Ифа набор на пастереллез

крининговый тест: рекомендуется для поголовья с низкой распространенностью заболеваемости в сочетании с подтверждающими тестами.

Метод	непрямой иммуноферментный анализ
Виды животных	жвачные, свиньи
Образцы	сыворотка или плазма крови
Антиген	очищенный ЛПС Pasterella антиген
Коньюгат	HRP - рекомбинантный белок G (х100)
Время анализа	1 3 0 минут

ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ЗАКАЗА

Код	LT-E-PS-01	LT-E- PS -02	LT-E- PS -05	LT-E- PS -10
Формат	1 планшет	2 планшета	5 планшет	10 планшет
Кол-во анализов*	96	192	480	960

*влючаяя лунки для контролей.

Cкрининговый тест: рекомендуется для поголовья с низкой распространенностью заболеваемости в сочетании с подтверждающими тестами.

Метод	иммунохроматографический анализ
Виды животных	жвачные, свиньи
Образцы	цельная кровь, сыворотка или плазма крови
Тестовая линия	очищенный ЛПС Pasterella антиген
Контрольная линия	рекомбинантный белок G
Коньюгат	рекомбинантный белок G - Colloid Gold
Время анализа	10 минут

ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ЗАКАЗА

Код	LT-F-PS-01s	LT-F-PS-10s	LT-F-PS-50s	LT-F-PS-01c
Формат	1 стик	10 стиков	50 стиков	1 кассета
Кол-во анализов*	1	10	50	1

* или N количество под заказ

1. OIE Terrestrial Manual 2018; Chapter 3.04.10; Haemorrhagic septicaemia

Вирусный энтерит гусей (ВЭГ) - острая высококонтагиозная болезнь гусей и муксусных уток, характеризующаяся поражением желудочно-кишечного тракта, печени и высокой летальностью. В естественных условиях болеют гусята и муксусные утята в возрасте от 1 до 30 дней. Заражение в основном происходит алиментарным и аэрогенным путем, возможна трансовариальная передача вируса. Переболевшая птица может оставаться вирусоносителем в течение нескольких лет. Болезнь широко распространена в мире и вызывает гибель 30—90% заболевших гусят. У реконвалесцентов ВН-антитела обнаруживали в течение 80 мес. В желтке яиц, снесенных гусями через 68—72 мес. после переболевания, также обнаружены антитела. Вылупившиеся из них гусята в течение двух недель оставались резистентными к заражению вирулентным штаммом вируса.

по применению набора для выявления антител к вирусу энтерита в сыворотках крови гусей иммуноферментным методом.

(Организация – производитель: ГНУ ВНИВИП Россельхозакадемии г. С-Петербург, Ломоносов)

1. Набор для выявления антител к вирусу энтерита в сыворотках крови гусей иммуноферментным методом. 2. В состав набора входят иммуноспецифические и неспецифические компоненты:

К.1 – положительная сыворотка крови гусей, содержащая антитела к вирусу энтерита гусей (положительный контроль), лиофилизированная, объем 1,0 см³ – 1 ампула (флакон); К.2 – нормальная сыворотка крови гусей, не содержащая антител к вирусу энтерита гусей (отрицательный контроль), лиофилизированная, объем 1,0 см³ - 1 ампула (флакон); К.3 – полистироловые 96-луночные планшеты с адсорбированным в лунках очищенным инактивированным антигеном вируса энтерита гусей (ВЭГ) – 2 шт.; К.4 – антивидовой (кроличий) иммунопероксидазный конъюгат против IgG гусей, лиофилизированный, объем 0,2 см³ – 1 ампула (флакон);

К.5–буферный раствор (концентрированный) для разведения контрольных и испытуемых сывороток, антивидового конъюгата и межэтапных промывок, объем 5,0 см³ – 1 флакон; К.6 – набор солей для приготовления фосфатно- цитратного буферного раствора, таблетка, 0,63 г, - 2 шт.; К.7 – детергент твин-20, объем 5,0 см³ – 1 флакон; К.8 – субстрат – ортофенилендиамин (ОФД), таблетка, 5 мг , 2 шт.; К.9 – гидроперит, таблетка, 1,5 г –1 шт.; К.10 – натрий хлористый, кристаллический порошок, 22,0 г – 1флакон. 3. Иммуноспецифические компоненты расфасованы в стеклянные ампулы (флаконы). Ампулы запаивают, а флаконы укупоривают пробками, укрепленными алюминевыми колпачками. По внешнему виду иммуноспецифические компоненты представляют собой:

сыворотки -сухую пористую массу белого цвета;
антивидовой иммунопероксидазный конъюгат- сухую пористую массу белого или кремового цвета;

При добавлении буферного раствора содержимое флаконов с лиофилизированными компонентами должно полностью раствориться в течение 1-3 мин. Неспецифические компоненты расфасованы в стеклянные флаконы, укупоренные резиновыми пробками,укрепленными алюминевыми колпачками. По внешнему виду неспецифические компоненты представляют собой:

буферный раствор (концентрированный) для разведения контрольных и испытуемых сывороток, антивидового конъюгата и межэтапных промывок - прозрачную бесцветную жидкость;
набор солей для приготовления фосфатно-цитратного буферного раствора - таблетку белого цвета;
субстрат-ортофенилендиамин (ОФД) - таблетку белого или кремового цвета;
детергент твин-20 - прозрачную жидкость светло-желтого цвета;
натрий хлористый- порошок белого цвета;
гидроперит - таблетку белого цвета.

7. Сущность непрямого варианта метода иммуноферментного анализа заключается в выявлении комплекса, образованного антигеном, сорбированным в лунках полистироливого планшета и специфическими антителами, содержащимися в пробах сывороток крови гусей. Специфический комплекс выявляется антивидовыми IgG, ковалентно связанными с ферментом – пероксидазой хрена, который при взаимодействии с субстратом (Н2О2) в составе хромогенной смеси (ОФД) вызывает ее окрашивание. Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна концентрации специфических антител в исследуемой пробе.

8. Набор предназначен для:

серологического контроля за распространением ВЭГ в популяциях гусей;
оценки эффективности иммунизации поголовья против данного заболевания;
ретроспективной диагностики ВЭГ у гусей по приросту уровня специфических антител.

Для исследования из гусеводческих хозяйств в лабораторию доставляют не менее 25 проб (по 0,2-0,3 см3) сыворотки крови гусей без признаков гемолиза и бактериальной контаминации. До постановки ИФА сыворотки можно хранить в морозильной камере бытового холодильникана (минус 20ºС) в течение 50-60 суток, при температуре 4ºС - более 3-х суток.

пипетки одно- и восьмиканальные автоматические переменного объема до 0,02 см³ , до 0,2 см³ и до 1,0 см³ со сменными наконечниками;
посуду мерную лабораторную;
пробирки для разведения проб;
дистиллированную или деионизованную воду (рН= 6,0-6,2);
термостат с поддержанием температуры (37,0±0,5)ºС;
холодильник бытовой;
рН-метр;
спектрофотометр (ридер) с вертикальным лучом при длине волны 492 нм;

Следует помнить, что ИФА является высокочувствительным методом, поэтому ошибки связанные с подготовкой образцов, проведением инкубационного, температурного и промывочного режимов могут быть причиной получения недостоверных результатов. Перед началом работы набор с компонентами выдерживают 30 минут при температуре 18-20ºС. Остатки неиспользованных реагентов убирают в холодильник (4-8ºС) сразу же после проведения исследования. 9. Подготовка рабочих растворов 9.1 Раствор № 1 - буферный раствор для разведения контрольных и испытуемых сывороток, антивидового конъюгата и межэтапных промывок. Содержимое флаконов К.5 и К.10 растворить в 750,0 см³ дистиллированной воды и измерить величину рН, которая должна быть в пределах 7,0-7,4. Затем в этот раствор добавить содержимое флакона К.7. Раствор рекомендуется хранить при температуре 4-8ºС не более 15 суток. 9.2 Раствор № 2 - фосфатно-цитратный буферный раствор. Содержимое флакона К.6 (1 таблетку) растворить в 10,0 см³ дистиллированной воды. Полученный раствор должен иметь рН в пределах 4,9-5,0. Готовить перед использованием. 9.3 Раствор № 3. 1 таблетку гидроперита (К.9) растворить в 45,0 см³ дистиллированной воды. Раствор хранить в защищенном от света месте при температуре 4-8оС не более 10 сут. 9.4 Раствор № 4 - субстратно-индикаторная смесь. 1 таблетку ОФД (К.8) растворить в 10,0 см³ раствора № 2, перемешать до полного растворения и добавить 0,4 см³ раствора № 3. Раствор № 4 готовить непосредственно перед использованием. Хранению не подлежит. 9.5 Раствор № 5 - стоп - раствор. 1,0 см³ концентрированной серной кислоты (в наборе отсутствует) растворить в 10,0 см³ дистиллированной воды. Раствор рекомендуется хранить во флаконе из темного стекла при температуре 18-25оС не более одного месяца. В связи с высокой токсичностью ОФД и серной кислоты приготовление субстратно-индикаторной смеси и стоп-раствора проводить в резиновых перчатках, избегая попадания на кожу и слизистые оболочки.

10.1 К содержимому ампулы (флакона) с лиофилизированной положительной сывороткой крови гусей (К.1) добавить 1,0 см³ раствора № 1. Готовят перед использованием. Подготовленную сыворотку рекомендуется хранить при температуре минус 10ºС и ниже не более 15 сут. В течение срока годности размораживание допускается один раз. 10.2 К содержимому ампулы (флакона) с лиофилизированной нормальной сывороткой крови гусей (К.2) добавить 1,0 см³ раствора № 1. Готовят перед использованием. Подготовленную сыворотку рекомендуется хранить при температуре минус 10ºС и ниже не более 15 сут. В течение срока годности размораживание допускается один раз.

К содержимому ампулы (флакона) с антивидовым конъюгатом (К.4) добавить 21,0 см³ раствора № 1. Раствор конъюгата рекомендуется хранить при температуре минус 10ºС и ниже не более 15 сут. В течение срока годности размораживание допускается один раз. 10.4. Разведение испытуемых и контрольных сывороток крови. 10.4.1 При постановке ИФА в одном разведении все испытуемые и контрольные сыворотки (положительную и нормальную) развести 1:400 раствором №1. Для контрольных к 0,3 см3 раствора №1 добавить 0,1 см3 сыворотки крови гусей, для испытуемых к 1,0 см3 раствора №1 добавить 0,0025 см3 сыворотки крови гусей и трижды пипетировать, используя для каждой пробы новый наконечник. 10.4.2 При постановке ИФА методом раститровки контрольные пробы сывороток (положительная и нормальная), приготовленные по п.п. 10.1 и 10.2, разведены 1:100. Готовы к использованию. Все испытуемые пробы сывороток крови гусей развести 1:100 раствором №1. Для чего к 1,0 см3 раствора №1 добавить 0,01 см3 сыворотки крови и трижды пипетировать, используя для каждой пробы новый наконечник.

Из комплекта набора взять планшет (К.3), сенсибилизированный антигеном ВЭГ. 11.1 При постановке ИФА в одном разведении в лунки вертикальных рядов планшета А1,В1,С1 внести положительную сыворотку, подготовленную по п.10.4.1 в объеме 0,1 см3. В лунки планшета D1,E1,F1 внести нормальную сыворотку (отрицательный контроль), подготовленную по п. 10.4.1 в объеме 0,1 см3. Лунки G1-H1 служат контролем конъюгата и заполняются раствором №1 по 0,1 см3. В остальные лунки планшета внести испытуемые пробы, подготовленные по п. 10.4.1 в объеме 0,1 см3. 11.1.2. Планшет осторожно встряхнуть для перемешивания содержимого, накрыть крышкой и инкубировать в термостате при температуре 37± 0,5ºС в течение 30 мин. По окончании инкубации лунки планшета освободить от содержимого резким встряхиванием и трехкратно промыть раствором № 1(по 0,3 см³ в каждую лунку). Затем жидкость окончательно удалить и планшет подсушить, постукивая по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге. 11.1.3. Во все используемые лунки планшета внести по 0,1 см³ рабочего раствора конъюгата, накрыть крышкой и инкубировать 30 минут при температуре 37± 0,5ºС. По окончании инкубации лунки планшета освободить от содержимого резким встряхиванием и трехкратно промыть раствором № 1(по 0,3 см3 в каждую лунку). Затем жидкость окончательно удалить и планшет подсушить, постукивая по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге. 11.1.4. Во все используемые лунки планшета внести по 0,1 см³ раствора №4, накрыть крышкой и выдержать 3-5 мин при температуре 18-25ºС в темном месте. 11.1.5. Реакцию остановить добавлением в каждую используемую лунку по 0,05 см³(50 мкл) раствора №5. 11.2. При постановке ИФА методом раститровки во все лунки рядов планшета В1-В12…Н1-Н12 внести по 0,1 см3 раствора №1. В лунку планшета А1 внести нормальную сыворотку (отрицательный контроль), подготовленную по п.10.4.2 в объеме 0,2 см3. В лунку планшета А2 внести положительную сыворотку, подготовленную по п. 10.4.2 в объеме 0,2 см3. В остальные лунки планшета А3-А12 внести испытуемые пробы, подготовленные по п. 10.4.2 в объеме 0,2 см3. Провести раститровку по вертикальным рядам А1-Н1…А12-Н12 с разведения 1:100 до 1:12800, перенося 0,1 см3 в очередную лунку вертикального ряда. Из последних лунок Н1-Н12 удалить по 0,1 см3. Дальнейшую постановку ИФА проводят аналогично по п. 11.1.2 – 11.1.5. 12. После остановки реакции учет результатов ИФА проводят визуально – по интенсивности окрашивания содержимого лунок планшета или инструментально – с помощью спектрофотометра (ридера) с вертикальным лучом света при длине волны 492 нм. 12.1 При визуальном способе учета первоначально оценивают контрольные лунки: положительный контроль (положительная сыворотка) при раститровке окрашивается в желтый цвет различной интенсивности, отрицательный контроль (нормальная сыворотка) остается неокрашенным или незначительно желтеет. 12.1.2 Затем сравнивают окраску содержимого лунок планшета испытуемых проб с окраской лунок отрицательного контроля. Титром испытуемой сыворотки считается ее предельное разведение, при котором наблюдают видимое глазом цветовое окрашивание, более интенсивное по сравнению с отрицательным контролем. Титр контрольной положительной сыворотки должен быть не менее 1:800. 12.2 Инструментальный спектрофотометрический способ учета результатов может быть использован как при постановке ИФА в одном разведении, так и при раститровке сыворотки крови. Он позволяет количественно оценить титры специфических антител в исследуемых пробах путем измерения значений оптической плотности (ОП 492 нм). При правильной постановке ИФА и использовании качественных компонентов набора среднее значение ОП отрицательного контроля в разведении 1:400 не должно превышать 0,200. Разница показателей средних значений оптических плотностей положительного и отрицательного контролей в разведении 1:400 должна быть в диапазоне 0,340-0,980. Если полученные данные выходят за пределы этих значений, результаты считаются недостоверными и реакцию повторяют.

Полученные значения S/P позволяют дифференцировать испытуемые сыворотки на положительные, отрицательные и сомнительные. Пробы сывороток крови со значениями S/P ниже или равными 0,2 считаются отрицательными, 0,21 - 0,23 – сомнительными, больше или равными 0,24 – положительными. Расчет титра сыворотки по одному разведению (1:400) проводят по формуле: Lg TИТР = 1,41 (lg S/P) + 3,56 Пример:

Отношение S/P	=0,22
Lg ТИТР	= 1,41(lg 0,22)+3,56
Lg ТИТР	= 1,41 (-0,658) + 3,56
Lg ТИТР	= 2,63
ТИТР	= Antilog 2,63
ТИТР	= 427

При постановке ИФА методом раститровки титром испытуемой сыворотки считается последнее ее разведение, в котором оптическая плотность превышает таковую отрицательного контроля в 2,0-2,1 раза. При постановке ИФА в одном разведении (инструментальном методе учета) пробы сывороток крови, содержащие антитела в титре 1:400 и ниже считаются отрицательными, 1:401-1:499 – сомнительными, а 1:500 и выше – положительными. 13. Интерпретация результатов По результатам ИФА определяют напряженность иммунитета в партии привитых гусей путем деления количества положительных проб на общее количество исследованных сывороток и выражают в процентах. Птицу считают иммунной к вирусному энтериту гусей (ВЭГ) при напряженности иммунитета 80 и более процентов (т.е. если в 80 и более процентах исследованных проб сывороток крови титр антител 1:800 и выше). Обнаружение антител у невакцинированной птицы свидетельствует о возможной циркуляции в стаде полевого вируса ВЭГ. В таких случаях через 21-30 суток проводят повторное исследование проб сывороток крови, полученных от этих же птиц. Нарастание титров и (или) увеличение количества птиц с высоким уровнем антител при отсутствии клинических и патологоанатомических признаков ВЭГ не является основанием для объявления в хозяйстве неблагополучия по данному заболеванию, но предусматривает установления за птицей тщательного наблюдения, проведения систематических серологических и вирусологических исследований.

14. При работе с набором следует избегать нарушения целостности стеклянных ампул (флаконов) с компонентами набора. 15. При нарушении целостности флаконов и порезах рук стеклом первую помощь оказывают согласно общепринятым методикам. 16. Работу с химическими компонентами набора следует проводить очень осторожно. При попадании их на кожу или слизистые оболочки рекомендуется промывать пораженное место большим количеством водопроводной воды. 17. В связи с высокой токсичностью ОФД и серной кислоты приготовление субстратно-индикаторной смеси и стоп-раствора проводить в резиновых перчатках, избегая попадания на кожу и слизистые оболочки. 18. Запрещается прием пищи и воды, курение в помещении, где проводятся работы с компонентами набора. 19. Препарат следует хранить в местах недоступных для детей.

Основные задачи:

разработка новых и совершенствование существующих средств лабораторной диагностики вирусных и бактериальных заболеваний сельскохозяйственных животных, птиц и пушных зверей;
разработка методов индикации вирусов особо опасных инфекционных заболеваний;
разработка, анализ методов и способов эффективной, быстрой и современной диагностики особо опасных инфекционных заболеваний;
изучение механизмов развития вирусных и бактериальных инфекций методами вирусологического, микробиологического и молекулярно-биологического анализов;
диагностика вирусных и бактериальных инфекций.

Основные достижения:

— Тест-система [набор] для лабораторной диагностики ящура типа А непрямым иммуноферментным методом.

— Тест-система [набор] для лабораторной диагностики ящура типа О непрямым иммуноферментным методом.

— Тест-система [набор] для выявления антител к вирусу инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа.

— Тест-система [набор] для выявления антител к вирусу катаральной лихорадки овец методом иммуноферментного анализа.

— Тест-системы [набор] для лабораторной диагностики и идентификации возбудителя оспы овец методами реакции диффузионной преципитации и реакции связывания комплемента.

— тест-система [набор] для лабораторной диагностики чумы мелких жвачных животных методом иммуноферментного анализа.

— Тест-система [набор] для выявления антител к вирусу чумы мелких жвачных животных методом иммуноферментного анализа.

— Тест-система [набор] для выявления антигена вируса болезни Ауески методом иммуноферментного анализа.

— Набор препаратов для лабораторной диагностики чумы плотоядных.

Основные публикации

— Кошеметов Ж.К., Зайцев В.Л., Сансызбай А.Р., Н.Т. Сандыбаев, Матвеева В.М., Строчков В.М., Абдураимов Е.О. Грипп лошадей: биологические и физико-химические свойства, культивирование и диагностика. – Алматы, 2014. – 246 с.

— Кошеметов Ж.К. Распространение, культивирование и методы диагностики гриппа типа А. – Алматы, 2017. — 260 с.

— Кошеметов Ж.К., Нурабаев С.Ш., Кондибаева Ж.Б., Сансызбай А.Р. Чума мелких жвачных животных. – Алматы, 2018. — 272 с.

— Koshemetov Zh. K., Matveyeva V. M., Mamadaliyev S. M., Nurabayev S. Sh., Azhibayev A. Zh., Orynbayev M. B. Seromonitoring of especially dangerous diseases in small ruminants in the Republic of Tajikistan // African Journal of Agricultural Research. – 2007. — 2(4). — P. 187-190.

— Matveyeva V.M., Mamadaliyev S.M, Koshemetov Z. K., Russanova A.M., Troitskiy Y. N. Development of the scheme to prepare specimens for sheep pox virus indication in objects of environment // African Journal of Agricultural Research. – 2007. — 2(5). — P. 203-207.

— Mamadaliyev S.M., Koshemetov Z.K., Matveyeva V.M., Kydyrbayev Z.K., Zaitsev V.L., Khairullin B.M., Mambetaliyev M.A., Sandybayev N.T., Nurabayev, S.S., Azhibayev A.Z., Bulatov Y.A., Katubayeva B.S., Kozhamkulov Y.M., Tabynov K.K., Kydyrmanov A.I., Daulbayeva K.D., Shahvorostova L.I. Avian influenza virus H₅N₁ subtype A diagnosed in sick and dead wild and domestic birds in Pavlodar oblast, Republic of Kazakhstan // African Journal of Agricultural Research. – 2007. — 2(8). — Р. 360-365.

— Zhugunissov K., Bulatov Ye., Taranov D., Yershebulov Z., Koshemetov Zh., Abduraimov Ye., Kondibayeva Zh., Samoltyrova A., Amanova Zh., Khairullin B., Sansyzbay A. Protective immune response of oral rabies vaccine in stray dogs, corsacs and steppe wolves after a single immunization // Archives of Virology. — 2017. Р. 1-8. (Impact factor — 2,058).

— Sarsenbayeva G., Volgin Y., Kassenov M., Issagulov T., Bogdanov N., Sansyzbay A., Abitay R., Nurpeisova A., Sagymbay A., Koshemetov Zh., Stukova M., Buzitskaya Zh., Кulmagambetov I., Karabayeva D., Ismailova A., Davlyatshin T., Khairullin B. Safety and immunogenicity of the novel seasonal preservative‐ and adjuvant‐free influenza vaccine: blind, randomized and placebo‐controlled trial // Journal of Medical Virology. — 2017. (Impact factor — 1.935).

Предоставление услуг:

Диагностические исследования сывороток крови на выявление антител к возбудителям оспы овец, контагиозной эктимы овец, чумы мелких жвачных животных, ящура типов А и О, инфекционного ринотрахеита КРС, гриппа типа А с антигенной формулой Н1-Н7, Н13.
Диагностические исследования биоматериалов на выявление антигена возбудителей оспы овец, контагиозной эктимы овец, чумы мелких жвачных животных, ящура типов А и О, инфекционного ринотрахеита КРС, гриппа типа А с антигенной формулой Н1-Н7, Н13, бешенства, пастереллеза, чумы плотоядных, чумы КРС, болезни Ауески.
Диагностическое исследование биоматериалов на наличие возбудителей бруцеллеза, пастереллеза, чумы мелких жвачных животных, гриппа типа А, бешенства методом ПЦР
Постановка биологической пробы на оспу овец, контагиозную эктиму овец, чуму мелких жвачных животных, ящур типов А и О, инфекционный ринотрахеит КРС, грипп типа А, бешенство, чуму плотоядных, чуму КРС, болезнь Ауески.
Выделение вирусов оспы овец, контагиозной эктимы овец, чумы мелких жвачных животных, ящура типов А и О, инфекционного ринотрахеита КРС, гриппа типа А, чумы плотоядных, чумы КРС, болезни Ауески в монослоях культуры клеток.
Обучение постановке лабораторных методов для диагностики вирусных и бактериальных инфекций.
Обучение сотрудников ветеринарных учреждений по отбору биоматериалов от больных животных, птиц и пушных зверей.
Обучение сотрудников ветеринарных учреждений по транспортировке биоматериалов.

О . А . Верк о вс кий , доктор биологических наук, заведующий отделом иммунологии НПО НАР ВАК

Теоретические и практические достижения ветеринарной науки значительно расширили арсенал методов диагностики и средств специфической профилактики инфекционных болезней крупного рогатого скота. При этом развитие новых подходов к предупреждению инфекционных болезней и изучение механизмов иммунологической защиты животных неразрывно связаны с разработкой и внедрением новых методов и технологий, основанных на современных представлениях об эффекторных механизмах иммунитета, среди которых главное место занимает взаимодействие анти ген-антитело.

Иммуноферментный анализ (ИФА) к настоящему времени прошел путь от новейшей научной разработки до рутинного метода в клинической диагностике. С его помощью можно проводить как массовое обследование стад, так и поставить окончательный диагноз у конкретного животного.

По сравнению с другими методами выявления антигенов и антител профессионально разработанные иммуноферментные тест-системы обладают следующими преимуществами:

• высокой чувствительностью, позволяющей выявлять концентрации белка в диапазоне нг/мл, и специфичностью;

• воспроизводимостью полученных результатов;

• стабильностью при хранении всех необходимых реагентов (до года и более);

• простотой проведения реакции и возможностью использования минимальных объемов исследуемого материала;

• наличием инструментального (в качественном и количественном варианте) учета реакции и возможностью автоматизации всех ее этапов.

При инструментальной оценке результат ИФА может быть качественным (позволяет судить о наличии или отсутствии специфических антител) и полуколичественным (позволяет получить информацию об относительном содержании антител в испытуемых пробах). Оба варианта являются приблизительными, однако они намного точнее методов определения титров антител в реакциях с визуальным учетом.

узаконенным методом диагностики лейкоза, ящура и бруцеллеза крупного рогатого скота.

Специалисты НПО НАРВАК в сотрудничестве с ведущими отечественными и зарубежными учеными внедрили в ветеринарную практику нашей страны ИФА-наборы для диагностики лейкоза и ящура, проводят эксперименты по созданию ИФА-набора для диагностики бруцеллеза. Условия применения данных наборов - любые лаборатории, оснащенные стандартным оборудованием для ИФА. ИФА - диагностика лейкоза

"Набор для выявления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС методом им-муноферментного анализа (ИфА)", выпускаемый в двух вариантах:

• И ФА-набор для проведения массовых скри-нинговых исследований - скринирующий тест;

• ИФА-набор (VeriTest) для подтверждения положительных результатов - подтверждающий (конфирмационный или верификационный) тест.

Как и большинство зарубежных аналогов оба варианта ИФА предназначены для выявления антител к поверхностному гликопротеину др51 ВЛКРС в сыворотке крови и молоке животных.

Использование подтверждающего ИфА-набо-ра VeriTest является очень важным моментом при диагностических исследованиях на лейкоз, поскольку одним из наиболее важных вопросов при проведении ИФА является вопрос о специфичности результатов. Так при применении только скриниру-ющего теста, некоторые пробы, взятые от животных с различной патологией, могут давать ложнополо-жительные результаты вследствие синтеза перекрестно-реагирующих антител. Поэтому возможное существование ложнопозитивных результатов ставит перед лабораторным работником задачу их разграничения с истинным выявлением антител к ВЛКРС. Для решения этой задачи и служит ИФА-набор VeriTest, который применяется для подтверждения положительных результатов скринирующего теста.

Таким образом, алгоритм серологического обследования на лейкоз при совместном применении РИД и ИФА следующий.

1) Животные положительные в РИД считаются инфицированными, в ИФА не проверяются и подлежат выбраковке.

2) Отрицательные результаты в РИД, должны быть перепроверены в ИФА и только после этого животные могут считаться серонегативными.

3) Первичное тестирование проб в ИФА проводится в скринирующем тесте и при отсутствии положительной реакции выдается заключение об отсутствии серологических данных инфицирования ВЛКРС. При положительном результате теста проба подлежит исследованию в подтверждающем тесте. При отрицательном результате подтверждающего теста, проба считается серонегативной по ВЛКРС, положительный результат является основанием для окончательного подтверждения серологического диагноза на лейкоз.

Такая схема проведения диагностических исследование за два последних года с успехом апробирована в ряде ветеринарных лабораторий нашей страны и показан ее практический эффект.

Если имеется возможность, то вместо скринирующего ИФА-набора можно сразу же использовать ИФА-набор VeriTest и тем самым упростить алгоритм серологического обследования на лейкоз и сократить число необходимых анализов. ИФА - диагностика ящура

"Набор для выявления антител к вирусу ящура ЗАВС иммуноферментным методом (ИФА)" предназначен для выявления постинфекционных антител в сыворотке крови крупного рогатого скота.

Набор позволяет обнаружить антитела к неструктурному белку вируса ящура - ЗАВС (в системе используется рекомбинантный белок MSP ЗАВС в качестве антигена), который отсутствует (или скрыт для распознавания клетками иммунной системы) в инактивированных вакцинных препаратах. Поэтому у здоровых или вакцинированных животных антител к ЗАВС белку нет (реакция отрицательная),

а у экспериментально зараженных или спонтанно инфицированных животных (даже ранее вакцинированных), в организме которых присутствовал живой вирус ящура - антитела данной специфичности есть (реакция положительная).

Данное заключение демонстрируют результаты, полученные нами при испытании данного набора в профильной лаборатории ФГУ ВНИИЗЖ (табл.1). Для проверки были использованы сыворотки крови крупного рогатого скота, полученные от. а) животных, переболевших ящуром (в динамике с интервалом 3- 5 суток после заражения); б) от животных, вакцинированных против ящура; в) животных сначала вакцинированных против ящура, затем экспериментально зараженных вирулентным вирусом; г) от клинически здоровых неиммунных животных. Исследования проводили в сравнительном аспекте с набором аналогичной направленности и с параллельным определением активности испытуемых сывороток в реакции микронейтрализации и в стандартном варианте непрямого ЙфА, где в качестве антигена используются структурные белки вириона.

Таким образом, отличительной особенностью ИФА-набора для выявления антител к антигену ЗАВС вируса ящура является его способность дифференцировать здоровых и вакцинированных животных от инфицированных и вирусоносите-лей, поэтому его использование незаменимо при проведении оздоровительных и мониторинговых мероприятий.

ИФА - диагностика бруцеллеза

В течение последних лет ряд зарубежных компаний выпускают ИФА-наборы, предназначенные для выявления антител к возбудителям бруцеллеза крупного рогатого скота, овец и коз (Brucella abortus и Brucella melitensis). В настоящее время в НПО проводятся подобные исследования.

В лабораторных исследованиях обычно используют два варианта ИФА: непрямой и конкурентный. Однако на практике наибольшей ценностью обладает конкурентный ИФА, отличительной особенностью которого является возможность дифференцировать животных инфицированных бруцеллами от животных, вакцинированных вакциной из штамма 19 (и возможно из штамма 82). Метод основан на конкурентном взаимодействии моноклональных антител к о-полисахариду S-LPS антигена В. abortus и сывороточных антител к бруцеллам с S-LPS антигеном В. abortus. При отсутствии в исследуемой сыворотке крови антител к В. abortus или В. melitensis, МкА связывается с иммобилизованным S-LPS антигеном, формируя при этом комплекс антиген-антитело. Полученный иммунный комплекс выявляется после взаимодействия с антивидовым конъюгатом, фермент которого после добавления субстрата, вызывает разложение субстрат-индикаторного раствора и образование окрашенного продукта. Если исследуемая сыворотка содержит антитела к бруцеллам, то они конкурируют с МкА за связывание с сайтами антигена и препятствуют взаимодействию МкА с о-полисахаридом S-LPS антигена, в результате чего интенсивность окраски снижается.

Сыворотка крови животных, вакцинированных вакциной из штамма 19, содержит низкоаффинные антитела, которые не конкурируют с МкА за связывание с антигеном, что приводит к отрицательной реакции. Однако в ряде случаев через 6 месяцев после вакцинации животные могут реагировать положительно.

Нами были проведены предварительные испытания двух тест-систем с использованием охарактеризованных в РА сывороток крови крупного рогатого, полученных из ФГУ ВГНКИ (табл.2).

Проведенные исследования показали, что по чувствительности оба варианта ИФА превосходят РА, однако для подтверждения диагностической ценности конкурентного метода проводятся более расширенные испытания с хорошо охарактеризованной панелью сывороток крови, полученных от больных и вакцинированных животных. Есть предположение, что данная тест-система может быть также использована в медицине для выявления антител к бруцеллам у инфицированных людей.

Читайте также: