Патогенные и условно-патогенные стрептококки

Стрептококки (от греч. streptos — цепочка) относятся к семейству Streрtососсасеае, в котором различают согласно классификации Д. Берги (1974) 21 вид, пять из которых не обладают выявленными групповыми антигенами.

По признаку выраженности гемолитической активности они подразделяются на три группы: β-стрептококк — гемолитический, ά-стрептококк — зеленящий, γ-стрептококк негемолитический.

Экология стрептококков изучена недостаточно, в связи с чем окончательно не определена классификация по этому показателю. Ориентировочная классификация выглядит следующим образом:

облигатные паразиты человека — Streрtососсus руоgеnes;

облигатные и условно-патогенные паразиты человека, имеющие общие видовые названия с паразитами животных,— Str. рneumoiae, Str. faecalis, Str. faecium, Str. equisimilis;

условно-патогенные паразиты человека — Str. anginosus, Str. salivarius, Str. mitis;

сапрофиты — Str. 1асtis, Str. еremоris, Str. thermophilus;

облигатные патогенные и условно-патогенные паразиты для животных — Str. zoopidermicus, Str. bovis, Str. avium, Str. uberis .

Морфология. Стрептококки имеют шаровидную и овальную форму, размер около 2 мкм, в мазках располагаются попарно или образуют цепочки. Спор не образуют, неподвижны, способность к капсулообразованию имеет Str. рneumoiae.

Культуральные и ферментативные свойства. На простых питательных средах стрептококки не растут, требуют добавления глюкозы, сыворотки и крови, поскольку неспособны синтезировать аминокислоты, пурины, витамины.

По типу дыхания относятся к факультативным анаэробам, но встречаются и облигатные анаэробы.

На плотных питательных средах образуют мелкие, полупрозрачные, сероватые колонии; на жидких — наблюдается придонный рост с образованием хлопьевидного осадка без поверхностной пленки.

Стрептококки обладают сахаролитической активностью в отношении глюкозы, лактозы, маннита, сбраживая их до кислоты без образования газа; не восстанавливают нитраты в нитриты; не разжижают желатин; свертывают молоко; растворяют фибрин.

Антигенную структуру представляют четыре антигенные фракции:

М-белок, определяет вирулентность и иммуногенность стрептококков; в его состав входят: тейхоевая кислота, липопротеиназа и антиген, ассоциированный с М-белком (активен при ревматизме и гломерулонефрите);

Т-белок (в его состав входят О-, К- и L-антиген) характеризуется вариантной специфичностью; термолабилен, обладает устойчивостью к трипсину и пепсину;

С-вещество, полисахарид, общий для всей группы гемолитических стрептококков;

К-белок, не имеет отношения к вирулентности, антитела к нему не обладают защитными свойствами.

стрептолизин S — гемолизин, содержит 2 млн. гемолитических единиц, устойчив к кислороду;

стрептолизин О — гемолизин, инактивирующийся в присутствии кислорода, обладает гемолитическими свойствами, кардиотропностью;

нуклеазы — усиливают инвазионные свойства стрептококков;

гиалуронидаза — фактор инвазивности;

протеиназа, стрептокиназа, липаза и др.

В организме человека стрептококки обнаруживаются в полости рта, верхних дыхательных путях, в кишечнике, на коже.

Эпидемиология. Источником инфекции являются больные и носители. Основные механизмы заражения — аспирационный и контактный, контактно-бытовой.

Патогенез. Стрептококки могут вызывать гнойно-воспалительные процессы различной локализации. Стрептококковые инфекции разделяют на нагноительные (ангины, пневмонии, рожистые воспаления, импетиго, сепсис и др.) и ненагноительные (скарлатина, ревматизм). Анаэробные стрептококки являются возбудителями тяжелых послеродовых сепсисов, гангрены; стрептококки группы А — ревматизма, скарлатины, ангины, рожи, пиелонефрита, гломерулонефрита, хронического тонзилита; Str. faecalis, вызывает гастроэнтероколиты; Str. рneumoiae обуславливает развитие бронхопневмоний.

Иммунитет после перенесения стрептококковых инфекций малонапряженный, непродолжительный, антиинфекционный (сочетает антибактериальный и антитоксический) с высоким уровнем аллергических проявлений.

Лабораторная диагностика. Исследуемым материалом являются мокрота, гнойное отделяемое, кровь, моча, испражнения. Используют бактериоскопический, бактериологический, серологический методы исследования.

Бактериоскопический метод предполагает окраску мазков по Граму (грамположительны) и наблюдение характерного расположения бактерий попарно и в виде цепочек.

Бактериологический метод связан с выделением чистой культуры на кровяном агаре и сахарном бульоне с ее последующей идентификацией.

Серологическая диагностика заключается в определении в сыворотке крови 0-стрептолизина, антистрептогиалуронидазы, стрептокиназы, в том числе с люминесцентными сыворотками.

Грамотрицательные кокки (менингококки, гонококки)

Менингококковые инфекции протекают в трех клинических формах — назофарингита, менингита и менингококцемии, из них наиболее тяжело — эпидемический цереброспинальный менингит. Это инфекционное заболевание вызывается менингококками и сопровождается гнойным воспалением мозговых оболочек и изменениями черепно-мозговых нервов.

Менингококки относятся к семейству Nеisseriaceae, роду Nеisseria, виду Nеisseria meningitidis.

Морфология. Менингококки представляют собой парные кокки бобовидной формы (в мазке напоминают кофейные зерна), они неподвижны, спор и капсул не образуют.

Культуральные и ферментативные свойства. Аэробы или факультативные анаэробы. На обычных питательных средах не растут, используют те, которые содержат сыворотку или спинномозговую жидкость человека. Оптимум рН среды 7,2—7,4, температура — 36—37 °С. На плотных средах образуют нежные прозрачные колонии диаметром 2—3 мм, на сывороточном бульоне — муть и осадок, через три-четыре дня на поверхности среды образуется пленка.

Ферментативная активность у менингококков выражена крайне слабо, они разлагают глюкозу и мальтозу до кислоты, обладают оксидазной активностью.

Факторы вирулентности. Токсинообразование характеризуется наличием субстанций, обладающих свойствами экзо- и эндотоксинов.

Антигенная структура. В антигенной структуре выделяют три фракции: углеводную, общую для всех менингококков; протеиновую, общую с гонококками и пневмококками; полисахаридную, специфическую.

Эпидемиология. Источники инфекции — больные и носители. Заражение происходит воздушно-капельным путем.

Патогенез и клиника. По данным В. И. Покровского, носительство в 25—35 % случаев определяет менингококковые назофарингиты, риниты.

Появились данные о том, что менингококки могут преодолевать барьеры лимфоидного кольца и размножаться в тканях и органах. Часто менингококковая инфекция протекает в виде легких, стертых форм. Гнойные менингиты являются болезнью носителей. Восприимчивость у разных людей к менингококку зависит в целом от состояния носоглоточного барьера, естественного иммунитета и естественной иммунизации при носительстве.

Менингококки вызывают эпидемический церебральный менингит — тяжелый инфекционный процесс, при котором поражаются оболочки головного и спинного мозга. Клинически выражается в виде Сильных головных болей, высокой температуры, судорог, ригидности затылочных мышц.

Спинномозговая жидкость содержит большое количество лейкоцитов, менингококков. Возможно развитие менингококкоцемии и назофарингитов.

Лабораторная диагностика. Исследуемым материалом является спинномозговая жидкость, кровь, смыв с носоглотки. Применяют бактериоскопический, серологический методы диагностики.

Бактериоскопический метод используют при микроскопии окрашенных по Граму и Леффлеру мазков из осадка спинномозговой жидкости.

Выделение чистой культуры и ее идентификацию проводят на специальных средах с помощью тестов на оксидазную активность, ферментативные и антигенные свойства.

Серодиагностику проводят, используя реакции преципитации, связывания комплемента.

Лечение и профилактика. Для химиотерапии используют антибиотики группы пенициллина и тетрациклина, стрептомицин, сульфаниламиды. Общая профилактика заключается в проведении санитарно-профилактических мероприятий при эпидемиях и санации носителей; препараты для специфической профилактики отсутствуют.

Темы лекций для: Стоматология, семестр 04 Микробиология, вирусология-микробиология полости рта

Стом.(30) семестр 04 Микробиология, вирусология-микробиология полости рта

1. Стафилококки. Характеристика бактерий рода Staphylococcus. Морфология и физиология стафилококков. Гнойно-воспалительные процессы, при которых выявляются стафилококки. Патогенез стафилококковых инфекций. Стафилококковые токсины, ферменты агрессии, факторы патогенности бактерий. Стафилококковый энтерит. Принципы лабораторной микробиологической диагностики. Специфическая и неспецифическая профилактика стафилококковых инфекций. Стафилококки в патологии слизистых оболочек полости рта, возбудители гнойно-воспалительных процессов полости рта. Принципы бактериологического исследования. Профилактика. Стафилококковое носительство. Понятие о резидентных носителях стафилококков. Бактериологическое исследование на стафилококки биоматериала из преддверья носа и зева. Стафилококки - санитарно-показательные микроорганизмы воздуха, объектов внешней среды, воды, пищевых продуктов. Нормативные документы, регламентирующие выявление стафилококков из среды ЛПУ и биоматериала от пациентов.

2. Стрептококки. Характеристика бактерий рода Streptococcus. Морфология и физиология стрептококков. Гнойно-воспалительные процессы, при которых выявляются стрептококки. Патогенез стрептококковых инфекций. Стрептококковые токсины, ферменты агрессии, факторы патогенности бактерий. Бета-гемолитический стрептококк группы А - S. pyogenes. Пиогенный стрептококк как возбудитель гнойно-воспалительных процессов полости рта и слизистых оболочек рта. Принципы бактериологического исследования. Профилактика. Пиогенный стрептококк как этиологический фактор при инфекционных заболеваниях: рожа и скарлатина. Микробиологическая диагностика и профилактика. Роль пиогенного стрептококка в развитии инфекционно-аллергического процесса - ревматизма. Определение О-стрептолизина в сыворотке крови. Пневмококки - S. pneumoniae, классификация, серотипы, факторы патогенности пневмококков. Патогенез пневмококковых пневмоний, менингитов, отитов, ползучей язвы роговицы. Бактериологическая диагностика. Профилактика. Роль вакцин пневмо-7, пневмо-23 в плановой профилактике заболеваний, при которых выявляется пневмококк. Энтерококки - E. faecalis, E. faecium, морфология, биология. Роль энтерококков как возбудителей оппортунистических и условно-патогенных инфекций: выявление энтерококков при патологии полости рта, ЖКТ, моче-полового тракта, заболеваниях почек и мочевого пузыря, раневые инфекции и др. Нормативные документы, регламентирующие выявление стрептококков из биоматериала от пациентов. Селективные, специальные и транспортные среды для культивирования стрептококков.

3. Энтеробактерии. Характеристика бактерий семейства Enterobacteriaceae. Облигатно-патогенные энтеробактерии родов Yersinia, Salmonella, Shigella. Условно-патогенные энтеробактерии родов Escherichia, Klebsiella, Proteus, Enterobacter, Citrobacter и др. Роль в патологии человека. Выявление условно-патогенных энтеробактерий в полости рта, роль в воспалительных процессах на слизистых оболочках полости рта. Эпидемиология кишечных инфекций. Общие принципы микробиологической диагностики. Лечение. Специфическая и неспецифическая профилактика. Значение бактериофагов в лечении и профилактике кишечных и внекишечных инфекций, при которых выявляются энтеробактерии.

4. Бактериальные инфекции полости рта. Возбудители дифтерии. Морфология, биология, классификация. Патогенез дифтерии. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика. Вакцины АКДС, АДС-М, АД. Противодифтерийная лошадиная антитоксическая сыворотка. Способы введения, дозы. Микобактерии - возбудители туберкулеза и проказы. Туберкулез - как социально-гигиеническая проблема. Туберкулёз тканей полости рта. Морфология, биология классификация микобактерий. Микробиологический диагноз туберкулеза. Особенности иммунитета и профилактики. Вакцина БЦЖ, препарат для аллергодиагностики - туберкулин. Способ введения, доза. Патогенные спирохеты. Морфология, биология, роль в патологии человека Выявление Treponema pallidum при локализации твёрдого шанкра и сифилидов в полости рта. Бактериологическая диагностика спирохетозов. Серологическая диагностика сифилиса. Основы профилактики сифилиса, возвратного тифа, лептоспирозов. Нормативные документы, регламентирующие выявление спирохет из биоматериала от пациентов.

5. Возбудители респираторных вирусных инфекций. Общая характеристика и классификация Вирусы гриппа, парагриппа. Аденовирусы. Эпидемиология. Патогенез. Лабораторный диагноз. Энтеровирусы - вирусы полиомиелита, Коксаки А, В, ECHO-вирусы, гепатита А. Вирусологическая диагностика энтеровирусных инфекций полости рта. Профилактика.

6. Вирусы гепатитов В, С, Д, Е, G. Эпидемиология и профилактика. Папилома-вирусы. Онкогенные вирусы. Вирусы лейкозов и злокачественных опухолей. Эпидемиология. Вирусологическая диагностика. Профилактика гепатитов в стоматологической практике.

7. Ретровирусы. Общая характеристика и классификация. Вирус ВИЧ. Оппортунистические инфекции в полости рта при СПИД. Понятие о латентных и медленных вирусных инфекциях. Герпес-вирусы. Эпидемиология. Вирусологическая диагностика герпес-вирусных инфекций в полости рта. Профилактика.

Слайды и текст этой презентации

ЧАСТНАЯ МЕДИЦИНСКАЯ БАКТЕРИОЛОГИЯ

СТАФИЛОКОККИ (род Staphylococcus)

Стафилококки - бактерии рода Staphylococcus (от греч. staphyle – виноградная гроздь) семейства Micrococcaceae; входят в состав нормальной микрофлоры тела человека, обитая в носоглотке, ротоглотке и на коже человека. Разделяются на виды: S.aureus, S.epidermidis, S.saprophyticus и др.

S.aureus - коагулазоположительный - наиболее патогенный для человека, вызывает разнообразные гнойно-воспалительные заболевания.

Менее вирулентные коагулазоотрицательные стафилококки
(S. epidermidis, S.saprophyticus и др.) колонизируют кожу, но при травме, снижении иммунитета они вызывают гнойно-воспалительные заболевания.

ОБЩИЕ ПРИЗНАКИ РОДА СТАФИЛОКОККОВ:

неподвижные, имеют правильную шаровидную форму диаметром 0,5-1,5 мкм, делятся в нескольких плоскостях, образуя скопления, напоминающие гроздья винограда;
Грам+;
галотолерантны (терпимость к соли) - растут при 10-15% NaCI;
возможно образование пигмента:
факультативные анаэробы;
патогенные и условно-патогенные
не образуют спор, могут образовывать капсулу.

Мазок чистой культуры S.aureus и колонии, растущие на желточно-солевом агаре (вокруг колоний образуется ореол вследствие продукции лецитовителлазы)

Колонии S.aureus, растущие на кровяном агаре.
Видны зоны гемолиза вокруг колоний стафилококка.

ФАКТОРЫ ВИРУЛЕНТНОСТИ Staphylococcus aureus

Бактериоскопический метод - мазок из гноя окрашивают по Граму.

Важно определять антибиотикограмму, так как внутрибольничные штаммы S.aureus часто являются полирезистентными, в том числе устойчивыми к метициллину и оксациллину (MRSA).

Специфическое (этиотропное) лечение проводится антибиотиками широкого спектра действия, используются полусинтетические пенициллины (оксациллин), цефалоспорины с обязательным учетом антибиотикограммы.

1) получен препарат из экзотоксина - анатоксин, его используют для вакцинации беременных женщин, у них возникает антитоксический иммунитет, который передается через плаценту ребенку.

2) стафилококковый гамма-глобулин - получают из крови доноров, иммунизированных анатоксином, создают пассивный иммунитет (используют так же и для лечения).

3) стафилококковая аутовакцина - получают из штаммов стафилококков, выделенных от больных. Используют при хронических инфекциях для активации иммунитета.

СТРЕПТОКОККИ (род Streptococcus)

Стрептококки - бактерии рода Streptococcus семейства Streptococcaceae.

Стрептококки группы А — бета-гемолитические стрептококки; представлены в основном S.pyogenes, вызывают рожу, скарлатину, ревматизм, острый гломерулонефрит, воспалительные процессы миндалин, горла, уха, пазух носа, а также развитие сепсиса, эндокардита, менингита, пневмонии и др.
Стрептококки группы В (S.agalactiae) — бета-гемолитические стрептококки, обуславливают развитие послеродового сепсиса, инфекций мочевого тракта, внутриутробной инфекции.
Стрептококки группы С включают бета-гемолитические стрептококки. Вызывают разнообразные гнойно-воспалительные процессы.
Стрептококки группы D представлены энтерококками типовой вид -E.faecalis. Могут вызывать эндокардит, менингит.
Стрептококки группы F включают альфа-гемолитические стрептококки, Могут выделяться из ран, абсцессов, мочеполового тракта, из крови, но чаще — из глотки.

СТРЕПТОКОККИ (род Streptococcus)

Стрептококки - грамположительные кокки неправильной округлой формы, располагающиеся в виде цепочек или попарно, размером 0,5-2,0 мкм. Неподвижны, спор не имеют, некоторые образуют капсулу. Факультативные анаэробы, отдельные представители - облигатные анаэробы.

Streptococcus pyogenes. Чистая культура (окраска метиленовым синим) и колонии на кровяном агаре

ФАКТОРЫ ВИРУЛЕНТНОСТИ стрептококков группы А

Бактериоскопический метод: окраска по Граму мазков из патологического материала может быть полезна для предварительного диагноза инфекций, вызванных стрептококками группы А.

Бактериологический метод: проводят идентификацию мелких блестящих колоний, выросших на кровяном агаре.

Серологический метод: определяют антитела против стрептококка группы А (антистрептолизин 0, против ДНКазы и других антигенов). С помощью ИФА или латекс-агглютинации выявляют стрептококковые антигены в патологическом материале (из респираторного тракта).

Лечение стрептококковых инфекций проводится препаратами группы пенициллина благодаря сохранившейся чувствительности к этому антибиотику и высокой активности его в отношении стрептококка. Другие антибиотики применяются в случае непереносимости пенициллина.

Пневмококки (Streptococcus pneumoniae)

Streptococcus pneumoniae - вид условно-патогенных бактерий рода Streptococcus семейства Streptococcaceae. Большинство сероваров нормальные обитатели верхних путей; однако могут вызывать пневмонию, синуситы, отиты, менингиты и другие инфекционные процессы при снижении резистентности макроорганизма.

Чистая культура пневмококка.
Окраска по Граму.

Электронограмма среза пневмококка в ткани

ФАКТОРЫ ВИРУЛЕНТНОСТИ Streptococcus pneumoniae

Бактериоскопический метод:
окраска по Граму мазков из патологического материала;
реакция набухания капсулы с антикапсульными сыворотками: усиление преломления света вокруг бактерий – положительный тест на S.pneumoniae.

Бактериологический метод: выделение чистой культуры и идентификация по чувствительности к оптохину, по другим биохимическим и серологическим свойствам.

Биологический метод: внутрибрюшинное заражение белых мышей материалом от больного с последующим выделением культуры и её идентификацией.

Разработана поливалентная вакцина, включающая 23 различных полисахаридных АГ сероваров, вызывающих 90% гематогенных инфекций.

Иммунизация показана группам повышенного риска и осуществляется двукратно с 5-10-летним интервалом.

Энтерококки (род Enterococcus)

Энтерококки - условно-патогенные бактерии семейства Enterococcaceae рода Enterococcus, который включает 28 видов: E. faecalis, E. avium, E. cecorum, E. dispar, E. durans, E. faecium, E. sacharolyticus, E. solitaris и др.
Наибольшее значение в патологии человека имеют E. faecalis, E. faecium (ранее относились к стрептококкам группы D).
Широко распространены в окружающей среде, особенно в кале позвоночных. У человека в норме может быть до 10 млн. бактерий в 1 г фекалий.
Могут вызывать внутрибольничные инфекции у больных со сниженным иммунитетом гнойные инфекции мочевыводящих путей, внутрибрюшные абсцессы, эндокардит, раневые инфекции, менингит.

Энтерококки - сферические или овоидной формы (0,6-2,0 х 0,6-2,5 мкм) грамположительные бактерии, располагающиеся парами или короткими цепочками.
Капсул не образуют. Иногда обладают жгутиками. Факультативные анаэробы.

Бактериологический метод:
энтерококки хорошо растут на кровяном и шоколадном агаре, средах с углеводами.
Растут при рН 9,6, при 450 С , на средах, содержащих 6,5% NaCl, 10% желчи, в молоке с метиленовым синим (обесцвечивание),

Энтерококкии устойчивы ко многим антибактериальным препаратам. Применяют аминогликозиды, ванкомицин

Чувствительность к действию антибиотиков двух наиболее часто выделяемых при инфекциях человека видов — Е. faecalis и Е. faecium — различна.
Известно, что около 90% штаммов Е. faecalis и около 50% штаммов Е. faecium чувствительны к ампициллину.
При резистентности энтерококков к ампициллину необходимо использовать ванкомицин. Неосложненные инфекции мочевыводящих путей лечат ампициллином, тетрациклином или хинолонами

МЕНИНГОКОККИ (Neisseria meningitidis)

Чистая культура N. meningitidis.
Окраска по Граму.

Стрептококковые инфекции продолжают оставаться в числе наиболее острых проблем здравоохранения во всех странах мира. Бактерии рода Streptococcus классифицируют по антигенным свойствам (на основании имеющихся полисахаридов), выделяя серогруппы, изучают биохимические и гемолитические свойства. Наиболее патогенным для человека является Streptococcus pyogenes группы А, вызывающий у человека гнойно-воспалительные и инфекционно-аллергические заболевания. Диагностика стрептококковых инфекций включает использование бактериоскопического метода, определение стрептококковых антигенов в патологическом материале с помощью ИФА или латекс-агглютинации, бактериологического метода идентификации возбудителей инфекции и серологического метода по определению антител к стрептококкам группы А. В последнее время широко распространен метод ПЦР, позволяющий установить диагноз заболевания в 3 раза чаще по сравнению с классическими бактериологическими методами исследований [1, 2, 4]. Эти данные свидетельствуют о необходимости совершенствования микробиологической диагностики стрептококковых инфекций. Стрептококки колонизируют кожные покровы, слизистые оболочки, носоглотку, желудочно-кишечный тракт и влагалище [5]. Для возбудителей инфекции характерна множественность механизмов и факторов передачи, но наиболее характерен воздушно-капельный механизм передачи. У школьников в холодный сезон года носительство стрептококков в носоглотке достигает 25% [6].

В большинстве случаев возникновение стрептококковых инфекций связано с оказанием медицинской помощи (ИСМП). Причинами роста заболеваемости гнойно-воспалительными стрептококковыми инфекциями являются селекция и формирование госпитальных штаммов, обладающих высокой вирулентностью и множественной лекарственной устойчивостью, что требует совершенствования систем надзора и контроля за ИСМП [7].

Описан общепринятый способ получения чистой культуры стрептококков [6], который имеет следующие недостатки: изолированные колонии можно получить только на 3-й день микробиологического исследования, в процессе культивирования бактерий не удаляется посторонняя сопутствующая микрофлора слизистых оболочек зева и миндалин, на 2-й день пересева материала на кровяной мясопептонный агар (МПА) не всегда удается определить микробы, подозрительные на стрептококк, и поэтому приходится делать пересев на кровяной МПА бактерий, не относящихся к стрептококкам, что требует большего расхода питательных сред для выделения изолированной колонии стрептококков. Известно также, что гемолитические свойства стрептококков не являются диагностическим тестом для выявления патогенных стрептококков. Патогенные стрептококки под влиянием антибиотиков и факторов внешней среды могут утратить гемолитическую активность, что существенно затрудняет выделение стрептококков из исследуемого материала.

А.С. Лабинская [3] предложила способ получения изолированных колоний стрептококков по результатам выделения возбудителя со слизистых оболочек носоглотки при посеве на чашки Петри с 3% кровяным МПА с последующим изучением культуральных свойств и морфологических признаков стрептококков. Исследуемый материал вносили на чашки Петри с 3% кровяным МПА методом отпечатков, а затем шпателем распределяли микробные клетки по всей поверхности питательной среды. Через 18-20 часов роста в условиях термостата при температуре 37°С учитывали рост колоний. Идентифицировали штаммы стрептококков серологической группы А, образующие колонии трех видов: мукоидные, шероховатые и гладкие. Предложенный способ не обеспечивает 100% выделение стрептококков из исследуемого материала, так как методом отпечатков тампоном удается произвести посев лишь небольшого количества бактерий, находящихся на поверхности слизистых оболочек носоглотки; не удаляется выделенная со слизистых оболочках носоглотки сопутствующая микрофлора, обладающая антагонистическими свойствами, а также удается идентифицировать только штаммы стрептококков серологической группы А, а патогенные для человека штаммы стрептококков серогруппы С и G не определяются. Использование предложенных питательных сред и культивирование в аэробных условиях не позволяет выделять стрептококки с анаэробным типом дыхания.

Итак, сложность лабораторной диагностики и эпидемиологические предпосылки циркуляции стрептококков в лечебно-профилактических учреждениях (ЛПУ) дают основания для совершенствования методов лабораторной диагностики стрептококковых инфекций.

Цель исследования - повышение эффективности выделения возбудителей стрептококковых инфекций из исследуемого материала при возникновении ИСМП.

Задача исследования. На основании изучения антибиотикограмм сопутствующей микрофлоры стрептококковым инфекциям выявить антибиотик, обладающий бактерицидным действием на сопутствующую микрофлору, но не влияющим на снижение репродуктивной активности стрептококков. Добавление данного антибиотика в питательную среду для роста стрептококков позволит разработать способ получения изолированных колоний стрептококков.

Материал и методы исследования

В период с 1997 по 2011 г. обследовано 5300 больных. В содержимом из зева выделена сопутствующая микрофлора стрептококковой инфекции. Для определения чувствительности выделенной сопутствующей микрофлоры к антибиотикам использовали диско-диффузионный метод. В опытах использовано 16-20 часовых культур бактерий. Концентрацию бактерий доводили по стандарту мутности до 0,5 ед. по McFarland на физиологическом растворе хлорида натрия (рН 7,2-7,4). Приготовленную взвесь вносили на чашки Петри с 5% кровяным МПА в количестве 0,2 мл и равномерно распределяли на поверхности питательной среды. Через 15 минут на поверхность питательной среды наносили диски с антибиотиками. Посевы инкубировали при 37°С в течение 24 часов с последующим определением задержки роста бактерий вокруг дисков с антибиотиками. Использовали следующие диски с антибиотиками: стрептомицин, эритромицин, гентамицин, амикацин, линкомицин, бензилпенициллин, олеандомицин, цефаклор, цефуроксим, цефатоксим, цефалексин.

Для выделения стрептококков, обладающих анаэробными свойствами, проводили посев исследуемого материала на печеночный бульон Китта-Тароцци. Через 18‒20 часов роста бактерий при 37°С проводили пересев взвеси бактерий со среды Китта-Тароцци на 5% кровяной МПА. На поверхность кровяного МПА вносили 0,1 мл взвеси бактерий и шпателем равномерно распределяли их по поверхности плотной питательной среды. На поверхность посевов помещали диски с гентамицином в количестве 8-9 штук на чашку Петри и распределяли их на равном расстоянии друг от друга. Через 18-20 часов роста бактерий при температуре 37°С вокруг дисков с гентамицином отмечался рост изолированных колоний стрептококков, обладающих анаэробными свойствами.

Предложенный способ получения изолированных колоний стрептококков поясняется графическим материалом. На рисунке представлена схема получения изолированных колоний стрептококков.

Схема получения изолированных колоний стрептококков. Обозначения: 1 - сбор исследуемого материала от больного (слизь из зева и с миндалин), 2-5% кровяной МПА, 3 - среда Кита-Тароцци для выращивания бактерий с анаэробным типом дыхания, 4 - диски с гентамицином, 5 - выросшие изолированные колонии стрептококков на кровяном МПА, обладающих аэробными и анаэробными свойствами

Результаты исследований и их обсуждение

Результаты исследований показали, что в мазках из зева сопутствующая микрофлора была чувствительна к гентамицину в 90-96% случаев, а выделенные культуры стрептококков были резистентны к гентамицину. На основании результатов анализа антибиотикограмм сопутствующей микрофлоры стрептококковой инфекции предложен способ выделения изолированных колоний стрептококков из смешанных микробных популяций. Способ заключается в следующем: с помощью тампона берут налет, слизь с миндалин и слизистых оболочек зева, затем методом штриха проводят посев исследуемого материала на 5% кровяной МПА, равномерно распределяя бактерии по поверхности питательной среды. На поверхность кровяного МПА с посевом исследуемого материала наносили диски с гентамицином в количестве 8-9 штук, равномерно распределяя их на поверхности питательной среды. Через 18-20 часов роста бактерий при температуре 37°С на поверхности кровяного МПА вокруг дисков с гентамицином наблюдался рост изолированных колоний стрептококков. Для выделения стрептококков, обладающих анаэробными свойствами, предварительно делали посев исследуемого материала на печеночный бульон Китта-Тароцци, а затем через 18-20 часов роста бактерий при 37°С проводили пересев взвеси бактерий со среды Китта-Тароцци на 3% кровяной МПА. На поверхность кровяного МПА вносили 0,1 мл взвеси бактерий, равномерно распределяя их на поверхности плотной питательной среды. На посевы с микробной взвесью помещали диски с гентамицином в количестве 8-9 штук. Через 18-20 часов роста бактерий при температуре 37°С вокруг дисков с гентамицином отмечался рост изолированных колоний стрептококков, обладающих анаэробными свойствами. С помощью предложенного метода выделено 34 культуры стрептококков.

По сравнению с традиционными методами микробиологической диагностики стрептококковых инфекций предложенный способ позволяет уменьшить расход питательных сред, повысить процент выделения стрептококков из исследуемого материала, что позволяет своевременно и в более полном объеме проводить противоэпидемическое расследование и осуществлять мероприятия, направленные на предупреждение возникновения ИСМП стрептококковой этиологии.

Следует отметить, что сложность и низкая эффективность выделения стрептококков из исследуемого материала при диагностике инфекционных заболеваний связана с тем, что сопутствующая микрофлора по сравнению со стрептококками более устойчива во внешней среде, неприхотлива к питательным средам, как правило, обладает антагонистическими свойствами и поэтому при инфекционных заболеваниях выделенную микрофлору от больных часто выделяют и идентифицируют преимущественно из группы условно-патогенной сопутствующей микрофлоры. При обследовании ожоговых больных в популяциях сопутствующей микрофлоры наиболее часто определялся эпидермальный стафилококк.

Итак, стрептококки, в отличие от условно-патогенной микрофлоры и стафилококков, менее устойчивы во внешней среде, часто обладали анаэробными свойствами и медленнее размножались на питательных средах. Поэтому не всегда удается выделять чистую культуру стрептококков традиционными микробиологическими методами.

Предложенный способ позволил повысить процент выделения стрептококков из исследуемого материала, сократить время проведения микробиологических исследований по выделению изолированных колоний стрептококков, уменьшить количество ложноотрицательных результатов исследований и снизить расход питательных сред в процессе лабораторной диагностики стрептококковых инфекций. Сокращение сроков проведения лабораторных исследований позволяет в ранние сроки и в более полном объеме проводить противоэпидемические мероприятия при возникновении ИСМП, вызываемых стрептококками.

Читайте также: