.
Для определения ростовых свойств диагностической питательной среды, не содержащей натрий углекислый кислый, используют тест-культуру В.anthracis штамма СТИ-1, которую в количестве 0,1 см 3 из разведения 10 -6 и 10 -5 (1·10 2 и 1·10 1 спор см -3 ) по счету в камере Горяева наносят на поверхность среды (по три чашки Петри на каждую) и распределяют по поверхности среды покачиванием. Культуру выращивают в термостате при температуре (37±1)°С в течение (21±3) ч, после чего визуально производят учет результатов.
Сравнительная оценка ростовых свойств питательных сред представлена в таблице 2.
Из представленных в таблице 2 данных видно, что заявляемая среда обеспечивает рост типичных колоний в достаточном количестве и по своим ростовым свойствам не уступает прототипу.
Пример 3. Использование диагностической питательной среды для дифференциации (селекции) В.anthracis от сопутствующей микрофлоры.
Определение дифференцирующих (селективных) свойств диагностической питательной среды в отношении В.anthracis проводят следующим образом.
На 3 чашки Петри со средами, не содержащими натрий углекислый кислый, приготовленными согласно примеру 1, высевают по 0,1 см 3 и 0,01 см 3 смеси тест-культур: суспензии спор В.anthracis штамма СТИ-1 (1×10 4 спор см -3 ), Е.coli штамма 18 (1×10 4 микробных клеток см -3 ), Pr.vulgaris штамма 19 (1×10 4 микробных клеток см -3 ) с 0,9%-ным раствором хлористого натрия в соотношении 0,5:0,5:0,5:3,5. Смесь равномерно распределяют шпателем по поверхности среды. Чашки с засеянной смесью культур помещают в термостат и выдерживают при температуре (37±1)°С в течение 18. 24 ч, после чего производят учет результатов.
Сравнительная оценка дифференцирующих (селективных) свойств заявляемой и средой прототипом представлена в таблице 3.
Из данных, представленных в таблице 3, видно, что как заявляемая, так и среда-прототип, с одной стороны, ингибирует рост сапрофитов Pr.vulgaris 19. Е.coli 18, с другой, - не влияет на рост В.anthracis СТИ-1.
Пример 4. Использование диагностической питательной среды для дифференциации В.anthracis от близкородственных сапрофитов.
Определение дифференцирующих свойств проводят визуально, путем изменения окраски колоний тест-культур. Для чего смесь тест-культур в объеме 0,1 см 3 , состоящую из штамма СТИ-1 (1×10 4 микробных клеток см -3 ), В.cereus 8 (1×10 5 микробных клеток см -3 ) и 0,9%-ного раствора хлористого натрия в соотношении 0,5:0,5:4,0 высевают на питательные среды, приготовленные согласно примеру 1, в чашки Петри и равномерно распределяют по поверхности шпателем. Посевы инкубируют при (37±1)°С в течение 36. 48 ч. Для выявления реакции на внутреннюю поверхность крышки чашки Петри наносят 2. 3 капли 10%-ного раствора аммиака (флакон №3), чашку закрывают и через 5. 10 мин визуально проводят учет результатов по изменению окраски колоний. Реакция считается положительной, если колонии окрашиваются в ярко-розовый или малиновый цвет. Штамм СТИ-1 сибиреязвенного микроба не разлагает фенолфталеинфосфат натрия и его колонии не изменяют свой цвет. Колонии В.cereus 8 окрашиваются в ярко-розовый или малиновый цвет.
Сравнительная оценка дифференцирующих свойств заявляемой и средой-прототипом представлена в таблице 4.
Из представленных в таблице 4 результатов видно, что изученные среды, при выращивании B.anthracis штамма СТИ-1 и B.cereus 8, в равной степени обеспечивают межвидовую дифференциацию бактерий.
Пример 5. Использование диагностической питательной среды для дифференциации капсулообразующих (вирулентных) и бескапсульных (авирулентных) штаммов В.anthracis.
Определение капсулообразующей способности В.asthracis проводят на диагностической питательной среде, содержащей натрий углекислый кислый (приготовленной согласно примеру №1). Для проведения анализа необходим эксикатор.
Рабочую смесь тест-культур В.anthracis в объеме 0,1 см 3 , состоящую из штаммов СТИ-1 и Ч-7 по 20. 50 спор каждого штамма в 0,9%-ном растворе хлористого натрия, высевают на поверхность питательной среды в чашках Петри. Чашки помещают в эксикатор вместимостью 5 дм 3 , на дно которого насыпают 4,6 г натрия углекислого кислого и наливают туда же 30 см 3 5%-ного (объем/объем) раствора серной кислоты и путем притирания плотно закрывают его крышкой. Культуру выращивают в течение 24. 48 ч при (37±1)°С в термостате. Вместо эксикатора можно использовать СО2-инкубатор с содержанием углекислого газа от 10 до 20% в воздушной смеси.
Учет результатов определения капсулообразующей способности В.anthraeis на питательной среде проводят визуально. Результаты представлены в таблице 5.
Из представленных в таблице 5 данных видно, что заявляемая среда, в отличие от прототипа, позволяет проводить дифференциацию капсулообразующих (вирулентных) и бескапсульных (авирулентных) штаммов сибиреязвенного микроба по морфологии их колоний.
Предлагаемая диагностическая питательная среда для идентификации возбудителя сибирской язвы сухая характеризуется перед ранее известными средами следующими преимуществами:
- позволяет стабильно и эффективно проводить одновременно выделение и дифференциацию капсулообразующих (вирулентных) и бескапсульных (авирулентных) форм сибиреязвенного микроба;
- среда может быть использована для бактериологической диагностики возбудителя сибирской язвы из объектов внешней среды и инфицированного материала;
- среда обладает ингибирующими свойствами в отношении микробных сапрофитов;
- среда позволяет проводить как межвидовую дифференциацию бактерий (вид anthraeis от вида cereus), так и внутривидовую - капсулообразующих (вирулентных) и бескапсульных (авирулентных) штаммов сибиреязвенного микроба по цвету и морфологии их колоний;
- использование диагностической питательной среды предполагает ускорение процедуры выделения и идентификации сибиреязвенного микроба;
- сухая форма среды обеспечивает стабильность ее свойств в течение 2-х лет хранения при условии целостности упаковки в помещении с относительной влажностью воздуха не более 70% и температурой не выше 30°С.
Вышеперечисленные преимущества диагностической питательной среды позволяют использовать ее для выделения чистой культуры возбудителя сибирской язвы и одновременной дифференциации его от близкородственных споровых бацилл, а также внутривидовой дифференциации между вирулентными капсулообразующими и авирулентными бескапсульными штаммами сибиреязвенного микроба.
| Таблица 1 Причинно-следственная связь между совокупностью существенных признаков заявляемого объекта и достигаемым техническим результатом | |||
| Виды технического результата и их размерность | Показатели фактические или расчетные | Подробное объяснение за счет чего (отличительный признак и (или) их совокупность) стало возможным улучшение предлагаемого объекта по сравнению с прототипом | |
| Прототипа* | Заявляемого объекта | ||
| Повышение дифференцирующих свойств питательной среды в отношении В.anthracis | Не проводит дифференциацию капсулообразующих и бескапсульных штаммы возбудителя сибирской язвы | Проводит дифференциацию капсулообразующих и бескапсульных штаммов возбудителя сибирской язвы | Обусловлено тем, что диагностическая питательная среда для идентификации возбудителя сибирской язвы сухая дополнительно содержит натрий углекислый кислый, а в качестве питательной основы - ферментативный гидролизат казеина, в качестве источника минеральных веществ - натрий хлористый, калий хлористый, натрий фосфорнокислый 12-водный, при следующем количественном содержании компонентов, г: питательная основа (с аминным азотом 3,5%) - 34,0; натрий хлористый - 5,0; калий хлористый - 0,2; натрий фосфорнокислый 12-водный - 1,0; агар микробиологический - 20,0; полимиксина сульфат - 0,05; фенолфталеинфосфат натрия - 2,0; натрий углекислый кислый - 4,0 |
| * Примечание. В качестве прототипа выбрана среда АДЭСБ (НИПЧИ г.Ростов-на-Дону) |
Диагностическая питательная среда для идентификации возбудителя сибирской язвы сухая, содержащая питательную основу, минеральные вещества, агар-агар, фенолфталеинфосфат натрия и ингибитор роста сопутствующей микрофлоры - полимиксина сульфат, отличающаяся тем, что в качестве питательной основы она содержит - ферментативный гидролизат казеина, в качестве источника минеральных веществ - натрий хлористый, калий хлористый, натрий фосфорнокислый 12-водный, а также дополнительно содержит натрий углекислый кислый, при следующем количественном содержании компонентов, г:
Читайте также:
