Индикаторная бумага для выявления микроорганизмов хеликобактер тест

Закон закупки 44-ФЗ

Закон, регулирующий правовые отношения в области государственных закупок.

Чем обычный договор отличается от контракта по 44-ФЗ
Предметы роскоши по 44-ФЗ: как их опознать
В каких случаях указывать и подтверждать страну происхождения товара по 44-ФЗ?
Как проходят закупки у СМП по 223-ФЗ и 44-ФЗ
Способы закупок по 44-ФЗ и 223-ФЗ
Как оплатить неустойку по 44-ФЗ
Национальный режим при осуществлении закупок по 44-ФЗ и 223-ФЗ: запреты, ограничения, условия допуска
Идентификационный код закупки (ИКЗ) по 44-ФЗ: определение, формирование, расшифровка и поиск закупок по ИКЗ
Расширили список запрещенных иностранных товаров по 44 ФЗ
Исключения из правил: что нельзя закупить по 44-ФЗ или 223-ФЗ
Оплата по контракту по 44-ФЗ: как получить вовремя
Банковское сопровождение контракта по 44-ФЗ: виды, случаи и порядок осуществления
Что не так с 44-ФЗ, или Почему злится Артемий Лебедев
Переторжка по 44-ФЗ и 223-ФЗ: особенности, процедура проведения
Что такое госзакупки: полное определение понятия, виды закупок по 44-ФЗ
Что изменилось в закупках в конце мая: обзор Постановлений Правительства
Вопрос: Я продаю компьютеры. Могу ли я участвовать в закупках по 44фз, если у меня нет документов о том, что эта техника - российского происхождения?
Сравниваем 44-ФЗ и 223-ФЗ: таблица для чайников
Неустойка по 44-ФЗ: разбираемся с особенностями начисления
Существенные условия контракта по 44-ФЗ: что к ним относится и можно ли их изменять?
Независимый регистратор по 44-ФЗ: обзор, функции, цели, плюсы и минусы использования

Заказчик

ИНН: 6452006471 / КПП: 645201001

Может ли поставщик увидеть заявки конкурентов?
"Зачем потеть и страдать, затачивая техзадание под своего подрядчика?" - подумал как-то заказчик и обратился к компьютерщикам.
Контракт исполнен, а оплаты нет - знакомая ситуация?
Об исчезновении строительства детского сада.
Права поставщика, о которых молчат заказчики
Положение о закупках по 223-ФЗ: содержание, структура, примеры
Общение с заказчиками
Может ли заказчик поменять техзадание после публикации закупки?
ФАС в шоке: новое нарушение госзаказчиков
Заказчик не платит
Топ-5 ловушек заказчика в документации
Заказчик разместил аукцион на ремонтные работы. Сроки выполнения работ - нереальные. Стоит ли участвовать?
Как отличить убытки от неустойки
Любовь заказчика к ПДФ (pdf)
Ошибки заказчика и обжалование действий заказчика
Кто такие государственные заказчики
Топ-5 ловушек заказчика в техзадании
Как заказчики злоупотребляли своими правами

Информационная лента

При прокрутке вниз Вы можете получить очень полезную информацию, подобранную специально для Вас нашей программой. А также самые интересные и актуальные статьи о тендерах и закупках, которые мы подобрали для Вас на просторах интернета.

Портал отображает информацию о закупках, публикуемых в сети интернет
и находящихся в открытом доступе, и предназначен для юрлиц и индивидуальных предпринимателей,
являющихся участниками размещения государственного и коммерческого заказа. Сайт использует Cookie, которые нужны для авторизации пользователя.
На сайте стоят счетчики Яндекс.Метрика, Google Analytics и LiveInternet,
которые нужны для статистики посещения ресурса.

ХЕЛИК-тест - методика, предназначенная для неинвазивной и атравматичной диагностики Helicobacter pylori.
Принцип действия методики основан на оценке содержания аммиака в воздухе ротовой полости человека. Для повышения чувствительности метода оценка содержания аммиака производится до и после приема мочевины нормального изотопного состава.

При наличии Helicobacter pylori, эндогенная и нагрузочная мочевина (карбамид) гидролизуется уреазой бактерии с выделением аммиака и углекислого газа.
Содержание аммиака в ротовой полости и изменение его концентрации фиксируется индикаторной трубкой по изменению цвета хромогенного адсорбента.

Индикаторная трубка представляет собой трубку из прозрачного полимерного материала, заполненную индикаторной рецептурой.
Индикаторная рецептура с двух сторон ограничена инертным фильтрующим материалом.
Полимерная трубка, индикаторная рецептура и материал фильтрующих ограничителей не содержат вредных компонентов.
Индикаторная рецептура изготавливается по безотходной экологически чистой технологии из химического индикатора и природного микропористого зернистого адсорбента.
Нанотехнология изготовления индикаторной рецептуры является "ноу-хау" ООО "Синтана СМ".

ИТМ-12эо (время аспирации 4 минуты (объём пробы 300 мл.), хранимость 10 лет) 230 поставляется только для научных исследований 23000

ИТ-NH₃ (время аспирации 30 секунд (объём пробы 20 мл.), хранимость 3 года) 210 поставляется только для научных исследований 21000

АННОТАЦИЯ

ABSTRACT

Ключевые слова: Helicobacter pylori, селективный уреазный тест, индикаторная бумага для выявления микроорганизмов, диагностика Helicobacter pylori.

Keywords: Helicobacter pylori, selective urease test, indicator paper for the detection of microorganisms, Helicobacter pylori detection.

Введение

Helicobacter pylori играет решающую роль в возникновении и рецидивировании язвенной болезни с локализацией дефекта в двенадцатиперстной кишке или желудке, а также в возникновении Н. рylori -индуцированного гастрита, МАЛТ-лимфомы желудка. Эрадикация Н. рylori приводит к существенному снижению уровня рецидивирования язвенной болезни, улучшению состояния слизистой при хроническом гастрите, прерывая цепь событий в канцерогенезе желудка, способствует гистологической ремиссии на ранних стадиях МАЛТ-лимфомы желудка. Доказана роль Н. рylori при необъяснимой железодефицитной анемии и тромбоцитопенической пурпуре.

Согласно положениям консенсуса Маастрихт V (Флоренция, 2015 г.), посвященным вопросам диагностики и лечения инфекции H. pylori, пациентам, которым показана фиброгастродуоденоскопия (ФГДС), рекомендуется дополнять исследование быстрым уреазным тестом для определения наличия инфекции H. pylori [15]. При этом отмечается, что важна именно точность положительного результата, так как именно в этом случае должно быть лечение назначено, а отрицательный результат должен быть подтвержден другими методами. Давая эти рекомендации, авторы говорят о высоких показателях чувствительности и специфичности, ссылаясь на работы, посвященные гелевым тестам, в том числе самому известному – CLO-test [18, 10, 21]. Специфичность определения в гелевых тестах обеспечивается использованием консервантов и буферов [9], которые, повышая точность определения, замедляют реакцию. Однако при хороших диагностических показателях этот тест характеризуется долгим временем срабатывания – до 24 часов, что ограничивает его использование в качестве экспресс-теста. На смену медленным гелевым тестам на мировом рынке появились более быстрые сухие селективные тесты [22, 17]. В таких тестах высокая специфичность обеспечивается механическим разделением слоев с карбамидом и индикатором [20, 24, 19]. Это разделение необходимо для защиты от нецелевых срабатываний и обеспечения достоверности положительного результата.

Переход от гелевой формы к сухой позволил уменьшить время проведения быстрого уреазного теста при одновременном повышении диагностической специфичности и сохранении высокой чувствительности определения инфекции. В исследовании [12] сравнили диагностические характеристики четырех тестов: гелевых CLO-test (США) и HelicotecUT (Тайвань) с селективными HelicotecUTPlus (Тайвань) и ProntoDry (Франция), показатели диагностической эффективности составили: чувствительность (97,0%; 95,5% и 98,5%; 97,0%), специфичность (94,0%; 94,7% и 92,5%; 91,7%). В другом исследовании при сравнении селективного ProntoDry и гелевого CLO-test селективный тест имел преимущество по чувствительности: 93% против 86,2% у CLO-test [22].

Материалы и методы

Критериями исключения были: прием ингибиторов протонной помпы, антибактериальных препаратов, висмут-содержащих препаратов в течение 4 недель до тестирования на H. pylori; отказ от выполнения любой из процедур исследования.

Для определения диагностической эффективности рассматриваемых методов определения уреазной активности пациентам, включенным в исследование, проводили процедуру с забором двух биоптатов антрального отдела и двух биоптатов из тела желудка, далее проводили определение уреазной активности индикаторной бумагой и селективным тестом, после чего биологический материал помещали в пробирки, кодированные специальной маркировкой XXXYZ, где XXX – номер пациента, Y – обозначение отдела, откуда был взят биоптат, каждая пробирка содержала 10%-ный формалин. Препараты подвергали окраске с гематоксилином и эозином с оценкой наличия Helicobacter pylori квалифицированным патоморфологом.

В качестве положительного результата фиксировались все синие окрашивания вне зависимости от того, в какой временной интервал от 0 до 4 минут появилось изменение цвета.

Определение уреазной активности Helicobacter pylori экспресс-тестом AMA RUT

Оценка диагностической эффективности

Результаты и обсуждение

В исследовании принял участие 101 пациент в возрасте от 18 до 88 лет, из них 54 женщины и 47 мужчины. Средний возраст пациентов составил 53,1±12,7 года. По результатам исследования у пациентов были выявлены следующие заболевания: хронический гастрит – 47 человек, язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки – 6 человек, язвенная болезнь желудка – 2 человека, функциональная диспепсия – 31 человек, гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь – 15 человек.

Избыточное количество положительных результатов индикаторной бумаги могло бы быть объяснено некорректной оценкой результата, однако по фотографиям, представленным в табл. 1 и табл. 2, видно, что изменения цвета индикаторной бумаги при отрицательной гистологии внешне не отличались от срабатываний на фоне гистологически подтвержденного присутствия бактерии в биоптате.

Таблица 1.

Пример окрашиваний индикаторной бумаги: последующее гистологическое исследование подтвердило отсутствие Helicobacter pylori в биоптатах

* – код биоптата для передачи на гистологическое исследование.

Таблица 2.

Пример окрашиваний индикаторной бумаги: последующее гистологическое исследование подтвердило наличие бациллярных форм Helicobacter pylori в биоптатах

* – код биоптата для передачи на гистологическое исследование.

Изменение окраски индикатора в щелочную форму в случае, если биоптат непосредственно контактирует с индикатором, может быть вызвано с физиологическими причинами в самом биоптате: на фоне различных факторов рН слизистого эпителия желудка in vitro в среднем варьируется от 6,0 до 7,2 , при этом граница перехода окраски бромтимолового синего, по документам производителя, использующегося в тестах, начинается с 6,5. Кроме того, на ложность результата могут повлиять щелочные агенты, попавшие на биоптат: желчь (рН > 7) [16], продукты реакции автолиза клеток тканей желудка [13], лидокаин, широко применяющийся в форме спрея для местной анестезии, а также подкравливание биоптата (кровь в норме имеет щелочную реакцию) [5, 14].

Специфичность теста особенно важна для выбора правильной стратегии лечения в будущем, так как согласно рекомендациям после положительного быстрого уреазного теста необходимо назначить лечение, которое будет включать в себя антимикробные препараты. Избыточное назначение антибиотиков и связанный с ним рост антибиотикорезистентности является проблемой, которая, по мнению Всемирной организации здравоохранения, достигла мирового масштаба [8]. Актуальность кларитромициновой резистентности H. pylori настолько высока, что H. pylori была внесена в список приоритетных патогенов для изучения и развития новых антибиотиков [26].

Медицина XXI века – это точная медицина (Precision medicine) [25]. В такое понятие для проведения антихеликобактерной терапии входит соответствие правилу 5П: правильный пациент, правильный препарат, правильная доза, правильное время приема препаратов и правильная диагностика. Для выполнения последнего пункта необходимо использовать точные методы диагностики. Селективность AMA RUT Pro к уреазе Helicobacter pylori позволяет проводить определение бактерии с высокой специфичностью – 95% при сохранении чувствительности. Отсутствие реакции на уреазу других микроорганизмов, согласно инструкции, подтверждено микробиологической проверкой, специальная мембрана в конструкции теста предотвращает изменение цвета индикаторного элемента из-за щелочных агентов, не связанных с протеканием целевой реакции [3].

Вывод

Диагностику Helicobacter pylori необходимо проводить тестами, предназначенными для определения уреазы именно этой бактерии. Селективные тесты AMA RUT Pro показали высокие диагностические характеристики: специфичность – 95,5% и чувствительность – 97,6%, что приближается к данным, представленным в инструкции к тестам. Индикаторная бумага, предназначенная для быстрого определения уреазолитических факторов, при выявлении Helicobacter pylori в биоптатах продемонстрировала специфичность в 10,6%.

Информация об авторах:

Владельцы патента RU 2540473:

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления продуцирующих уреазу микроорганизмов, в частности Helicobacter pylori. Для этого проводят экспресс-анализ на диагностических дисках для определения уреазной активности образцов. Диски выполнены из фильтровальной бумаги, на которую заранее наносят мочевину, кислотно-основной индикатор, муромидазу и кондиционирующие вещества. При наличии уреазной активности в пробе происходит цветовое окрашивание индикаторного диска. Изобретение обеспечивает повышение чувствительности способа диагностики Helicobacter pylori. 3 пр.

Изобретение относится к разделу аналитической химии, используемому в медико-биологических исследованиях, а именно в идентификации микроорганизмов по определению уреазной активности, и может быть использовано как в микробиологии, так и в медицине, в частности, для диагностики Helicobacter pylori. Данный микроорганизм отличается чрезвычайно высокой уреазной активностью, выполняемой in vivo: для контроля содержания равновесного аммиака.

Уреазную активность как in vivo, так и in vitro обычно измеряют по кинетике разложения мочевины и, в частности, по количеству аммиака или углекислого газа (Дж.Б. Самнер, Г.Ф. Сомерс, "Химия ферментов и методы их исследований", под ред. В.А. Энгельгардта, Иностранная литература, Москва, 1948, 584 с., с.178), выделяющихся в результате реакции ферментативного гидролиза. Для определения уреазной активности биоптатов классически используются жидкие среды, приготовляемые ex tempore из растворов, содержащих мочевину в воде, 50% этаноле или фосфатном буфере с кислотно-основным индикатором, обычно феноловым красным (рН перехода 6,8-8,4). Например, используемая в микробиологии среда Христйансена: мочевина 20 г/л, феноловый красный 0,012 г/л, KH2PO4 2 г/л, пептон 1 г/л, NaCl 5 г/л, глюкоза 10 г/л. Именно эта среда была впервые применена для определения HP в биоптатах слизистой оболочки желудка. Или среда, содержащая 2 г мочевины, 10 мг фенолового красного и азида натрия в 100 мл 0,01 М фосфатного буфера рН 6,5 (Н.В. Сафонова, А.В. Жебрун "Гастрит, язвенная болезнь и хеликобактериоз". Рекомендации для врачей, НИИ им.Пастера, Спб, 1993, 40 с., с.32). Известны уреазные коммерческие тесты, где в качестве реакционной среды используются гели. "Pyloritek" (B.J. Marshall and coil. Rapid urease test in the management of Campylobacter pyloridis-associated gastritis. Am. J. Gastroenterol. 1987; v.82, p.200-210; Westblom T.U. and coll. Evaluation of a rapid urease test to detect Campylobacter pylori infectim. J. Clin. Microbiol., 1988, v.26, p.1393-1394) и коммерческий CLOtest, выпускаемый фирмой "Delta West" (Австралия) совместно с фирмой "Tri-Med Specialites Inc." (США),тесты финской фирмы БИОХИТ.

Использование всех вышеописанных методов, равно как и избранного в качества прототипа, предполагает анализ уреазной активности находящихся на поверхности клеток микроорганизмов ферментов для разложения кондиционированного добавками, включающими индикатор субстрата (мочевины).

При этом чувствительность метода имеет принципиальное значение, так как при анализе биоптатов или других образцов на содержание микроорганизмов возможно попадание в пробу очень небольшого количенства микробных тел, что при недостаточной чувствительности может дать ложноотрицательный результат.

Поэтому с целью дальнейшего расширения аналитических возможностей, нами предлагается вариант быстрого уреазного теста на основе твердого гигроскопичного носителя, содержащего субстрат(мочевину)в количестве от 1.0 кг до 2.5,0 кг на 1 м2, один из кислотно-основных индикаторов с интервалом перехода в области от рН 3,2-5,0 до 8,2-9;0 в количестве от 21 г до 50 г на 1 м2 (например, (например, бромтимоловый синий), буфер (например, фосфатный) до рН 7.0, повышающий осмотическое давление агент (например, хлористый натрий) 1200 кг на 1 м2, фермент, разрушающий клеточую мембрану микроорганизма (например, муромидазу) - 0.001 кг на м2. Изготовление теста производится при последовательной кристаллизации растворов вышеперечисленных веществ на фильтровальной бумаге в вытяжном шкафу при использовании в качестве растворителя воды и изопропилового спирта.

При проведении анализа биоптат помещается на индикаторный диск и производится оценка индикаторного эффекта в течение 3-4 минут. При наличии уреазопродуцирующих микроорганизмов происходит разрушение клеточной оболочки вследствие повышенного осмотического градиента и воздействия ферментов. Выделяющийся внутриклеточный пул уреазы вызывает немедленную реакцию расщепления мочевины с выделением аммиака, меняющего рН среды, что и вызывает цветовое окрашивание индикаторного диска. Таким образом, происходит резкое повышение чувствительности теста, позволяющего выявить подпороговые количества микроорганизмов по другим методам. Применение способа делает возможной диагностику гастродуоденальной патологии человека в условиях клинико-бактериологической лаборатории лечебно-профилактических учреждений.

В целом способ заключается в том, что реакционная среда гипертонична и содержит вещества органического и неорганического происхождения, вызывающие повреждение клеточной стенки и выход в реакционную среду эндогенной уреазы.

В клинику поступил больной В. в возрасте 28 лет с жалобами на боли в эпигастрии. В процессе фиброгастроскопии в антральном отделе желудка была обнаружена полныу эрозии, взят биопсийный материал. После разделения биоптата на 3 части одна из них была помещена на тест прототипа, вторая направлена на микроскопическое исследование, третья помещена на диск по описанному выше способу.

Через 3 минуты тест прототип - результат отрицательный, при микроскопии с окраской - единичные микробные тела Хеликобактер пилори, предлагаемый тест - результат положительный через 28 с, на основании чего был сделан вывод о наличии HP в материале, а следовательно, лабораторно подтвердили диагноз - пилорический хеликобактериоз, и была начала соответствующая этиотропная терапия заболевания.

В клинику на дообследование поступила больная Б. в возрасте 35 лет по поводу болей в эпигастрии. При фиброгастроскопии выявлен хронический субатрофический гастрит с дуодено-гастральным рефлюксом IV ст. и взят материал для исследования.

Биоптат разделен на 3 части. В процессе тестирования биоптата по варианту прототипа микроскопического метода и предложенному выше способу не выявлено микроорганизмов - был сделан вывод об отсутствии HP.

В клинику поступил больной Ф. в возрасте 48 лет с жалобами на боли в эпигастрии. В процессе фиброгастроскопии в желудке хронический атрофический гастрит, хроническая язва луковицы 1.0×0.8 см, рубцовая деформация луковицы 12 п кишки. Взят биопсийный материал. После разделения биоптата на 3 части одна из них была помещена на тест прототипа, вторая направлена на микроскопическое исследование, третья помещена на диск по описанному выше способу.

Через 3 минуты тест прототип - результат отрицательный, при микроскопии с окраской - единичные микробные тела Хеликобактер пилори, предлагаемый тест - результат положительный через 14 с - на основании чего был сделан вывод о наличии HP в материале, а следовательно, лабораторно подтвердили диагноз - хеликобактериоз, и была начала соответствующая этиотропная терапия заболевания.

Способ выявления продуцирующих уреазу микроорганизмов, заключающийся во внесении в среду, содержащую мочевину, кондиционирующие эту реакционную среду химические вещества и индикатор, реагирующий изменением цвета на сдвиг рН среды, вызванный выделением аммиака при разложении мочевины уреазой тестируемых микроорганизмов, и выполненной в виде диагностических дисков из природных или синтетичесих полимеров, отличающийся тем, что с целью повышения чувствительности метода реакционная среда гипертонична и содержит вещества органического и неорганического происхождения, вызывающие повреждение клеточной стенки и выход в реакционную среду эндогенной уреазы.

Читайте также: